专题训练2（无菌技术）练习2026-2027学年高二下学期生物人教版选择性必修3

专题训练2（无菌技术）答案 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C B D D B D B C B D 题号 11 12 13 答案 C B B 1．C 【详解】A、由图可知，②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全打开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连，A正确； B、微生物平板划线过程中要保证始终没有杂菌的污染，因此实验操作过程应该在酒精灯火焰旁进行，B正确； C、接种环在每次划线前、后都需要进行灼烧灭菌，因此共进行了6次灼烧灭菌，C错误； D、划线后未等待菌液被培养基吸收，直接倒置培养时，菌液流动导致菌落混杂或污染，因此待菌液被培养基吸收后才能将平板倒置培养，D正确。 2．B 【详解】A、牛奶不耐高温，牛奶的消毒应采用巴氏消毒法，即在62～65 ℃条件下消毒30分钟或在80～90 ℃条件下处理30 s～1 min，A错误； B、生物消毒法是利用生物或其代谢物去除环境中部分微生物的方法，比如有的微生物能够寄生在多种细菌体内，使细菌裂解，B正确； C、对灭菌物品在160～170 ℃的热空气中维持1～2 h是常见的干热灭菌条件，湿热灭菌如高压蒸汽灭菌时，在压力100 kPa、温度为121 ℃的条件下，维持15～30 min来灭菌，C错误； D、实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，而不是消毒处理。因为消毒一般只能杀死部分微生物，不能完全杀灭芽孢等有较强抗性的微生物，而灭菌可以彻底杀灭包括芽孢在内的所有微生物，以防止污染环境，D错误。 3．D 【详解】A、细胞培养过程中都需要无菌无毒的环境，以保证培养物正常生长，因此培养基和器械都需要经过灭菌，要在无菌环境中进行操作，A正确； B、维持细胞生存必须有适宜的温度和 pH，②植物组织培养和③微生物纯培养均需在固体培养基上进行培养，因此需要加入琼脂，B正确； C、植物组织培养要定期更换培养液，以便清除代谢物，防止细胞代谢产物积累对细胞造成危害，②植物组织培养需要根据不同阶段对激素的需求，更换培养基，C正确； D、纯培养自生固氮菌时培养基中不需要加入氮源，纯培养自养微生物时培养基中不需要加碳源，D错误。 4．D 【详解】A、应根据葡萄球菌的特点配置选择培养基，A正确； B、培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，B正确； C、葡萄球菌需从人体皮肤的微生物中分离，为避免杂菌污染，故需要使用无菌棉拭子从皮肤表面取样，C正确； D、用取样后的棉拭子需要进行选择培养→梯度稀释→再将稀释液涂布到选择培养基上，D错误。 5．B 【详解】A、无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌，A正确； B、接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30min进行消毒，使用过程中使用紫外线照射进行消毒，会危及实验操作者，B错误； C、固体培养基可用于分离、纯化菌种，液体培养基可用于菌种的扩大培养，C正确； D、用平板划线法划完线后，要在培养皿皿底上做好标记，D正确。 6．D 【详解】A、接种环在使用前，必须进行灼烧灭菌，不能仅插入酒精中消毒。灼烧灭菌能够更彻底地杀灭接种环上的微生物，A 错误； B、倒平板时，不能将培养皿盖完全取下，应该只打开一条稍大于瓶口的缝隙，避免空气中的杂菌污染培养基，B错误； C、在无菌操作台内进行操作时，需要关闭紫外灯，因为紫外线对人体有伤害，而且操作过程中人员活动等可能会影响紫外线杀菌效果，同时在操作时主要依靠无菌操作台内的过滤空气来保持无菌环境，C错误； D、在无菌操作过程中，实验者尽量避免说话或快速移动，这样可以减少空气流动，从而降低空气中杂菌污染实验材料的风险，D正确。 7．B 【详解】A、蒸煮可以起到消毒的作用，蒸稻壳的目的除了去除稻壳中残留的农药、霉烂味，还有杀灭一部分杂菌，A正确； B、发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌，温度一般控制在18-30℃，B错误； C、扩大培养需要采用液体培养基，对培养基灭菌常采用湿热灭菌，C正确； D、绿豆烧酒的生产流程中，酵母菌在无氧条件下会产生酒精，并使培养液pH变低，在缺氧和酸性环境条件下酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物因无法适应而受到抑制，该过程虽没有严格的灭菌操作，但发酵过程几乎不会受杂菌污染，D正确。 