精品解析：湖北省黄冈市黄梅县第一中学2025-2026学年高二下学期5月月考生物试题

高二年级五月月考生物试题 考试时间：75分钟 一、单选题(每题2分，共36分） 1. 为获得优良的发酵食品，实验室在三支试管中培养了酵母菌、醋酸菌、乳酸菌。下图中甲、乙、丙三支试管的菌种（试管内深色区域表示菌种存在的位置）及其发酵食品对应正确的是（ ） A. 甲试管：醋酸菌—泡菜；乙试管：乳酸菌—果酒；丙试管：酵母菌—果醋 B. 甲试管：醋酸菌—果醋；乙试管：乳酸菌—泡菜；丙试管：酵母菌—果酒 C. 甲试管：醋酸菌—果醋；乙试管：酵母菌—果酒；丙试管：乳酸菌—泡菜 D. 甲试管：酵母菌—果酒；乙试管：醋酸菌—果醋；丙试管：乳酸菌—泡菜 【答案】B 【解析】 【分析】酵母菌是兼性厌氧型，有氧无氧都能生存，用于果酒制作。醋酸菌是好氧菌，用于制醋。乳酸菌是厌氧菌，用于泡菜发酵。 【详解】参与果醋制作的菌种是醋酸菌，为好氧菌，在试管的上层，对应甲试管；参与泡菜制作的菌种是乳酸菌，为厌氧菌，在试管的底层，对应乙试管；参与果酒制作的菌种是酵母菌，为兼性厌氧菌，在试管的各个部分都有分布，对应丙试管。ACD错误、B正确。 故选B。 2. 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下列有关无菌技术的叙述，正确的是（ ） A. 操作者的双手清洁后，用无水乙醇擦拭消毒 B. 巴氏消毒法处理的食品不含微生物，可长期保存 C. 平板划线接种微生物时须在酒精灯火焰旁操作 D. 培养基、培养皿等均须采用干热灭菌法灭菌 【答案】C 【解析】 【分析】实验室常用的灭菌方法：（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121 ℃的条件下，维持15～30min。 【详解】A、操作者的双手清洁后，用体积分数为75%的酒精擦拭消毒，不能用无水乙醇进行消毒，这是因为过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，难以将细菌彻底杀死，达不到消毒的目的，A错误； B、巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底杀死，仍会有部分较耐热的细菌或细菌芽孢存在，故不能长期保存，B错误； C、平板划线接种微生物时须在酒精灯火焰旁操作，以保证接种时处于无菌的环境，防止杂菌污染，C正确； D、培养皿等玻璃器皿可采用干热灭菌法灭菌，培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，D错误。 故选C。 3. 下列有关微生物培养基的配制表述错误的是（ ） A. 培养硝化细菌的培养基中的铵盐可作为氮源和能源 B. 尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH C. 培养光能自养型的蓝细菌的培养基中不需提供有机物 D. 马铃薯蔗糖固体培养基中的琼脂能作为酵母菌的碳源 【答案】D 【解析】 【分析】在自然界中，除了光合作用，还有另外一种制造有机物的方式。少数种类的细菌，细胞内没有叶绿素，不能进行光合作用，但是却能利用体外环境中的某些无机物氧化时所释放的能量来制造有机物。例如，生活在土壤中的硝化细菌，能将土壤中的氨（NH3）氧化成亚硝酸（HNO2），进而将亚硝酸氧化成硝酸（HNO3）。这两个化学反应中释放出的化学能，就被硝化细菌用来将CO2和H2O合成糖类。这些糖类就可以供硝化细菌维持自身的生命活动。 【详解】A、硝化细菌是化能自养型生物，可利用氧化NH3获得能量，将无机物转化为有机物，故培养硝化细菌的培养基中的铵盐可作为氮源和能源，A正确； B、尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH，保证微生物所需的酸碱环境，B正确； C、培养光能自养型的蓝细菌的培养基中不需提供有机物，蓝细菌可利用二氧化碳和水合成有机物，C正确； D、琼脂的作用是凝固剂，不能作为碳源，D错误。 故选D。 4. 科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶，用于生物防治。下列相关叙述错误的是（ ） A. 土壤样品应加到以几丁质为唯一碳源的选择培养基中培养 B. 目的菌的纯化和计数可以使用平板划线法或稀释涂布平板法 C. 可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株 D. 获得的几丁质酶可用于防治某些有害的甲壳类动物、昆虫等生物 【答案】B 【解析】 【分析】1、要从土壤中分离出能合成几丁质酶的微生物，应以几丁质为唯一碳源，以淘汰不能产生几丁质酶的真菌达到筛选效果。 2、水解圈是产生几丁质酶的微生物产生相关酶水解几丁质产生的，水解圈直径/菌落直径越大，说明该菌降解能力越强。 【详解】A、据题意可知，要从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，那么应该用以几丁质为唯一碳源的选择培养基培养，A正确； B、目的菌的纯化和计数可以使用稀释涂布平板法，平板划线法只能用于目的菌的纯化，不能计数，B错误； C、水解圈直径/菌落直径的值可以表示该菌水解能力的大小，水解圈直径/菌落直径的值越大，说明该菌降解几丁质能力越强，反之越弱，因此可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株，C正确； D、几丁质为广泛存在于甲壳类动物的外壳、昆虫的甲壳和真菌的胞壁中，因此获得的几丁质酶可用于防治某些有害的甲壳类动物、昆虫等生物，D正确。 故选B。 5. 某兴趣小组按如图方法对没有加工的鲜奶进行细菌检测。有关叙述正确的是（ ） A. 用湿热灭菌法对该实验中的鲜奶进行灭菌 B. 若培养基需要调节pH，应该在灭菌后培养基凝固前立即进行 C. 若3个培养皿中菌落数为35、33、34，则鲜奶中细菌数为3.4×106个/mL D. 对鲜奶中细菌计数，常采用稀释涂布平板法，统计的结果往往比实际值偏高 【答案】C 【解析】 【分析】稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 【详解】A、实验的目的是检测鲜奶中的细菌数，若使用湿热灭菌法处理鲜奶，则鲜奶就不含有细菌了，A错误； B、若培养基需要调节pH，应该在灭菌前进行，B错误； C、从图中可以看出涂布时添加的0.1mL的鲜奶共稀释了10×10×10×10=104倍，所以1mL鲜奶中细菌数为（35+33+34）÷3×104×10=3.4×106个/mL，C正确； D、使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细胞连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，D错误。 故选C。 6. 关于植物组织培养的再分化过程，说法错误的是（ ） A. 再分化过程中，不同细胞内合成了功能不同的特异性蛋白质 B. 