精品解析：甘肃省平凉市第一中学2025-2026学年高二下学期期中生物试卷

平凉一中2027届高二第二学期第二次阶段性考试试题（卷） 生物 考试时间：75分钟 一、选择题（本题共30小题，每题2分，共60分，每题只有一个正确选项） 1. 乙烯生物合成酶基因可以控制乙烯的合成，科学家将该基因的反义基因导入番茄细胞内，培育转基因延熟番茄，下列说法正确的是（ ） A. 形成转基因番茄的过程发生的变异属于染色体变异 B. 反义基因通过抑制转录来调控基因的表达 C. 乙烯生物合成酶基因模板链序列与反义基因模板序列互补 D. 乙烯是乙烯生物合成酶基因表达的产物，可促进果实成熟 【答案】C 【解析】 【分析】由图可知，乙烯生物合成酶基因转录形成的是有意义mRNA，反义基因转录形成的是反义mRNA，有意义mRNA和反义mRNA能互补配对，这样可以导致翻译无法进行，进而导致乙烯生物合成酶无法合成。 【详解】A、转基因番茄利用的是基因工程技术，该技术原理是基因重组，A错误； B、有意义mRNA和反义mRNA能互补配对，则抑制翻译来调控基因的表达，B错误； C、据图可知，有意义mRNA和反义mRNA能互补配对，则乙烯生物合成酶基因的模板链的序列与反义基因的模板序列是互补的，C正确； D、乙烯生物合成酶基因表达的产物是乙烯生物合成酶，不是乙烯，D错误。 故选C。 2. 马奶酒是具有民族特色的发酵乳制品，主要依靠乳酸菌和特殊的酵母菌发酵制备。当马奶中的乳糖被分解后，特殊的酵母菌能优先利用半乳糖进行发酵，而其余微生物都会争抢葡萄糖。下列叙述正确的是（ ） A. 酵母菌纯培养常用固体培养基，琼脂可提供碳源 B. 乳酸菌和特殊的酵母菌均属于进行无氧呼吸的真核微生物 C. 发酵中活的微生物数量可以使用血细胞计数板进行直接计数 D. 特殊的酵母菌优先利用半乳糖的营养方式有利于其数量的增长 【答案】D 【解析】 【详解】A、酵母菌纯培养常用固体培养基，但琼脂是培养基的凝固剂，一般无法被酵母菌分解利用，不能提供碳源，A错误； B、乳酸菌是细菌，属于原核生物，且酵母菌为兼性厌氧微生物，既可以进行有氧呼吸也可以进行无氧呼吸，B错误； C、血细胞计数板直接计数无法区分活菌和死菌，统计结果是所有微生物的总数量，统计活的微生物数量可以使用稀释涂布平板法，C错误； D、特殊酵母菌优先利用半乳糖，其余微生物都会争抢葡萄糖，可有效减少种间竞争，更易获得充足的营养物质，有利于其数量的增长，D正确。 3. 某乡村因长期过量使用化肥、砍伐薪炭林、生活污水直接排放等，导致耕地肥力下降、水土流失加剧、河流水体富营养化。当地政府启动生态修复工程，采取了以下措施：①在河流沿岸种植芦苇、菖蒲等挺水植物；②修建沼气池，将秸秆、畜禽粪便转化为沼气和有机肥；③退耕还林，种植本地树种恢复植被；④在耕地中推行“稻—鸭—鱼”立体种养模式。下列叙述错误的是（ ） A. 措施①种植芦苇、菖蒲等可吸收水体中的N、P等元素，缓解水体富营养化 B. 措施②建立沼气池实现了能量的多级利用，提高了能量传递效率 C. 措施③种植本地树种而非外来树种遵循了生态工程的协调原理 D. 措施④“稻—鸭—鱼”立体种养模式可提高该生态系统的稳定性 【答案】B 【解析】 【详解】A、芦苇、菖蒲等挺水植物可吸收水体中过剩的N、P等矿质元素，降低水体富营养化程度，A正确； B、修建沼气池实现了能量的多级利用，提高的是能量的利用率，而能量传递效率是相邻两个营养级之间的能量同化效率，通常稳定在10%~20%，通常无法人为提高，B错误； C、生态工程的协调原理要求生物与所处环境相协调平衡，种植本地树种可避免外来物种不适应当地环境，或引发生物入侵破坏本地生态，遵循了协调原理，C正确； D、“稻—鸭—鱼”立体种养模式增加了生态系统的物种丰富度，使营养结构更复杂，可提高生态系统的抵抗力稳定性，D正确。 4. 中国酒文化博大精深，酿酒技术在我国已有上千年的历史。以下是用苹果酿造果酒果醋的过程，以下说法正确的是（ ） A. 酵母菌与醋酸杆菌的代谢类型均为异养好氧型 B. 果酒转化为果醋所需的酶存在于细胞质基质和线粒体 C. 添加白砂糖有利于酒精的产生，加入醋酸杆菌后发酵条件只需要改变通气情况 D. 醋酸发酵前，加入无菌水对苹果果酒进行稀释 【答案】D 【解析】 【详解】A、酵母菌是异养兼性厌氧型微生物，醋酸杆菌为异养好氧型微生物，代谢类型不同，A错误； B、醋酸发酵利用的是醋酸杆菌，原核细胞，没有线粒体，B错误； C、添加白砂糖有利于酒精的发酵，多数醋酸杆菌的最适温度为；加入醋酸杆菌后温度需要提高且要通气，C错误； D、醋酸发酵前，加入无菌水对苹果酒进行稀释，防止酒精浓度过高抑制醋酸杆菌的发酵，D正确。 故选D。 5. 深海中某种赖氨酸缺陷型放线菌能产生安莎霉素，可治疗肺部感染。为此，科研人员用紫外线诱变深海放线菌后，如图选育高产菌株，以提取安莎霉素。下列叙述正确的是（ ） 注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落 A. 培养基①②属于选择培养基，无需添加赖氨酸 B. 用接种环蘸取菌液在培养基②上划线进行接种 C. 为不破坏培养基③的无菌状态应在灭菌后调节pH D. 培养结果是甲菌落不能在③生存，推断甲菌落能产生安莎霉素 【答案】D 【解析】 【详解】A、该放线菌为赖氨酸缺陷型，自身无法合成赖氨酸。培养1、2需提供赖氨酸以保证菌株生长，故属于完全培养基而非选择培养基，A错误； B、原位影印法无需进行划线操作，B错误； C、配制培养基需先调节pH后灭菌。若灭菌后调节pH，极易引入杂菌破坏无菌状态，C错误； D、甲菌落在③中不能生存，在④中可以生存，说明甲菌落只能生活在含有赖氨酸的培养基中，不能生活在缺赖氨酸的培养基中，即甲菌落是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，可以产生安莎霉素，D正确。 6. 马铃薯种植过程中很容易受到棒形杆菌的侵染导致维管束环状腐烂。棒形杆菌主要在种薯上传播，也可在土壤中存活。如图所示，利用特定的选择培养基可以从土壤中筛选出棒形杆菌，下列说法错误的是（ ） A. 从种植过患病马铃薯的土壤中取样容易筛选到目的菌株 B. 平板划线结果如图乙所示，接种时总共有6次灼烧接种环 C. 若图甲共3个选择培养基上菌落平均数为120，则每克土壤约含棒形杆菌1.2×107个 D. 为保证实验结果准确，需增设未接种的选择培养基及接种后的完全培养基作为对照 【答案】C 【解析】 【详解】A、目的菌株棒形杆菌可以在患病马铃薯的土壤中存活，种植过患病马铃薯的土壤中棒形杆菌含量更高，因此更容易筛选得到目的菌株，A正确； B、平板划线法接种时，划线前需要灼烧接种环，每次划线结束后都需要灼烧接种环，最后一次划线完成后仍需要灼烧灭菌，图乙共进行了5次划线，因此灼烧总次数为5+1=6次，B正确； C、称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，稀释了100倍，而经梯度稀释后，③中相当于稀释了100000倍，从图③号试管取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，重复3次，若菌落平均数为120个，故该样本中每克土壤约含棒形杆菌（120÷0.1）×100000=1.2×108个/g，C错误； D、实验需要设置对照验证结果，未接种的选择培养基可以检测培养基是否被杂菌污染，接种后的完全培养基可以对照验证选择培养基的选择作用，因此需要增设这两组对照，D正确。 7. 下列关于微生物培养和计数的叙述，错误的是（　　） A. 常用的灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等 B. 平板划线纯培养酵母菌时，不得将最后一次与第一次划线相连 C. 同一稀释度下至少选3个平板计数，且菌落数在30~300之间 D. 在以尿素为唯一氮源的培养基上生长的微生物就是尿素分解菌 【答案】D 【解析】 【详解】A、常用的灭菌方法包含湿热灭菌（如培养基的高压蒸汽灭菌）、干热灭菌（适用于玻璃器皿、金属工具等）、灼烧灭菌（适用于接种环、接种针等接种工具），A正确； B、平板划线法纯化菌种的原理是通过多次划线逐步稀释菌种，最终获得单菌落，若最后一次划线与第一次划线相连，无法起到稀释分离的效果，因此二者不能相连，B正确； C、稀释涂布平板法计数时，为降低实验误差，同一稀释度下需至少设置3个平板做重复，且仅选取菌落数在30~300之间的平板统计，避免菌落数过少误差大、过多菌落重叠难以计数的问题，C正确； D、以尿素为唯一氮源的培养基属于选择培养基，可筛选出能分解尿素的微生物，但自生固氮菌可利用空气中的氮气作为氮源，无需利用尿素也可在该培养基上生长，因此该培养基上生长的微生物不都是尿素分解菌，D错误。 8. 产朊假丝酵母菌可利用淀粉水解液、制糖废液等廉价原料发酵生产单细胞蛋白，作为优质微生物饲料。下列叙述正确的有（　　） ①发酵前需对产朊假丝酵母进行菌种选育，以获得能高效利用糖类、菌体蛋白合成能力强的菌株 ②发酵培养基中除碳源外，还需添加氮源、无机盐和生长因子等 ③可通过连续培养的方式，不断补充新鲜原料、排出代谢废物，提高单细胞蛋白的生产效率 ④培养基中淀粉水解液的浓度不宜过高，否则会导致酵母菌细胞失水 ⑤发酵过程中pH会逐渐降低，应定期添加酸液以维持稳定的酸性环境 ⑥采用过滤、沉淀等方法分离产朊假丝酵母菌，干燥后即可获得单细胞蛋白产品 A. 3项 B. 4项 C. 5项 D. 6项 【答案】C 【解析】 【详解】①发酵工程的首要环节是菌种选育，生产单细胞蛋白（菌体蛋白）的目标下，选育高效利用糖类、蛋白合成能力强的菌株可提升产量，叙述正确； ②微生物生长需要碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等营养物质，因此培养基除碳源外还需添加氮源、无机盐、生长因子等，叙述正确； ③连续培养可及时补充新鲜原料、排出代谢废物，延长菌体生长的稳定期，有效提高单细胞蛋白的生产效率，叙述正确； ④淀粉水解液浓度过高会导致外界渗透压远高于酵母菌细胞内渗透压，引发细胞失水甚至死亡，因此浓度不宜过高，叙述正确； ⑤发酵过程中酵母菌产生的CO₂、有机酸会使pH逐渐降低，维持pH稳定需添加碱性物质中和，添加酸液会进一步降低pH，叙述错误； ⑥单细胞蛋白即微生物菌体，可通过过滤、沉淀分离产朊假丝酵母菌，干燥后即可得到单细胞蛋白饲料产品，叙述正确。 