内容正文:
课题一
微生物的实验室培养
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。
(1) 培养细菌用的培养基与培养皿
(2) 玻棒、试管、烧瓶和吸管
(3) 实验操作者的双手
二.大肠杆菌的纯化培养:
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.计算:
培养基用量
依配方计算各成分的用量
2.称量:
3.溶化:
牛肉膏黏稠,用称量纸称取
牛肉膏、蛋白胨易吸潮,要快、加盖
牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解
→取纸
→蛋白胨、NaCl
→琼脂
→补水定容
4.灭菌:
5.倒平板:
培养基、培养皿
分散成单个细胞,形成单个菌落
冷却到50℃左右;酒精灯附近
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
H2O 定容至1000ml
Nacl 5g
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
琼脂20.0g
倒平板
约50℃
防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染
灼烧灭菌,
防止瓶口的微生物污染培养基
在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?
空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。
问题讨论
㈡纯化大肠杆菌:
⑴平板划线法:
菌种
划3个平板
1.接种:
接种环
防止划破培养基
(重复实验)
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
杀死上次残留的菌种,保证使下一次划线时,菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。
及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线?
以免接种环温度太高,杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?
划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
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⑵稀释涂布平板法:
a.梯度稀释菌液:
6支试管,分别加入9ml无菌水
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