脱分化与再分化过程所使用的培养基主要是激素浓度及用量比例的不同 C. 再分化过程在实验室或植物组织培养车间进行，需要避光处理 D. 再分化过程中，核遗传物质没有发生改变，但mRNA有变化 【答案】C 【解析】 【分析】已分化的细胞，当受到创伤或进行离体培养(也受到创伤)时，已停止分裂的细胞又重新恢复分裂，细胞改变原有的分化状态，失去原有结构和功能，成为具有未分化特性的愈伤组织的过程称脱分化，又称去分化。将脱分化产生的愈伤组织继续培养，又可以重新分化形成芽和根等器官，这个过程叫再分化。 【详解】A、再分化的实质是分化的过程，细胞内的基因选择性表达，不同细胞内合成了功能不同的特异性蛋白质，A正确； B、决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，因此脱分化与再分化二者使用的培养基主要是激素用量及比例的不同，B正确； C、形成愈伤组织时要进行避光处理，但再分化过程是形成根和芽等营养器官。芽的形成需要光照的参与，才能形成叶绿素(叶绿素的形成过程需要光照)，所以再分化过程需要光照，C错误； D、再分化的实质是细胞分化，分化过程是基因选择性表达的过程，该过程中核遗传物质没有发生改变，但mRNA有变化，D正确。 故选C。 7. 植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理相符的是（　　） A. 原生质体融合和动物细胞融合——生物膜选择透过性 B. 动物细胞培养——细胞的全能性 C. 纤维素酶、果胶酶处理——酶的高效性 D. 紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞增殖 【答案】D 【解析】 【详解】A、原生质体融合和动物细胞融合的过程中，都利用了细胞膜的流动性，A错误； B、动物细胞培养没有利用细胞的全能性，利用了细胞增殖的原理，B错误； C、植物细胞细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，利用酶的专一性，纤维素酶和果胶酶能够去除植物细胞的细胞壁，C错误； D、紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养都可获得多个细胞，都利用了细胞增殖的原理，D正确。 8. 海拉（HeLa）细胞是1951年从一位患宫颈癌的美国病人身上分离出来的宫颈癌细胞，该病人已经去世，但海拉细胞直到今天还有被用于科学研究。下列说法正确的是（ ） A. 海拉细胞可在体外大量增殖，在细胞培养过程中会出现接触抑制现象 B. 将癌变的宫颈癌组织分散为单个的海拉细胞，可用胃蛋白酶处理 C. 培养海拉细胞时，氧气是细胞代谢所必需的，可将培养皿置于含有95％的O2和5％的CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养 D. 培养液还需定期更换，以便清除代谢废物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 【答案】D 【解析】 【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养；接触抑制是指当贴壁细胞生长到表面相互接触时，会出现停止分裂增殖的现象。 【详解】A、海拉细胞为癌细胞，具有无限增殖的能力，但海拉细胞在体外增殖需要适宜的条件；在细胞培养过程中不会出现接触抑制现象，A错误； B、将癌变的宫颈癌组织分散为单个的海拉细胞，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，B错误； C、培养海拉细胞时，氧气是细胞代谢所必需的，可将培养皿置于含有95％的空气加5％的CO2的混合气体的培养箱中进行培养，C错误； D、应定期更换培养液，以便清除代谢废物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，D正确。 故选D。 9. 2021年6月，我国首个原创性抗体偶联药物（ADC）获批上市。该药采用人源化抗HER2抗体，通过可切割的接头与高效毒性分子MMAE偶联。ADC被肿瘤细胞内吞后，载荷MMAE被释放到细胞质中后，可抑制细胞中微管蛋白聚合，进而影响纺锤体的形成。下列叙述错误的是（　　） A. 传统鼠源性单抗可能会引起人体产生相应抗体进而影响ADC的效果 B. ADC中接头稳定性偏低会导致药物分子脱落而对正常细胞造成损伤 C. 连接抗体和MMAE的接头可能在肿瘤细胞溶酶体中被蛋白酶破坏 D. MMAE可能抑制肿瘤细胞内着丝粒分裂从而使其停滞在分裂中期 【答案】D 【解析】 【分析】抗体偶联药物( antibody-drug conjugate，ADC) 是将单克隆抗体药物的高特异性和小分子细胞毒药物的高活性相结合，用以提高肿瘤药物的靶向性、减少毒副作用。和传统的完全或部分人源化抗体或抗体片段相比，ADC因为能在肿瘤组织内释放高活性的细胞毒素从而理论上疗效更高。 【详解】A、传统鼠源性单抗对人体来说是抗原，可能会引起人体产生相应抗体，使得单抗药物疗效减弱，并且引起严重的不良反应，进而影响ADC的效果，而人源化单抗能够克服人抗鼠抗体反应，避免单抗分子被免疫系统当作异源蛋白而被快速清除，提高单抗药物的药效，A正确； B、抗体偶联药物（ADC）是采用人源化抗HER2抗体，通过可切割的接头与高效毒性分子MMAE偶联，因此ADC中接头稳定性偏低会导致药物分子脱落而对正常细胞造成损伤，造成“脱靶毒性”，B正确； C、抗体的化学本质是蛋白质，连接抗体和MMAE的接头是蛋白质，因此可能在肿瘤细胞溶酶体中被蛋白酶破坏，C正确； D、据题意可知，ADC被肿瘤细胞内吞后，可抑制细胞中微管蛋白聚合，进而影响纺锤体的形成，进而影响纺锤丝牵拉染色体移向两极，不影响着丝粒的分裂，D错误。 故选D。 10. 下列关于哺乳动物受精的描述正确的是（ ） ①获能后的精子与卵子相遇，释放多种酶，以溶解卵细胞膜外的结构（如透明带等） ②精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜发生反应，阻止后来的精子进入卵内 ③精子入卵后，原有核膜破裂，最后形成一个比原来精子的核还大的雄原核 ④精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核 ⑤合子中的遗传物质，一半来自父方，一半来自母方 A. ①③④ B. ③④⑤ C. ②④⑤ D. ①③⑤ 【答案】A 【解析】 【分析】胚胎干细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。 【详解】①精子与卵子接触，释放多种酶如顶体酶，以溶解卵细胞膜外的结构（如透明带等），如发生透明带反应，①正确； ②精子入卵的瞬间，卵细胞膜发生反应，阻止后来的精子进入卵内，②错误； ③精子入卵后，原有核膜破裂，最后形成一个比原来精子的核还大的雄原核，③正确； ④精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核，④正确； ⑤合子中的核遗传物质，一半来自父方，一半来自母方，⑤错误。 