综上，正确的叙述共5项，C符合题意。 9. 下列表述中正确的有几项（　　） ①发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵 ②发酵工程的产品主要包括微生物的代谢产物、酶及菌体本身 ③在发酵过程中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径 ④单细胞蛋白是从微生物细胞中提取出来的 A. 1项 B. 2项 C. 3项 D. 4项 【答案】B 【解析】 【详解】①传统发酵技术和发酵工程均利用微生物进行发酵，二者最大区别是发酵工程在严格无菌条件下进行纯种发酵，传统发酵多为自然混菌发酵，①错误； ②发酵工程的产品包括微生物的代谢产物、微生物合成的酶、菌体本身三类，②正确； ③发酵条件（如温度、pH、溶氧量）会影响微生物的酶活性，既会影响微生物生长繁殖，也会改变其代谢途径，例如酵母菌有氧条件下大量繁殖，无氧条件下进行酒精发酵，③正确； ④单细胞蛋白是微生物菌体本身，并非从微生物细胞中提取的蛋白质，④错误。 故选B。 10. 关于植物组织培养技术，相关叙述正确的是（　　） A. 外植体需用酒精和次氯酸钠混合液进行消毒处理 B. 脱分化形成愈伤组织时可发生基因突变和染色体变异 C. 所用培养基含植物细胞所必需的无机盐、葡萄糖和激素等营养物质 D. 只有再分化的过程中存在基因的选择性表达，脱分化的过程中不存在 【答案】B 【解析】 【详解】A、外植体消毒需依次用70%酒精、次氯酸钠溶液单独处理，两次处理间用无菌水冲洗，并非使用二者混合液消毒，A错误； B、脱分化过程中细胞进行旺盛的有丝分裂，有丝分裂间期DNA复制时可发生基因突变，分裂期可出现染色体结构或数目的变异，B正确； C、植物组织培养的培养基中碳源为蔗糖而非葡萄糖，且植物激素属于生长调节物质，不属于营养物质，C错误； D、脱分化和再分化都是细胞功能特化的过程，均存在基因的选择性表达，D错误。 11. 为拯救濒危植物红豆杉，并同时获得高抗癌活性物质——紫杉醇，科研小组设计了如图所示的实验流程。下列相关叙述正确的是（ ） A. 诱导红豆杉茎尖经过再分化过程形成愈伤组织 B. 在红豆杉组织培养过程中，通常加入蔗糖作为碳源和氮源 C. 用液体培养基扩大培养愈伤组织生产紫杉醇时，通常要通入无菌空气 D. 同一株植物不同部位的组织细胞经诱导培养获得的植株基因型一定相同 【答案】C 【解析】 【详解】A、诱导红豆杉茎尖经过脱分化过程形成愈伤组织，A错误； B、在红豆杉组织培养过程中，因愈伤组织不能进行光合作用，所以需要加入蔗糖作为碳源和能源，蔗糖因不含有氮元素，所以不能作为氮源，B错误； C、用液体培养基培养固定在一定空间内的愈伤组织生产紫杉醇时，需要通入无菌空气，利于细胞进行有氧呼吸并避免杂菌污染，C正确； D、同一植株不同部位的组织细胞经诱导培养获得的植株基因型不一定相同，如花粉粒经诱导培养获得的植株，其体细胞内的染色体数是正常植株体细胞内的一半，基因型也与正常体细胞的不同，D错误。 12. 沃柑果实色泽艳丽，品质极优，但因果实有籽严重削弱了其市场竞争力。为培育具有市场竞争力的无籽沃柑，研究者设计如下流程。相关叙述正确的是（ ） A. ①需使用胰蛋白酶或果胶酶处理 B. 常用PEG诱导原生质体融合和细胞壁再生 C. 获得的三倍体植株都能表现双亲的优良性状 D. ③过程发育成三倍体植株依赖于细胞的全能性 【答案】D 【解析】 【详解】A、制备植物原生质体通常使用果胶酶和纤维素酶，胰蛋白酶用于动物细胞，A错误； B、PEG可诱导原生质体融合，但细胞壁再生是通过培养过程中的细胞代谢实现，并非由PEG诱导，B错误； C、三倍体植株的性状表现受基因互作、染色体分离异常等多种因素影响，不一定都能表现双亲的优良性状，C错误； D、杂种细胞通过植物组织培养（③过程）发育成完整植株，依赖于植物细胞的全能性，D正确。 13. 细胞的全能性是植物细胞工程的理论基础，但随着现代生物技术的发展，植物细胞工程领域取得的一些重要科研成果已不再局限于细胞的全能性。下列科研成果未涉及细胞全能性的是（　　） A. 利用植物细胞培养生产紫杉醇 B. 培育“柳叶橘-葡萄柚”杂种植株 C. 培育马铃薯、草莓、大蒜等脱毒苗 D. 单倍体育种与常规育种结合培育水稻新品种 【答案】A 【解析】 【详解】A、利用植物细胞培养生产紫杉醇，仅需要植物细胞进行增殖、产生相应的代谢产物，没有将细胞培育为完整植株，未涉及细胞全能性，符合题意，A正确； B、培育“柳叶橘-葡萄柚”杂种植株利用了植物体细胞杂交技术，该技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，即该过程涉及植物细胞全能性，不符合题意，B错误； C、培育脱毒苗的核心技术是植物组织培养，将植物分生区的离体组织/细胞培育为完整植株，涉及细胞全能性，不符合题意，C错误； D、单倍体育种过程中需要通过花药离体培养将花粉（雄配子）培育为单倍体植株，体现了生殖细胞的全能性，涉及细胞全能性，D错误。 14. 紫杉醇是红豆杉产生的一种次生代谢物，具有显著的抗癌功效。研究人员开展了悬浮培养红豆杉细胞合成紫杉醇的工程技术研究，结果如表所示。下列说法错误的是（　　） 蔗糖浓度（g/L） 20 30 40 50 60 细胞干重（g/L） 12.5 15.3 18.6 14.2 10.1 紫杉醇产量（g/L） 8.2 12.7 15.4 10.8 6.5 A. 紫杉醇不是红豆杉细胞生长、增殖等生命活动所必需的 B. 蔗糖浓度过高可能使培养液渗透压升高，抑制细胞生长 C. 据表可知，红豆杉细胞的生物量与紫杉醇产量呈正相关 D. 40 g/L蔗糖浓度下，单个红豆杉细胞中紫杉醇含量最高 【答案】D 【解析】 【详解】A、紫杉醇属于红豆杉的次生代谢物，次生代谢物不是植物细胞生长、增殖等生命活动所必需的物质，A正确； B、蔗糖浓度过高会导致培养液渗透压升高，红豆杉细胞会因渗透失水而代谢受抑制，进而抑制细胞生长，与表格中高蔗糖浓度下细胞干重下降的结果相符，B正确； C、分析表格数据：蔗糖浓度从20g/L到60g/L变化时，细胞干重（生物量）先升高后降低，紫杉醇产量也同步先升高后降低，二者变化趋势一致，呈正相关，C正确； D、单个细胞紫杉醇含量=紫杉醇总产量÷细胞干重，经计算：30g/L蔗糖浓度下该比值约为0.83，高于40g/L时的约0.83，说明40g/L蔗糖浓度下并非单个细胞紫杉醇含量最高，D错误。 15. 病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构扩散，导致果蔬产量下降和品质退化。通过植物组织培养技术，利用茎尖可以快速培育出脱毒苗。下列说法正确的是（　　） A. 切取的植株茎尖用70%的酒精消毒后，需用清水进行清洗 B. 脱分化和再分化过程都需要光照，不需额外添加能源物质 C. 植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是其胞间连丝不发达 D. 获得的脱毒苗具有抗病毒性状并且可以通过无性繁殖遗传 【答案】C 【解析】 【详解】A、植物组织培养的外植体消毒时，70%酒精处理后需用无菌水清洗，普通清水含有杂菌，会造成外植体污染，A错误； B、脱分化过程需要避光处理，且脱分化、再分化阶段细胞无法进行光合作用合成有机物，培养基中需要额外添加蔗糖作为能源物质，B错误； C、病毒可借助胞间连丝在植物细胞间扩散，茎尖部位胞间连丝不发达，病毒难以扩散进入，同时茎尖分生区细胞分裂旺盛，病毒来不及增殖，因此茎尖细胞通常不含病毒，C正确； D、脱毒苗仅为本身不携带病毒的植株，并未发生抗病毒的可遗传变异，不具备抗病毒性状，该无病毒的特性也不能通过无性繁殖遗传给后代，D错误。 16. 实验小组从患者胃组织中提取干细胞，在特殊培养条件下诱导其发育成模拟真实胃功能的类器官，培育出全球首个全功能的“迷你胃”。下列有关培育胃组织干细胞的叙述，错误的是（　　） A. 用胃组织干细胞培育“迷你胃”的原理是细胞增殖和细胞核的全能性 B. 应置于95%的空气和5%的CO2的气体环境中培养干细胞 C. 在体外培养细胞时，必须保证环境是无菌、无毒的 D. 动物细胞培养基中通常需加入血清、血浆等天然成分 【答案】A 【解析】 【详解】A、细胞全能性的定义是已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能，用胃组织干细胞培育“迷你胃”仅得到胃器官，未发育为完整个体，该过程利用的是细胞增殖和细胞分化，未体现细胞核的全能性，A错误； B、动物细胞培养的标准气体环境就是95%的空气（为细胞有氧呼吸提供氧气）和5%的CO2（维持培养液的pH稳定），B正确； C、体外培养动物细胞时，必须保证无菌、无毒的环境，否则杂菌、有毒物质会导致细胞代谢异常甚至死亡，C正确； D、目前人类尚未完全明确动物细胞所需的全部营养物质，因此动物细胞培养基中通常需加入血清、血浆等天然成分，补充未知的必需营养，D正确。 17. 抗体—药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A. ADC中的抗体主要是发挥治疗效应，直接杀伤靶细胞 B. 