内容正文:
一、培养基
1.概念
人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养基质。
2.种类
按照培养基的物理状态划分为液体培养基和固体培养基。
3.营养要素
各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,此外还要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、无菌技术
1.获得纯净培养物:关键是防止外来杂菌的入侵。
2.无菌操作主要包括以下四个方面
(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染, 实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
3.消毒和灭菌
(1)消毒
①概念:使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
②常用的方法有煮沸消毒法和化学药剂消毒法。
(2)灭菌
①概念:使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。
②常见的方法有:灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
三、大肠杆菌的纯化培养
1.制备固体培养基
2.纯化大肠杆菌
(1)微生物接种最常用的方法
①平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。
(2)微生物培养分析
①如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致,说明接种操作符合要求。
②若培养基上出现了其他菌落,则说明接种过程中被杂菌污染。
③未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若长出菌落,说明灭菌不彻底,实验失败。
四、菌种保存
临时保藏法
甘油管藏法
适用对象
频繁使用的菌种
长期保存的菌种
培养基类型
固体斜面培养基
液体培养基
温度
4_℃
-20_℃
方法
菌落长成后于冰箱中保存,每3~6个月将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上
将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存
缺点
菌种易被污染或产生变异
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[共研探究]
1.下面是察氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分,根据下表,回答下列问题:
蔗糖
NaNO3
K2HPO4
KCl
MgSO4·
7H2O
FeSO4
琼脂
水
20 g
3 g
1 g
1 g
0.5 g
0.01 g
20 g
定容至
1 000 mL
(1)该培养基根据物理性质划分应是固体培养基,原因是该培养基中加入了凝固剂琼脂。
(2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的 4类营养物质(成分),分别是碳源、氮源、无机盐和水。有时候还需要加入特殊的营养物质(生长因子)。
(3)①蔗糖提供碳源,除此之外,提供碳源的主要有:a.无机化合物CO2、Na2CO3等;b.有机化合物糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等。
②NaNO3提供氮源和无机盐。
(4)碳源、氮源、生长因子在微生物体内的作用
营养要素
作用
碳源
构成生物体细胞的物质和一些代谢产物,
有些是异养微生物的能源物质
氮源
合成蛋白质、核酸及含氮代谢废物
生长因子
酶和核酸的组成成分
【总结提升】 某些微生物的代谢及特点
(1)硝化细菌:自养,需NH3或亚硝酸盐做氮源。
(2)圆褐固氮菌:异养,培养基中不需加氮源。
(3)金黄色葡萄球菌:异养,培养基中需加高浓度食盐。
(4)破伤风杆菌:异养厌氧。
2.无菌技术
(1)目的:防止外来杂菌的入侵。
(2)消毒和灭菌的比较
项目
消毒
灭菌
概念
使用较为温和的物理或化学方法杀死
物体表面或内部的部分微生物(不包
括芽孢和孢子)
用强烈的理化因素杀死物体内外所有
的微生物,包括芽孢和孢子
常用
方法
煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂
消毒法
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用
对象
操作空间、操作者、一些液体等
接种环、接种针、玻璃器皿、培养
基等
(3)连线
(4)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还能有效避免操作者自身被微生物感染。
【易错易混】
(1)消毒与灭菌的最根本区别:芽孢和孢子是否存活。灭菌能杀死芽孢和孢子,因而灭菌更彻底。
(2)具体选择消毒还是灭菌需要考虑:一是效果,灭菌的效果比消毒要好;二是操作对象的承受能力,活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒,而不能灭菌。
[总结升华]
1.培养基的成分
营养物质
作用
功能
主要来源
碳源
能为微生物代谢
提供碳元素
构成生物体的细胞物质
和一些代谢产物,有些
是异养生物的能源物质
无机碳源:CO2、NaHCO3等;有机