故选A。 11. 如图所示为治疗性克隆的基本过程，首先取病人的体细胞核，移植到去核的卵母细胞中，在早期胚胎形成后，从中分离获得胚胎干细胞（ES细胞），对ES细胞进行基因修饰和定向分化处理，将定向分化后的细胞移植给病人，从而达到治疗疾病的目的。下列相关叙述错误的是（　　） A. 接受细胞核的卵母细胞处于减数第二次分裂中期 B. 获得图中去核的卵母细胞时，可通过显微操作去核 C. 图中形成的器官用于移植，理论上可以避免免疫排斥反应 D. 治疗性克隆过程采用的技术有核移植技术和胚胎移植技术 【答案】D 【解析】 【分析】减数分裂是有性生殖的生物产生生殖细胞时，从原始生殖细胞发展到成熟生殖细胞的过程。这个过程中DNA复制一次，细胞分裂两次，产生的生殖细胞中染色体数目是本物种体细胞中染色体数目的一半。 【详解】A、卵母细胞进行减数分裂时停止在减数第二次分裂中期，因此接受细胞核的卵母细胞处于减数第二次分裂中期，A正确； B、显微镜下可以通过显微操作去核，B正确； C、图中形成的器官来源于病人的细胞，用于移植，理论上可以避免免疫排斥反应，C正确； D、治疗性克隆过程采用的技术有核移植技术，不用进行胚胎移植技术，D错误。 故选D。 12. 羊奶的脂肪颗粒体积为牛奶的三分之一，更利于人体吸收，其维生素及微量元素含量明显高于牛奶。欲利用胚胎工程技术加快高产奶的萨能山羊的繁殖，下列说法正确的是(　　) A. 为使萨能母羊超数排卵，可在其饲料中添加适量的促性腺激素 B. 卵裂期的细胞数量增加，但细胞的体积和细胞内有机物的种类会减少 C. 为提高胚胎利用率，可采用胚胎分割移植等无性繁殖技术 D. 生产上可选用原肠胚细胞进行性别鉴定 【答案】C 【解析】 【详解】A、促性腺激素的化学本质为蛋白质，若添加到饲料中口服，会被动物消化道内的蛋白酶分解失活，无法发挥作用，超数排卵需通过注射方式补充促性腺激素，A错误； B、卵裂期细胞通过有丝分裂增殖，细胞数量增加，胚胎总体积不增加；该时期细胞代谢旺盛，有机物总量因呼吸消耗减少，但代谢会产生多种中间产物，同时基因表达合成多种蛋白质，因此有机物种类会增加，B错误； C、胚胎分割移植技术可将早期胚胎分割为多等份，移植后获得多个同卵后代，属于无性繁殖技术，能够显著提高胚胎利用率，C正确； D、生产上通常选择囊胚期的滋养层细胞进行性别鉴定，原肠胚细胞分化程度高，不适用于性别鉴定，D错误。 13. 如图为利用逆转录方法和PCR技术扩增目的基因片段的过程示意图。据图分析，下列说法错误的是(　　) A. 在第3轮PCR结束后，两条链等长的DNA占1/4 B. ⑤过程使用72 ℃左右的温度处理既可以防止DNA变性，又可以促进子链的延伸 C. ④过程两种引物通过碱基互补配对分别与DNA两条单链结合 D. 第4轮④过程中消耗15对引物 【答案】D 【解析】 【详解】 A、在第3轮PCR结束后，两条链等长的DNA的数量为2，经过3次复制后产生的DNA分子数目为23=8，可见，两条链等长的DNA片段占1/4，A正确； B、⑤过程为延伸，延伸过程使用70～75℃的温度处理既可以防止DNA变性，还能促进子链的延伸，B正确； C、④过程为复性，复性过程使用55℃的温度处理，使两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，C正确； D、第4轮中产生的DNA分子数目为24=16个，该过程需要新合成16条子链，因而需要16个引物，即④过程中消耗8对引物，D错误。 14. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的叙述，错误的是(　　) A. 将预冷酒精加入上清液后，出现的白色丝状物为粗提取的DNA B. 鉴定DNA时应将丝状物直接加到二苯胺试剂中进行水浴加热 C. 将扩增得到的PCR产物与不含指示剂的电泳缓冲液混合，注入加样孔 D. 在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小、构象等有关 【答案】BC 【解析】 【详解】A、DNA不溶于酒精，而细胞中的多数蛋白质等杂质可溶于酒精，向上清液中加入预冷的95%酒精后，析出的白色丝状物就是粗提取的DNA，A正确； B、鉴定DNA时，需先将DNA丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂进行水浴加热，B错误； C、PCR产物电泳加样时，需将PCR产物与含指示剂的载样缓冲液混合，指示剂还可指示电泳进程；电泳缓冲液是置于电泳槽中的缓冲液，不能用于和样品混合加样，C错误； D、凝胶中DNA的迁移速率受多种因素影响：凝胶浓度越高，孔隙越小，DNA迁移越慢；DNA分子越大，迁移速率越低；相同分子量的DNA，构象不同（如超螺旋、线性、开环）迁移速率也存在差异，D正确。 15. 当目的基因和质粒都用Hind Ⅲ处理、连接后，目的基因可能正向插入载体，也可能反向插入载体，为判断目的基因的插入方向，可使用限制酶处理，并进行电泳检测（如图）。下列选项中能判断目的基因插入方向的限制酶是（ ） 注：EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和Hind Ⅲ的识别序列、切割位点均不同，数字表示相邻两个限制酶切点之间的碱基对数（bp），质粒全长20000bp。 A. Hind Ⅲ B. EcoR I C. BamH I D. EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ 【答案】B 【解析】 【分析】限制酶能特异性地识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，而且只能切割特定序列中的特定部位。 【详解】A、识图分析可知，图中质粒用限制酶Hind Ⅲ处理，并进行电泳后，无论正向插入还是反向插入的均会出现的DNA片段为：5000+4000=9000bp和1000+2000+5000+3000=11000bp，因此用该限制酶处理后不能判断目的基因的插入方向，A错误； B、识图分析可知，图中质粒用限制酶EcoR I处理，并进行电泳后，正向插入的质粒会出现的DNA片段为：1000+2000+5000=8000bp和5000+4000+3000=12000bp，而反向插入的质粒切割后会出现的DNA片段为：1000+2000+4000=7000bp和5000+3000+5000+3000=13000bp，因此正向插入和反向插入用还限制酶EcoR I处理电泳后得到的DNA片段大小不同，可以判断目的基因的插入方向，B正确； C、识图分析可知，图中质粒用限制酶BamH I处理，并进行电泳后，无论正向插入还是反向插入的均会出现的DNA片段为：5000+1000=6000bp和4000+2000+5000+3000=14000bp，因此用该限制酶处理后不能判断目的基因的插入方向，C错误； D、识图分析可知，图中质粒用限制酶EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ共同处理，并进行电泳后，无论正向插入还是反向插入的均会出现的DNA片段为：2000+1000=3000bp、5000bp、4000bp、5000+3000=8000bp，因此用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ限制酶处理后不能判断目的基因的插入方向，D错误。 