甘肃省平凉市崆峒区甘肃省平凉市第一中学2024-2025学年高二下学期5月期中生物试题

平凉一中 2024—2025 学年度第二学期期中考试试题（卷） 高二 Th物 时间：75min 总分：100 分 一、选择题（每小题 2 分，共计 50 分） 1．如图表示果酒和果醋生产过程中的物质变化情况，下列相关叙述正确的是（ ） A．果酒、果醋发酵利用的微生物均属于真核生物 B．过程①②在酵母菌细胞中发生的场所不同 C．过程⑤需要氧气而过程④不需要氧气 D．制作果酒和果醋的过程中，发酵液的 pH 均会降低 2．馒头夹着腐乳或者就着泡菜，是很多中国人喜欢的传统早餐，这些食品的制作都离不开微生物的发酵。下列叙述错误的是（ ） A．制作“老面馒头”时，可用前一次发酵保存下来的“面团”为发酵提供酵母菌 B．制作泡菜时盐水质量分数 5%～20%，煮沸后要冷却是为了避免高温杀死乳酸菌 C．馒头和泡菜的制作都需要创造无氧环境，是因为利用的菌种都是厌氧微生物 D．豆腐发酵成腐乳的过程中起主要作用的毛霉，其 DNA 主要存在于细胞核 3．传统四川泡菜风味的形成依赖于以乳酸菌为主导的自然发酵。在发酵过程中乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的相对含量(或数量)变化如图所示，其中亚硝酸盐是硝酸盐还原菌酶促硝酸盐还原形成的。研究发现与硝酸盐还原相关基因的表达量与大部分杂菌的数量呈正相关，而与乳酸菌的数量呈负相关。下列相关叙述错误的是（ ） A．需用质量分数为 20%—50%的盐水制作泡菜 B．泡菜发酵初期硝酸盐的酶促还原主要由杂菌完成 C．乳酸菌可能主要通过产生大量乳酸来降低体系中的亚硝酸盐水平 D．发酵后期，泡菜液 pH 下降是导致乳酸菌数量逐渐减少的原因之一 4．在反刍动物瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物以尿素为唯一氮源。某小组计划从牛瘤胃中分离出该类微生物进行研究,下图表示实验所用的培养基配方。下列说法错．误．的是（ ） 本实验使用的培养基配方 KH₂ PO₄ Na₂ HPO4 MgS04·7H₂ O 葡萄糖 尿素 琼脂 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g l。0g 15.0g 将上述物质溶解后,用蒸馏水定容至 1000 mL。 A．该培养基为固体培养基,在倒平板操作前,要进行高压蒸汽灭菌 B．该培养基上只有尿素分解菌能够存活,因而长出的菌落无须菌种鉴定 C．接种针可以通过灼烧灭菌,灼烧时使用酒精灯的外焰效果更好 D．尿素分解菌能够使培养基的 pH 升高,可据此初步确定所需菌种 5．一次性口罩的主要成分是由 C、H 两种元素组成的聚丙烯纤维。现欲从合适的土壤样品中选出能高 ( 生物试题 ) ( 第 1 页 共 8 页 ) 学科网（北京）股份有限公司 效降解一次性口罩的细菌，研究人员设计了如图所示的操作流程。下列叙述错误的是（ ） A．应从口罩丢弃较多的土壤中采集样品 B．土壤取样时一般要铲去表层土 C．培养基应以聚丙烯纤维作为唯一碳源 D．鉴别培养阶段应在液体培养基上进行 6．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，请分析下列操作，正确的项数是（ ） ①平板划线操作过程中，每次划完线需灼烧接种环，初次划线前不需要灼烧 ②加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 ③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 ④干热灭菌可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 ⑤涂布平板时所用的涂布器需酒精浸泡后灼烧灭菌 ⑥家庭制作泡菜并无刻意的灭菌环节，发酵初期乳酸菌产生的乳酸可以抑制其他微生物的生长 ⑦确保无菌操作条件下，获得的不含代谢废物的微生物培养物即是纯培养物 A．一项 B．二项 C．三项 D．四项 7．消毒、灭菌是生物学实验中常见的操作。下列有关说法正确的是（ ） A．培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染 B．植物组织培养时，外植体分别用酒精和次氯酸钠溶液处理 30min 即可 C．用接种环接种时，取菌种前和接种后都需将接种环进行干热灭菌处理 D．培养乳酸菌时，需在培养基中添加维生素，配制好的培养基需先灭菌后调节 pH 8．如图为实验室培养和纯化酵母菌过程的操作步骤，下列有关叙述错误的是（ ） A．整个划线操作过程中，需要对接种环进行两次灼烧灭菌 B．第二次及其后的划线，应从上一次划线的末端开始 C．图中 I、Ⅱ区的酵母菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落 D．用接种环在平板上划线时应注意不能将培养基划破 9．垃圾分类有利于变废为宝，减少环境污染。处理生活垃圾的有效方法之一是利用微生物对其进行降解，为了从土壤中筛选出能高效降解淀粉的微生物，某研究人员利用土壤浸出液进行了如图所示的操作。下列说法错误的是（ ） A．甲培养基是含有淀粉的固体培养基 B．图示采用的接种方法既可分离菌株又可用于计数 C．获得高效降解淀粉的微生物，应挑③处的菌落接种到丙的培养液 D．将锥形瓶丙放在摇床上充分振荡，有利于菌株与培养液充分接触 10．下图为酵母菌纯培养过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是（ ） A．调节培养基的 pH 可以在①步骤（倒平板）之后进行 B．②步骤操作前需要将接种环灼烧灭菌并冷却 C．图示实验过程中，接种环共灼烧了 5 次 D．图中培养基倒置培养后可以用于统计酵母菌的菌落数 11．如图所示为分离某种以尿素为氮源的细菌的实验过程，下列叙述错误的是（ ） A．土样从有哺乳动物尿液的地方取，获得目的菌种的概率更高 B．为验证尿素固体培养基具有选择作用，可用不接种的空白培养基作对照 C．C 组三个培养皿中分别形成了 54 个、46 个、50 个菌落，则 1g 土壤样本中约有分解尿素的细菌 5×106 个 D．在以尿素为唯一氮源的固体培养基上生长的细菌，有可能不都是以尿素为氮源的细菌 12．工业上常利用发酵工程生产微生物饲料，其主要生产流程如下图。下列叙述错误的是（ ） A．优良菌种不一定是直接从自然界中筛选得到 B．发酵工程的中心环节是发酵罐内的发酵 C．