制备ADC中的抗体应用了动物细胞融合和动物细胞培养等技术 C. ADC通过胞吞作用进入肿瘤细胞体现了细胞膜的选择透过性， D. ADC中的细胞毒素也能识别并杀伤正常细胞，因此ADC具有副作用 【答案】B 【解析】 【详解】A、ADC的治疗效应是由细胞毒素（药物）直接杀伤靶细胞实现的，抗体的作用是特异性识别肿瘤抗原、靶向定位，本身不直接杀伤细胞，A错误； B、ADC中的抗体是单克隆抗体，制备单克隆抗体用到的动物细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养，B正确； C、ADC通过胞吞作用进入肿瘤细胞体现了细胞膜的流动性，C错误； D、ADC中的细胞毒素本身不具备识别细胞的能力，识别肿瘤细胞的是抗体；正常细胞没有对应的肿瘤抗原，因此ADC不会结合正常细胞，只有当抗体的特异性不足时才可能误伤正常细胞，并非细胞毒素能识别正常细胞，D错误。 18. 细胞融合技术有着广泛应用。如图为细胞融合的示意图，据图判断错误的是（ ） A. 若d为受精卵，则a、b为获能的精子和MⅡ期的次级卵母细胞 B. 若d为杂种细胞，则c→d过程需要筛选 C. 若a细胞和b细胞是植物细胞，需先脱分化再诱导融合 D. 上述过程不都能证明融合后的细胞仍然具有全能性 【答案】C 【解析】 【详解】A、受精时，精子需要获能，卵子需发育到MⅡ期才能完成受精，二者融合形成受精卵，A正确； B、细胞融合后会出现多种类型的细胞（如未融合的 a、b 细胞，自身融合的细胞，以及 a-b 融合的杂种细胞），因此c→d过程需要筛选出杂种细胞，B正确； C、植物细胞融合的步骤是：先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得原生质体，再诱导原生质体融合，脱分化是融合成功后培养过程中的步骤，不是融合前的步骤，C错误； D、受精卵发育成个体， 植物体细胞杂交植株的形成，能证明杂种细胞的全能性； 单克隆抗体的制备只需要杂交瘤细胞分泌抗体，不需要发育成个体，不能证明全能性， D正确。 19. 科研人员为抢救性保护濒临灭绝的西藏樟木牛，将樟木牛耳缘成纤维细胞，通过体细胞核移植技术制备重构胚胎，并移植至代孕黄牛进行体内发育。下列叙述错误的是（　　） A. 该技术涉及动物细胞培养、细胞核移植、胚胎移植等操作 B. 在MⅡ期通过显微操作法对卵母细胞进行去核操作 C. 对代孕黄牛应进行同期发情和超数排卵处理 D. 激活重构胚以完成细胞分裂和发育进程 【答案】C 【解析】 【详解】A、体细胞核移植技术制备重构胚胎并移植的过程中，需要培养供体成纤维细胞、受体卵母细胞，进行细胞核移植获得重构胚，再将重构胚移植到代孕母体，涉及动物细胞培养、细胞核移植、胚胎移植等操作，A正确； B、核移植的受体细胞选择处于减数第二次分裂中期（MⅡ期）的卵母细胞，常通过显微操作法去除卵母细胞的细胞核，B正确； C、代孕黄牛仅需为重构胚胎提供发育的子宫环境，仅需进行同期发情处理使生殖器官生理状态适配胚胎着床，超数排卵是对提供卵母细胞的供体母牛的操作，代孕黄牛无需进行超数排卵，C错误； D、获得重构胚后，需要通过物理或化学方法激活重构胚，使其启动细胞分裂和后续发育进程，才能进行后续胚胎移植操作，D正确。 20. 西藏特有牛种樟木牛濒临灭绝。研究人员以一头成年樟木公牛作为供体，采集耳组织成纤维细胞培养后，通过体细胞核移植技术制备重构胚，移植至代孕母牛体内发育从而获得多头犊牛。下列叙述错误的是（　　） A. 成纤维细胞需置于含有95%空气和5%CO2的CO2培养箱中进行培养 B. 对卵巢中采集获得的卵母细胞进行传代培养可以产生大量卵细胞 C. 可采用显微操作法或密度梯度离心法等方法对卵母细胞进行去核处理 D. 通过该过程不能大幅改良樟木牛的性状，获得的多头犊牛均为公牛 【答案】B 【解析】 【详解】A、动物细胞培养的气体环境为95%空气，保障细胞有氧呼吸；5%CO₂，维持培养液pH稳定，成纤维细胞的培养符合该条件，A正确； B、从卵巢采集的卵母细胞是高度分化的细胞，不具备分裂增殖能力，无法通过传代培养获得大量卵细胞，卵母细胞仅需培养至减数第二次分裂中期即可作为核移植受体，B错误； C、卵母细胞的去核方法包括显微操作法、密度梯度离心法、紫外光短时间照射法等，C正确； D、体细胞核移植属于无性繁殖，获得的犊牛核遗传物质全部来自供体樟木公牛，性状与供体基本一致，无法大幅改良性状，且性别均与供体一致为公牛，D正确。 21. 干细胞在再生医学、药物安全性与有效监测等领域发挥着巨大作用。下列有关干细胞的说法，错误的是（　　） A. 囊胚阶段的细胞都属于胚胎干细胞 B. 成体干细胞只能分化成特定的细胞或组织 C. 用iPS细胞移植治疗时，理论上可以避免免疫排斥反应 D. 干细胞用于临床治疗存在肿瘤发生的风险 【答案】A 【解析】 【详解】A、囊胚阶段的细胞分为内细胞团和滋养层细胞，仅内细胞团细胞属于胚胎干细胞，滋养层细胞将来发育为胎膜和胎盘，不属于胚胎干细胞，A错误； B、成体干细胞属于专能干细胞，分化能力有限，只能分化成特定的细胞或组织，如造血干细胞仅能分化为各类血细胞、免疫细胞等，B正确； C、iPS细胞（诱导多能干细胞）一般是由患者自身的体细胞诱导重编程得到，遗传信息与患者完全一致，理论上进行移植治疗时不会引发免疫排斥反应，C正确； D．干细胞具有较强的分裂分化能力，若移植后分化调控失常，存在异常增殖形成肿瘤的风险，因此干细胞临床治疗存在相关安全隐患，D正确。 22. 中国科学家选择了比格犬作为受体及代孕母亲，成功克隆了一只濒危物种北极狼。通过克隆技术获得北极狼的基本过程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. 从重组细胞到甲胚胎，胚胎体积不断增大 B. 需对代孕比格犬注射激素使其同期发情 C. 克隆狼的部分遗传性状与代孕比格犬相同 D. 将重组细胞直接移植到代孕犬子宫中可缩短克隆周期 【答案】B 【解析】 【详解】A 、从重组细胞到甲胚胎，为卵裂期，胚胎总体积基本不变或略缩小，A错误； B 、胚胎移植需对代孕母体同期发情处理，保证移植生理状态一致，B正确； C 、克隆狼核基因来自核供体，质基因来自卵母细胞供体，与代孕母体无遗传关系，C错误； D 、重组细胞必须在体外培养至桑葚胚或囊胚阶段才能移植到子宫，不能直接移植单个细胞，D错误。 23. 限制酶是基因工程的重要工具。科研人员使用EcoRⅠ和BamHⅠ对某长度为1080 bp的环状质粒进行酶切，酶切完全后经电泳检测仅发现一条条带。已知两种酶识别序列不同，且在该质粒上均有单一识别位点。下列叙述错误的是（　　） A. 限制酶既可以来自原核生物，也可从真核细胞中获取 B. 酶切所得DNA片段约为540 bp，共存在两种黏性末端 C. 补齐黏性末端的酶切片段可利用T4DNA连接酶连接 D. 若EcoRⅠ或BamHⅠ完全失活，则电泳后将会出现两个条带 【答案】D 【解析】 【详解】A、限制酶主要从原核生物中分离纯化获得，也可从部分真核细胞（如酵母菌）中获取，A正确； B、两种酶在环状质粒上各有1个单一识别位点，酶切后得到2个长度均为540 bp的DNA片段，长度相同因此电泳仅显示一条条带，两种酶识别序列不同，切出的黏性末端共2种，B正确； C、补齐黏性末端后得到平末端片段，T4 DNA连接酶既可连接黏性末端也可连接平末端，可将上述平末端片段连接，C正确； D、若其中一种限制酶完全失活，仅另一种限制酶发挥作用，环状质粒被单酶切后得到1种长度为1080 bp的线性DNA片段，电泳仅出现1个条带，不会出现2个条带，D错误。 24. 某实验小组以洋葱鳞片叶为材料，进行“DNA的粗提取与鉴定”实验，实验步骤参照教材设计。下列相关叙述错误的是（　　） A. 研磨洋葱时，加入适量的研磨液有利于充分释放DNA B. 利用纱布过滤研磨液，可以去除一些颗粒较大的杂质 C. 向研磨液离心后得到的上清液中加入预冷的酒精溶液可以获得粗提取的DNA D. 将粗提取的含DNA的丝状物加到二苯胺试剂中，经沸水浴后会呈现蓝色 【答案】D 【解析】 【详解】A、研磨液中的洗涤剂可瓦解细胞膜，NaCl可溶解DNA，加入适量研磨液有利于细胞破裂，充分释放DNA，A正确； B、纱布孔径较小，过滤研磨液时，颗粒较大的细胞碎片等杂质无法通过纱布被截留，可去除这类杂质，B正确； C、DNA不溶于酒精，预冷的酒精还能抑制DNA酶活性，减少DNA降解，加入后DNA会以白色丝状物形式析出，可获得粗提取的DNA，C正确； D、二苯胺鉴定DNA时，需先将DNA丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂经沸水浴才会呈现蓝色，直接将DNA丝状物加到二苯胺试剂中无法发生显色反应，D错误。 25. T4 DNA连接酶是基因工程的一种工具酶，可将任意2个具有相同黏性末端的DNA片段连接在一起。下列叙述错误的是（　　） A. T4 DNA连接酶作用的底物有多种，但其仍具有专一性 B. T4 DNA连接酶在催化前后组成成分没有发生改变 C. T4 DNA连接酶在连接目的基因与载体时能够恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 D. T4 DNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于E.coli DNA连接酶的 【答案】D 【解析】 【详解】A、酶的专一性是指酶能催化一种或一类化学反应，T4 DNA连接酶虽然可作用于多种带有相同黏性末端的DNA片段，但只能特异性催化磷酸二酯键的形成，仍具有专一性，A正确； B、酶作为生物催化剂，在催化反应前后本身的化学性质和组成成分不发生改变，B正确； C、限制酶切割DNA断裂的是磷酸二酯键，T4 DNA连接酶连接DNA片段时可恢复该化学键，实现目的基因与载体的连接，C正确； D、E.coli DNA连接酶只能连接具有黏性末端的DNA片段，无法连接平末端，T4 DNA连接酶既可以连接黏性末端也可以连接平末端，因此T4 DNA连接酶连接平末端的效率远高于E.coli DNA连接酶，D错误。 26. 某同学利用PCR技术扩增目的基因，完成扩增后取不同样品进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. PCR延伸阶段，TaqDNA聚合酶从引物3'端催化脱氧核苷酸连接，电泳前无需高温变性 B. 电泳条带距加样孔越远，代表DNA片段分子量越大，迁移速率越慢 C. 实验组2号泳道出现与阳性对照（M）位置一致的条带，说明扩增成功且产量更高 D. 阴性对照4号泳道未出现条带，说明本次PCR实验体系存在外源DNA污染 【答案】A 【解析】 【详解】A、PCR扩增过程中，Taq DNA聚合酶从引物的3'端开始催化脱氧核苷酸的连接，琼脂糖凝胶电泳分离的是双链DNA片段，电泳前无需对样品进行高温变性处理，A正确； B、琼脂糖凝胶电泳中，DNA片段的分子量越小，在凝胶中的迁移速率越快，条带距离加样孔的距离就越远，B错误； C、实验组2号泳道仅出现与阳性对照（M）位置一致的条带，只能说明目的基因扩增成功，条带亮度和宽度未超过阳性对照，无法证明产量高于对照组，C错误； D、阴性对照的作用是检测实验体系是否存在外源DNA污染，4号泳道未出现任何条带，说明实验体系无污染，结果可靠，D错误。 27. 关于基因工程应用的叙述，正确的是（　　） A. 将苏云金杆菌中的Bt基因导入棉花细胞，培育抗病毒棉花 B. 将凝乳酶基因导入大肠杆菌的基因组中，再通过工业发酵生产凝乳酶 C. 将含有药用蛋白基因的表达载体注射入牛的乳腺细胞中，从乳汁中获得所需的药品 D. 将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，使其肠道细胞表达肠乳糖酶基因，从而改善牛奶品质 【答案】B 【解析】 【详解】A、苏云金杆菌的Bt基因表达产物为Bt毒蛋白，仅对棉铃虫等昆虫有毒害作用，可培育抗虫棉花，不抗病毒，A错误； B、大肠杆菌繁殖速度快、易培养，将凝乳酶基因导入大肠杆菌后，可通过工业发酵大量生产凝乳酶，是基因工程在食品工业中的典型应用，B正确； C、乳腺生物反应器的操作是将药用蛋白基因表达载体导入牛的受精卵中，发育为完整个体后雌性个体的乳腺细胞可表达该基因，若直接注射入高度分化的乳腺细胞，无法实现整体动物所有细胞携带目的基因，不能稳定获得药用蛋白，C错误； D、要改善牛奶品质、降低牛奶中乳糖含量，需要让肠乳糖酶基因在奶牛乳腺细胞中表达，使乳糖酶分泌到乳汁中分解乳糖，肠道细胞表达该基因仅能帮助奶牛自身消化乳糖，无法改善牛奶品质，D错误。 28. 人乳头瘤病毒疫苗（HPV疫苗）是一种由L蛋白在体外自发组装成的空心颗粒，可以预防HPV引起的部分宫颈癌，其生产过程如下图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 疫苗甲、乙属于基因工程疫苗 B. 疫苗甲、乙与HPV具有相似的抗原 C. 疫苗甲、乙可利用微生物发酵大量生产 D. 疫苗甲比疫苗乙预防宫颈癌的效果更好 【答案】D 【解析】 【详解】A、甲、乙都通过基因重组→导入受体→表达目的蛋白的流程生产，符合基因工程疫苗的定义，A正确； B、甲、乙都是由 HPV 的衣壳蛋白（L1 或 L1+L2）组装成的空心颗粒，结构与天然 HPV 的衣壳高度相似。 因此它们能模拟 HPV 的抗原特征，刺激机体产生抗体，B正确； C、生产流程中，“重组质粒导入受体” 的受体细胞通常是大肠杆菌、酵母菌等微生物。 这些微生物可以通过发酵工程大规模培养，高效表达 L1 或 L1/L2 蛋白，从而实现疫苗的工业化生产，C正确； D、疫苗甲只含有 L1 蛋白，疫苗乙同时含有 L1 和 L2 蛋白。 L2 蛋白能提供额外的抗原表位，诱导产生更广泛的中和抗体，因此疫苗乙的免疫原性通常比疫苗甲更强，预防效果更好，D错误。 29. 胰岛素用于治疗糖尿病，但胰岛素注射后易在皮下堆积，需较长时间才能进入血液，进入血液后又易被分解，因此治疗效果受到影响。科研人员研制了速效胰岛素，其生产过程如图所示。下列说法错误的是（　　） A. 速效胰岛素的生产需要用到蛋白质工程和发酵工程 B. 大肠杆菌合成的新的胰岛素不能正常发挥作用 C. 对胰岛素的改造最终还必须通过改造或合成基因来完成 D. 可以用Ca2+处理的方法直接将新的胰岛素基因导入大肠杆菌细胞中 【答案】D 【解析】 【详解】A、速效胰岛素是对天然胰岛素的结构进行定向改造获得的，属于蛋白质工程的应用，改造后的目的基因导入大肠杆菌后，需要通过发酵工程实现大规模生产，A正确； B、大肠杆菌是原核生物，没有内质网、高尔基体等可以加工蛋白质的细胞器，因此，大肠杆菌合成的新胰岛素还需要经过重折叠等加工步骤才能成为有活性的速效胰岛素，即大肠杆菌合成的新胰岛素不能正常发挥作用，B正确； C、蛋白质的结构由基因决定，且改造后的基因可稳定遗传，因此对胰岛素的改造最终必须通过改造或合成对应的基因来完成，C正确； D、将目的基因导入大肠杆菌前，需要先将新的胰岛素基因与载体结合构建基因表达载体，不能直接将游离的新胰岛素基因导入经Ca2+处理的大肠杆菌中，D错误。 30. 下列有关生物工程的叙述，错误的有（　　） ①基因工程的核心步骤是构建基因表达载体②蛋白质工程可通过直接改造蛋白质的结构从而改变其功能③利用核移植可以培养试管婴儿④PCR技术需要利用限制性内切核酸酶打开DNA双链⑤利用动物细胞培养技术和细胞融合技术可以制备单克隆抗体⑥利用植物茎尖培养脱毒苗时，全程都需要光照 A. 一项 B. 两项 C. 三项 D. 四项 【答案】D 【解析】 【详解】①基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，可保证目的基因在受体细胞中稳定存在、表达并遗传，①正确； ②蛋白质工程的操作对象是基因，需通过改造或合成基因间接改造蛋白质，不能直接改造蛋白质结构，②错误； ③试管婴儿培育采用体外受精、胚胎移植技术，属于有性生殖；核移植是克隆动物的技术，属于无性生殖，不能用于培养试管婴儿，③错误； ④PCR技术通过高温加热使DNA双链解旋，不需要限制酶，限制酶的作用是切割DNA的磷酸二酯键，④错误； ⑤单克隆抗体制备时，先通过细胞融合技术获得杂交瘤细胞，再通过动物细胞培养技术扩增获得大量抗体，⑤正确； ⑥植物茎尖培养脱毒苗时，脱分化阶段不需要光照，再分化阶段才需要光照，并非全程需要光照，⑥错误。 ABC不符合题意，D符合题意。 31. 葡萄糖异构酶能将葡萄糖转化为果糖，其最适温度约为60℃，生产上常用于高果糖浆的生产。科学家将葡萄糖异构酶的第138位甘氨酸用脯氨酸替代，结果它的最适温度提高了约10℃。下列有关说法正确的是（ ） A. 蛋白质工程和基因工程的根本区别是操作对象的差异 B. 编码葡萄糖异构酶的基因的核糖核苷酸序列会有相应的改变 C. 经改造后的葡萄糖异构酶热稳定性提高这一性状不可遗传 D. 改造后的葡萄糖异构酶在60℃时生产高果糖浆的效率可能低于70℃时的 【答案】D 【解析】 【分析】蛋白质工程的实施过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列，蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程。 【详解】A、基因工程只能改造或制造自然界已有的蛋白质，蛋白质工程可以创造新的蛋白质，操作对象都是基因，A错误； B、编码葡萄糖异构酶的基因的脱氧核糖核苷酸序列会有相应的改变，B错误； C、蛋白质工程对编码蛋白质的基因进行了改造，遗传物质已经改变，属于可以遗传的变异，这一性状可遗传，C错误； D、改造后的葡萄糖异构酶最适温度从60℃变为70℃，60℃活性降低，故在60℃时生产高果糖浆的效率可能低于70℃时的，D正确。 故选D。 32. 基因工程技术在迅猛发展，为人类的生产生活带来很多便利，但同时也带来了一些安全性问题，下列说法正确的是（　　） A. 乳腺生物反应器是将药用蛋白基因与药用蛋白启动子重组后导入动物的受精卵中 B. 将外源生长素基因导入鲤鱼中可提高鲤鱼的生长速度 C. 治疗性克隆不涉及伦理问题，无需监控审查 D. 在转基因研究中，科学家通过阻断淀粉储藏使花粉失去活性来防止基因污染 【答案】D 【解析】 【详解】A、乳腺生物反应器需要将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子重组，才能保证药用蛋白在动物乳腺细胞中特异性表达，A错误； B、生长素是植物激素，对动物生长无促进作用，若要提高鲤鱼的生长速度，应导入外源生长激素基因，B错误； C、治疗性克隆仍涉及伦理问题，我国虽不反对治疗性克隆研究，但要求进行严格的监控和审查，C错误； D、阻断淀粉储藏使花粉失去活性，转基因植物的花粉无法完成受精作用，可避免外源基因随花粉扩散到其他近缘物种，有效防止基因污染，D正确。 33. 下列应用实例最可能造成生物技术安全性与伦理问题的是（ ） A. 对先天免疫缺陷症患儿的免疫细胞进行基因编辑后，回输给患儿进行治疗 B. 利用干细胞培养具有单腔室结构的迷你跳动心脏，增加器官移植供体来源 C. 利用人体的成纤维细胞转变成iPS细胞，进而利用iPS细胞治疗疾病 D. 利用基因编辑技术设计试管婴儿，以期得到智力超群的婴儿 【答案】D 【解析】 【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）．