故选B。 16. 水杨酸羟化酶可催化水杨酸转化为龙胆酸，龙胆酸可被细胞利用。科研人员欲将水杨酸羟化酶基因与红色荧光蛋白基因（mrfp）连接成融合基因，导入工程菌中，以实现对水杨酸的动态监测和清除，基因结构如图所示。现欲通过PCR判断融合基因的连接方向是否正确，应选用的引物组合是（　　） A. 引物1和引物3 B. 引物1和引物4 C. 引物1和引物2 D. 引物2和引物4 【答案】A 【解析】 【详解】PCR技术要求引物与模板链的3'端互补配对，且DNA聚合酶从引物的3'端开始延伸子链。要判定水杨酸羟化酶基因与mrfp基因连接成的融合基因已准确连接，需要选择能扩增出融合基因的引物组合。引物1和引物3可以分别与融合基因中水杨酸羟化酶基因的3'端和mrfp基因的3'端互补配对，从而扩增出融合基因，所以应选择的引物组合是引物1和引物3，A正确。 17. THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述错误的是（    ） EcoR Ⅰ BamH Ⅰ Kpn Ⅰ Mfe Ⅰ Hind Ⅲ 5′−G↓AATTC−3 3′− CTTAA↑G−5′ 5′−G↓GATCC−3 3′− CCTAG↑G−5′ 5′−G↓GTACC−3′ 3′−CCATG↑G −5′ 5′−C↓AATTG−3′ 3′−GTTAA↑C −5′ 5′−A↓AGCTT−3′ 3′−TTCGA↑A −5′ A. THP9基因有2个游离的磷酸基团，而且游离的磷酸基团在5′端 B. 构建基因表达载体时，用Kpn Ⅰ、Hind Ⅲ切割质粒和目的基因 C. 利用PCR技术获取THP9基因时应选择引物2和引物3 D. 为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要在个体水平上检测其蛋白质含量 【答案】B 【解析】 【详解】A、THP9基因是双链DNA，每条链的5′端有1个游离的磷酸基团，因此THP9基因共有2个游离的磷酸基团，且都在5′端，A正确； B、构建基因表达载体时，需要避免破坏质粒的启动子、终止子、标记基因（氨苄青霉素抗性基因），同时要保证目的基因（THP9）按正确方向插入到质粒的启动子和终止子之间，图中THP9基因转录的方向为从左往右，则正确插入时THP9基因的左侧应当靠近启动子、右侧应当靠近终止子，用Kpn Ⅰ和Hind Ⅲ切割质粒和目的基因，目的基因能够插入质粒，但反向连接，不能正常表达，B错误； C、利用PCR技术扩增基因时，引物需要与模板链的3'端结合，故应选择引物2和引物3，C正确； D、利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种，为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要在个体水平上检测玉米蛋白质含量，判断是否获得高蛋白性状，D正确。 18. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸(ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP)，子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧腺苷三磷酸(dATP)，继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述不正确的是(　　) A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 5′－CTACCCGTGAT－3′为对照个体的一段序列 C. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G D. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越快 【答案】C 【解析】 【详解】A、利用双脱氧测序法时，PCR反应体系中加入的模板是待测的单链DNA，故只需加入一种引物，A正确； B、依据分析中双脱氧测序法的原理，可以确定每个泳道中的条带（DNA片段）的3'末端的碱基，如+ddATP的泳道中出现的条带（DNA片段）的3'终端碱基就是A。另外由于每个片段的起始点相同，但终止点不同，因此可以通过比较片段的长度来确定DNA序列中每个位置上的碱基；图示电泳方向为从上→下，即对应的DNA片段为长→短，则对应的DNA测序结果为3'→5'，如对照个体的电泳结果最短的条带为+ddCTP泳道组的条带，则说明该DNA片段5'端第一个碱基为C；因此对照个体的测序结果为5'-CTACCCGTGAT-3'，患者的测序结果为5'-CTACCTGTGAT-3'，B正确； C、对比患者和对照个体的测序结果可知，患者该段序列中某位点的碱基C突变为T，C错误； D、电泳时，产物的片段越大，迁移速率越慢，反之越快，D正确。 二、非选择题(除标注外每空2分，共64分） 19. 食醋酿造是多种微生物共同作用的过程，主要微生物为霉菌、酵母菌、醋酸菌和乳酸菌。食醋发酵过程分为淀粉糖化、酒精发酵和醋酸发酵三个阶段，期间有不同种类的微生物生长繁殖并产生各种酶类，经过一系列复杂的生物化学变化最终形成食醋。 （1）发酵原料中的淀粉为微生物提供________(营养物质)。参与发酵的多种微生物种间关系属于________。 （2）研究人员对食醋固态发酵过程中微生物的生长变化规律进行研究。下图为醋醅(食醋发酵的物料)不同层次的酵母菌和醋酸菌数量变化情况。 ①用________________法将接菌种接种到添加了碳源、氮源、无机盐、水以及________的培养基中，培养一段时间，获得单菌落后，挑选菌落数符合要求的平板进行计数。 ②由图1可知，整个发酵过程中酵母菌数量呈现________________________的趋势，且在不同层次上随着深度增加而减少。初期，由于________________，上层菌增殖速度高于中层及下层菌。之后，随着发酵条件的变化，酵母菌基本停止繁殖而主要进行酒精发酵。在第7天以后随发酵时间延长，酵母菌的数量呈降低趋势，原因是________________________________________________________________________________________________________________。 ③图2显示，醋酸菌在1～3天繁殖最快。醋酸菌将乙醇转化为醋酸，反应简式为：_______________________________________________________________。 【答案】（1） ①. 碳源 ②. 种间竞争 （2） ①. 稀释涂布平板法 ②. 琼脂 ③. 先快速升高后缓慢降低 ④. 溶解氧的存在 ⑤. 酒精的增多以及酸的产生不适宜酵母的生长繁殖(营养物质减少及有害代谢产物的积累) ⑥. C2H5OH＋O2CH3COOH＋H2O＋能量 【解析】 【小问1详解】 淀粉属于多糖，为微生物的生长提供碳源。参与发酵的多种微生物为了生长繁殖，它们之间争夺营养物质和生存空间，其种间关系属于竞争关系。 【小问2详解】 ①为了了解醋醅不同层次的酵母菌和醋酸菌数量变化情况，利用稀释涂布平板法得到单菌落后计数。该培养基为固体培养基，该培养基中应该含有碳源、氮源、无机盐、水以及凝固剂琼脂等。②由图1可知，酵母菌在发酵过程中先快速升高后缓慢降低。发酵初期，上层溶解氧的浓度高，因而上层菌增殖速度高于中层及下层菌。之后，由于溶解氧的消耗殆尽，酵母菌进行无氧呼吸，产生酒精。由于酒精的增多以及酸的产生(营养物质减少及有害代谢产物的积累)不适宜酵母的生长繁殖，在第7天以后酵母菌的数量呈降低趋势。③由图2可知，醋酸菌在1-3天直线的斜率最大，其繁殖最快。醋酸菌将乙醇转化为醋酸，反应简式为：C2H5OH＋O2CH3COOH＋H2O＋能量。 20. 电影《我不是药神》中的格列卫是一种治疗癌症的靶向药物，此类靶向药物可称为“生物导弹”。通常，我们采用动物细胞融合技术来制备单克隆抗体，利用单克隆抗体来诊断和治疗癌症可能会成为攻克癌症的重要手段。 （1）若单克隆抗体与药物结合制成“生物导弹”治疗肠癌，则特定抗原通常是____________________。靶向药物比普通的化疗药物疗效高、毒副作用小是因为 ____________________。 （2）图中诱导细胞融合时需要采用_________________________ 或电融合法等方法诱导，杂交瘤细胞的特点是________________________________。 （3）用特定的选择培养基筛选出融合的杂交瘤细胞进行____________和________，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 （4）近年来，科学家发现丁酸钠对杂交瘤细胞产生单克隆抗体有一定的影响，某科研小组进行了相关实验，结果如表所示：丁酸钠对杂交瘤细胞产生单克隆抗体的影响 丁酸钠的浓度/(mmol·L-1) 时间/h 48 96 144 0 1∶320 1∶640 1∶1 200 0.25 1∶320 1∶1 280 1∶2 500 0.5 1∶160 1∶2 500 1∶2 500 0.75 1∶320 1∶320 1∶640 注：表中比值表示抗体效价，值越高表明越有利于抗体的产生。 ①该实验过程中培养杂交瘤细胞的培养瓶放在了含5%CO2的培养箱中培养，CO2的主要作用是________________，该实验的自变量为_______________________。 ②根据表中数据，分析丁酸钠浓度与单克隆抗体产生量的关系： __________________。 【答案】（1） ①. 肠癌细胞(膜)表面的蛋白质 ②. 单克隆抗体可特异性地结合癌细胞，不损伤正常细胞 （2） ①. 灭活病毒诱导法或聚乙二醇(PEG)融合法 ②. 既能迅速大量增殖，又能产生抗体 （3） ①. 克隆化培养 ②. 抗体检测 （4） ①. 维持培养液的pH ②. 丁酸钠的浓度和培养时间 ③. 在一定浓度范围内，丁酸钠浓度越高，单克隆抗体产生越多，超过一定浓度，丁酸钠会抑制抗体的产生 【解析】 【小问1详解】 制备治疗肠癌的单克隆抗体时，需要用肠癌细胞表面的特定抗原免疫小鼠，使小鼠产生能分泌针对该抗原的抗体的 B 淋巴细胞，最终得到的单克隆抗体能特异性识别肠癌细胞。“生物导弹” 的原理是单克隆抗体的特异性识别作用，它能将药物定向带到癌细胞部位，在原位杀死癌细胞，避免了化疗药物对正常细胞的杀伤，因此疗效高、毒副作用小。 【小问2详解】 诱导动物细胞融合的方法包括：物理法（电融合法）、化学法（PEG / 聚乙二醇融合法）、生物法（灭活病毒诱导法，如仙台病毒）。杂交瘤细胞是 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的产物，兼具两者的优点：骨髓瘤细胞的无限增殖能力和 B 淋巴细胞的分泌特异性抗体的能力。 【小问3详解】 选择性培养基筛选出的杂交瘤细胞，还需要进行克隆化培养（获得单个细胞的克隆）和抗体检测（筛选出能分泌目标抗体的杂交瘤细胞），经过多次筛选，最终获得能稳定分泌所需抗体的杂交瘤细胞株。 【小问4详解】 动物细胞培养中，5% CO₂的作用是维持培养液的 pH，CO₂溶于培养液中形成碳酸缓冲体系，防止培养液 pH 剧烈变化影响细胞存活。实验的自变量是丁酸钠的浓度（0、0.25、0.5、0.75 mmol・L⁻¹）和培养时间（48h、96h、144h），二者都会影响抗体效价（因变量）。丁酸钠浓度为 0 时，抗体效价随时间延长升高，但整体低于添加丁酸钠的组；0.25、0.5 mmol・L⁻¹ 组，随时间延长，抗体效价升高，其中 0.5 mmol・L⁻¹ 组在 96h 和 144h 效价达到最高；0.75 mmol・L⁻¹ 组，随时间延长效价反而下降，说明高浓度丁酸钠抑制抗体产生。 整体趋势：低浓度丁酸钠（0.25~0.5 mmol・L⁻¹）促进抗体产生，且随时间延长促进作用增强；高浓度（0.75 mmol・L⁻¹）抑制抗体产生。 21. 由于猪的器官在生理形态上和人的器官非常接近，近年来应用猪的体细胞核移植技术研制人类基因疾病的动物模型，以及生产基因敲除猪用于人异种器官移植成为猪核移植相关研究的热点方向。下图为猪的体细胞核移植流程示意图，请回答下列问题。 （1）研究人员在用合成培养基对猪耳部成纤维细胞进行培养时，通常需加入________等一些天然成分。 （2）从卵巢中采集的卵母细胞需在体外培养至________期才能用于体细胞核移植。除该方法外，采集卵母细胞还可采用超数排卵法，其具体做法是给卵母细胞供体注射_________________，使其排出更多的卵子。 （3）重构胚通常需培养至________________期，然后通过________技术送入代孕母猪体内。为提高胚胎的利用率，还可采用________技术对胚胎进行处理。 （4）就猪的体细胞移植技术本身来讲，虽然已经有多例体细胞克隆猪诞生，但总体的效率还是较低的，克隆猪的存活率只有1%或更低。研究表明，用组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(VPA)处理重构胚能显著提高其发育能力。从而大大提高克隆效率。若想探究VPA处理重构胚的最适浓度，其实验思路是______________________________________________________________________。 【答案】（1）血清(或动物血清) （2） ①. M Ⅱ ②. 促性腺激素 （3） ①. 桑葚胚或囊胚 ②. 胚胎移植 ③. 胚胎分割 （4）设置一系列浓度梯度的VPA溶液分别处理重构胚，一段时间后观察统计胚胎的发育情况 【解析】 【小问1详解】 合成培养基的成分明确，但仍无法完全模拟体内环境，因此通常需要加入 血清（或血浆）等天然成分，血清中含有细胞生长增殖所需的多种未知生长因子、激素、营养物质，能促进细胞贴壁、分裂和存活。 【小问2详解】 体细胞核移植中，卵母细胞需要培养至减数第二次分裂中期（MⅡ 中期），此时卵母细胞的细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质，且具备受精和发育的潜能，是核移植的最佳时期。超数排卵的操作是给供体注射促性腺激素，促进卵泡发育和排卵，从而一次性排出更多卵子，便于后续收集卵母细胞。 【小问3详解】 重构胚需要在体外培养至桑葚胚或囊胚期，此时胚胎的分化程度较低，移植后成活率高。将胚胎送入代孕母猪体内的技术是胚胎移植，这是胚胎工程中获得后代的关键步骤。提高胚胎利用率的常用方法是胚胎分割，可以将一枚胚胎分割成多份，获得多个遗传性状相同的后代。 【小问4详解】 探究最适浓度的实验思路核心是设置梯度浓度、观察指标。自变量：VPA 的浓度（设置一系列梯度）。因变量：重构胚的发育情况（如发育率、存活率、囊胚率等），通过比较不同VPA溶液浓度下的重构胚发育能力，确定最适浓度。 22. 农杆菌Ti质粒上的T－DNA(序列已知)可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将图1中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T－DNA插入位置两侧的未知序列，进一步分析可确定T－DNA插入的具体位置。T－DNA的序列如图2所示，虚线处省略了部分核苷酸序列。已知Sal Ⅰ酶的识别序列为5′—G↓TCGAC—3′。回答下列问题： （1）PCR技术扩增时起关键作用的酶是________，其作用是___________________。 （2）扩增出T－DNA插入位置两侧的未知序列时，需要先根据____________________设计两种特异性引物序列，利用图中的引物________组合可扩增出T－DNA两侧的未知序列。 （3）若只使用一种引物，通过PCR技术制备与T－DNA的b链相同的单链作为某些检测的探针，则所选择引物由5′→3′的前5个碱基序列为________。 （4）对PCR产物测序，经分析得到了图1中的未知序列。下列DNA单链序列中(虚线处省略了部分核苷酸序列)，可能正确的是________。 A. 5′—GTCGACCAC……ATGTCGA—3′ B. 5′—AATTCCATG……CTGAATT—3′ C. 5′—GCAATGCGT……TCGGGAA—3′ D. 5′—TTGATACGC……CGAGTAC—3′ （5）PCR技术扩增出T－DNA插入位置两侧的未知序列后，扩增产物可用________________技术进行鉴定。 【答案】（1） ①. Taq DNA聚合酶##耐高温的DNA聚合酶 ②. 将游离的脱氧核苷酸连到引物的3′端 （2） ①. T-DNA两端已知的碱基序列 ②. ①④ （3）5′—CTGTC—3′ （4）A （5）琼脂糖凝胶电泳 【解析】 【小问1详解】 PCR技术需要在高温条件下进行变性，故进行PCR扩增需要Taq DNA聚合酶（或耐高温的DNA聚合酶），DNA聚合酶（Taq酶）将游离的脱氧核苷酸连到引物的3'端。 【小问2详解】 根据T-DNA基因两端已知的碱基序列设计两种特异性引物序列，DNA的两条链反向平行，子链从引物的3′端开始延伸，则利用图中的引物①、④组合可扩增出两侧的未知序列。 【小问3详解】 通过PCR技术制备与T-DNA的b链相同的单链作为某些检测的探针，则根据碱基互补配对原则，则引物由5'→3'的前5个碱基序列为5′-CTGTC-3′。 【小问4详解】 由于Sal l酶的识别序列为5'-G↓TCGAC-3'，则扩增的未知序列中应该含有相关序列，A正确，BCD错误。 【小问5详解】 电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带电荷不同，把待测分子的混合物放在一定介质（如琼脂糖凝胶）中进行分离和分析的实验技术，PCR技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列后，扩增产物可用琼脂糖凝胶电泳技术进行鉴定。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二年级五月月考生物试题 考试时间：75分钟 一、单选题(每题2分，共36分） 1. 为获得优良的发酵食品，实验室在三支试管中培养了酵母菌、醋酸菌、乳酸菌。下图中甲、乙、丙三支试管的菌种（试管内深色区域表示菌种存在的位置）及其发酵食品对应正确的是（ ） A. 甲试管：醋酸菌—泡菜；乙试管：乳酸菌—果酒；丙试管：酵母菌—果醋 B. 甲试管：醋酸菌—果醋；乙试管：乳酸菌—泡菜；丙试管：酵母菌—果酒 C. 甲试管：醋酸菌—果醋；乙试管：酵母菌—果酒；丙试管：乳酸菌—泡菜 D. 甲试管：酵母菌—果酒；乙试管：醋酸菌—果醋；丙试管：乳酸菌—泡菜 2. 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下列有关无菌技术的叙述，正确的是（ ） A. 操作者的双手清洁后，用无水乙醇擦拭消毒 B. 巴氏消毒法处理的食品不含微生物，可长期保存 C. 平板划线接种微生物时须在酒精灯火焰旁操作 D. 培养基、培养皿等均须采用干热灭菌法灭菌 3. 下列有关微生物培养基的配制表述错误的是（ ） A. 培养硝化细菌的培养基中的铵盐可作为氮源和能源 B. 尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH C. 培养光能自养型的蓝细菌的培养基中不需提供有机物 D. 马铃薯蔗糖固体培养基中的琼脂能作为酵母菌的碳源 4. 科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶，用于生物防治。下列相关叙述错误的是（ ） A. 土壤样品应加到以几丁质为唯一碳源的选择培养基中培养 B. 目的菌的纯化和计数可以使用平板划线法或稀释涂布平板法 C. 可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株 D. 获得的几丁质酶可用于防治某些有害的甲壳类动物、昆虫等生物 5. 某兴趣小组按如图方法对没有加工鲜奶进行细菌检测。有关叙述正确的是（ ） A. 用湿热灭菌法对该实验中的鲜奶进行灭菌 B. 若培养基需要调节pH，应该在灭菌后培养基凝固前立即进行 C. 若3个培养皿中菌落数为35、33、34，则鲜奶中细菌数为3.4×106个/mL D. 对鲜奶中细菌计数，常采用稀释涂布平板法，统计的结果往往比实际值偏高 6. 关于植物组织培养的再分化过程，说法错误的是（ ） A. 再分化过程中，不同细胞内合成了功能不同的特异性蛋白质 B. 脱分化与再分化过程所使用的培养基主要是激素浓度及用量比例的不同 C. 再分化过程在实验室或植物组织培养车间进行，需要避光处理 D. 再分化过程中，核遗传物质没有发生改变，但mRNA有变化 7. 植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理相符的是（　　） A. 原生质体融合和动物细胞融合——生物膜选择透过性 B. 动物细胞培养——细胞的全能性 C. 纤维素酶、果胶酶处理——酶的高效性 D. 紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞增殖 8. 海拉（HeLa）细胞是1951年从一位患宫颈癌的美国病人身上分离出来的宫颈癌细胞，该病人已经去世，但海拉细胞直到今天还有被用于科学研究。下列说法正确的是（ ） A. 海拉细胞可在体外大量增殖，在细胞培养过程中会出现接触抑制现象 B. 将癌变的宫颈癌组织分散为单个的海拉细胞，可用胃蛋白酶处理 C. 培养海拉细胞时，氧气是细胞代谢所必需的，可将培养皿置于含有95％的O2和5％的CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养 D. 培养液还需定期更换，以便清除代谢废物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 9. 2021年6月，我国首个原创性抗体偶联药物（ADC）获批上市。该药采用人源化抗HER2抗体，通过可切割的接头与高效毒性分子MMAE偶联。ADC被肿瘤细胞内吞后，载荷MMAE被释放到细胞质中后，可抑制细胞中微管蛋白聚合，进而影响纺锤体的形成。下列叙述错误的是（　　） A. 传统鼠源性单抗可能会引起人体产生相应抗体进而影响ADC的效果 B. ADC中接头稳定性偏低会导致药物分子脱落而对正常细胞造成损伤 C. 连接抗体和MMAE的接头可能在肿瘤细胞溶酶体中被蛋白酶破坏 D. MMAE可能抑制肿瘤细胞内着丝粒分裂从而使其停滞在分裂中期 10. 下列关于哺乳动物受精的描述正确的是（ ） ①获能后的精子与卵子相遇，释放多种酶，以溶解卵细胞膜外的结构（如透明带等） ②精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜发生反应，阻止后来的精子进入卵内 ③精子入卵后，原有核膜破裂，最后形成一个比原来精子的核还大的雄原核 ④精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核 ⑤合子中的遗传物质，一半来自父方，一半来自母方 A. ①③④ B. ③④⑤ C. ②④⑤ D. ①③⑤ 11. 如图所示为治疗性克隆的基本过程，首先取病人的体细胞核，移植到去核的卵母细胞中，在早期胚胎形成后，从中分离获得胚胎干细胞（ES细胞），对ES细胞进行基因修饰和定向分化处理，将定向分化后的细胞移植给病人，从而达到治疗疾病的目的。下列相关叙述错误的是（　　） A. 接受细胞核的卵母细胞处于减数第二次分裂中期 B. 获得图中去核的卵母细胞时，可通过显微操作去核 C. 图中形成的器官用于移植，理论上可以避免免疫排斥反应 D. 治疗性克隆过程采用的技术有核移植技术和胚胎移植技术 12. 羊奶的脂肪颗粒体积为牛奶的三分之一，更利于人体吸收，其维生素及微量元素含量明显高于牛奶。欲利用胚胎工程技术加快高产奶的萨能山羊的繁殖，下列说法正确的是(　　) A. 为使萨能母羊超数排卵，可在其饲料中添加适量的促性腺激素 B. 卵裂期的细胞数量增加，但细胞的体积和细胞内有机物的种类会减少 C. 为提高胚胎利用率，可采用胚胎分割移植等无性繁殖技术 D. 生产上可选用原肠胚细胞进行性别鉴定 13. 如图为利用逆转录方法和PCR技术扩增目的基因片段的过程示意图。据图分析，下列说法错误的是(　　) A. 在第3轮PCR结束后，两条链等长的DNA占1/4 B. ⑤过程使用72 ℃左右的温度处理既可以防止DNA变性，又可以促进子链的延伸 C. ④过程两种引物通过碱基互补配对分别与DNA两条单链结合 D. 第4轮④过程中消耗15对引物 14. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的叙述，错误的是(　　) A. 将预冷酒精加入上清液后，出现的白色丝状物为粗提取的DNA B. 鉴定DNA时应将丝状物直接加到二苯胺试剂中进行水浴加热 C. 将扩增得到的PCR产物与不含指示剂的电泳缓冲液混合，注入加样孔 D. 在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小、构象等有关 15. 当目的基因和质粒都用Hind Ⅲ处理、连接后，目的基因可能正向插入载体，也可能反向插入载体，为判断目的基因的插入方向，可使用限制酶处理，并进行电泳检测（如图）。下列选项中能判断目的基因插入方向的限制酶是（ ） 注：EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和Hind Ⅲ识别序列、切割位点均不同，数字表示相邻两个限制酶切点之间的碱基对数（bp），质粒全长20000bp。 A. Hind Ⅲ B. EcoR I C. BamH I D. EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ 16. 水杨酸羟化酶可催化水杨酸转化为龙胆酸，龙胆酸可被细胞利用。科研人员欲将水杨酸羟化酶基因与红色荧光蛋白基因（mrfp）连接成融合基因，导入工程菌中，以实现对水杨酸的动态监测和清除，基因结构如图所示。现欲通过PCR判断融合基因的连接方向是否正确，应选用的引物组合是（　　） A. 引物1和引物3 B. 引物1和引物4 C. 引物1和引物2 D. 引物2和引物4 17. THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述错误的是（    ） EcoR Ⅰ BamH Ⅰ Kpn Ⅰ Mfe Ⅰ Hind Ⅲ 5′−G↓AATTC−3 3′− CTTAA↑G−5′ 5′−G↓GATCC−3 3′− CCTAG↑G−5′ 5′−G↓GTACC−3′ 3′−CCATG↑G −5′ 5′−C↓AATTG−3′ 3′−GTTAA↑C −5′ 5′−A↓AGCTT−3′ 3′−TTCGA↑A −5′ A. THP9基因有2个游离的磷酸基团，而且游离的磷酸基团在5′端 B. 构建基因表达载体时，用Kpn Ⅰ、Hind Ⅲ切割质粒和目的基因 C. 利用PCR技术获取THP9基因时应选择引物2和引物3 D. 为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要在个体水平上检测其蛋白质含量 18. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸(ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP)，子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧腺苷三磷酸(dATP)，继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述不正确的是(　　) A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 5′－CTACCCGTGAT－3′为对照个体的一段序列 C. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G D. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越快 二、非选择题(除标注外每空2分，共64分） 19. 食醋酿造是多种微生物共同作用的过程，主要微生物为霉菌、酵母菌、醋酸菌和乳酸菌。食醋发酵过程分为淀粉糖化、酒精发酵和醋酸发酵三个阶段，期间有不同种类的微生物生长繁殖并产生各种酶类，经过一系列复杂的生物化学变化最终形成食醋。 （1）发酵原料中的淀粉为微生物提供________(营养物质)。参与发酵的多种微生物种间关系属于________。 （2）研究人员对食醋固态发酵过程中微生物的生长变化规律进行研究。下图为醋醅(食醋发酵的物料)不同层次的酵母菌和醋酸菌数量变化情况。 ①用________________法将接菌种接种到添加了碳源、氮源、无机盐、水以及________的培养基中，培养一段时间，获得单菌落后，挑选菌落数符合要求的平板进行计数。 ②由图1可知，整个发酵过程中酵母菌数量呈现________________________的趋势，且在不同层次上随着深度增加而减少。初期，由于________________，上层菌增殖速度高于中层及下层菌。之后，随着发酵条件的变化，酵母菌基本停止繁殖而主要进行酒精发酵。在第7天以后随发酵时间延长，酵母菌的数量呈降低趋势，原因是________________________________________________________________________________________________________________。 ③图2显示，醋酸菌在1～3天繁殖最快。醋酸菌将乙醇转化为醋酸，反应简式为：_______________________________________________________________。 20. 电影《我不是药神》中的格列卫是一种治疗癌症的靶向药物，此类靶向药物可称为“生物导弹”。通常，我们采用动物细胞融合技术来制备单克隆抗体，利用单克隆抗体来诊断和治疗癌症可能会成为攻克癌症的重要手段。 （1）若单克隆抗体与药物结合制成“生物导弹”治疗肠癌，则特定抗原通常是____________________。靶向药物比普通的化疗药物疗效高、毒副作用小是因为 ____________________。 （2）图中诱导细胞融合时需要采用_________________________ 或电融合法等方法诱导，杂交瘤细胞特点是________________________________。 （3）用特定的选择培养基筛选出融合的杂交瘤细胞进行____________和________，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 （4）近年来，科学家发现丁酸钠对杂交瘤细胞产生单克隆抗体有一定的影响，某科研小组进行了相关实验，结果如表所示：丁酸钠对杂交瘤细胞产生单克隆抗体的影响 丁酸钠的浓度/(mmol·L-1) 时间/h 48 96 144 0 1∶320 1∶640 1∶1 200 0.25 1∶320 1∶1 280 1∶2 500 0.5 1∶160 1∶2 500 1∶2 500 0.75 1∶320 1∶320 1∶640 注：表中比值表示抗体效价，值越高表明越有利于抗体的产生。 ①该实验过程中培养杂交瘤细胞的培养瓶放在了含5%CO2的培养箱中培养，CO2的主要作用是________________，该实验的自变量为_______________________。 ②根据表中数据，分析丁酸钠浓度与单克隆抗体产生量关系： __________________。 21. 由于猪的器官在生理形态上和人的器官非常接近，近年来应用猪的体细胞核移植技术研制人类基因疾病的动物模型，以及生产基因敲除猪用于人异种器官移植成为猪核移植相关研究的热点方向。下图为猪的体细胞核移植流程示意图，请回答下列问题。 （1）研究人员在用合成培养基对猪耳部成纤维细胞进行培养时，通常需加入________等一些天然成分。 （2）从卵巢中采集的卵母细胞需在体外培养至________期才能用于体细胞核移植。除该方法外，采集卵母细胞还可采用超数排卵法，其具体做法是给卵母细胞供体注射_________________，使其排出更多的卵子。 （3）重构胚通常需培养至________________期，然后通过________技术送入代孕母猪体内。为提高胚胎的利用率，还可采用________技术对胚胎进行处理。 （4）就猪体细胞移植技术本身来讲，虽然已经有多例体细胞克隆猪诞生，但总体的效率还是较低的，克隆猪的存活率只有1%或更低。研究表明，用组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(VPA)处理重构胚能显著提高其发育能力。从而大大提高克隆效率。若想探究VPA处理重构胚的最适浓度，其实验思路是______________________________________________________________________。 22. 农杆菌Ti质粒上的T－DNA(序列已知)可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将图1中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T－DNA插入位置两侧的未知序列，进一步分析可确定T－DNA插入的具体位置。T－DNA的序列如图2所示，虚线处省略了部分核苷酸序列。已知Sal Ⅰ酶的识别序列为5′—G↓TCGAC—3′。回答下列问题： （1）PCR技术扩增时起关键作用的酶是________，其作用是___________________。 （2）扩增出T－DNA插入位置两侧的未知序列时，需要先根据____________________设计两种特异性引物序列，利用图中的引物________组合可扩增出T－DNA两侧的未知序列。 （3）若只使用一种引物，通过PCR技术制备与T－DNA的b链相同的单链作为某些检测的探针，则所选择引物由5′→3′的前5个碱基序列为________。 （4）对PCR产物测序，经分析得到了图1中的未知序列。下列DNA单链序列中(虚线处省略了部分核苷酸序列)，可能正确的是________。 A. 5′—GTCGACCAC……ATGTCGA—3′ B. 5′—AATTCCATG……CTGAATT—3′ C. 5′—GCAATGCGT……TCGGGAA—3′ D. 5′—TTGATACGC……CGAGTAC—3′ （5）PCR技术扩增出T－DNA插入位置两侧的未知序列后，扩增产物可用________________技术进行鉴定。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $