精品解析：山东枣庄市薛城区2025-2026学年高二下学期期中生物试题

试卷类型：A 高二生物 2026.4 一、单项选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 某同学利用蓝莓果实制作果醋，图示其操作的简易流程。下列相关叙述正确的是（　　） A. 果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同 B. 过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率 C. 过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌 D. 过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气 2. 微生物相关实验中需要进行灭菌或消毒操作。实验操作者的双手、培养基、接种环、超净工作台、牛奶，分别采用的灭菌或消毒方法依次是（　　） ①化学药物消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法 A. ④⑤②③⑥ B. ⑥⑤②④⑥ C. ①⑤②③⑥ D. ①⑤②④⑥ 3. 在分离、纯化酵母菌实验中进行的两种接种方法的培养结果如图甲、乙所示。下列叙述错误的是（　　） A. 甲需要使用接种环，乙需要使用涂布器 B. 甲结果不能用于计数，乙结果可以用于计数 C. 甲接种后需要将培养皿倒置，乙不需要 D. 甲、乙接种目的都是获得单个细胞形成的菌落 4. 猕猴桃醋生产的基本工艺流程如下，其中①②③表示发酵的三个环节，糖化是将淀粉转化为葡萄糖的过程。 下列叙述错误的是（　　） A. 通过蒸煮可以杀灭猕猴桃自带的绝大多数微生物 B. 麸曲中曲霉的主要作用是对糖类进行氧化分解 C. 环节③需要通入无菌空气 D. ①②③都需要控制温度、pH 等条件 5. 青霉素可采取液体发酵方式以青霉菌（一种需氧、多细胞丝状真菌）为生产菌株进行生产，过程中操作不当的是（ ） A. 用诱变或基因工程等途径得到的菌种进行接种 B. 监控pH、温度、溶解氧等参数 C. 用血细胞计数板实时监测活菌数量 D. 用大肠杆菌为指示菌监测青霉素产量 6. 下图是“白菜-甘蓝”杂种植株的培育过程。下列叙述正确的是（　　） A. 去除细胞壁产生原生质体需要纤维素酶和胶原蛋白酶 B. 促进原生质体融合可以使用灭活的病毒 C. 杂种细胞再生出细胞壁是融合成功的标志 D. 愈伤组织发育成杂种植株需要经过脱分化和再分化 7. 下列关于干细胞的叙述，正确的是（　　） A. 已分化的T细胞能被诱导为iPS细胞 B. 造血干细胞可以分化为各种细胞 C. 干细胞是从胚胎中分离提取的细胞 D. 向人体移植iPS细胞不会产生免疫排斥反应 8. 利用犬肾细胞MDCK扩增流感病毒，生产流感疫苗，具有标准化、产量高等优点。但MDCK细胞贴壁生长的特性不利于生产规模的扩大，严重制约疫苗的生产效率。研究人员通过筛选，成功获得一种无成瘤性的（多代培养不会癌变）、可悬浮培养的MDCK细胞——XF06.下列叙述错误的是（　　） A. XF06悬浮培养可提高细胞密度，进而提升生产效率 B. 细胞贴壁生长特性的改变是由于流感病毒感染所导致 C. 可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒 D. 采用无成瘤性细胞生产疫苗，是为了避免疫苗中有致瘤DNA的污染 9. 下列有关哺乳动物早期胚胎发育的叙述，正确的是（　　） A. 卵裂期细胞数量和胚胎的总体积都在增加 B. 桑葚胚阶段细胞开始分化，细胞失去全能性 C. 囊胚的内细胞团将来发育成胎膜和胎盘 D. 囊胚经过孵化阶段后，将发育形成原肠胚 10. 下列关于胚胎移植的叙述，错误的是（　　） A. “受体”的性别不受限制，但是需要进行同期发情处理 B. 可以通过转基因、核移植或体外受精等方式获得“供体”的胚胎 C. 胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力 D. 胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 11. DNA分子中腺嘌呤可能会被甲基化酶修饰。不同的限制酶对识别序列中腺嘌呤的甲基化前后的切割的影响如表所示。下列叙述正确的是（　　） 限制酶 识别序列 腺嘌呤甲基化前 腺嘌呤甲基化后 TaqⅠ 5'-T↓CGA-3' 切割 不切割 DpnⅠ 5'-GA↓TC-3' 不切割 切割 ClaⅠ 5'-AT↓CGAT-3' 切割 不切割 BamHⅠ 5'-G↓GATCC-3' 切割 切割 A. DNA腺嘌呤的甲基化不会影响基因的表达 B. ClaⅠ所识别的序列，都能被TaqⅠ识别并切割 C. 含有5'-G↓GATCC-3'序列的DNA片段中各碱基是否甲基化不影响BamHⅠ对其切割 D. 用不同限制酶切同一DNA片段，甲基化前后可被切割的位点数可能相同 12. 载体是基因进入受体细胞的“分子运输车”，下列叙述错误的是（　　） A. 可作为载体的质粒只能是来自原核细胞的拟核外的环状DNA B. 载体上的限制酶切割位点用来插入外源DNA片段 C. 噬菌体和动植物病毒都可以作为载体，但是受体细胞有差异 D. 载体上的复制原点能够结合解旋酶和DNA聚合酶 13. 科研人员构建的某重组质粒如图所示，甲、乙、丙表示3条引物及其在重组质粒中的相应位置，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因。下列叙述错误的是（　　） A. 构建成功的重组质粒还应该包含启动子、终止子和复制原点等组件 B. 使用引物乙、丙进行PCR扩增，能够检测目的基因是否正向连接 C. 若受体菌在含有氨苄青霉素的培养基中正常生长，可确定目的基因已转化成功 D. 若目的基因未导入，使用引物甲、丙进行PCR扩增，也会有扩增产物 14. 下图是某兴趣小组PCR产物琼脂糖凝胶电泳的结果。下列分析错误的是（　　） A. 凝胶加样孔应在A端，且A端应连接电源的负极 B. 1号和2号泳道的DNA片段具有相同的碱基排列顺序 C. 凝胶中的DNA分子被染色后可在波长300nm的紫外灯下被检测出来 D. 制备凝胶时，核酸染料需要在琼脂糖熔化冷却后、倒胶凝固前加入 15. 下列关于生物技术安全和伦理问题的叙述，错误的是（　　） A. 反对设计完美婴儿 B. 反对人的生殖性克隆 C. 禁止生物武器的使用 D. 禁止转基因技术的应用 二、不定项选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有两个或两个以上选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全得1分，有选错的得0分。 16. 微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（ ） A. 用平板划线法能测定X菌组中的活菌数 B. Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高 C. 混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种 D. 能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 17. 科研人员研究某种红豆杉的细胞悬浮培养和原生质体培养方式对合成紫杉醇的影响，甲组为细胞悬浮培养，乙组为原生质体的液体静置培养，丙组为琼脂糖包埋后的原生质体悬浮培养。三组的培养基相同，其中乙、丙两组另加细胞壁合成抑制剂等，结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 比较甲和丙，丙组的培养方式有利于原生质体的增殖，从而提高紫杉醇总产量 B. 比较乙和丙，丙组的培养方式有利于应用到发酵罐进行紫杉醇的生产 C. 丙组中琼脂糖凝胶的作用是持续为原生质体供应碳源 D. 上述实验表明细胞壁完整有助于紫杉醇的合成与积累 18. 为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙(种群数量多)进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是（　　） A. 克隆动物的核基因组来源于甲、乙 B. 体外受精需用获能的精子与MI期的卵母细胞受精 C. 滋养层细胞可影响内细胞团的发育 D. 滋养层可用于做DNA分子鉴定胚胎性别 19. 下面有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（　　） A. 新鲜的洋葱、香蕉、菠菜、猪血、猪肝都是理想的实验材料 B. 洋葱研磨液用纱布过滤后可以经离心后取上清液 C. 向上清液中加入预冷的体积分数为95%的酒精是为了析出DNA D. 向收集的丝状物中直接加入二苯胺试剂，溶液会呈现出蓝色 20. ddNTP(N代表A、T、C、G)表示四种双脱氧核苷三磷酸，其组成结构中脱氧核糖的3’位无羟基，无法形成磷酸二酯键，当以该物质作为DNA复制的原料时，会导致 DNA 链延伸终止。科学家可依据此原理进行DNA的测序。DNA测序时，先将待测单链DNA模板、引物、有关酶、4种脱氧核苷三磷酸(dNTP，N代表A、T、C、G)均加入4个试管中，再分别加入ddNTP。ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸，从而形成不同长度的DNA片段，分离4支试管中所有DNA片段，分泳道进行电泳，结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. ddNTP不能形成氢键，dNTP可以形成氢键 B. 该PCR反应体系中需要加入2种引物、1种酶 C. 电泳过程中，DNA片段越小迁移速率越快 D. 待测模板链的碱基序列为5’-CTATGCATA-3’ 三、非选择题：本题共5题，共55分。 21. 自生圆褐固氮菌是异养需氧型微生物，能够利用大气中的N2，并将其还原为氨。某生物兴趣小组进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力的鉴定研究。 （1）想获得圆褐固氮菌的菌种最好选择___________(填“表层”或“深层”)的土壤。自生固氮菌利用氮元素可合成体内的化合物有___________(写出2种)。 （2）某同学将获得的某固氮菌液进行梯度稀释，吸取104稀释倍数的菌液各0.1mL，分别涂布在三个平板上，一段时间后形成的菌落数依次为10、15、20，该同学以平均菌落数15进行计数，求得原菌液固氮菌的浓度为___________个/mL。老师认为该同学的计数方法不正确，原因是___________。 （3）为了进一步筛选高效固氮菌，不同小组将获得初步筛选得到的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，利用细菌计数板对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如下： 甲菌 乙菌 丙菌 丁菌 菌量(个/mL) 6.1×105 1.5×105 7.4×105 2.0×105 含氮量(K) 3.32 5.34 4.38 5.36 利用上述方法对固氮菌进行计数时，统计的结果往往比活菌的实际数目偏___________(填“大”“小”或“无法确定”)。依据上表中的结果分析，___________菌的固氮效率最高。 22. 我国科学家经过多年反复试验，可以在10s之内对卵母细胞进行操作，在15s之内将体细胞核注入去核的卵母细胞里，成功培育体细胞核移植食蟹猴，流程如图所示，①～⑥表示相关过程，回答下列问题： （1）科学家可以利用胚胎工程培育试管猴和克隆猴，前者的生殖方式属于___________(填“有性”或“无性”)生殖。体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是___________。 （2）过程①通常置于含有___________的混合气体的CO2培养箱中进行培养，期间需要定期更换培养液，目的是___________。 （3）激活重构胚分化潜能调控基因A的表达，是克隆成功的关键。为了激活基因A的表达，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理重构胚。据此分析，组蛋白脱乙酰酶可以___________(填“促进”或“抑制”)基因A的表达。向重构胚注入Kdm4d的mRNA，其发挥作用的机理是___________。 23. 肿瘤细胞表面有受体EGFR，CD3是T细胞表面的标志性抗原。科研人员制备双特异性抗体EGFR/CD3，可招募T细胞定向移至肿瘤细胞，增强其对肿瘤细胞的杀伤力，过程如图1所示。 （1）细胞A表示___________。细胞B与细胞A融合前，___________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞B数量。若步骤②可以使用化学试剂___________促进细胞融合。 （2）核苷酸合成有两个途径，如图2所示。骨髓瘤细胞只能利用全合成途径进行无限增殖，B淋巴细胞两种途径都能进行。 现利用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”对图1中的细胞进行筛选，能够在“HAT 培养基”上正常增殖的细胞是___________。图1中能够分泌双特异性抗体的细胞是经步骤___________ (填序号)筛选获得的细胞。双特异性抗体治疗肿瘤的效果往往优于EGFR抗体和CD3抗体的联合使用，原因是___________。 24. 限制酶被称为基因工程的“分子手术刀”。下图为三种限制酶及其识别的序列，回答下列问题： （1）DNA分子经限制酶切割可产生两种形式的DNA片段末端，经图中限制酶切割后产生平末端的限制酶是___________。经限制酶BamHⅠ切割后产生的黏性末端序列是5’___________3’。 （2）某质粒的两个位点上分别含有1个限制酶BamHⅠ和1个限制酶Sau3AⅠ的酶切位点，若用Sau3AⅠ对该质粒进行完全酶切，会产生___________个DNA片段，将产生的片段重新连接成新的质粒，则该质粒___________(填“能”、“不能”或“不一定能”)被限制酶BamHⅠ重新切开。 （3）限制酶BsmBⅠ具有偏移剪切特性(切割位点在识别序列之外)，利用BsmBⅠ可以实现多DNA片段的无缝连接。下图表示利用BsmBⅠ将M基因和N基因连接形成融合基因的过程，F1、F2、R1、R2表示引物。 若用BsmBⅠ切割DNA片段，理论上可产生的黏性末端最多有___________种。若M基因两端的碱基序列为5’-CATCGGACT……TTGTACTCG-3’，已知引物R1的碱基序列为5’-CGTCTCNcgagTACAA…-3’(小写字母表示接头序列)，则引物F1的序列可以设计为5’___________3’(写出所有已知序列)。 25. 大豆中转录调控因子Y蛋白可以和某些基因启动子序列结合，促进其表达。研究人员通过逆转录PCR获得Y基因并与改造后的Ti质粒上的绿色荧光蛋白基因(GFP)进行拼接获得融合基因。成功表达的Y—GFP融合蛋白可用于Y蛋白调控机理的研究，回答下列问题： （1）图中的Y基因中___________(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子序列。研究中首先要对Y基因进行PCR扩增。PCR反应要在一定的缓冲液中进行，缓冲液中一般需要加入Mg2+，其作用是___________。 （2）为将扩增后的产物定向插入载体，切割Ti质粒应该选择的限制酶是___________。为使Y基因正确接入载体并成功表达出Y—GFP融合蛋白，PCR扩增Y基因时应通过设计引物去除___________对应的序列。为了使目的基因在酶切后能够与载体正确连接，需要在引物的5’端添加限制酶___________的识别序列。 （3）将初步构建的Y—GFP基因表达载体导入大豆细胞后，在加入___________的培养基中筛选得到三个不同细胞系，对这三个细胞系的总蛋白进行抗体检测，电泳结果如图2所示。其中细胞系___________最可能成功表达出Y—GFP融合蛋白。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 试卷类型：A 高二生物 2026.4 一、单项选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 某同学利用蓝莓果实制作果醋，图示其操作的简易流程。下列相关叙述正确的是（　　） A. 果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同 B. 过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率 C. 过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌 D. 过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气 【答案】B 【解析】 【详解】A、果酒发酵的菌种是酵母菌（真核生物，有细胞核、多种细胞器），果醋发酵的菌种是醋酸菌（原核生物，无成形细胞核、只有核糖体一种细胞器），二者细胞结构不同， A错误；   B、过程①是从果实制取果汁，蓝莓果实的细胞壁中含有果胶，添加适量果胶酶可以分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨汁更容易，从而提高出汁率， B正确；   C、过程②是果酒发酵，原理是酵母菌的无氧呼吸产生酒精，发酵过程需要无氧环境，不能多次开盖搅拌（否则会进入氧气，抑制酒精发酵，还会污染杂菌），正确操作是定期拧松瓶盖放气（释放CO₂），而非开盖， C错误；   D、过程③是果醋发酵，醋酸菌是好氧菌，将酒精转化为醋酸的过程不产生CO₂，不会出现大量气泡，不需要放气， D错误。 2. 微生物相关实验中需要进行灭菌或消毒操作。实验操作者的双手、培养基、接种环、超净工作台、牛奶，分别采用的灭菌或消毒方法依次是（　　） ①化学药物消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法 A. ④⑤②③⑥ B. ⑥⑤②④⑥ C. ①⑤②③⑥ D. ①⑤②④⑥ 【答案】D 【解析】 【详解】实验操作者的双手用75%酒精等化学药物擦拭消毒，对应①； 培养基需用高压蒸汽灭菌，既能彻底灭菌也不会破坏培养基成分，对应⑤； 接种环为金属材质，用灼烧灭菌可快速彻底灭菌，对应②； 超净工作台使用前用紫外线照射消毒，杀灭台面及空气内的微生物，对应④； 牛奶用巴氏消毒法，可在杀灭致病菌的同时保留牛奶的营养和风味，对应⑥； 正确顺序为①⑤②④⑥。ABC不符合题意，D符合题意。 3. 在分离、纯化酵母菌实验中进行的两种接种方法的培养结果如图甲、乙所示。下列叙述错误的是（　　） A. 甲需要使用接种环，乙需要使用涂布器 B. 甲结果不能用于计数，乙结果可以用于计数 C. 甲接种后需要将培养皿倒置，乙不需要 D. 甲、乙接种目的都是获得单个细胞形成的菌落 【答案】C 【解析】 【详解】A、甲是平板划线法，该方法需要使用接种环进行划线操作；乙是稀释涂布平板法，需要使用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，A正确； B、平板划线法（甲）得到的菌落是逐渐划线稀释得到的，菌落分布不均匀，无法准确计数；稀释涂布平板法（乙）的菌落分散均匀，可以通过统计菌落数来估算活菌数量，B正确； C、无论是平板划线法还是稀释涂布平板法，接种后都需要将培养皿倒置培养。倒置培养一方面可以防止培养基表面的水分过快蒸发，另一方面可以避免冷凝水滴落到培养基上造成污染，C错误； D、平板划线法和稀释涂布平板法的接种目的都是为了将聚集的菌种分散开，最终获得由单个细胞繁殖形成的纯种菌落，D正确。 4. 猕猴桃醋生产的基本工艺流程如下，其中①②③表示发酵的三个环节，糖化是将淀粉转化为葡萄糖的过程。 下列叙述错误的是（　　） A. 通过蒸煮可以杀灭猕猴桃自带的绝大多数微生物 B. 麸曲中曲霉的主要作用是对糖类进行氧化分解 C. 环节③需要通入无菌空气 D. ①②③都需要控制温度、pH 等条件 【答案】B 【解析】 【详解】A、蒸煮过程中高温可以破坏微生物的细胞结构等，从而杀灭猕猴桃自带的绝大多数微生物，A正确； B、麸曲中的曲霉主要作用是将淀粉等多糖分解为葡萄糖等单糖，而不是对糖类进行氧化分解，B错误； C、环节③是醋酸发酵，醋酸菌是好氧菌，所以需要通入无菌空气，C正确； D、①糖化过程、②酒精发酵、③醋酸发酵都需要适宜的温度和pH等条件来保证微生物的正常生长和代谢，D正确。 故选B。 5. 青霉素可采取液体发酵方式以青霉菌（一种需氧、多细胞丝状真菌）为生产菌株进行生产，过程中操作不当的是（ ） A. 用诱变或基因工程等途径得到的菌种进行接种 B. 监控pH、温度、溶解氧等参数 C. 用血细胞计数板实时监测活菌数量 D. 用大肠杆菌为指示菌监测青霉素产量 【答案】C 【解析】 【详解】A、诱变或基因工程等途径可改造青霉菌菌株，获得高产等优良菌种，用于接种发酵生产青霉素，操作恰当，A正确； B、发酵过程中，pH、温度、溶解氧等参数会影响青霉菌的生长和代谢，监控这些参数是必要的，操作恰当，B正确； C、血细胞计数板无法区分死菌与活菌，且青霉菌为多细胞丝状结构，难以分散计数，实时监测活菌数不准确，操作不当，C错误； D、大肠杆菌对青霉素敏感，可用大肠杆菌为指示菌，通过观察大肠杆菌的生长情况来监测青霉素产量，操作恰当，D正确。 故选C。 6. 下图是“白菜-甘蓝”杂种植株的培育过程。下列叙述正确的是（　　） A. 去除细胞壁产生原生质体需要纤维素酶和胶原蛋白酶 B. 促进原生质体融合可以使用灭活的病毒 C. 杂种细胞再生出细胞壁是融合成功的标志 D. 愈伤组织发育成杂种植株需要经过脱分化和再分化 【答案】C 【解析】 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，去除细胞壁需要用纤维素酶和果胶酶，而胶原蛋白酶是用于动物细胞培养时分解细胞间质的，不能用于植物细胞。A错误； B、灭活的病毒是动物细胞融合常用的诱导方法，植物原生质体融合常用物理法（电融合、离心等）或化学法（PEG聚乙二醇），不能用灭活的病毒。B错误； C、杂种细胞成功再生出细胞壁，是植物原生质体融合完成的标志，C正确； D、愈伤组织发育成杂种植株的过程是再分化，脱分化是已经分化的细胞形成愈伤组织的过程，愈伤组织已经是脱分化的产物，不需要再脱分化。D错误。 7. 下列关于干细胞的叙述，正确的是（　　） A. 已分化的T细胞能被诱导为iPS细胞 B. 造血干细胞可以分化为各种细胞 C. 干细胞是从胚胎中分离提取的细胞 D. 向人体移植iPS细胞不会产生免疫排斥反应 【答案】A 【解析】 【详解】A、诱导多能干细胞（iPS细胞）可通过向已分化的体细胞（如T细胞、成纤维细胞等）中导入特定转录因子诱导获得，因此已分化的T细胞能被诱导为iPS细胞，A正确； B、造血干细胞属于多能干细胞，仅能分化为各类血细胞和免疫细胞，不具备分化为机体所有种类细胞的全能性，B错误； C、干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞，成体的骨髓、皮肤等组织中也存在造血干细胞、皮肤干细胞等，并非只能从胚胎中分离提取，C错误； D、只有用患者自身体细胞诱导得到的iPS细胞移植才不会发生免疫排斥，若移植异体来源的iPS细胞，细胞表面的抗原存在差异，仍会引发免疫排斥，D错误。 8. 利用犬肾细胞MDCK扩增流感病毒，生产流感疫苗，具有标准化、产量高等优点。但MDCK细胞贴壁生长的特性不利于生产规模的扩大，严重制约疫苗的生产效率。研究人员通过筛选，成功获得一种无成瘤性的（多代培养不会癌变）、可悬浮培养的MDCK细胞——XF06.下列叙述错误的是（　　） A. XF06悬浮培养可提高细胞密度，进而提升生产效率 B. 细胞贴壁生长特性的改变是由于流感病毒感染所导致 C. 可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒 D. 采用无成瘤性细胞生产疫苗，是为了避免疫苗中有致瘤DNA的污染 【答案】B 【解析】 【分析】动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适当的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。动物细胞培养需满足基本的营养条件，培养液中需有氨基酸、无机盐、糖类和维生素等，同时需要适宜的温度、pH和渗透压，还需在无菌无毒的环境下去培养。无菌：对培养液和所有的培养用具进行灭菌处理，在无菌的环境下进行操作；无毒：定期更换培养液，以便清除代谢产物。 【详解】A、悬浮培养的XF06细胞无需贴壁，可在培养液中自由增殖，从而提高细胞密度，扩大病毒产量，提升生产效率，A正确； B、XF06细胞的贴壁特性改变是通过筛选获得的遗传特性，而非流感病毒感染所致（病毒感染仅用于扩增病毒，不改变宿主细胞生长方式），B错误； C、流感病毒释放到细胞裂解液后，离心可分离细胞碎片（沉淀）与病毒（上清液），C正确； D、无成瘤性细胞不含癌基因，可避免疫苗中混入致瘤性DNA片段，确保疫苗安全性，D正确； 故选B。 9. 下列有关哺乳动物早期胚胎发育的叙述，正确的是（　　） A. 卵裂期细胞数量和胚胎的总体积都在增加 B. 桑葚胚阶段细胞开始分化，细胞失去全能性 C. 囊胚的内细胞团将来发育成胎膜和胎盘 D. 囊胚经过孵化阶段后，将发育形成原肠胚 【答案】D 【解析】 【详解】A、卵裂期细胞通过有丝分裂使数量增加，但胚胎总体积并不增加，甚至略有减小，A错误； B、桑葚胚阶段细胞尚未发生分化，该时期的细胞仍具有发育成完整胚胎的全能性，细胞分化从囊胚阶段才开始，B错误； C、囊胚的滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘，内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，C错误； D、囊胚进一步扩大会导致透明带破裂，胚胎从中伸展出来的过程称为孵化，囊胚经过孵化阶段后会继续发育形成原肠胚，D正确。 10. 下列关于胚胎移植的叙述，错误的是（　　） A. “受体”的性别不受限制，但是需要进行同期发情处理 B. 可以通过转基因、核移植或体外受精等方式获得“供体”的胚胎 C. 胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力 D. 胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 【答案】A 【解析】 【详解】A、胚胎移植的受体需要承担妊娠孕育胚胎的功能，必须为雌性，且受体需与供体进行同期发情处理以保证二者生理环境一致，A错误； B、供体胚胎的获取方式多样，可通过转基因、核移植、体外受精，或雌性优良供体体内受精后冲卵等方式获得，B正确； C、胚胎移植中，雌性优良个体仅负责提供优良胚胎，妊娠孕育的职能由普通受体承担，可大幅缩短优良个体的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，C正确； D、胚胎移植是将早期胚胎移植到同期发情的同种受体子宫内，二者生理环境一致，实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，D正确。 11. DNA分子中腺嘌呤可能会被甲基化酶修饰。不同的限制酶对识别序列中腺嘌呤的甲基化前后的切割的影响如表所示。下列叙述正确的是（　　） 限制酶 识别序列 腺嘌呤甲基化前 腺嘌呤甲基化后 TaqⅠ 5'-T↓CGA-3' 切割 不切割 DpnⅠ 5'-GA↓TC-3' 不切割 切割 ClaⅠ 5'-AT↓CGAT-3' 切割 不切割 BamHⅠ 5'-G↓GATCC-3' 切割 切割 A. DNA腺嘌呤的甲基化不会影响基因的表达 B. ClaⅠ所识别的序列，都能被TaqⅠ识别并切割 C. 含有5'-G↓GATCC-3'序列的DNA片段中各碱基是否甲基化不影响BamHⅠ对其切割 D. 用不同限制酶切同一DNA片段，甲基化前后可被切割的位点数可能相同 【答案】D 【解析】 【详解】A、DNA甲基化属于表观遗传修饰，若腺嘌呤甲基化发生在基因的启动子等调控区域，会影响RNA聚合酶与启动子的结合，抑制转录过程，进而影响基因的表达，A错误； B、ClaⅠ识别序列为5'-ATCGAT-3'，虽包含TaqⅠ的识别序列TCGA，但若序列中的腺嘌呤发生甲基化，TaqⅠ无法对其进行切割，因此不是所有ClaⅠ识别的序列都能被TaqⅠ切割，B错误； C、表格仅说明识别序列中腺嘌呤的甲基化不影响BamHⅠ的切割，并未给出其他碱基甲基化对BamHⅠ切割的影响，无法得出“各碱基是否甲基化都不影响”的结论，C错误； D、如选择BamHⅠ进行切割时，其切割不受识别序列中腺嘌呤甲基化的影响，用其切割同一DNA片段时，甲基化前后可被切割的位点数相同，因此存在甲基化前后切割位点数相同的可能，D正确。 12. 载体是基因进入受体细胞的“分子运输车”，下列叙述错误的是（　　） A. 可作为载体的质粒只能是来自原核细胞的拟核外的环状DNA B. 载体上的限制酶切割位点用来插入外源DNA片段 C. 噬菌体和动植物病毒都可以作为载体，但是受体细胞有差异 D. 载体上的复制原点能够结合解旋酶和DNA聚合酶 【答案】A 【解析】 【详解】A、质粒是裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，具有自我复制能力的环状双链DNA分子，酵母菌等真核生物中也存在质粒，并非只能来自原核细胞，A错误； B、载体需具有一个或多个限制酶切割位点，作用是供外源DNA片段（目的基因）插入，B正确； C、基因工程常用的载体包括质粒、噬菌体衍生物和动植物病毒，噬菌体的受体细胞多为细菌，动植物病毒的受体细胞为对应的动植物细胞，二者受体细胞存在差异，C正确； D、复制原点是DNA复制的起始位点，DNA复制时解旋酶首先结合在该位点解开DNA双链，之后DNA聚合酶结合参与子链的合成，D正确。 13. 科研人员构建的某重组质粒如图所示，甲、乙、丙表示3条引物及其在重组质粒中的相应位置，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因。下列叙述错误的是（　　） A. 构建成功的重组质粒还应该包含启动子、终止子和复制原点等组件 B. 使用引物乙、丙进行PCR扩增，能够检测目的基因是否正向连接 C. 若受体菌在含有氨苄青霉素的培养基中正常生长，可确定目的基因已转化成功 D. 若目的基因未导入，使用引物甲、丙进行PCR扩增，也会有扩增产物 【答案】C 【解析】 【详解】A、质粒作为基因工程的载体，必须包含启动子（驱动目的基因转录）、终止子（终止转录）、复制原点（保证质粒在受体细胞中复制）、标记基因（筛选）等组件，因此构建成功的重组质粒需要这些结构。 A正确；   B、PCR扩增需要引物分别与目的基因的两条链的3'端结合，且方向为5'→3'。引物乙、丙的位置：若目的基因正向连接，乙和丙的引物结合位点方向正确，可扩增出目标片段；若反向连接，则无法扩增出对应长度的片段，因此可以用乙、丙检测目的基因的连接方向。 B正确；   C、Ampr（氨苄青霉素抗性基因）位于质粒上，即使目的基因未成功插入，只要质粒成功导入受体菌，受体菌也能在含氨苄青霉素的培养基上生长。因此“能正常生长”只能说明质粒导入成功，不能确定目的基因已转化成功。 C错误；   D、引物甲、丙结合在质粒的非目的基因区域，无论目的基因是否导入，只要质粒存在（即使是空质粒），甲、丙之间的片段都能被扩增出产物。因此即使目的基因未导入，也会有扩增产物。 D正确。 14. 下图是某兴趣小组PCR产物琼脂糖凝胶电泳的结果。下列分析错误的是（　　） A. 凝胶加样孔应在A端，且A端应连接电源的负极 B. 1号和2号泳道的DNA片段具有相同的碱基排列顺序 C. 凝胶中的DNA分子被染色后可在波长300nm的紫外灯下被检测出来 D. 制备凝胶时，核酸染料需要在琼脂糖熔化冷却后、倒胶凝固前加入 【答案】B 【解析】 【详解】A、DNA分子带负电，电泳时DNA会从负极向正极迁移；DNA分子越小，移动速度越快，距离加样孔越远，可知A端为加样孔，连接电源负极，A正确； B、1号和2号DNA片段长度（碱基对数目）相同，但不代表碱基排列顺序相同，B错误； C、琼脂糖凝胶电泳中，DNA 分子经核酸染料（如溴化乙锭）染色后，可在波长约 300nm 的紫外灯下发出荧光，从而被检测出来，C正确； D、制备凝胶时，核酸染料需要在琼脂糖熔化冷却后、倒胶凝固前加入，混匀后再倒入模具凝固，D正确。 15. 下列关于生物技术安全和伦理问题的叙述，错误的是（　　） A. 反对设计完美婴儿 B. 反对人的生殖性克隆 C. 禁止生物武器的使用 D. 禁止转基因技术的应用 【答案】D 【解析】 【详解】A、设计完美婴儿涉及基因编辑技术，可能引发基因歧视、破坏基因多样性等伦理问题，因此反对是合理的，A正确； B、生殖性克隆会冲击现有伦理体系，且克隆人存在技术风险，国际社会普遍反对，B正确； C、生物武器具有大规模杀伤性，国际公约明确禁止其研发和使用，C正确； D、转基因技术需在严格监管下合理应用（如转基因作物），并非完全禁止，D错误。 故选D。 二、不定项选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有两个或两个以上选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全得1分，有选错的得0分。 16. 微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（ ） A. 用平板划线法能测定X菌组中的活菌数 B. Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高 C. 混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种 D. 能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 【答案】C 【解析】 【分析】接种最常用的方法： （1）平板划线分离法：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 （2）稀释平板法：首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。 