对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。 【详解】A、对先天性免疫缺陷症患儿的免疫细胞进行基因编辑，然后回输给患儿进行治疗，未涉及到新生命（例如已发育的胚胎、婴儿等），不会造成生物技术安全与伦理问题，不符合题意，A错误； B、利用干细胞培养出具有单个腔室结构的迷你跳动心脏，以增加器官移植供体来源，未涉及到新生命（例如已发育的胚胎、婴儿等），不会造成生物技术安全与伦理问题，不符合题意，B错误； C、利用人体的成纤维细胞转变成iPS细胞，进而利用iPS细胞治疗阿尔茨海默病，未涉及到新生命（例如已发育的胚胎、婴儿等），不会造成生物技术安全与伦理问题，不符合题意，C错误； D、利用基因编辑技术设计试管婴儿，以期得到身高标准和智力超群的“完美婴儿”，已经涉及到新生命的诞生，会造成生物技术安全与伦理问题，符合题意，D正确。 故选D。 34. CRISPR/Cas9系统由向导RNA和Cas9蛋白组成，由向导RNA（gRNA）引导Cas9蛋白在特定的基因位点进行切割，从而完成基因的编辑过程，过程如图所示。现欲用CRISPR/Cas9编辑技术对轮状病毒（双链RNA病毒）进行编辑，下列相关叙述错误的是（　　） A. 可以根据目标基因的碱基序列人工设计向导RNA B. Cas9类似于基因工程中的限制酶，其作用位点是磷酸二酯键 C. 向导RNA的碱基序列越短，则其在基因上出现定位错误的概率越高 D. 若向导RNA的序列为5'-UCACAUC-3'，则其识别的基因靶序列为3'-AGTGTAG-5' 【答案】D 【解析】 【详解】A、向导 RNA（gRNA）靠碱基互补配对识别目标基因，可以按目标序列人工设计，A正确； B、Cas9切割 DNA，断开 磷酸二酯键，功能和限制酶一样，定点切割核酸，B正确； C、序列越短，随机匹配上的概率越大，脱靶（定位错）率越高，C正确 D、用CRISPR/Cas9编辑技术对轮状病毒（双链RNA病毒）进行编辑，向导 RNA 是 RNA：含 U，识别的基因靶序列是RNA：正确配对应该是：5'-UCACAUC-3'与3'-AGUGUAG-5'，D错误。 故选D。 35. 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，以便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是−↓GATC−，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是−G↓GATCC−，根据图示判断下列操作正确的是（　　） A. 载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 B. 目的基因成功地插入到受体细胞染色体上后一定能正常表达 C. 目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 D. 质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 【答案】D 【解析】 【详解】A、载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为筛选标记基因，并非抗生素合成基因，A错误； B、目的基因成功插入受体细胞染色体后，还需要具备匹配的启动子、终止子，且插入位置适宜等才能正常表达，B错误； C、若目的基因用限制酶Ⅱ切割，限制酶Ⅱ仅识别-GGATCC-序列，只能切割目的基因左侧位点，无法切割右侧的-GATC-序列，不能获取完整的目的基因，C错误； D、质粒用限制酶Ⅱ切割时，仅破坏GeneⅡ，保留完整的GeneⅠ作为筛选标记；限制酶Ⅰ识别-GATC-序列，可同时切割目的基因两侧的位点，获得完整目的基因，且二者切割后产生的黏性末端相同，可完成重组，D正确。 二、非选择题（每空1分，共30分） 36. EGFR是一种表皮生长因子受体，在肿瘤细胞中的表达量较高。维贝柯妥塔单抗是一种针对EGFR的靶向治疗鼻咽癌的ADC药物，该药物是将抗EGFR单克隆抗体与单甲基奥瑞他汀E（MMAE）偶联。MMAE是一种小分子药物，能阻断细胞有丝分裂，引发细胞凋亡。回答下列问题： （1）制备EGFR抗原的主要步骤如下： ①获取目的基因：从人类表皮细胞中提取mRNA，通过______得到编码EGFR的cDNA，再利用_______技术扩增出EGFR基因。 ②构建基因表达载体：将扩增出的EGFR基因与质粒连接。要使EGFR基因在受体细胞中稳定遗传、表达并发挥作用，构建的基因表达载体除含启动子外，还必须有_______________等（答出2点）。 ③将目的基因导入受体细胞：将构建好的基因表达载体导入CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）。该环节不选择生长周期短、繁殖速度快的原核细胞作为受体细胞，原因是_______，不能产生结构和功能最接近人类的EGFR蛋白。 ④培养已转化的CHO细胞，获得EGFR蛋白。 （2）制备抗EGFR单克隆抗体的流程如图： 过程①诱导细胞融合的常用方法有_____________（答出1种）。过程②需要对杂交瘤细胞进行_________，经多次筛选，可获得足量的目标杂交瘤细胞。 （3）利用连接子将抗EGFR单克隆抗体与MMAE连接形成ADC药物——维贝柯妥塔单抗。临床试验表明，该药物的安全性和疗效都较高。结合题干信息分析，其原因是____________。 【答案】（1） ①. 逆转录 ②. PCR  ③. 终止子、标记基因、复制原点 ④. 原核细胞不具有内质网、高尔基体等结构，不能对蛋白质进行正确加工 （2） ①. 灭活病毒诱导法、PEG融合法 ②. 克隆化培养和抗体检测 （3）肿瘤细胞中EGFR表达量较高，维贝柯妥塔单抗可特异性识别EGFR，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤 【解析】 【小问1详解】 获取目的基因时，从人类表皮细胞中提取mRNA，通过逆转录得到编码EGFR的cDNA，再利用PCR技术扩增出EGFR基因。构建基因表达载体时，除含启动子外，还必须有终止子、标记基因、复制原点等。原核细胞不具有内质网、高尔基体等结构，不能对蛋白质进行正确加工，不能产生结构和功能最接近人类的EGFR蛋白，所以不选择原核细胞作为受体细胞。 【小问2详解】 诱导细胞融合的常用方法有灭活病毒诱导法、聚乙二醇（PEG）融合法、电融合法等。过程②需要对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，可获得能产生特异性抗体的目标杂交瘤细胞。 【小问3详解】 维贝柯妥塔单抗是针对EGFR的靶向治疗药物，肿瘤细胞中EGFR表达量较高，维贝柯妥塔单抗可特异性识别EGFR，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤，所以该药物安全性和疗效都较高。 37. 糖尿病是一种常见病，且发病率有逐年上升的趋势。利用基因工程生产胰岛素有三种方法，如下图所示。据图结合所学知识回答下列问题： （1）方法三中，为使胰岛素基因能顺利进入细菌细胞，应用Ca2+处理细菌细胞，目的是使细胞处于一种________。莴苣为双子叶植物，过程②常用的方法是________。 （2）大肠杆菌和酵母菌均可作为生产胰岛素的工程菌，该类工程菌的优点是__________（至少答出两点）。三种方法中，哪种方法得到的胰岛素需要进一步加工和修饰以使其获得生物活性？___________。 （3）方法一将目的基因导入受体细胞常用的方法是______，受体细胞A应该是____细胞。转基因羊可通过分泌乳汁来生产人胰岛素，在构建的基因表达载体中，人胰岛素基因的首端必须含有_________________。图中过程③是先通过动物细胞培养成早期胚胎，然后将胚胎移植到经过_______处理的受体母羊子宫内。胚胎移植之前要在囊胚期取______细胞进行性别鉴定。为提高胚胎的利用效率，可以通过胚胎分割技术得到同卵双犊，在分割时，应将____均等分割。在早期胚胎的培养中，由于对动物细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，往往还需要再培养液中添加_____。 （4）用基因工程生产的胰岛素被注射到患者血液中容易被分解，使治疗效果受到影响。科学工作者通过对传统胰岛素进行改造，生产出不易被分解的高效胰岛素，这属于生物工程中______的范畴。 【答案】（1） ①. 能吸收周围环境中DNA分子的感受态 ②. 农杆菌转化法 （2） ①. 繁殖快、易培养、生产成本低（答出任意两点即可） ②. 方法三 （3） ①. 显微注射法 ②. 受精卵 ③. 乳腺蛋白基因的启动子 ④. 同期发情 ⑤. 滋养层 ⑥. 内细胞团 ⑦. 动物血清  （4）蛋白质工程 【解析】 【小问1详解】 将目的基因导入原核细胞时，Ca2+处理的目的是使细菌处于吸收周围环境中DNA分子的感受态；农杆菌转化法是将目的基因导入双子叶植物最常用的方法。 【小问2详解】 微生物作为工程菌，优点是繁殖速度快、培养条件简单、生产成本低，适合工业化生产；方法三的受体是大肠杆菌（原核生物），没有内质网、高尔基体等加工蛋白质的细胞器，无法对胰岛素前体进行加工修饰，因此得到的产物需要进一步处理才能获得生物活性。 