8．C 【详解】A、乳酸菌进行的是无氧呼吸，因此传统的乳酸发酵制作酸奶的过程中需始终保持密封发酵，A正确； B、随着技术的进步，性状优良的乳酸菌可以从自然界中筛选出来，也可通过诱变育种或基因工程育种获得，B正确； C、培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，调pH之后再进行高压蒸汽灭菌，C错误； D、可采用稀释涂布的方法分离出乳酸菌单一菌种，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上看到的只是一个菌落，故用这种方法测定乳酸菌的数目时，测得的结果通常比实际值偏低，D正确。 9．B 【详解】①在操作的第一步之前灼烧接种环‌是为了确保接种环上没有残留的微生物，从而避免污染培养物‌；划线结束时灼烧接种环‌是为了杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境或感染操作者‌，①错误； ②加入培养基中的指示剂和染料需要灭菌，否则会染菌，影响微生物的培养，②错误； ③家庭制作葡萄酒将容器和葡萄进行消毒，不需要灭菌，③错误； ④煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢，而灭菌，例如干热灭菌能杀灭环境中一切微生物，包括孢子和芽孢，④错误； ⑤涂布平板时所用的涂布器需70%酒精浸泡后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌，⑤正确； ⑥家庭制作泡菜时需要将容器进行清洗消毒，但不需要刻意灭菌，⑥正确； ⑦纯培养物是指只含一种微生物的培养物，与是否含代谢废物无关，⑦错误。 综上，⑤⑥正确，B正确，ACD错误。 10．D 【详解】A、若未进行倒置培养，培养过程中产生的冷凝水会滴落在平板上，从而出现平板上有大量水滴的现象，A正确； B、平板划线法中，随着划线次数增加，菌液浓度逐渐降低，若每次划线前都重新蘸取菌液，菌液浓度过高，难以分离出单个菌落，B正确； C、接种环灼烧后未冷却处理，会导致高温杀死酵母菌，使得接种后的平板上未形成酵母菌菌落，C正确； D、若培养基灭菌不彻底，未接种的平板上也会有杂菌生长形成菌落，而题干说未接种的平板上无菌落产生，说明杂菌不是来自培养基灭菌不彻底，可能是接种过程中操作不规范等原因导致的，D错误。 11．C 【详解】A、在微生物培养过程中，杂菌的存在会对目标微生物的生长和研究造成干扰，所以获得纯净的微生物培养物的关键就是防止杂菌污染，A正确； B、无菌技术主要由消毒和灭菌构成，煮沸能够在一定程度上杀死部分微生物，是常用的消毒方法之一，B正确； C、玻璃吸管、培养皿等用具一般采用干热灭菌的方法来灭菌，C错误； D、微生物接种时，火焰灼烧接种环是为了灭菌，若不冷却就接触样本，高温会杀死样本中的微生物，所以要待其冷却后才能接触样本，D 正确。 12．B 【详解】A、在实验前，应将操作空间、微生物培养的器皿、接种工具等进行灭菌，而操作者的衣着和手需要进行消毒处理，A错误； B、为鉴别出可生产长春碱和长春新碱的酵母菌，可在培养基中加入相应指示剂，可以显出不同的颜色，B正确； C、可采用平板划线法获得酵母菌的纯培养物，培养皿中的一个菌落是同种生物的全部个体，属于一个种群，C错误； D、对于微生物进行扩大培养（富集培养）时需要用液体培养基，D错误。 故选B。 13．B 【详解】A、乳酸菌属于厌氧菌，广泛分布于空气、土壤、植物体表等处，A正确； B、抗生素会抑制或杀灭细菌，包括作为发酵菌种的乳酸菌，若添加抗生素，酸奶发酵过程将无法正常进行，B错误； C、巴氏消毒法通过低温杀菌减少有害微生物，同时保留大部分营养物质，适合用于牛奶等原材料的处理，C正确； D、袋装酸奶“胀袋”通常由产气杂菌（如酵母菌）污染引起，导致气体（如CO2）积累，此类酸奶已变质，不宜食用，D正确。 14．(1)酸性 干热灭菌 灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌 不接种培养/空白培养 (3) 2.56×108 涂布操作不规范未涂布均匀；涂布器灼烧后未充分冷却，导致部分微生物被烫死 (4) 土壤样品中存在多种微生物（无菌操作不规范，混入杂菌等） 避免接种环上残留的微生物污染实验室和环境，避免接种环上残留的微生物感染实验人员 【详解】（1）配置用于乳酸菌纯培养的培养基时，除了提供乳酸菌生长所需的碳源、氮源、水和无机盐等基本营养物质外，还需调整培养基的pH，应使用 “酸性物质”进行调节，因为乳酸菌适宜在此pH值环境下生长，即酸性环境中乳酸菌会成为优势种。 （2）在无菌操作过程中，对玻璃器皿的需要保持干燥的器皿在进行灭菌时可采用干热灭菌法。对试管口、瓶口等容易被污染的部位，可采用（火焰）灼烧法进行灭菌，避免杂菌污染。 （3）利用稀释涂布平板法进行乳酸菌计数。将乳酸菌培养液进行梯度稀释，取104、105、106 三个稀释度的稀释液各0.1mL分别涂布到多个平板上。在适宜条件下培养后，104稀释度平板上菌落数过多，无法计数；105稀释度平板上平均菌落数为256个；106稀释度平板上平均菌落数为23个。由于用于统计的平板中菌落数在30~300之间的平板可以用于统计，因此，每毫升乳酸菌培养液中的活菌数约为256÷0.1×105=2.56×108个。其中一个10-4稀释度平板上的菌落分布不均匀，部分区域菌落密集，部分区域菌落稀疏，这可能是涂布操作不规范未涂布均匀；涂布器灼烧后未充分冷却，导致部分微生物被烫死。 （4）在进行平板划线法分离乳酸菌时，平板上出现了多种形态的菌落，因为菌落具有种的特异性，因此该实验结果说明土壤样品中存在多种微生物，另外无菌操作不规范，混入杂菌等也会出现上述现象。五次划线接种结束时，仍需要灼烧接种环，这样操作的目的是避免接种环上残留的微生物污染实验室和环境，避免接种环上残留的微生物感染实验人员。 答案第4页，共4页 答案第1页，共4页 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题训练2（无菌技术） 1．微生物平板划线的具体操作如图所示，下列说法错误的是（    ） A．图中存在明显错误的操作有②⑥⑦ B．实验操作过程应该在酒精灯火焰旁进行 C．整个过程要用酒精灯对接种环进行5次灼烧灭菌 D．待菌液被培养基吸收后才能将平板倒置培养 2．下列关于无菌操作技术的说法，正确的是（    ） A．一般通过100℃煮沸5~6 min来对牛奶进行消毒 B．利用微生物寄生于细菌体内使其裂解的方法属于生物消毒 C．对灭菌物品进行湿热灭菌时需在160~170℃的条件下维持1~2 h D．实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 3．下列关于①动物细胞培养、②植物组织培养和③微生物纯培养的说法，错误的是（    ） A．培养基和器械都需要经过灭菌，都需要在无菌环境中进行操作 B．都需要保证适宜的温度和pH，②和③需要在培养基中加入琼脂 C．①和②还需要更换培养基或培养液，③不需要更换培养基 D．培养基中都需要加入碳源、氮源、水和无机盐等营养物质 4．皮肤表面存在多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作错误的是（    ） A．应根据葡萄球菌的特点配置选择培养基 B．需要对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌 C．从皮肤表面取样时，应确保棉拭子无菌 D．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布 5．微生物培养和无菌操作是发酵工程的基础。以下说法错误的是（　　） A．无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌 B．接种室、接种箱或超净工作台在使用过程中，可用紫外线照射进行消毒 C．固体培养基可用于分离、纯化菌种，液体培养基可用于菌种的扩大培养 D．用平板划线法划完线后，要在培养皿皿底上做好标记 6．微生物实验中，无菌技术是确保实验成功的关键。关于无菌操作过程，正确的是（  ） A．接种环在使用前，可以直接将其插入酒精中消毒，无需灼烧灭菌 B．倒平板时，可将培养皿盖取下，以便更好地将培养基倒入培养皿 C．在无菌操作台内进行操作时，无需关闭紫外灯，因为紫外灯可持续杀灭空气中微生物 D．无菌操作中，实验者应尽量避免说话或快速移动，以减少空气流动带来的污染风险 7．窑湾绿豆烧酒，香醇甜美，其色宛如绿豆汤，工艺流程如图所示。错误的是（ 　　） A．蒸稻壳不仅可以去除稻壳中残留的农药、霉烂味还能杀灭一部分杂菌 B．发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌，温度一般控制在30~35℃ C．扩大培养需要采用液体培养基，对培养基灭菌常采用湿热灭菌 D．绿豆烧酒的生产流程中，虽没有严格的灭菌操作，但发酵过程几乎不会受杂菌污染 8．为提高发酵产物品质，工业上大规模生产酸奶时，需获得单一乳酸菌菌种。错误的是（　　） A．传统的乳酸发酵制作酸奶的过程中需始终保持密封发酵 B．性状优良的乳酸菌可以从自然界中筛选出来，也可通过诱变育种或基因工程育种获得 C．乳酸菌纯培养时，培养基用干热灭菌法灭菌后调至中性或弱碱性 D．利用稀释涂布平板法分离并测定乳酸菌的数目时，测得的结果通常比实际值偏低 9．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，请分析下列操作，正确的项数是（    ） ①平板划线操作过程中，每次灼烧接种环的目的都是杀死接种环上次残留的菌种 ②加入培养基的指示剂和染料不需灭菌③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 ④干热灭菌可杀死微生物营养细胞和部分芽孢⑤涂平板所用涂布器需酒精浸泡后灼烧灭菌 ⑥家庭制作泡菜无刻意的灭菌环节，发酵初期乳酸菌产生的乳酸可以抑制其他微生物生长 ⑦确保无菌操作条件下，获得的不含代谢废物的微生物培养物即是纯培养物 A．一项 B．二项 C．三项 D．四项 10．某学校用平板划线法接种进行酵母菌的纯培养，发现了一些异常现象，不合理的是（　　） 选项 异常现象 原因分析 A 平板上有大量水滴 未进行倒置培养 B 平板上未分离出单个菌落 每次划线前重新蘸取菌液 C 接种后的平板上未形成酵母菌菌落 接种环灼烧后未冷却处理 D 平板上产生杂菌菌落，但未接种的平板上无菌落产生 培养基灭菌不彻底 11．无菌技术是一套系统性的操作规范，旨在防止微生物污染，广泛应用于医疗、实验室及制药等领域。下列叙述错误的是（　　） A．获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染 B．无菌技术主要包括消毒和灭菌，煮沸是常用的消毒方法之一 C．玻璃吸管、培养皿等用具一般采用湿热灭菌的方法来灭菌 D．微生物接种时，火焰灼烧接种环，待其冷却后才能接触样本 12．在2019年夏秋两季，一些癌症患者突然经历了治疗的中断，这是因为两种常用碱性物质癌症化疗药物长春碱（vinblastine）和长春新碱（vincristine）的短缺。某研究团队对酵母菌进行基因工程改造，使用酵母菌和简单的可再生物质（酵母培养基成分）来制造长春碱前体物质，生产过程不太容易受到疫情及疫情带来的物流问题的干扰，而且生产过程不再依赖植物，因此也不会受到植物病害和自然灾害的影响。下列有关说法正确的是（    ） A．在实验前，应将操作空间、操作者的衣着和手、微生物培养器皿、接种工具等灭菌 B．为鉴别出可生产长春碱和长春新碱的酵母菌，可在培养基中加入相应指示剂 C．可采用平板划线法获得酵母菌的纯培养物，一个菌落即一个群落 D．扩大培养酵母菌时，应将固体培养基倒置于恒温培养箱内进行培养 13．酸奶是以新鲜牛奶或奶粉为原材料在乳酸菌作用下发酵形成的产品，因风味独特，营养价值高而广受人们的喜爱。下列叙述错误的是（    ） A.乳酸菌可分布空气、土壤、植物体表等 B.为防止杂菌污染，发酵酸奶时可适量加抗生素 C．对原材料进行巴氏消毒，有利于防止营养物质被破坏 D．袋装酸奶发生“胀袋”说明酸奶已被杂菌污染，不宜食用 14．某科研团队想从土壤中分离乳酸菌进行纯培养及相关特性研究。请回答下列问题： (1)配置培养乳酸菌的培养基时，除了提供乳酸菌生长所需的碳源、氮源、水和无机盐等基本营养物质外，还需调整培养基pH，应使用 物质（填“酸性”或“碱性”）进行调节，因为乳酸菌适宜在此pH值生长。在无菌操作中，对玻璃器皿进行灭菌可采用 法。对试管口、瓶口等容易被污染的部位，可采用 法进行灭菌。配制的培养基必须进行 灭菌，检测固体培养基灭菌效果的常用方法是 。 (3)利用稀释涂布平板法进行乳酸菌计数。将乳酸菌培养液进行梯度稀释，取10-4、10-5、10-6 三个稀释度的稀释液各0.1mL分别涂布到多个平板上。在适宜条件下培养后，10⁻⁴稀释度平板上菌落数过多，无法计数；105稀释度平板上平均菌落数为256个；10-6稀释度平板上平均菌落数为23个。则每毫升乳酸菌培养液中的活菌数约为 个。其中一个10-4稀释度平板上的菌落分布不均匀，部分区域菌落密集，部分稀疏，可能的原因是 。 (4)在进行平板划线法分离乳酸菌时，平板上出现了多种形态的菌落，原因可能是 。划线接种结束时，仍需要灼烧接种环目的是 。 学科网（北京）股份有限公司 $