【详解】A、平板划线法主要用于微生物的分离和纯化，不能用于测定活菌数，测定活菌数常用稀释涂布平板法，A错误； B、Y菌组微塑料残留率较高，说明Y菌对微塑料的降解能力相对较弱，而不是菌浓度高，微塑料残留率与菌对微塑料的降解能力有关，而非直接与菌浓度相关，B错误； C、由图可知，X+Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组，说明混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种，C正确； D、该培养基中含有蛋白胨，能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等，但不一定都能降解微塑料，D错误。 故选C。 17. 科研人员研究某种红豆杉的细胞悬浮培养和原生质体培养方式对合成紫杉醇的影响，甲组为细胞悬浮培养，乙组为原生质体的液体静置培养，丙组为琼脂糖包埋后的原生质体悬浮培养。三组的培养基相同，其中乙、丙两组另加细胞壁合成抑制剂等，结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 比较甲和丙，丙组的培养方式有利于原生质体的增殖，从而提高紫杉醇总产量 B. 比较乙和丙，丙组的培养方式有利于应用到发酵罐进行紫杉醇的生产 C. 丙组中琼脂糖凝胶的作用是持续为原生质体供应碳源 D. 上述实验表明细胞壁完整有助于紫杉醇的合成与积累 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、题干体现的是对紫杉醇含量的影响，没有体现对细胞增殖的影响，A错误； B、丙组的胞外紫杉醇浓度比乙组高，这意味着丙组的培养方式能更多地产生可提取的紫杉醇，有利于用发酵罐进行紫杉醇的生产，B正确； C、琼脂糖的作用是为细胞提供支撑和固定，它不能为细胞提供碳源，C错误； D、甲组细胞有细胞壁，不过从紫杉醇合成量来看，甲组低于乙组和丙组，D错误。 18. 为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙(种群数量多)进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是（　　） A. 克隆动物的核基因组来源于甲、乙 B. 体外受精需用获能的精子与MI期的卵母细胞受精 C. 滋养层细胞可影响内细胞团的发育 D. 滋养层可用于做DNA分子鉴定胚胎性别 【答案】CD 【解析】 【详解】A、克隆动物的核基因组来源于甲，细胞质中的基因来源于乙，A错误； B、体外受精需用获能的精子与MⅡ期的卵母细胞受精，而不是MI期，B错误； C、滋养层可影响内细胞团的发育，如滋养层细胞分泌的某些物质可能会影响内细胞团细胞的分化等，C正确； D、滋养层细胞将来发育为胎膜和胎盘，其细胞中含有胚胎的全套遗传物质，因此可通过取滋养层细胞进行 DNA 分子鉴定来判断胚胎性别，D正确。 19. 下面有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（　　） A. 新鲜的洋葱、香蕉、菠菜、猪血、猪肝都是理想的实验材料 B. 洋葱研磨液用纱布过滤后可以经离心后取上清液 C. 向上清液中加入预冷的体积分数为95%的酒精是为了析出DNA D. 向收集的丝状物中直接加入二苯胺试剂，溶液会呈现出蓝色 【答案】BC 【解析】 【详解】A、新鲜的洋葱、香蕉、菠菜属于植物材料，含有DNA，可以作为实验材料；但猪血中的红细胞没有细胞核，几乎不含DNA，猪肝虽然含有DNA，但动物材料中的蛋白质、脂肪等杂质较多，不是理想的实验材料，A错误； B、洋葱研磨液用纱布过滤后，滤液中含有DNA、蛋白质等成分，离心后，密度较小的上清液中含有较多的DNA，因此可以取上清液继续后续操作，B正确； C、DNA不溶于预冷的体积分数为95%的酒精，而蛋白质等杂质可以溶于其中，所以向上清液中加入预冷的体积分数为95%的酒精能够析出DNA，同时低温还能抑制DNA酶的活性，减少DNA的降解，C正确； D、用二苯胺鉴定DNA时，需要将DNA丝状物溶解在NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂，然后进行水浴加热，溶液才会呈现蓝色，直接加入二苯胺试剂无法完成鉴定，D错误。 20. ddNTP(N代表A、T、C、G)表示四种双脱氧核苷三磷酸，其组成结构中脱氧核糖的3’位无羟基，无法形成磷酸二酯键，当以该物质作为DNA复制的原料时，会导致 DNA 链延伸终止。科学家可依据此原理进行DNA的测序。DNA测序时，先将待测单链DNA模板、引物、有关酶、4种脱氧核苷三磷酸(dNTP，N代表A、T、C、G)均加入4个试管中，再分别加入ddNTP。ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸，从而形成不同长度的DNA片段，分离4支试管中所有DNA片段，分泳道进行电泳，结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. ddNTP不能形成氢键，dNTP可以形成氢键 B. 该PCR反应体系中需要加入2种引物、1种酶 C. 电泳过程中，DNA片段越小迁移速率越快 D. 待测模板链的碱基序列为5’-CTATGCATA-3’ 【答案】CD 【解析】 【详解】A、ddNTP和dNTP的区别是脱氧核糖3'位是否有羟基，它们的碱基部分是相同的，都能通过碱基互补配对形成氢键，A错误； B、该实验是对单链DNA模板进行测序，只需要加入1种引物即可结合单链模板启动复制；需要的酶是耐高温的DNA聚合酶（Taq酶），仅1种，B错误； C、DNA电泳利用的是DNA分子在电场中向正极移动的特性，DNA片段越小，受到的阻力越小，在凝胶中的迁移速率就越快，C正确； D、从电泳方向（从上到下是片段从长到短）读取合成链的碱基序列：从上往下看，四个泳道的碱基依次是GATACGTAT，即合成链的序列是5'-GATACGTAT-3'。根据碱基互补配对，模板链的序列是5'-CTATGCATA-3'，D正确。 三、非选择题：本题共5题，共55分。 21. 自生圆褐固氮菌是异养需氧型微生物，能够利用大气中的N2，并将其还原为氨。某生物兴趣小组进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力的鉴定研究。 （1）想获得圆褐固氮菌的菌种最好选择___________(填“表层”或“深层”)的土壤。自生固氮菌利用氮元素可合成体内的化合物有___________(写出2种)。 （2）某同学将获得的某固氮菌液进行梯度稀释，吸取104稀释倍数的菌液各0.1mL，分别涂布在三个平板上，一段时间后形成的菌落数依次为10、15、20，该同学以平均菌落数15进行计数，求得原菌液固氮菌的浓度为___________个/mL。老师认为该同学的计数方法不正确，原因是___________。 （3）为了进一步筛选高效固氮菌，不同小组将获得初步筛选得到的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，利用细菌计数板对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如下： 甲菌 乙菌 丙菌 丁菌 菌量(个/mL) 6.1×105 1.5×105 7.4×105 2.0×105 含氮量(K) 3.32 5.34 4.38 5.36 利用上述方法对固氮菌进行计数时，统计的结果往往比活菌的实际数目偏___________(填“大”“小”或“无法确定”)。依据上表中的结果分析，___________菌的固氮效率最高。 【答案】（1） ①. 表层 ②. 蛋白质、核酸、磷脂等(其他合理亦可) （2） ①. 1.5×106 ②. 所选稀释倍数的平板的菌落数不在30-300之间 （3） ①. 大 ②. 乙 【解析】 【小问1详解】 自生圆褐固氮菌是异养需氧型微生物，需要氧气进行呼吸作用。土壤表层氧气含量高，更适合该菌的生长繁殖，因此最好选择表层土壤。氮元素是构成多种生物大分子的关键元素，自生固氮菌利用氮元素可合成的化合物包括：蛋白质、核酸（DNA/RNA）、磷脂、ATP等（任选2种即可） 【小问2详解】 该同学的计算过程：平均菌落数为15，稀释倍数为104，涂布体积为0.1mL。计算公式：菌液浓度=平均菌落数÷涂布体积 ×稀释倍数，代入数据15÷0.1×104 =1.5×106个 /mL。平板计数法的关键原则：为保证计数结果准确，平板上的菌落数应在30~300之间。该同学的平板菌落数为10、15、20，均低于30，菌落数过少会导致误差过大，因此计数方法不正确。 【小问3详解】 细菌计数板（血球计数板）计数的特点：它统计的是所有菌体（包括活菌和死菌）的总数，而活菌计数（如涂布平板法）仅统计活菌数。因此，用细菌计数板统计的结果往往比活菌的实际数目偏大。要判断“固氮效率最高”，不是看菌量多少，而是看单位菌量产生的含氮量，即“含氮量÷菌量”，值越大说明效率越高。计算每种菌的“单位菌量固氮量”：甲菌3.32÷ (6.1×10⁵) ≈ 5.44×10⁻⁶ ，乙菌5.34÷ (1.5×10⁵) ≈ 3.56 ×10⁻⁵，丙菌4.38÷ (7.4×10⁵) ≈ 5.92 ×10⁻⁶，丁菌5.36÷ (2.0×10⁵) = 2.68 ×10⁻⁵ ，明显乙菌的单位菌量固氮量最大，说明固氮效率最高。 22. 我国科学家经过多年反复试验，可以在10s之内对卵母细胞进行操作，在15s之内将体细胞核注入去核的卵母细胞里，成功培育体细胞核移植食蟹猴，流程如图所示，①～⑥表示相关过程，回答下列问题： （1）科学家可以利用胚胎工程培育试管猴和克隆猴，前者的生殖方式属于___________(填“有性”或“无性”)生殖。体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是___________。 （2）过程①通常置于含有___________的混合气体的CO2培养箱中进行培养，期间需要定期更换培养液，目的是___________。 （3）激活重构胚分化潜能调控基因A的表达，是克隆成功的关键。为了激活基因A的表达，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理重构胚。据此分析，组蛋白脱乙酰酶可以___________(填“促进”或“抑制”)基因A的表达。向重构胚注入Kdm4d的mRNA，其发挥作用的机理是___________。 【答案】（1） ①. 有性 ②. 胚胎细胞的分化程度低，细胞核的全能性更高(或体细胞核分化程度高细胞核的全能性低) （2） ①. 95%空气和5%CO2 ②. 清除代谢废物 （3） ①. 抑制 ②. mRNA翻译合成Kdm4d，Kdm4d促进基因A的表达 【解析】 【小问1详解】 试管猴的培育需要经过两性生殖细胞的结合（体外受精），因此属于有性生殖；克隆猴通过体细胞核移植培育，无两性生殖细胞结合，属于无性生殖。体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，其原因是胚胎细胞的分化程度低，细胞核的全能性更高(或体细胞核分化程度高细胞核的全能性低)。 【小问2详解】 动物细胞培养的CO₂培养箱中，通常通入95%空气（保证细胞有氧呼吸）+5%CO₂（维持培养液pH）的混合气体。定期更换培养液的目的是：清除代谢废物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，同时补充营养物质。 【小问3详解】 组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA可激活基因A的表达，说明组蛋白脱乙酰酶本身会抑制基因A的表达。Kdm4d是组蛋白去甲基化酶，向重构胚注入Kdm4d的mRNA，mRNA翻译出Kdm4d，组蛋白去甲基化酶。去除组蛋白的甲基化修饰，激活基因A的表达，组蛋白甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则解除抑制。因此，发挥作用的机理是mRNA翻译合成Kdm4d，Kdm4d促进基因A的表达。 23. 肿瘤细胞表面有受体EGFR，CD3是T细胞表面的标志性抗原。科研人员制备双特异性抗体EGFR/CD3，可招募T细胞定向移至肿瘤细胞，增强其对肿瘤细胞的杀伤力，过程如图1所示。 （1）细胞A表示___________。细胞B与细胞A融合前，___________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞B数量。若步骤②可以使用化学试剂___________促进细胞融合。 （2）核苷酸合成有两个途径，如图2所示。骨髓瘤细胞只能利用全合成途径进行无限增殖，B淋巴细胞两种途径都能进行。 现利用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”对图1中的细胞进行筛选，能够在“HAT 培养基”上正常增殖的细胞是___________。图1中能够分泌双特异性抗体的细胞是经步骤___________ (填序号)筛选获得的细胞。双特异性抗体治疗肿瘤的效果往往优于EGFR抗体和CD3抗体的联合使用，原因是___________。 【答案】（1） ①. 骨髓瘤细胞 ②. 不需要 ③. 聚乙二醇(PEG) （2） ①. 单克隆杂交瘤细胞、双杂交瘤细胞 ②. ⑤ ③. 双特异性抗体可以同时结合EGFR和CD3，促进癌细胞与T细胞的聚集与结合 【解析】 【小问1详解】 单克隆抗体制备过程中，是将已免疫的B淋巴细胞（浆细胞）和骨髓瘤细胞融合，本题中细胞B是注射EGFR后从小鼠得到的B淋巴细胞，因此细胞A为骨髓瘤细胞。细胞B是高度分化的B淋巴细胞，不能分裂增殖，因此融合前不需要通过原代培养扩大其数量。细胞融合的化学诱导剂常用聚乙二醇（PEG）。 【小问2详解】 根据题干信息：HAT培养基阻断了核苷酸的全合成途径；骨髓瘤细胞只能进行全合成，因此未融合或自身融合的骨髓瘤细胞无法增殖；B淋巴细胞自身不能无限增殖，因此未融合或自身融合的B细胞也无法增殖；只有单克隆杂交瘤细胞、双杂交瘤细胞，既能利用B淋巴细胞的补救合成途径合成核苷酸，又具备骨髓瘤细胞无限增殖的特点，因此可以在HAT培养基上正常增殖。图1中，⑤是筛选获得能分泌目标双特异性抗体的杂交瘤细胞的步骤。双特异性抗体一个分子可同时结合EGFR和CD3，能直接桥接肿瘤细胞和T细胞，促进癌细胞与T细胞的聚集与结合，增强杀伤；而两种单独的抗体无法同时桥接两类细胞，不能有效招募T细胞，因此效果优于两种抗体联合使用。 24. 限制酶被称为基因工程的“分子手术刀”。下图为三种限制酶及其识别的序列，回答下列问题： （1）DNA分子经限制酶切割可产生两种形式的DNA片段末端，经图中限制酶切割后产生平末端的限制酶是___________。经限制酶BamHⅠ切割后产生的黏性末端序列是5’___________3’。 （2）某质粒的两个位点上分别含有1个限制酶BamHⅠ和1个限制酶Sau3AⅠ的酶切位点，若用Sau3AⅠ对该质粒进行完全酶切，会产生___________个DNA片段，将产生的片段重新连接成新的质粒，则该质粒___________(填“能”、“不能”或“不一定能”)被限制酶BamHⅠ重新切开。 （3）限制酶BsmBⅠ具有偏移剪切特性(切割位点在识别序列之外)，利用BsmBⅠ可以实现多DNA片段的无缝连接。下图表示利用BsmBⅠ将M基因和N基因连接形成融合基因的过程，F1、F2、R1、R2表示引物。 若用BsmBⅠ切割DNA片段，理论上可产生的黏性末端最多有___________种。若M基因两端的碱基序列为5’-CATCGGACT……TTGTACTCG-3’，已知引物R1的碱基序列为5’-CGTCTCNcgagTACAA…-3’(小写字母表示接头序列)，则引物F1的序列可以设计为5’___________3’(写出所有已知序列)。 【答案】（1） ①. SmaⅠ ②. GATC （2） ①. 2 ②. 不一定能 （3） ①. 256 ②. CGTCTCNcatcGGACT 【解析】 【小问1详解】 BamHⅠ识别序列为5’-G↓GATCC-3’，切割位点在第一个G之后→切割后产生黏性末端（5’突出）；Sau3AⅠ识别序列为 5’-↓GATC-3’，切割位点在G之前→也是黏性末端（5’突出）；SmaⅠ识别序列为 5’-CCC↓GGG-3’，切割位点在CCC和GGG中间→两条链都在同一位置切断，无突出末端→平末端。BamHⅠ切割后，上方链留下：5’-G （突出部分从GATCC开始）下方链留下：CCTAG-5’→反向互补是5’-GATC-3’，故突出的黏性末端是5’-GATC-3’。 【小问2详解】 质粒是环状DNA分子，含1个BamHⅠ位点和1个Sau3AⅠ位点。Sau3AⅠ的识别序列为5'-GATC-3'，而BamHⅠ切割后产生的黏性末端为GATC，说明BamHⅠ的识别序列中包含Sau3AⅠ的识别序列。因此，质粒上实际有2个Sau3AⅠ的酶切位点，环状DNA被2个位点完全酶切，会产生2个线性DNA片段。Sau3AⅠ切割产生的黏性末端为-GATC-，两个片段重新连接时，连接位点的序列可能恢复为BamHⅠ的识别序列GGATCC，也可能是其他序列（如AGATCT、TGATCA等）。只有当连接位点恢复为GGATCC时，才能被BamHⅠ识别并切开；若连接位点不是该序列，则无法被切开。因此不一定能被BamHⅠ重新切开。 【小问3详解】 题目中BsmBⅠ切割后，单链突出的黏性末端为4个碱基（NNNN），理论上每个碱基有4种可能，因此黏性末端种类为44 =256种。引物F1需在5’端添加BsmBⅠ识别序列（CGTCTC）和接头序列，3’端匹配M基因左端序列。M基因左端为5’-CATCGGACT-3’，为保持扩增后序列完整并实现无缝连接，接头序列设计为“catc”（即CATC的小写形式），与基因前端自然衔接；3’端取GGACT，覆盖基因起始后半部分，故引物F1为5’-CGTCTCNcatcGGACT-3’。 25. 大豆中转录调控因子Y蛋白可以和某些基因启动子序列结合，促进其表达。研究人员通过逆转录PCR获得Y基因并与改造后的Ti质粒上的绿色荧光蛋白基因(GFP)进行拼接获得融合基因。成功表达的Y—GFP融合蛋白可用于Y蛋白调控机理的研究，回答下列问题： （1）图中的Y基因中___________(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子序列。研究中首先要对Y基因进行PCR扩增。PCR反应要在一定的缓冲液中进行，缓冲液中一般需要加入Mg2+，其作用是___________。 （2）为将扩增后的产物定向插入载体，切割Ti质粒应该选择的限制酶是___________。为使Y基因正确接入载体并成功表达出Y—GFP融合蛋白，PCR扩增Y基因时应通过设计引物去除___________对应的序列。为了使目的基因在酶切后能够与载体正确连接，需要在引物的5’端添加限制酶___________的识别序列。 （3）将初步构建的Y—GFP基因表达载体导入大豆细胞后，在加入___________的培养基中筛选得到三个不同细胞系，对这三个细胞系的总蛋白进行抗体检测，电泳结果如图2所示。其中细胞系___________最可能成功表达出Y—GFP融合蛋白。 【答案】（1） ①. 不含有 ②. 激活耐高温的DNA聚合酶 （2） ①. Sau3AⅠ、EcoRⅠ ②. 终止密码子 ③. MunⅠ、BamHⅠ （3） ①. 潮霉素 ②. 1 【解析】 【小问1详解】 利用逆转录PCR获得Y基因所需的酶有逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶。逆转录的模板是mRNA，而mRNA是经过转录后加工的产物，仅包含编码区序列(外显子)，不包含DNA中的启动子(转录起始调控序列)和终止子(转录终止调控序列)。PCR反应要在一定的缓冲液中进行，缓冲液中一般需要加入Mg2+，其作用是激活耐高温的DNA聚合酶。 【小问2详解】 为实现定向插入，需选择两种不同的限制酶，且Ti质粒中启动子下游的EcoR Ⅰ(识别序列GAATTC)和Sau3A Ⅰ(识别序列GATC)位点适合。则Y基因上游含有黏性末端AATT，下游含有黏性末端GATC，避免载体自连并保证方向正确。去除终止密码子：Y基因编码链末端含TAG(对应mRNA的UAG，终止密码子)，若保留会导致融合蛋白翻译提前终止，因此需通过引物设计去除该终止密码子对应的序列。EcoR Ⅰ会破坏Y基因则不能用EcoR Ⅰ切割Y基因，则需要用同尾酶，即Mun Ⅰ加入引物的5′端，Sau3A Ⅰ会识别Bcl Ⅰ的识别序列，则不能用Sau3A Ⅰ切割，需要引入同尾酶，即BamH Ⅰ识别序列，所以上游引物需含Mun Ⅰ位点(CAATTG)，引物序列为5′-CAATTGATGC3′。下游引物需含BamH Ⅰ位点(GGATCC)且去除最末端TAG对应的终止密码子，所以下游引物序列为5′-GGATCCATGT-3′。 【小问3详解】 Ti质粒含潮霉素抗性基因，因此需用潮霉素筛选成功导入载体的大豆细胞。融合蛋白检测，Y—GFP融合蛋白可被Y蛋白抗体和GFP抗体同时识别。从图2电泳结果看，只有细胞系1同时在相同大小的位置出现了Y蛋白抗体和GFP抗体的阳性条带，说明该细胞系最有可能成功表达出Y—GFP融合蛋白，因为Y—GFP融合蛋白既有Y蛋白的部分又有GFP蛋白的部分，能同时与两种抗体反应。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $