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第39讲 微生物的培养技术和应用
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默写小纸条——课前5分钟核心背默
1.培养基的种类及用途:
①按物理性质,可分为 液体 培养基、 半固体 培养基和 固体 培养基。 液体 培养基应用于工业或生活生产, 固体 培养基应用于微生物的分离和鉴定, 半固体 培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
②按照用途, 可分为 选择 培养基和 鉴别 培养基。
2.消毒
① 日常生活中经常用到 煮沸消毒法 ;
②对于一些不耐高温的液体如牛奶, 可使用 巴氏消毒法 ;
③还可使用 化学药物 进行消毒, 例如用 酒精 擦拭双手 、用 氯气 消毒水源等;
④接种室 、接种箱或超净工作台在使用前, 可以用 紫外线照射 ;
项目
理化因素的作用强度
能否完全消灭芽孢和孢子
消毒
较为温和
否
灭菌
强烈
能
3.选择培养基:在微生物学中, 允许特定种类 的微生物生长, 同时 抑制或阻止其他种类 微生物生长的培养基。
4. 微生物的选择培养方法: 稀释涂布平板法 。 由于土壤细菌的数量庞大, 要想得到特定微生物的纯培养物,必须要对土壤进行 充分稀释 ,然后再将菌液 涂布 到制备好的 选择 培养基上。
5.培养物: 在微生物学中, 将接种于 培养基 内, 在 合适条件 下形成的 含特定种类微生物的群体 称为培养物。
6.纯培养物: 由 单一个体 繁殖所获得的 微生物群体 称为纯培养物。 单菌落 一般是由单个微生物繁殖形成的 纯培养物 。
7.纯培养: 获得纯培养物的过程 。
8.菌落的概念: 分散 的微生物在适宜的 固体 培养基表面或内部可以繁殖形成 肉眼可见 的、有一定形态结构 的 子细胞群体 。
9.灭菌
①培养基一般采用 湿热灭菌 , 其中 高压蒸汽灭菌 的效果最好(填灭菌方法);
② 耐高温 的和需保持 干燥 的物品, 如玻璃器皿 、金属用具等, 可采用 干热灭菌 ;
③接种过程中, 微生物的接种工具 、试管口 、瓶口采用 灼烧灭菌 ;
10.获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 , 要注意以下几个方面:
①对实验操作的空间 、操作者的衣着和手, 进行清洁和 消毒 。
②将用于微生物培养的器皿 、接种用具和培养基等进行 灭菌 。
③为避免周围环境中微生物的污染, 实验操作应在 酒精灯火焰 附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 周围的物品 相接触。
11.无菌技术除了用来防止实验室的 培养物 被其他外来微生物污染外, 还能有效避免 操作者自身 被微生物感染。
12.倒平板时要使培养基冷却到 50 ℃左右, 在 酒精灯火焰附近 倒平板。
13.平板划线法过程中, 接种环蘸了 1 次菌液; 若分五个区划线, 则接种环共需灼烧 6 次 。从第二次划线开始, 都应从 上一次划线的末端开始往下一区域 划线。
14.稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外,也常用来统计样品中活菌的数目 。当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数, 就能推测出样品中大约含有多少活菌 。为了保证结果准确, 一般选择菌落数为 30~300 的平板进行计数。在 同一稀释度下,应至少对 3 个平板进行重复计数,然后求出 平均值 。
15.稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目 少 ,这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此,统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
16.C 是某一稀释度下平板上生长菌落数的平均值,V 是涂布平板时吸取的稀释液体积数值(mL), M 是稀释倍数; 则每 g 样品中的细菌数=(C÷V) ×M 。
17.显微镜直接计数法
① 原理: 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板, 在显微镜下观察 、计数, 再计算一定体积的样品中微生物的数量。
②计数工具:血细胞计数板 常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等;细菌计数板可对细菌等较小的细胞计数;
③ 优点: 快速直观。
④ 缺点: ①不能区分活菌和死菌, 统计结果一般是活菌数和死菌数的总和 。②难以观察个体 小 的细菌。
18.分解尿素的细菌合成的 脲酶 可将尿素分解为 氨 , 使培养基的碱性 增强 。可以在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入 酚红 指示剂, 培养某种细菌, 若指示剂 变红 , 可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
19.常用的培养基处理及原理(用符号“+/ -”表示“添加/不加”)
目的
处理
原理
分离酵母菌、霉菌等真菌
+青霉素
青霉素能抑制细菌生长, 对真菌无作用。
分离固氮菌
-氮源
固氮微生物能利用空气中的氮气。
分离自养微生物
-有机碳源
自养微生物能利用无机碳源。
鉴别分解尿素的细菌
+酚红
尿素被分解产生氨, 培养基呈碱性, 酚红指示剂变红。
鉴别纤维素分解菌
+刚果红
刚果红与纤维素能形成红色复合物, 当纤维素被分解后,复合物无法形成, 培养基中出现以菌落为中心的透明圈。
鉴别大肠杆菌
+伊红-美蓝
大肠杆菌的代谢产物与伊红-美蓝结合, 使菌落呈现黑色。
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1.培养基的种类及用途:
①按物理性质,可分为 培养基、 培养基和 培养基。 培养基应用于工业或生活生产, 培养基应用于微生物的分离和鉴定, 培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
②按照用途, 可分为 培养基和 培养基。
2.消毒
① 日常生活中经常用到 ;
②对于一些不耐高温的液体如牛奶, 可使用 ;
③还可使用 进行消毒, 例如用 擦拭双手 、用 消毒水源等;
④接种室 、接种箱或超净工作台在使用前, 可以用 ;
项目
理化因素的作用强度
能否完全消灭芽孢和孢子
消毒
灭菌
3.选择培养基:在微生物学中, 的微生物生长, 同时 微生物生长的培养基。
4. 微生物的选择培养方法: 。 由于土壤细菌的数量庞大, 要想得到特定微生物的纯培养物,必须要对土壤进行 ,然后再将菌液 到制备好的 培养基上。
5.培养物: 在微生物学中, 将接种于 内, 在 下形成的 称为培养物。
6.纯培养物: 由 繁殖所获得的 称为纯培养物。 一般是由单个微生物繁殖形成的 。
7.纯培养: 。
8.菌落的概念: 的微生物在适 培养基表面或内部可以繁殖形成 的、
的 。
9.灭菌
①培养基一般采用 , 其中 的效果最好(填灭菌方法);
② 的和需保持 的物品, 如玻璃器皿 、金属用具等, 可采用 ;
③接种过程中, 微生物的接种工具 、试管口 、瓶口采用 ;
10.获得纯净培养物的关键是 , 要注意以下几个方面:
①对实验操作的空间 、操作者的衣着和手, 进行清洁和 。
②将用于微生物培养的器皿 、接种用具和培养基等进行 。
③为避免周围环境中微生物的污染, 实验操作应在 附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。
11.无菌技术除了用来防止实验室的 被其他外来微生物污染外, 还能有效避免 被微生物感染。
12.倒平板时要使培养基冷却到 ℃左右, 在 倒平板。
13.平板划线法过程中, 接种环蘸了 次菌液; 若分五个区划线, 则接种环共需灼烧 次 。从第二次划线开始, 都应从 划线。
14.稀释涂布平板法除可以用于 外,也常用来 。当样品的稀释度 时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的菌落数, 就能推测出样品中大约含有多少活菌 。为了保证结果准确, 一般选择菌落数为 的平板进行计数。在 稀释度下,应 对 个平板进行重复计数,然后求出 。
15.稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ,这是因为当
连在一起时,平板上观察到的只是一个 。因此,统计结果一般用 而不是用活菌数来表示。
16.C 是某一稀释度下平板上生长菌落数的平均值,V 是涂布平板时吸取的稀释液体积数值(mL), M 是稀释倍数; 则每 g 样品中的细菌数= 。
17.显微镜直接计数法
① 原理: 利用特定的 或 , 在 下观察 、计数, 再计算 的样品中微生物的数量。
②计数工具: 常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等; 可对细菌等较小的细胞计数;
③ 优点: 。
④ 缺点: ①不能区分 , 统计结果一般是 。②难以观察个体 的细菌。
18.分解尿素的细菌合成的 可将尿素分解为 , 使培养基的碱性 。可以在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂, 培养某种细菌, 若指示剂 , 可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
19.常用的培养基处理及原理(用符号“+/ -”表示“添加/不加”)
目的
处理
原理
分离酵母菌、霉菌等真菌
能 , 对真菌无作用。
分离固氮菌
固氮微生物能利用 。
分离自养微生物
自养微生物能利用 。
鉴别分解尿素的细菌
尿素被分解产生 , 培养基呈 , 指示剂变 。
鉴别纤维素分解菌
与纤维素能形成 , 当纤维素被分解后,复合物无法形成, 培养基中出现 。
鉴别大肠杆菌
大肠杆菌的 与 结合, 使菌落呈现 。
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