生产乳酸菌时，不仅要关注培养基中的营养成分，还要注意隔绝空气 D．微生物蛋白质含量高，可以从发酵得到的菌体中提取出大量的单细胞蛋白 13．下列对发酵工程及其应用的叙述，正确的有几项（ ） ①用单细胞蛋白制成的微生物饲料，可通过发酵工程从微生物细胞中提取 ②谷氨酸棒状杆菌发酵时，需在中性或弱碱性条件下，才能积累谷氨酸 ③利用发酵工程生产的食品添加剂可以起到调味增色的作用，但不能增加食物的营养 ④生产柠檬酸需要筛选产酸量高的黑曲霉 ⑤利用发酵工程生产的微生物农药是化学防治的重要手段 ⑥青霉素是青霉的代谢物，可以采用提取、分离和纯化等措施来获得 ⑦发酵过程中的优良菌种只能通过诱变育种和基因工程育种获得 A．2 项 B．3 项 C．4 项 D．5 项 14．自然界选育出的优良菌株、通过发酵生产制成的活菌或其代谢物产品等在现代农牧业上有很多方面的应用。下列相关叙述正确的是（ ） A．用微生物农药来防治病虫害，这属于化学防治 B．在青贮饲料中添加酵母菌等可以提高饲料的品质，使饲料保鲜 C．单细胞蛋白是以淀粉或纤维素等为原料进行发酵获得的蛋白质 D．有些微生物肥料也具有一定的微生物农药的作用 15．长穗偃麦草（2n=14）是普通小麦（6n=42）的近缘属植物，因其可与普通小麦杂交，且具有突出的抗旱、抗寒、抗病及耐盐性，常用于小麦遗传改良育种研究。科学家采用下图所示的技术培育出了 普通小麦—长穗偃麦草杂种植株，①、②、③代表培育过程。下列说法正确的是（ ） A．将植物细胞置于低渗溶液中，用纤维素酶和果胶酶处理可以获取完整的原生质体 B．①过程是原生质体融合，进而再生细胞壁形成杂种细胞 C．②过程和③过程使用的培养基不一样，但都需要在光照下进行培养 D．植物体细胞杂交的原理是细胞增殖和植物细胞的全能性 16．某二倍体植物（2n=24）的基因型为 Aabb，这 2 对基因位于 2 对同源染色体上。为了获得基因型为 AAbb 的个体，某研究者以该植物为材料进行了如图所示的两种育种过程。下列叙述正确的是（ ） A．①过程形成的雄配子和雌配子数量相同 B．②过程中发生了脱分化和再分化 C．进行③过程前应先选出基因型为 Ab 的幼苗再用秋水仙素处理 D．个体Ⅰ和个体Ⅱ的体细胞中分别含有 48 条和 24 条染色体 17．育种工作者运用相关工程技术，快速培育出抗除草剂的水稻（2N=24），育种流程如图所示。下列相关叙述错误的是（ ） A．过程①代表花药离体培养，利用了植物细胞具有全能性的原理 B．过程②的目的是使单倍体幼苗定向突变产生抗除草剂基因 C．过程③需要用除草剂处理，进而筛选出抗除草剂的叶片 D．过程⑤可以用秋水仙素处理使其染色体数目加倍，形成二倍体 18．间充质干细胞（MSC）是一种成体干细胞，具备分化为骨细胞、脂肪细胞等的潜能。目前已被用于器官移植及组织器官修复，下列叙述正确的是（ ） A．MSC 培养过程中可加入适量抗生素和血清以防止杂菌污染 B．培养 MSC 细胞，需要为其创造 95%O2 和 5%CO2 的气体环境 C．可用胶原蛋白酶处理体外培养的 MSC 以解除细胞接触抑制的现象 D．MSC 具有组织特异性，在体内可分化形成诱导多能干细胞 19．根据制造原料不同，人造肉主要分为植物蛋白人造肉和细胞培养人造肉两类。植物蛋白人造肉是指以大豆蛋白等植物蛋白为主料，经纤维化等工艺制成；细胞培养人造肉是指利用动物体内分离得到的肌肉干细胞进行培养，诱导细胞分化增殖得到肌肉类似物。下列有关叙述错误的是（ ） A．与成年动物相比，幼龄动物的肌肉干细胞增殖能力强，造肉速度快 B．猪肌肉干细胞生产人造猪肉时，培养液中通常需加入血清等天然成分 C．利用植物细胞培养技术生产植物蛋白质不受季节、地域等因素影响 D．用于传代培养的细胞都需要用胰蛋白酶等处理后，再用离心法收集 20．再生医学领域在 2019 年首次利用异源诱导多能干细胞（iPS 细胞）培养出的眼角膜组织，移植到病人体内，成功治疗一名失明患者，且未发生免疫排斥反应。下列叙述正确的是（ ） A．iPS 细胞存在于早期胚胎、外周血和脐带血中，分化程度低于造血干细胞 B．神经干细胞和 iPS 细胞在治疗阿尔茨海默病等方面有重要价值 C．体外培养 iPS 细胞的培养基中需添加糖类、氨基酸、血清、激素、维生素等成分 D．患者未发生免疫排斥反应是因为移植细胞与其自身细胞的基因相同 21．下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是（ ） A．后代丁的遗传性状由甲、乙、丙的遗传物质共同决定 B．过程①需要提供 95%空气和 5%CO2 的混合气体 C．过程②常使用显微操作去核法对受精卵进行处理 D．过程③将激活后的重组细胞培养至囊胚或者原肠胚后移植 22．青霉素的发酵生产过程中遇到两个问题，首先发酵过程中总会产生头孢霉素如图 1，其次青霉素发酵需要大量氧气。为保证发酵过程中青霉素的持续高产，研究人员将透明颤菌（细菌）的血红蛋白引入青霉菌，设计方案如图 2 所示。相关叙述错．误．的是（ ） A．菌种选育时，敲除青霉菌中控制酶 B 合成的基因可使其只产青霉素 B．①②过程需要用相同的酶去除细胞壁获得原生质体 C．③过程可在略高渗溶液中采用 PEG 融合法诱导原生质体融合 D．可利用缺乏甲硫氨酸和精氨酸的基本培养基筛选出融合细胞 23．辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如下图。下列说法正确的是（ ） A．①过程受外源激素的调控，②过程受内源激素的调控 B．实现①过程的条件是外植体细胞发生基因突变 C．获得脱毒苗常用的外植体是成熟的根和茎，脱毒苗具有更强的抗病毒能力 D．辣椒素是次生代谢物，可通过细胞培养实现工厂化生产 24．非洲猪瘟病毒（ASFV）是一种具有包膜的双链 DNA 病毒，病毒蛋白 p30 位于病毒的包膜上，在病毒进入宿主细胞时期具有重要作用。科研人员设计如下流程制备 ASFV 单克隆抗体。下列叙述错．误．的是 （ ） A．该流程利用了动物细胞融合和动物细胞培养技术 B．①是从免疫小鼠脾脏中提取的多种 B 淋巴细胞 C．②和③所进行的两次筛选过程都不需要用到 ASFV D．该单克隆抗体直接应用于人体可能会引起过敏反应 25．科研人员从供体母牛耳朵上采集细胞，注入到去核的卵母细胞中构建成重构胚，再将发育的胚胎移植到代孕母牛体内，最终获得了克隆牛“垦垦”。下列叙述错误的是（ ） A．进行核移植前，通常需将采集到的卵母细胞在体外培养到 MⅡ期 B．Ca2+载体、乙醇等处理能使耳细胞和去核的卵母细胞发生融合 C．代孕母牛为重构胚发育提供空间和营养，不会影响犊牛的遗传物质 D．克隆牛“垦垦”的遗传物质与供体牛的遗传物质并不完全相同 二、非选择题（共计 50 分） 26．牛和羊的瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。某研究小组欲从瘤胃内筛选出能高效降解尿素的细菌，设计了如下实验。请分析并回答下列问题： 实验步骤： I、取样：从刚宰杀的牛的瘤胃中取样，将样品装入事先灭过菌的锥形瓶中。 Ⅱ、培养基的配制和灭菌： 配制全营养 LB 固体培养基。配方：水、蛋白胨、酵母提取物、NaCl、琼脂（一种凝固剂）。配制尿素固体培养基。配方：水、葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、琼脂。 Ⅲ、制备瘤胃稀释液并接种，如下图 1 所示。 IV、在无氧条件下进行微生物的培养、观察与计数。 (1)全营养LB 固体培养基和尿素固体培养基在营养成分上的主要区别是全营养LB 固体培养基含有多种氮源，尿素固体培养基以 为唯一氮源，尿素固体培养基能够筛选出尿素分解菌的原因是能合成 的微生物（尿素分解菌）能分解尿素作为氮源生长。 (2)该小组采用稀释涂布平板法对瘤胃中分解尿素的细菌进行分离和计数。在无菌条件下，利用该方法进行分离计数时，需要用到图 2 中的实验器材有 。 (3)为了判断尿素固体培养基是否具有选择作用，实验时还需要同时接种全营养 LB 固体培养基，如果同一浓度梯度下，能判定尿素培养基具有选择作用的依据是 。 (4)为了避免混淆，本实验中使用的平板需要在培养皿的 （“皿盖”或“皿底”）做好标记。然后在 （“18~25℃”或“25~30℃”或“30~37℃”）的恒温培养箱中需培养 1-2d， (5)若将最后一个试管中的稀释液分别涂布到 3 个尿素平板上培养，培养后平板上出现的菌落数口图 1所示，则 5mL 瘤胃样品中含有目标活菌数约为 。 27．下图是植物组织培养的过程，试据图回答相关问题： (1)用于植物组织培养的材料叫做外植体，外植体是指 。在植物组织培养过程中，选择幼嫩的器官、组织用于接种的原因是 。 (2)①②分别是 过程，启动①②的关键激素是 ，所以在植物组织培养过程中需要两次 “转接”，一是将愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上，二是长出芽后再转接到诱导生根的培养基上。 (3)在植物组织培养过程中，要进行一系列的消毒、灭菌，且要求无菌操作的目的是 ，且有些杂菌会危害培养物的生长。配制的 MS 培养基通常用 进行湿热灭菌。 (4)植物细胞培养技术是工厂化生产相关代谢产物的一条有效途径，在生产中通常要培养到 阶段。与传统的从植物体内提取相比，工厂化生产细胞产物的突出优点是 （答出 1 点）。除细胞 产物的工厂化生产外，植物细胞工程还有哪些应用？ （答出 2 点） 28．癌症的免疫疗法是指重新激活抗肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫逃逸、某些种类癌细胞表面高表达银蛋白 PSMA，CD28 是 T 细胞表面受体，T 细胞的有效激活依赖于 CD28 在癌细胞与 T 细胞结合部位的聚集。科研人员尝试构建双特异性抗体 PSMA×CD28 的生产流程，如图 1 所示；双特异性抗体 PSMA×CD28 的结构及作用机理，如图 2 所示。 (1)据图 1 分析，制备双特异性抗体 PSMA×CD28 的过程中，用到的动物细胞工程技术主要有 （答出 2 点即可）。 (2)双特异性抗体 PSMA×CD28 制备时，需要将 B 淋巴细胞分别与小鼠的骨髓瘤细胞融合，此过程与植物细胞杂交比特有的诱导方法是 。将第一次筛选获得的杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过 1 个，通过培养让其增殖，然后利用 原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出 细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体的优点有 。体外培养到一定时期的单克隆杂交-杂交瘤细胞因为 等因素而分裂受阻，需进行传代培养。 29．2017 年 11 月～12 月，中科院神经科学研究所研究团队利用体细胞克隆技术克隆出了猕猴“中中”和“华华”，该成果标志着中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代。如图是体细胞克隆猴的技术流程，请据图回答下列问题： (1)图中猕猴胚胎成纤维细胞刚放入培养瓶中会沉降到瓶底部后细胞贴壁，贴壁细胞生长增殖时，还会发生 现象。传代培养时，常利用酶处理，分散成单细胞，再用 法收集，制成 后转入新的培养瓶中。 (2)图中①过程去核方法除了显微操作去核法，还可以选择 法（写出一点），应将卵母细胞培养至 期去核，此时卵母细胞中的“核”是指 。 (3)在体细胞核移植中，非人灵长动物的细胞核移植非常困难，一方面是对非人灵长类动物胚胎操作技术尚不完善，另一方面是 ，导致胚胎发育率低。 (4)科学家发现，猴的体细胞克隆胚胎发育障碍与克隆胚胎基因组上大量组蛋白的甲基化密切相关。由此推测，图 2 中 KDM4dmRNA 翻译产生的酶的作用是 $$ 《2025年5月23日高中生物作业》参考答案 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 D C A B D B A A C B 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 B D B D B B B C D B 题号 21 22 23 24 25 答案 B B D C B 26．(1) 尿素 脲酶 (2)①③④ (3)尿素培养基上的菌落数小于全营养培养基上的菌落数 (4) 皿底 30~37℃ (5) 3.5×1010个 27．(1) 植物组织培养过程中离体培养植物器官、组织或细胞 分裂能力强，分化程度低 (2) 脱分化、再分化 生长素和细胞分裂素 (3) 避免杂菌在培养基上迅速生长而消耗营养 高压蒸汽灭菌锅（法） (4) 愈伤组织 快速高效，而且不受季节、外部环境等条件的限制 植物繁殖的新途径（包括微型繁殖，作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用） 28．(1)动物细胞融合和动物细胞培养 (2) 灭活病毒诱导法 抗原与抗体特异性结合 能分泌所需抗体的杂交瘤 特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点 细胞密度过大、有害代谢产物积累和培养液中营养物质缺乏 29．(1) 接触抑制 离心 细胞悬液 (2) 梯度离心、紫外线短时间照射 MII 纺锤体-染色体复合物 (3)供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态 (4)催化组蛋白去甲基化 1．D 【分析】分析题图：图示是果酒和果醋生产过程中的物质变化情况，其中①是细胞呼吸的第一阶段，发生在细胞质基质中；②是无氧呼吸的第二阶段，为酒精发酵，发生在细胞质基质中；③为有氧呼吸的第二、三阶段，发生在线粒体中；④⑤均为醋酸发酵，发生在细胞质基质中。 【详解】A、参与果酒发酵的微生物是酵母菌，属于真核生物，而参与果醋发酵的微生物是醋酸菌，属于原核生物，A错误； B、过程①为细胞呼吸的第一阶段，发生在细胞质基质中，过程②为无氧呼吸的第二阶段，发生在细胞质基质中，B错误 ； C、过程④是醋酸菌在氧气充足、缺少糖源时，将酒精变成乙醛，再将乙醛变成醋酸，过程⑤是醋酸菌在氧气、糖源充足时，将葡萄糖转变成醋酸，这两个过程都需要氧气，C错误； D、果酒（该过程中不断产生二氧化碳，导致发酵液降低)、果醋（该过程产生的醋酸能使发酵液降低）、发酵液pH均会降低，D正确。 故选D。 2．C 【分析】制作泡菜的实验原理： （1）乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸；（2）利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化；温度过高，食盐用量不足10%、腌制时间过短容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。 【详解】A、老面中留有酵母菌，家庭制作馒头时采用老面发酵，属于传统发酵技术，A正确； B、制作泡菜时盐水质量分数5%～20%，煮沸后要冷却是为了避免高温杀死乳酸菌，同时也能减少杂菌污染，B正确； C、泡菜的制作需要创造无氧环境，有利于乳酸菌繁殖和发酵，馒头的制作中需要创造有氧环境，促进酵母菌的有氧呼吸，C错误； D、豆腐发酵成腐乳的过程中起主要作用的毛霉，毛霉是真核生物，因而其DNA主要存在于细胞核，D正确。 故选C。 3．A 【分析】泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。 【详解】A、泡菜制作中，用清水和食盐配制质量百分比为5%~20%的盐水，A错误； BC、由题意可知，硝酸盐还原相关基因的表达量与大部分杂菌呈正相关，而与主要乳酸菌呈负相关，发酵中期和后期乳酸大量增加，而亚硝酸盐含量逐渐降低，由此说明泡菜发酵中硝酸盐的酶促还原主要由杂菌完成，而乳酸菌可通过产生大量乳酸，使pH下降，导致硝酸盐还原菌的活动受到抑制，部分亚硝酸盐被分解，BC正确； D、发酵后期泡菜液pH下降是抑制乳酸菌生长繁殖的因素之一，D正确。 故选A。 4．B 【分析】培养基营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、由于培养基配方中含有琼脂，琼脂是一种凝固剂，所以该培养基为固体培养基。在倒平板操作前，为防止杂菌污染，需要对培养基进行高压蒸汽灭菌，A正确； B、鉴定分离纯化的菌种为尿素分解菌，根据尿素分解菌产生的脲酶将尿素分解产生的氨与酚红指示剂显红色的原理，所以可在培养基中加入酚红指示剂用于菌种鉴定，B错误； C、接种针等金属用具可以通过灼烧灭菌，酒精灯外焰温度高，灼烧时使用酒精灯的外焰效果更好，能更有效地杀死微生物，C正确； D、尿素分解菌能够将尿素分解为氨，氨呈碱性，会使培养基的pH升高，因此可据此初步确定所需菌种，D正确。 故选B。 5．D 【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 【详解】A、口罩丢弃较多的土壤中，存在能降解一次性口罩细菌的可能性更大，从这里采集样品更有可能筛选到目标细菌，A正确； B、土壤表层可能存在较多杂菌，且受外界因素影响大，铲去表层土后采集的土壤样品能减少杂菌干扰，更有利于筛选出目标细菌，B正确； C、要筛选能高效降解一次性口罩（主要成分是聚丙烯纤维）的细菌，培养基以聚丙烯纤维作为唯一碳源，这样只有能利用聚丙烯纤维作为碳源的细菌才能生长，从而达到筛选目的，C正确； D、鉴别培养阶段应在固体培养基上进行，通过观察菌落特征等进行鉴别，在液体培养基上细菌生长难以形成具有特定特征的菌落，不便于鉴别，D错误。 故选D。 6．B 【分析】无菌技术的主要内容：（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 【详解】①在操作的第一步之前灼烧接种环‌是为了确保接种环上没有残留的微生物，从而避免污染培养物‌；划线结束时灼烧接种环‌是为了杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境或感染操作者‌，①错误； ②加入培养基中的指示剂和染料需要灭菌，否则会染菌，影响微生物的培养，②错误； ③家庭制作葡萄酒将容器和葡萄进行消毒，不需要灭菌，③错误； ④煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢，而灭菌，例如干热灭菌能杀灭环境中一切微生物，包括孢子和芽孢，④错误； ⑤涂布平板时所用的涂布器需70%酒精浸泡后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌，⑤正确； ⑥家庭制作泡菜时需要将容器进行清洗消毒，但不需要刻意灭菌，⑥正确； ⑦纯培养物是指只含一种微生物的培养物，与是否含代谢废物无关，⑦错误。 综上，⑤⑥正确，B正确，ACD错误。 故选B。 7．A 【分析】培养基一般含有水、碳源、氮源、无机盐等。常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。 【详解】A、培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染，A正确； B、植物组织培养时需将流水充分冲洗后的外植体用酒精消毒30s，后立即用无菌水清洗2~3次；再用次氯酸钠溶液处理30min后，立即用无菌水清洗2~3次，B错误； C、每次使用接种环前、后都要进行灼烧灭菌处理，并要注意待接种环冷却后才能使用，C错误； D、培养乳酸菌时，需要在培养基中添加维生素，配制好的培养基需先调节pH后灭菌，D错误。 故选A。 8．A 【分析】平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 【详解】A、由图可知，该平板划线过程中，划线3次，由于接种环前后都需要灭菌，故接种环共需灼烧灭菌4次，A错误； B、第一次划线后，灼烧接种环待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线，以保证第二次划线时的菌种来自第一次划线的末端，重复操作进行第三次划线，B正确； C、图中Ⅰ、Ⅱ区没有出现单菌落，说明细菌数量太多，菌落重叠，而Ⅲ区出现单菌落，所以应该从Ⅲ区挑取单菌落，C正确； D、用接种环在平板上划线时应注意不能将培养基划破，若划破培养基会影响菌落的形成和观察等，D正确。 故选A。 9．C 【分析】微生物常见的接种的方法： （1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 （2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、实验的目的是从土壤中筛选出能高效降解淀粉的微生物，所以甲培养基是含有淀粉的固体培养基，A正确； B、图示采用的接种方法是稀释涂布平板法，该方法既可以分离菌株又可以用于计数，B正确； C、⑤处透明圈最大，说明降解淀粉的能力最强，故为获得高效降解淀粉的微生物，应挑⑤处的菌落接种到丙的培养液中，C错误； D、将锥形瓶丙放在摇床上充分振荡，有利于增加锥形瓶中的氧气含量，也有利于菌株与培养液的充分接触，D正确。 故选C。 10．B 【分析】观察题图可知，步骤①为倒平板，步骤②为蘸取菌液，步骤③为划线接种，步骤④为培养。 【详解】 A、①步骤为倒平板操作，为实现无菌操作，应先调pH再灭菌，A错误； B、步骤②为蘸取菌液，为保证无菌操作，防止杂菌污染，操作前要将接种环灼烧灭菌并冷却，B正确； C、③到④的过程中，观察图④发现培养皿上有5道划线，每次划线操作前都需要进行灼烧灭菌，接种结束后还需要灼烧灭菌1次，由此可知接种环共需要灼烧6次，C错误； D、图示为平板划线法，该接种方法不能用于微生物计数，D错误。 故选B。 11．B 【分析】分离某种以尿素为氮源的细菌实验过程：土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定。 【详解】A、在含哺乳动物排泄物的土壤中有较多能合成脲酶的细菌，因此土样从有哺乳动物尿液的地方取，获得目的菌种的几率很高，A正确； B、取不同稀释倍数的土壤稀释液各0.1mL，分别涂布于牛肉膏蛋白胨固体培养基、尿素固体培养基上，其中牛肉膏蛋白胨固体培养基是对照，用以说明尿素固体培养基是否有选择作用，B错误； C、C组三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1g土壤样本中约有分解尿素的细菌（54+46+50）÷3÷0.1×104=5×106个，C正确； D、在尿素固体培养基上生长的细菌大多数是以尿素为氮源的细菌，还有一些利用空气中氮的微生物也能生长，D正确。 故选C。 12．D 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。 【详解】A、优良菌种不一定是直接从自然界中筛选得到，也可以来自诱变育种或基因工程育种等方式，A正确； B、发酵工程中，发酵罐内的发酵是整个流程的核心阶段，在这个环节中，微生物在合适的条件下大量生长繁殖并产生目标产物，它涉及到对温度、pH、溶解氧等多种条件的精准控制，直接关系到产物的产量和质量，是发酵工程的中心环节，B正确； C、乳酸菌是厌氧菌，发酵过程中要注意隔绝空气，C正确。 D、微生物蛋白质含量高，通过发酵获得的大量微生物菌体，即为单细胞蛋白。D错误。 故选D。 13．B 【分析】谷氨酸棒状杆菌属于好氧型细菌，发酵过程中应进行通气和搅拌，以提高培养液中的溶氧量。如果培养液中溶氧量不足，生成的产物就会是乳酸或琥珀酸。温度会影响酶的活性，控制好温度也会有利于谷氨酸高效持久的大量合成。 【详解】①用单细胞蛋白制成的微生物饲料，其中的单细胞蛋白是微生物菌体，并不是通过发酵工程从微生物细胞中提取获得，①错误； ②谷氨酸棒状杆菌发酵时，需在中性或弱碱性条件下，才能积累谷氨酸，故生产谷氨酸需将pH调至中性或弱碱性，②正确； ③食品添加剂不仅可以增加食品的营养，改善食品的口味、色泽和品质，有时还可以延长保质期，③错误； ④黑曲霉可以产生柠檬酸，生产柠檬酸需要筛选产酸量高的黑曲霉，④正确； ⑤利用发酵工程生产的微生物农药是生物防治的重要手段，⑤错误； ⑥‌青霉素是从青霉菌的培养液中提炼出来的天然抗生素‌，属于微生物发酵产物，可以采用提取、分离和纯化等措施来获得，⑥正确； ⑦发酵工程中的优良菌种可以通过诱变育种和基因工程育种获得，也可以从自然界中筛选出来，⑦错误。 故选B。 14．D 【分析】1、微生物肥料利用了微生物在代谢过程中产生的有机酸、生物活性物质等来增进土壤肥力，改良土壤结构，促进植株生长； 2、微生物含有丰富的蛋白质。以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发酵获得了大量的微生物菌体，即单细胞蛋白，用单细胞蛋白制成的微生物饲料，能使家畜、家禽增重快，产奶或产蛋量显著提高。 【详解】A、用微生物农药来防治病虫害，这属于生物防治。生物防治是利用有益生物或其他生物来抑制或消灭有害生物的方法 ，微生物农药是利用微生物本身或其代谢产物来防治病虫害，并非化学防治（化学防治是利用化学药剂防治病虫害），A错误； B、在青贮饲料中添加乳酸菌等有益微生物，可通过发酵产生乳酸，降低青贮料的 pH 值，抑制有害微生物生长，从而提高饲料品质并保鲜。而酵母菌在青贮饲料中一般不是起保鲜和提高品质的主要作用，B错误; C、单细胞蛋白是以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发酵获得大量的微生物菌体，这些微生物菌体含有丰富蛋白质，单细胞蛋白不是单纯发酵获得的蛋白质，而是富含蛋白质的微生物菌体，C错误； D、有些微生物肥料中的微生物，如一些芽孢杆菌，在促进植物生长的同时，还能分泌抗菌物质抑制病原菌生长，从而对病虫害有一定防治作用，所以有些微生物肥料也具有一定的微生物农药的作用，D正确。 故选D。 15．B 【分析】分析图示可知，①过程为原生质体融合形成杂种细胞，②过程为植物组织培养过程中的脱分化过程，③过程为再分化过程。 【详解】A、制备原生质体时，植物细胞要置于等渗溶液或略高渗溶液中，防止制备的原生质体吸水破裂，A错误； B、据图分析可知，图中①过程是利用PEG（聚乙二醇）或电融合等手段促使不同来源的原生质体融合，随后新生细胞壁，形成杂种细胞，B正确； C、②过程不需要光照条件，③过程需要光照条件，C错误； D、植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，D错误。 故选B。 16．B 【分析】1、杂交育种的原理是基因重组；其优点是可以将不同个体的优良性状集中于同一个体上，且方法简单，可预见强。 2、诱变育种的原理是基因突变；方法是用物理因素（如X射线、γ射线、紫外线、激光等）或化学因素（如亚硝酸、硫酸二乙酯等）来处理生物，使其在细胞分裂间期DNA复制时发生差错，从而引起基因突变；其优点是可提高变异频率，出现新性状，大幅度改良某些性状，加速育种进程。 3、单倍体育种的原理是染色体变异；方法是用花药离体培养获得单倍体植株，再人工诱导染色体数目加倍；优点是纯合体自交后代不发生性状分离，因而能明显缩短育种年限。 4、多倍体育种的原理是染色体变异；方法是利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗；优点是茎秆粗壮，叶片、果实和种子都比较大，糖类和蛋白质等营养物质的含量都有所增加。 【详解】A、在高等植物中，①过程形成的雄配子（花粉粒）数量远远多于雌配子（卵细胞）数量，A错误； B、②过程是由花粉粒培养成单倍体幼苗，这属于植物组织培养技术。植物组织培养过程包括脱分化形成愈伤组织，以及再分化形成根、芽等器官进而发育成幼苗。所以②过程中发生了脱分化和再分化，B正确； C、可用秋水仙素处理单倍体幼苗后选出基因型为AAbb的植株，C错误； D、该二倍体植物(2n = 24)，个体 Ⅰ 是由单倍体幼苗经秋水仙素处理后得到的，其体细胞中染色体数目恢复到正常二倍体水平，即 24 条；个体 Ⅱ 是由受精卵发育而来的，也是二倍体，体细胞中染色体数目同样为 24 条，D错误。 故选B。 17．B 【分析】分析图解可知，该育种方式中综合运用了单倍体育种和诱变育种，其中γ射线照射是为了诱导基因发生突变，而除草剂是起了选择的作用。 【详解】A、过程①是花药离体培养，目的是获得单倍体幼苗，利用了植物细胞具有全能性的原理，A正确； B、过程②用γ射线照射单倍体幼苗，目的是提高幼苗的突变率，基因突变是不定向的，B错误； C、用③除草剂喷洒单倍体幼苗，目的是要筛选出抗除草剂的植株，该过程中除草剂起选择作用，C正确； D、过程⑤可以用秋水仙素处理使其染色体数目加倍，形成二倍体，从而培育出抗除草剂的水稻（2N=24），D正确。 故选B。 18．B 【分析】动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境。②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度：适宜温度。④气体环境：95%空气+5%CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 【详解】A、 MSC培养过程中可加入适量抗生素以防止杂菌污染，血清能为细胞培养提供一些未知的营养，A错误； B、培养MSC细胞，需要为其创造95%空气和5%CO2的气体环境，B错误； C、细胞接触抑制时可以用胶原蛋白酶或者胰蛋白酶处理，C正确； D、 MSC是一种成体干细胞，具有组织特异性，在体内不能分化形成诱导多能干细胞，诱导多能干细胞一般在体外诱导而来，D错误。 故选B。 19．D 【分析】动物细胞培养需要满足以下条件 （1）充足的营养供给--微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。 （2）适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。 （3）无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 （4）气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 【详解】A、幼龄动物的肌肉干细胞分裂增殖能力更强，因此培养时增殖速度更快，A正确； B、动物细胞培养液中需添加血清等天然成分，以提供必需的营养物质和生长因子，B正确。 C、植物细胞培养在人工控制条件下进行，不受季节、地域等因素影响，C正确； D、传代培养时，贴壁细胞需用胰蛋白酶处理以脱离培养皿，但悬浮培养的细胞可直接离心收集，无需胰蛋白酶处理，D错误；故选D。 20．B 【分析】胚胎干细胞（简称ES细胞）存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内的任何一种类型的 细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能；胚胎干细胞必须从胚胎中获取，这涉及伦理问题，因而限制了它在医学上的应用。科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞（简称 iPS细胞），并用iPS细胞治疗了小鼠的镰状细胞贫血。现 在，用iPS细胞治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等领域的 研究也取得了新进展。科学家已尝试采用多种方 法来制备iPS细胞，包括借助载体将特定基因导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞中或者用小 分子化合物等来诱导形成iPS细 胞。iPS细胞最初是由成纤维细 胞转化而来的，后来发现已分化 的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。 【详解】A、iPS细胞是通过对成熟细胞“重新编程”得到的，并不存在于早期胚胎、外周血和脐带血中；且通常其分化程度低于造血干细胞，A错误； B、神经干细胞和iPS细胞具有分化和修复等特性，在治疗阿尔茨海默病等神经系统疾病方面有重要价值，因为它们能够分化成神经细胞等相关细胞，对受损的神经组织进行修复和替代，B正确； C、体外培养iPS细胞的培养基中需要添加糖（提供能量）、血清、氨基酸（合成蛋白质等物质的原料）、维生素等营养物质，不需要添加激素等成分，C错误； D、患者未发生免疫排斥反应是因为移植细胞与其自身细胞的HLA相同，D错误。 故选B。 21．B 【分析】…分析图解：图示过程为体细胞克隆过程，取乙牛体细胞，对处于减数分裂Ⅱ中期的卵母细胞去核，然后进行细胞核移植；融合后的细胞激活后培养到早期胚胎，再进行胚胎移植，最终得到克隆牛。 【详解】A、后代丁的细胞核的遗传物质来自甲，细胞质的遗传物质来自乙牛，则丁的遗传性状由甲和乙的遗传物质共同决定，A错误； B、动物细胞培养中需要提供95%空气（保证细胞的有氧呼吸）和5%CO2（维持培养液的pH）的混合气体，B正确； C、过程②常使用显微操作去核法对卵母细胞进行处理，C错误； D、过程③将激活后的重组细胞培养至囊胚或桑椹胚后移植，D错误。 故选B。 22．B 【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。 【详解】A、青霉菌是真菌，其细胞壁主要成分是几丁质等；透明颤菌是细菌，其细胞壁主要成分是肽聚糖。 由于二者细胞壁成分不同，去除细胞壁时所用的酶不一样，不是用相同的酶去除细胞壁获得原生质体，A错误； B、从图1可知，前体物质在酶A作用下生成青霉素，在酶B作用下生成头孢霉素。 若敲除青霉菌中控制酶B合成的基因，那么前体物质就不会在酶B作用下生成头孢霉素，只会在酶A作用下生成青霉素，B正确； C、③过程是原生质体融合，没有细胞壁， 在略高渗溶液中细胞不会吸水引起涨破。采用PEG融合法诱导原生质体融合是常见的技术手段，能够促使不同的原生质体融合，C正确； D、甲硫氨酸营养缺陷型青霉菌不能在缺乏甲硫氨酸的培养基上生长，精氨酸营养缺陷型透明颤菌不能在缺乏精氨酸的培养基上生长。 只有融合细胞含有两者的遗传物质，能在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的基本培养基上生长，所以可利用缺乏甲硫氨酸和精氨酸的基本培养基筛选出融合细胞，D正确。 故选B。 23．D 【分析】植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。其具体流程为：接种外植体→诱导愈伤组织→诱导生芽→诱导生根→移栽成活。 【详解】A、在进行植物组织培养时，需要在培养基中添加适当比例的生长素和细胞分裂素诱导细胞的脱分化和再分化，因此①和②都会受到外源激素的调控，A错误； B、①表示脱分化，实现①过程的条件是外植体细胞的基因发生了选择性表达，而不是基因突变，B错误； C、分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，故将分生组织（如根尖、茎尖）进行离体培养可以获得脱毒植株，并非成熟的根和茎，并且脱毒苗也不一定具有更强的抗病毒能力，C错误； D、植物代谢会产生一些一般认为不是植物基本的生命活动所必需的产物-次生代谢物，由图可知辣椒素是次生代谢物，可通过细胞培养实现工厂化生产，D正确。 故选D。 24．C 【分析】单克隆抗体制备利用的就是动物细胞融合技术，在该过程中需要进行两次筛选，第一次筛选需要用到选择培养基，其目的是筛选获得杂交瘤细胞，第二次筛选需要进行单克隆培养和抗体检测，其目的是获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 【详解】A、制备单克隆抗体需要将已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，制成杂交瘤细胞，然后进行细胞培养使之产生单克隆抗体，该过程中需要用到动物细胞融合和动物细胞培养技术，A正确； B、由图可知，在①之前向小鼠体内注射VEGF（作抗原），引发小鼠特异性免疫，获得已免疫的B淋巴细胞，由于在此过程中，小鼠还可能接受其他抗原物质刺激，因此从其脾脏中提取的B淋巴细胞有多种，B正确； C、②代表利用选择培养基进行的第一次筛选，该过程不需要用到VEGF；③代表第二次筛选，即克隆化培养和抗体检测，其中抗体检测需要用到VEGF与克隆化培养的杂交瘤细胞产生的抗体进行抗原-抗体杂交，C错误； D、由图可知，该单克隆抗体是利用小鼠制备的，作为生物制剂应用于人体，因为其属于异源蛋白可引起过敏反应甚至危及生命，D正确。 故选C。 25．B 【分析】动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新的胚胎，继而发育成动物个体的技术。用核移植方法得到的动物称为克隆动物。 【详解】A、进行核移植前，通常需将采集到的卵母细胞在体外培养到MⅡ期，A正确； B、Ca2+载体、乙醇等处理的目的是激活重构胚，要使耳细胞和去核的卵母细胞发生融合，可以使用电融合法，B错误； C、代孕母牛为重构胚发育提供空间和营养，没有为犊牛提供遗传物质，不会影响犊牛的遗传物质，C正确； D、克隆牛“垦垦”的遗传物质与供体牛的遗传物质并不完全相同，原因是“垦垦”的细胞核遗传物质来自供体牛，“垦垦”的细胞质遗传物质来自供体牛和卵母细胞，D正确。 故选B。 26．(1) 尿素 脲酶 (2)①③④ (3)尿素培养基上的菌落数小于全营养培养基上的菌落数 (4) 皿底 30~37℃ 防止培养时间不足导致菌落遗漏 (5) 3.5×1010个 【分析】1、筛选尿素分解菌要以尿素为唯一氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素而缺乏氮源导致生长发育受抑制，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以用尿素固体培养基能够选择出分解尿素的微生物。 2、稀释涂布平板法：稀释涂布平板法除了可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测样品大约含有多少活菌。 【详解】（1）尿素固体培养基的配方中仅以尿素作为唯一氮源，尿素固体培养基能够筛选出尿素分解菌的原因： 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用尿素中的氮源来生长繁殖。 （2）据图可知，接种后平板上培养出了菌落，且菌落可用于计数，故接种方法为稀释涂布平板法。稀释涂布平板法操作时需要在酒精灯火焰旁边操作，故需要用到①酒精灯（③培养皿）、④涂布器。 （3）选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长，故同一浓度梯度下，尿素培养基上的菌落数小于全营养培养基上的菌落数，则说明尿素培养基具有选择作用。 （4）本实验使用的平板较多，为了避免混淆，最好使用前在培养皿上做好标记，由于培养基倒置培养，所以皿底上标记号组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。为了防止培养时间不足导致菌落遗漏，在恒温培养箱中需培养1-2d，每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果。一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。由于分离的菌是从牛的瘤胃中取样的，故培养箱的温度设定在30—37℃为宜 （5）5号试管的稀释倍数为107，5mL瘤胃样品中含有目标活菌数=（68+75+67）÷3÷0.1×107×5=3.5×1010（个）。 27．(1) 植物组织培养过程中离体培养植物器官、组织或细胞 分裂能力强，分化程度低 (2) 脱分化、再分化 生长素和细胞分裂素 (3) 避免杂菌在培养基上迅速生长而消耗营养 高压蒸汽灭菌锅（法） (4) 愈伤组织 快速高效，而且不受季节、外部环境等条件的限制 植物繁殖的新途径（包括微型繁殖，作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用） 【分析】图中①表示脱分化形成愈伤组织，②表示再分化形成试管苗。 【详解】（1）离体的植物器官、组织、细胞或原生质体可作为外植体进行植物组织培养。由于幼嫩的器官或组织分裂能力强，分化程度低，植物组织培养过程中一般选用其进行培养。 （2）图中①表示脱分化形成愈伤组织，②表示再分化形成试管苗。培养基中适宜浓度的生长素和细胞分裂素是启动脱分化或再分化的关键激素。 （3）消毒、灭菌的目的是避免杂菌滋生而影响培养物的生长，培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌，灭菌工具为高压蒸汽灭菌锅。 （4）试管苗一般需经过练苗才能移栽，即将培养物连带培养皿（瓶）移到一般培养室（为经消毒灭菌）进行培养，使试管苗适应自然环境，以保证移栽存活率。 （5）只需要代谢产物时，可将培养物培养到愈伤组织阶段，从愈伤组织中进行代谢产物的提取即可，该技术具有快速高效，而且不受季节、外部环境等条件的限制等优点。植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（包括微型繁殖，作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。 28．(1)动物细胞融合和动物细胞培养 (2) 灭活病毒诱导法 抗原与抗体特异性结合 能分泌所需抗体的杂交瘤 特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点 细胞密度过大、有害代谢产物积累和培养液中营养物质缺乏 【分析】单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A、B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原-抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。 【详解】（1）制备双特异性单克隆抗体的过程中用到的动物细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养技术。 （2）双特异性抗体PSMA×CD28制备时，PSMA、CD28相当于抗原，需要先将PSMA、CD28分别注射到小鼠体内刺激小鼠产生B淋巴细胞，再分离出B淋巴细胞。B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合的方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法（动物细胞融合特有的诱导方法）等。将第一次筛选获得的杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，然后利用抗原与抗体特异性结合的原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。单克隆抗体的优点有特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点。体外培养到一定时期的单克隆杂交-杂交瘤细胞因为细胞密度过大、有害代谢产物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻，需进行传代培养。 29．(1) 接触抑制 离心 细胞悬液 (2) 梯度离心、紫外线短时间照射 MII 纺锤体-染色体复合物 (3)供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态 (4)催化组蛋白去甲基化 【分析】核移植技术指的是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体；用核移植的方法得到的动物称为克隆动物，原理是动物细胞核的全能性；动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。 【详解】（1）贴壁细胞生长增殖时，还会发生接触抑制现象，即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。在进行传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集；贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集。之后，制成细胞悬液后转入新的培养瓶中。 （2）目前使用的去核方法除了显微操作去核法，还有梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等；核移植过程中应将卵母细胞培养至MII期；在MII期，卵母细胞中的“核”实际上是指纺锤体-染色体复合物，因为核膜已经消失。 （3）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植，由于动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难，因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。 （4）由于胚胎发育障碍与克隆胚胎基因组上大量组蛋白的甲基化密切相关，为了使胚胎顺利发育，需要对组蛋白进行去甲基化操作，因此可推知图中KDM4dmRNA翻译产生的酶的作用是催化组蛋白去甲基化的。 学科网（北京）股份有限公司 $$