【小问3详解】 将目的基因导入动物受体细胞的常用方法是显微注射法；培育转基因动物时，动物受精卵全能性最高，因此通常选择受精卵作为受体细胞；要让胰岛素基因在乳腺细胞中特异性表达，基因表达载体上胰岛素基因首端必须连接乳腺蛋白基因的启动子（启动子是RNA聚合酶结合位点，调控基因表达）；胚胎移植前需要对受体母羊做同期发情处理，保证受体和供体生理状态一致，利于胚胎着床；囊胚期进行性别鉴定会取不影响胚胎发育的滋养层细胞；胚胎分割时需要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和发育；由于动物早期胚胎培养的营养条件尚未完全明确，培养基中需要添加天然成分动物血清。 【小问4详解】 对现有天然胰岛素进行改造，获得功能更符合需求的新型胰岛素，属于蛋白质工程的范畴。 38. 番茄起源于南美洲，是一种喜温性植物，最适生长温度20~25℃，抗寒能力较弱。而具有东北“早春第一花”美名的冰凌花，具有强大抗寒基因AaCBF（约含800 bp）。科学家通过基因工程技术将抗寒基因AaCBF转入番茄，培育转基因抗寒番茄，据图回答下列问题： 限制酶识别序列及其切割位点 限制酶 识别序列 限制酶 识别序列 EcoRⅠ 5′G↓AATTC3′ XmaⅠ 5′C↓CCGGG3′ BamHⅠ 5′G↓GATCC3′ AscⅠ 5′G↓GCGCGG3′ SphⅠ 5′CGTAC↓G3′ MunⅠ 5′C↓AATTG3′ Sau3AⅠ 5′↓GATC3′ （1）获取和扩增AaCBF基因的常用技术是PCR，该技术中的反应缓冲液中一般要添加Mg²⁺，它的作用是__________。 （2）为扩增AaCBF基因，应选择图1中的引物____。构建基因表达载体时，应选用_______________两种限制酶切割Ti质粒，使用两种限制酶切割质粒，是为了防止________。 （3）为了后续能将目的基因正确连接到载体上，应在AaCBF基因a链和b链的5′端分别添加_________、______限制酶识别序列。 （4）为了检测AaCBF基因是否插入到质粒中，利用目的基因两端添加的限制酶切割重组质粒，然后对产物进行电泳，结果如图3。样品______最可能是插入了目的基因的重组质粒。 （5）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了质粒（空载质粒和重组质粒）的农杆菌，培养基中除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基中还需添加________，从作用角度来看，这样的培养基叫__________。若AaCBF基因成功转入植物细胞中，可检测到_______（填“Tetr”或“Ampr”或“Tetr”和Ampr”）的表达产物。 （6）为了确定抗寒番茄是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要用____________的方法从个体水平鉴定番茄植株的抗寒性。 【答案】（1）激活耐高温的DNA聚合酶的活性 （2） ①. 1和4 ②. EcoR Ⅰ和Sph Ⅰ ③. 质粒自身环化连接、目的基因反向连接等问题 （3） ①. Sph Ⅰ ②. Mun Ⅰ （4）2 （5） ①. 氨苄青霉素和四环素 ②. 选择培养基 ③. Tetr （6） ①. AaCBF ②. 移栽番茄植株到寒冷环境中 【解析】 【小问1详解】 PCR反应体系中，为了激活耐高温的DNA聚合酶的活性，反应缓冲液中一般要添加Mg2+(镁离子)。 【小问2详解】 DNA复制时子链沿5'→3'方向延伸，引物需要结合在目的基因两条链的3'端，且延伸方向应朝向目的基因内部，因此选择引物1和引物4，可扩增出完整的AaCBF基因。构建基因表达载体时，需要在启动子和终止子之间插入目的基因，且选用两种不同的限制酶切割可产生不同的黏性末端，从而有效避免目的基因、质粒自身环化连接、目的基因反向连接等问题，由于BamH Ⅰ位于标记基因上，选用该酶会破坏标记基因，而Sau3A I也能切割BamH I的识别序列，因此应选择EcoR I和Sph Ⅰ两种限制酶切割Ti质粒。 【小问3详解】 由图可知，a链方向为3'→>5'，其5'端位于目的基因的右侧；b链方向为5'→3'，其5'端位于目的基因的左侧。质粒上启动子后的酶切位点顺序为EcoR I→Sph I，为保证目的基因以正确方向插入载体 中，因此需在a链的5'端 (右侧)添加Sph I识别序列，而目的基因内部存在EcoR I的识别序列，不能直接使用EcoR I，故在b链的5'端(左侧)添加EcoR I的同尾酶Mun Ⅰ识别序列，Mun Ⅰ切割后可产生与EcoR I相同的黏性末端。 【小问4详解】 由图可知，原Ti质粒长度为8000bp，AaCBF目的基因长度约为800bp，插入目的基因后重组质粒的理论长度约为8800bp，由于目的基因左侧是通过Mun I的黏性末端与EcoR I的黏性末端连接，形成的新序列5'-CAATTC-3'不能被Mun I识别和切割，因此用目的基因两端添加的对应限制酶切割重组质粒时，只能被Sph I切割，最终得到接近8800bp的一个片段，观察图3电泳结果，样品2呈现出符合该预期大小的条带，因此样品2最可能是插入了目的基因的重组质粒。 【小问5详解】 Ti质粒上有四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因，所以有Ti质粒的农杆菌能在四环素和氨苄青霉素的培养基上存活，该培养基能筛选出含质粒的农杆菌，从功能作用划分该培养基属于选择培养基。农杆菌转化法的作用机理是将Ti质粒上的T-DNA转移并整合到植物细胞染色体DNA中，由Ti质粒的结构可知，T-DNA区域包含四环素抗性基因(Tetr)，而氨苄青霉素抗性基因(Ampr)位于T-DNA区域之外，不会进入植物细胞，因此若AaCBF基因成功转入植物细胞中，可检测到Tetr的表达产物。 【小问6详解】 探针是指用放射性同位素标记的目的基因（AaCBF）制成的，除了从分子水平上进行检测，还可以从个体水平上进行鉴定，即将番茄植株移栽到寒冷环境中鉴定番茄植株的抗寒性。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 平凉一中2027届高二第二学期第二次阶段性考试试题（卷） 生物 考试时间：75分钟 一、选择题（本题共30小题，每题2分，共60分，每题只有一个正确选项） 1. 乙烯生物合成酶基因可以控制乙烯的合成，科学家将该基因的反义基因导入番茄细胞内，培育转基因延熟番茄，下列说法正确的是（ ） A. 形成转基因番茄的过程发生的变异属于染色体变异 B. 反义基因通过抑制转录来调控基因的表达 C. 乙烯生物合成酶基因模板链序列与反义基因模板序列互补 D. 乙烯是乙烯生物合成酶基因表达的产物，可促进果实成熟 2. 马奶酒是具有民族特色的发酵乳制品，主要依靠乳酸菌和特殊的酵母菌发酵制备。当马奶中的乳糖被分解后，特殊的酵母菌能优先利用半乳糖进行发酵，而其余微生物都会争抢葡萄糖。下列叙述正确的是（ ） A. 酵母菌纯培养常用固体培养基，琼脂可提供碳源 B. 乳酸菌和特殊的酵母菌均属于进行无氧呼吸的真核微生物 C. 发酵中活的微生物数量可以使用血细胞计数板进行直接计数 D. 特殊的酵母菌优先利用半乳糖的营养方式有利于其数量的增长 3. 某乡村因长期过量使用化肥、砍伐薪炭林、生活污水直接排放等，导致耕地肥力下降、水土流失加剧、河流水体富营养化。当地政府启动生态修复工程，采取了以下措施：①在河流沿岸种植芦苇、菖蒲等挺水植物；②修建沼气池，将秸秆、畜禽粪便转化为沼气和有机肥；③退耕还林，种植本地树种恢复植被；④在耕地中推行“稻—鸭—鱼”立体种养模式。下列叙述错误的是（ ） A. 措施①种植芦苇、菖蒲等可吸收水体中的N、P等元素，缓解水体富营养化 B. 措施②建立沼气池实现了能量的多级利用，提高了能量传递效率 C. 措施③种植本地树种而非外来树种遵循了生态工程的协调原理 D. 措施④“稻—鸭—鱼”立体种养模式可提高该生态系统的稳定性 4. 中国酒文化博大精深，酿酒技术在我国已有上千年的历史。以下是用苹果酿造果酒果醋的过程，以下说法正确的是（ ） A. 酵母菌与醋酸杆菌的代谢类型均为异养好氧型 B. 果酒转化为果醋所需的酶存在于细胞质基质和线粒体 C. 添加白砂糖有利于酒精的产生，加入醋酸杆菌后发酵条件只需要改变通气情况 D. 醋酸发酵前，加入无菌水对苹果果酒进行稀释 5. 深海中某种赖氨酸缺陷型放线菌能产生安莎霉素，可治疗肺部感染。为此，科研人员用紫外线诱变深海放线菌后，如图选育高产菌株，以提取安莎霉素。下列叙述正确的是（ ） 注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落 A. 培养基①②属于选择培养基，无需添加赖氨酸 B. 用接种环蘸取菌液在培养基②上划线进行接种 C. 为不破坏培养基③的无菌状态应在灭菌后调节pH D. 培养结果是甲菌落不能在③生存，推断甲菌落能产生安莎霉素 6. 马铃薯种植过程中很容易受到棒形杆菌的侵染导致维管束环状腐烂。棒形杆菌主要在种薯上传播，也可在土壤中存活。如图所示，利用特定的选择培养基可以从土壤中筛选出棒形杆菌，下列说法错误的是（ ） A. 从种植过患病马铃薯的土壤中取样容易筛选到目的菌株 B. 平板划线结果如图乙所示，接种时总共有6次灼烧接种环 C. 若图甲共3个选择培养基上菌落平均数为120，则每克土壤约含棒形杆菌1.2×107个 D. 为保证实验结果准确，需增设未接种的选择培养基及接种后的完全培养基作为对照 7. 下列关于微生物培养和计数的叙述，错误的是（　　） A. 常用的灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等 B. 平板划线纯培养酵母菌时，不得将最后一次与第一次划线相连 C. 同一稀释度下至少选3个平板计数，且菌落数在30~300之间 D. 在以尿素为唯一氮源的培养基上生长的微生物就是尿素分解菌 8. 产朊假丝酵母菌可利用淀粉水解液、制糖废液等廉价原料发酵生产单细胞蛋白，作为优质微生物饲料。下列叙述正确的有（　　） ①发酵前需对产朊假丝酵母进行菌种选育，以获得能高效利用糖类、菌体蛋白合成能力强的菌株 ②发酵培养基中除碳源外，还需添加氮源、无机盐和生长因子等 ③可通过连续培养的方式，不断补充新鲜原料、排出代谢废物，提高单细胞蛋白的生产效率 ④培养基中淀粉水解液的浓度不宜过高，否则会导致酵母菌细胞失水 ⑤发酵过程中pH会逐渐降低，应定期添加酸液以维持稳定的酸性环境 ⑥采用过滤、沉淀等方法分离产朊假丝酵母菌，干燥后即可获得单细胞蛋白产品 A. 3项 B. 4项 C. 5项 D. 6项 9. 下列表述中正确的有几项（　　） ①发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵 ②发酵工程的产品主要包括微生物的代谢产物、酶及菌体本身 ③在发酵过程中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径 ④单细胞蛋白是从微生物细胞中提取出来的 A. 1项 B. 2项 C. 3项 D. 4项 10. 关于植物组织培养技术，相关叙述正确的是（　　） A. 外植体需用酒精和次氯酸钠混合液进行消毒处理 B. 脱分化形成愈伤组织时可发生基因突变和染色体变异 C. 所用培养基含植物细胞所必需的无机盐、葡萄糖和激素等营养物质 D. 只有再分化的过程中存在基因的选择性表达，脱分化的过程中不存在 11. 为拯救濒危植物红豆杉，并同时获得高抗癌活性物质——紫杉醇，科研小组设计了如图所示的实验流程。下列相关叙述正确的是（ ） A. 诱导红豆杉茎尖经过再分化过程形成愈伤组织 B. 在红豆杉组织培养过程中，通常加入蔗糖作为碳源和氮源 C. 用液体培养基扩大培养愈伤组织生产紫杉醇时，通常要通入无菌空气 D. 同一株植物不同部位的组织细胞经诱导培养获得的植株基因型一定相同 12. 沃柑果实色泽艳丽，品质极优，但因果实有籽严重削弱了其市场竞争力。为培育具有市场竞争力的无籽沃柑，研究者设计如下流程。相关叙述正确的是（ ） A. ①需使用胰蛋白酶或果胶酶处理 B. 常用PEG诱导原生质体融合和细胞壁再生 C. 获得的三倍体植株都能表现双亲的优良性状 D. ③过程发育成三倍体植株依赖于细胞的全能性 13. 细胞的全能性是植物细胞工程的理论基础，但随着现代生物技术的发展，植物细胞工程领域取得的一些重要科研成果已不再局限于细胞的全能性。下列科研成果未涉及细胞全能性的是（　　） A. 利用植物细胞培养生产紫杉醇 B. 培育“柳叶橘-葡萄柚”杂种植株 C. 培育马铃薯、草莓、大蒜等脱毒苗 D. 单倍体育种与常规育种结合培育水稻新品种 14. 紫杉醇是红豆杉产生的一种次生代谢物，具有显著的抗癌功效。研究人员开展了悬浮培养红豆杉细胞合成紫杉醇的工程技术研究，结果如表所示。下列说法错误的是（　　） 蔗糖浓度（g/L） 20 30 40 50 60 细胞干重（g/L） 12.5 15.3 18.6 14.2 10.1 紫杉醇产量（g/L） 8.2 12.7 15.4 10.8 6.5 A. 紫杉醇不是红豆杉细胞生长、增殖等生命活动所必需的 B. 蔗糖浓度过高可能使培养液渗透压升高，抑制细胞生长 C. 据表可知，红豆杉细胞的生物量与紫杉醇产量呈正相关 D. 40 g/L蔗糖浓度下，单个红豆杉细胞中紫杉醇含量最高 15. 病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构扩散，导致果蔬产量下降和品质退化。通过植物组织培养技术，利用茎尖可以快速培育出脱毒苗。下列说法正确的是（　　） A. 切取的植株茎尖用70%的酒精消毒后，需用清水进行清洗 B. 脱分化和再分化过程都需要光照，不需额外添加能源物质 C. 植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是其胞间连丝不发达 D. 获得的脱毒苗具有抗病毒性状并且可以通过无性繁殖遗传 16. 实验小组从患者胃组织中提取干细胞，在特殊培养条件下诱导其发育成模拟真实胃功能的类器官，培育出全球首个全功能的“迷你胃”。下列有关培育胃组织干细胞的叙述，错误的是（　　） A. 用胃组织干细胞培育“迷你胃”的原理是细胞增殖和细胞核的全能性 B. 应置于95%的空气和5%的CO2的气体环境中培养干细胞 C. 在体外培养细胞时，必须保证环境是无菌、无毒的 D. 动物细胞培养基中通常需加入血清、血浆等天然成分 17. 抗体—药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A. ADC中的抗体主要是发挥治疗效应，直接杀伤靶细胞 B. 制备ADC中的抗体应用了动物细胞融合和动物细胞培养等技术 C. ADC通过胞吞作用进入肿瘤细胞体现了细胞膜的选择透过性， D. ADC中的细胞毒素也能识别并杀伤正常细胞，因此ADC具有副作用 18. 细胞融合技术有着广泛应用。如图为细胞融合的示意图，据图判断错误的是（ ） A. 若d为受精卵，则a、b为获能的精子和MⅡ期的次级卵母细胞 B. 若d为杂种细胞，则c→d过程需要筛选 C. 若a细胞和b细胞是植物细胞，需先脱分化再诱导融合 D. 上述过程不都能证明融合后的细胞仍然具有全能性 19. 科研人员为抢救性保护濒临灭绝的西藏樟木牛，将樟木牛耳缘成纤维细胞，通过体细胞核移植技术制备重构胚胎，并移植至代孕黄牛进行体内发育。下列叙述错误的是（　　） A. 该技术涉及动物细胞培养、细胞核移植、胚胎移植等操作 B. 在MⅡ期通过显微操作法对卵母细胞进行去核操作 C. 对代孕黄牛应进行同期发情和超数排卵处理 D. 激活重构胚以完成细胞分裂和发育进程 20. 西藏特有牛种樟木牛濒临灭绝。研究人员以一头成年樟木公牛作为供体，采集耳组织成纤维细胞培养后，通过体细胞核移植技术制备重构胚，移植至代孕母牛体内发育从而获得多头犊牛。下列叙述错误的是（　　） A. 成纤维细胞需置于含有95%空气和5%CO2的CO2培养箱中进行培养 B. 对卵巢中采集获得的卵母细胞进行传代培养可以产生大量卵细胞 C. 可采用显微操作法或密度梯度离心法等方法对卵母细胞进行去核处理 D. 通过该过程不能大幅改良樟木牛的性状，获得的多头犊牛均为公牛 21. 干细胞在再生医学、药物安全性与有效监测等领域发挥着巨大作用。下列有关干细胞的说法，错误的是（　　） A. 囊胚阶段的细胞都属于胚胎干细胞 B. 成体干细胞只能分化成特定的细胞或组织 C. 用iPS细胞移植治疗时，理论上可以避免免疫排斥反应 D. 干细胞用于临床治疗存在肿瘤发生的风险 22. 中国科学家选择了比格犬作为受体及代孕母亲，成功克隆了一只濒危物种北极狼。通过克隆技术获得北极狼的基本过程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. 从重组细胞到甲胚胎，胚胎体积不断增大 B. 需对代孕比格犬注射激素使其同期发情 C. 克隆狼的部分遗传性状与代孕比格犬相同 D. 将重组细胞直接移植到代孕犬子宫中可缩短克隆周期 23. 限制酶是基因工程的重要工具。科研人员使用EcoRⅠ和BamHⅠ对某长度为1080 bp的环状质粒进行酶切，酶切完全后经电泳检测仅发现一条条带。已知两种酶识别序列不同，且在该质粒上均有单一识别位点。下列叙述错误的是（　　） A. 限制酶既可以来自原核生物，也可从真核细胞中获取 B. 酶切所得DNA片段约为540 bp，共存在两种黏性末端 C. 补齐黏性末端的酶切片段可利用T4DNA连接酶连接 D. 若EcoRⅠ或BamHⅠ完全失活，则电泳后将会出现两个条带 24. 某实验小组以洋葱鳞片叶为材料，进行“DNA的粗提取与鉴定”实验，实验步骤参照教材设计。下列相关叙述错误的是（　　） A. 研磨洋葱时，加入适量的研磨液有利于充分释放DNA B. 利用纱布过滤研磨液，可以去除一些颗粒较大的杂质 C. 向研磨液离心后得到的上清液中加入预冷的酒精溶液可以获得粗提取的DNA D. 将粗提取的含DNA的丝状物加到二苯胺试剂中，经沸水浴后会呈现蓝色 25. T4 DNA连接酶是基因工程的一种工具酶，可将任意2个具有相同黏性末端的DNA片段连接在一起。下列叙述错误的是（　　） A. T4 DNA连接酶作用的底物有多种，但其仍具有专一性 B. T4 DNA连接酶在催化前后组成成分没有发生改变 C. T4 DNA连接酶在连接目的基因与载体时能够恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 D. T4 DNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于E.coli DNA连接酶的 26. 某同学利用PCR技术扩增目的基因，完成扩增后取不同样品进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. PCR延伸阶段，TaqDNA聚合酶从引物3'端催化脱氧核苷酸连接，电泳前无需高温变性 B. 电泳条带距加样孔越远，代表DNA片段分子量越大，迁移速率越慢 C. 实验组2号泳道出现与阳性对照（M）位置一致的条带，说明扩增成功且产量更高 D. 阴性对照4号泳道未出现条带，说明本次PCR实验体系存在外源DNA污染 27. 关于基因工程应用的叙述，正确的是（　　） A. 将苏云金杆菌中的Bt基因导入棉花细胞，培育抗病毒棉花 B. 将凝乳酶基因导入大肠杆菌的基因组中，再通过工业发酵生产凝乳酶 C. 将含有药用蛋白基因的表达载体注射入牛的乳腺细胞中，从乳汁中获得所需的药品 D. 将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，使其肠道细胞表达肠乳糖酶基因，从而改善牛奶品质 28. 人乳头瘤病毒疫苗（HPV疫苗）是一种由L蛋白在体外自发组装成的空心颗粒，可以预防HPV引起的部分宫颈癌，其生产过程如下图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 疫苗甲、乙属于基因工程疫苗 B. 疫苗甲、乙与HPV具有相似的抗原 C. 疫苗甲、乙可利用微生物发酵大量生产 D. 疫苗甲比疫苗乙预防宫颈癌的效果更好 29. 胰岛素用于治疗糖尿病，但胰岛素注射后易在皮下堆积，需较长时间才能进入血液，进入血液后又易被分解，因此治疗效果受到影响。科研人员研制了速效胰岛素，其生产过程如图所示。下列说法错误的是（　　） A. 速效胰岛素的生产需要用到蛋白质工程和发酵工程 B. 大肠杆菌合成的新的胰岛素不能正常发挥作用 C. 对胰岛素的改造最终还必须通过改造或合成基因来完成 D. 可以用Ca2+处理的方法直接将新的胰岛素基因导入大肠杆菌细胞中 30. 下列有关生物工程的叙述，错误的有（　　） ①基因工程的核心步骤是构建基因表达载体②蛋白质工程可通过直接改造蛋白质的结构从而改变其功能③利用核移植可以培养试管婴儿④PCR技术需要利用限制性内切核酸酶打开DNA双链⑤利用动物细胞培养技术和细胞融合技术可以制备单克隆抗体⑥利用植物茎尖培养脱毒苗时，全程都需要光照 A. 一项 B. 两项 C. 三项 D. 四项 31. 葡萄糖异构酶能将葡萄糖转化为果糖，其最适温度约为60℃，生产上常用于高果糖浆的生产。科学家将葡萄糖异构酶的第138位甘氨酸用脯氨酸替代，结果它的最适温度提高了约10℃。下列有关说法正确的是（ ） A. 蛋白质工程和基因工程的根本区别是操作对象的差异 B. 编码葡萄糖异构酶的基因的核糖核苷酸序列会有相应的改变 C. 经改造后的葡萄糖异构酶热稳定性提高这一性状不可遗传 D. 改造后的葡萄糖异构酶在60℃时生产高果糖浆的效率可能低于70℃时的 32. 基因工程技术在迅猛发展，为人类的生产生活带来很多便利，但同时也带来了一些安全性问题，下列说法正确的是（　　） A. 乳腺生物反应器是将药用蛋白基因与药用蛋白启动子重组后导入动物的受精卵中 B. 将外源生长素基因导入鲤鱼中可提高鲤鱼的生长速度 C. 治疗性克隆不涉及伦理问题，无需监控审查 D. 在转基因研究中，科学家通过阻断淀粉储藏使花粉失去活性来防止基因污染 33. 下列应用实例最可能造成生物技术安全性与伦理问题的是（ ） A. 对先天免疫缺陷症患儿的免疫细胞进行基因编辑后，回输给患儿进行治疗 B. 利用干细胞培养具有单腔室结构的迷你跳动心脏，增加器官移植供体来源 C. 利用人体的成纤维细胞转变成iPS细胞，进而利用iPS细胞治疗疾病 D. 利用基因编辑技术设计试管婴儿，以期得到智力超群的婴儿 34. CRISPR/Cas9系统由向导RNA和Cas9蛋白组成，由向导RNA（gRNA）引导Cas9蛋白在特定的基因位点进行切割，从而完成基因的编辑过程，过程如图所示。现欲用CRISPR/Cas9编辑技术对轮状病毒（双链RNA病毒）进行编辑，下列相关叙述错误的是（　　） A. 可以根据目标基因的碱基序列人工设计向导RNA B. Cas9类似于基因工程中的限制酶，其作用位点是磷酸二酯键 C. 向导RNA的碱基序列越短，则其在基因上出现定位错误的概率越高 D. 若向导RNA的序列为5'-UCACAUC-3'，则其识别的基因靶序列为3'-AGTGTAG-5' 35. 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，以便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是−↓GATC−，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是−G↓GATCC−，根据图示判断下列操作正确的是（　　） A. 载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 B. 目的基因成功地插入到受体细胞染色体上后一定能正常表达 C. 目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 D. 质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 二、非选择题（每空1分，共30分） 36. EGFR是一种表皮生长因子受体，在肿瘤细胞中的表达量较高。维贝柯妥塔单抗是一种针对EGFR的靶向治疗鼻咽癌的ADC药物，该药物是将抗EGFR单克隆抗体与单甲基奥瑞他汀E（MMAE）偶联。MMAE是一种小分子药物，能阻断细胞有丝分裂，引发细胞凋亡。回答下列问题： （1）制备EGFR抗原的主要步骤如下： ①获取目的基因：从人类表皮细胞中提取mRNA，通过______得到编码EGFR的cDNA，再利用_______技术扩增出EGFR基因。 ②构建基因表达载体：将扩增出的EGFR基因与质粒连接。要使EGFR基因在受体细胞中稳定遗传、表达并发挥作用，构建的基因表达载体除含启动子外，还必须有_______________等（答出2点）。 ③将目的基因导入受体细胞：将构建好的基因表达载体导入CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）。该环节不选择生长周期短、繁殖速度快的原核细胞作为受体细胞，原因是_______，不能产生结构和功能最接近人类的EGFR蛋白。 ④培养已转化的CHO细胞，获得EGFR蛋白。 （2）制备抗EGFR单克隆抗体的流程如图： 过程①诱导细胞融合的常用方法有_____________（答出1种）。过程②需要对杂交瘤细胞进行_________，经多次筛选，可获得足量的目标杂交瘤细胞。 （3）利用连接子将抗EGFR单克隆抗体与MMAE连接形成ADC药物——维贝柯妥塔单抗。临床试验表明，该药物的安全性和疗效都较高。结合题干信息分析，其原因是____________。 37. 糖尿病是一种常见病，且发病率有逐年上升的趋势。利用基因工程生产胰岛素有三种方法，如下图所示。据图结合所学知识回答下列问题： （1）方法三中，为使胰岛素基因能顺利进入细菌细胞，应用Ca2+处理细菌细胞，目的是使细胞处于一种________。莴苣为双子叶植物，过程②常用的方法是________。 （2）大肠杆菌和酵母菌均可作为生产胰岛素的工程菌，该类工程菌的优点是__________（至少答出两点）。三种方法中，哪种方法得到的胰岛素需要进一步加工和修饰以使其获得生物活性？___________。 （3）方法一将目的基因导入受体细胞常用的方法是______，受体细胞A应该是____细胞。转基因羊可通过分泌乳汁来生产人胰岛素，在构建的基因表达载体中，人胰岛素基因的首端必须含有_________________。图中过程③是先通过动物细胞培养成早期胚胎，然后将胚胎移植到经过_______处理的受体母羊子宫内。胚胎移植之前要在囊胚期取______细胞进行性别鉴定。为提高胚胎的利用效率，可以通过胚胎分割技术得到同卵双犊，在分割时，应将____均等分割。在早期胚胎的培养中，由于对动物细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，往往还需要再培养液中添加_____。 （4）用基因工程生产的胰岛素被注射到患者血液中容易被分解，使治疗效果受到影响。科学工作者通过对传统胰岛素进行改造，生产出不易被分解的高效胰岛素，这属于生物工程中______的范畴。 38. 番茄起源于南美洲，是一种喜温性植物，最适生长温度20~25℃，抗寒能力较弱。而具有东北“早春第一花”美名的冰凌花，具有强大抗寒基因AaCBF（约含800 bp）。科学家通过基因工程技术将抗寒基因AaCBF转入番茄，培育转基因抗寒番茄，据图回答下列问题： 限制酶识别序列及其切割位点 限制酶 识别序列 限制酶 识别序列 EcoRⅠ 5′G↓AATTC3′ XmaⅠ 5′C↓CCGGG3′ BamHⅠ 5′G↓GATCC3′ AscⅠ 5′G↓GCGCGG3′ SphⅠ 5′CGTAC↓G3′ MunⅠ 5′C↓AATTG3′ Sau3AⅠ 5′↓GATC3′ （1）获取和扩增AaCBF基因的常用技术是PCR，该技术中的反应缓冲液中一般要添加Mg²⁺，它的作用是__________。 （2）为扩增AaCBF基因，应选择图1中的引物____。构建基因表达载体时，应选用_______________两种限制酶切割Ti质粒，使用两种限制酶切割质粒，是为了防止________。 （3）为了后续能将目的基因正确连接到载体上，应在AaCBF基因a链和b链的5′端分别添加_________、______限制酶识别序列。 （4）为了检测AaCBF基因是否插入到质粒中，利用目的基因两端添加的限制酶切割重组质粒，然后对产物进行电泳，结果如图3。样品______最可能是插入了目的基因的重组质粒。 （5）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了质粒（空载质粒和重组质粒）的农杆菌，培养基中除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基中还需添加________，从作用角度来看，这样的培养基叫__________。若AaCBF基因成功转入植物细胞中，可检测到_______（填“Tetr”或“Ampr”或“Tetr”和Ampr”）的表达产物。 （6）为了确定抗寒番茄是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要用____________的方法从个体水平鉴定番茄植株的抗寒性。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $