课时分层检测(13)基因工程的基本操作程序-【创新大课堂系列】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程同步辅导与测试(人教版)

提供C()2的目的是雏持培养液的H。(3)进行胚胎分割时，应选 (2)长度为3300bp的环状DNA(3)酶切后产生相同的黏性末 择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚时期的胚胎进行操作。 端，并遵循碱基互补配对原则(4)含卡那霉素但不含亮氨酸 (4)图中①②分别是指内细胞团和囊胚腔。(5)受体母牛必须和供！10.C[根据题意和图示分析可知，因质粒和胰岛素基因都有两个限 体牛属于同一物种，移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基 制酶E1的切割位点，所以用限制酶E1可以将和b都切下来，A 础是受体子宫对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应。 是质粒与标记基因重新连接，B是质粒与胰岛素基因b连接，D 答案(])（次级）卵母细胞外源促性腺激素(2)获能维持培 是质粒切除标记基因后的自我连接，只有C是不可能出现。] 养液的pH(3)桑葚胚或囊胚(4)内细胞团、囊胚腔(5)同一：11.ACD[限制酶能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每 物种受体子宫对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应 一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，A正确：RNA聚合酶与基 课时分层检测（十二） 因的特定位点结合，催化遗传信息的转录，B错误：DNA连接酶将 两个DNA片段连接在一起，在两个DNA片段之间形成磷酸二酯 1,D「1973年，科学家证明质粒可以作为基因工程的载体，打破了物 键，C正确；DNA聚合酶将单个脱氧核苷酸连接到已有的核苷酸 种间的障碍，实现了物种间的基因交流，D错误。] 链上，形成磷酸二酯键，D正确。] 2.A[限制酶具有专一性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序！12.解析(1)质粒作为基因表达栽体的条件之一是要有抗性基因，以 列，A正确：质粒是基因工程中爱常用的栽体，此外还可以用动植物 便于筛选（鉴别）目的基因是否导入受体细胞。(2)同一种限制酶 病毒或噬菌体等，B错误；载体必须具备的条件之一是具有一个或！ 切割DNA分子产生的黏性末端相同。图示见答案。(3)DNA连 多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接，C错误：DNA连接酶！ 接酶催化两个DNA片段形成磷酸二酯键：而通过DNA连接酶能 的作用部位是磷酸二酯键，D错误。] 将两个DNA分子片段连接，表明经两种限制酶(BamH I和Bgl 3.C[DNA连接酶的化学本质是蛋白质，根据来源不同可分为 Ⅱ)切割得到的DNA片段，其黏性末端相同。(4)由题意知：由于 E.coli DNA连接酶和T4DNA连接酶两大类，DNA连接酶连接的 与图3空圈相对应的大肠杆菌能在含氨苄青露素的培养基上生 是两个DNA片段之间的磷酸二酯键，而DNA聚合酶连接的是！ 长，而不能在含四环素的培养基上生长，故可推知与图3空圈相对 DNA片段与游离的脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，因此在基因工 应的图2中的菌落能抗氯苄青霉素，但不能抗四环素。由图2、图3 程中不能用DNA聚合酶替代DNA连接酶，故选C。 结果显示，多数大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，而经限制酶BamH I 4,A[用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接在一起，形成的 作用后，标记基因Tt被破坏，故导入目的基因的大肠杆菌不能抗 DNA分子为一个重组DNA分子，A错误：常用的载体有质粒、噬菌 四环素，即多数大肠杆菌导入的是pBR322质粒。 体、动植物病毒等，其中在基因工程操作中，真正被用作载体的质 答案(1)筛选（鉴别）目的基因是否导入受体细胞 粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，B、C正确：质粒上 (2)如图所示： 常有特殊的标记基因便于重组DNA分子的旖选，D正确。] 目的基因 5.D[不同生物的DNA分子的空间结构和化学成分一致，因此不同 -G AATTC…-G AATTC- 生物的基因能连接在一起：不同生物的DNA分子都遵循碱基互补 —CTTAA G…CTTAA G- 配对原则，因此具有相同黏性末端的基因能连接起来；自然界所有 (3)磷酸二酯两种限制酶(BamH I和BglⅡ)切割得到的黏性末 生物共用一套遗传密码，因此一种生物的基因能在另一种生物体内 端相同 表达：真核生物和原核生物的基因结构不同。] (4)能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素pBR322质粒 6,C[猪为哺乳动物，成熟红细胞不含细胞核和细胞器，而鸡属于鸟 课时分层检测（十三） 类，其红细胞内含有细胞核与各种细胞器，DNA含量较多，A错误： 等体积鸡(2n=78)的血液和鸭(2n=78)的血液中所含血细胞的数！1，C[可以从基因文库中获取目的基因，A正确：可以利用PCR技术 量不相等，所以提取到的DNA量不相等，B错误：二苯胺试剂为无 扩增目的基因，B正确：利用DNA转录合成的是RNA,不是基因， 色溶液，与DNA在沸水浴的条件下会呈现蓝色，且蓝色的深浅与被 C错误：可以利用化学方法人工合成目的基因，D正确。] 鉴定的DNA含量有关，C正确：二苯胺试剂应该现配现用，2.A「栽体不能防止目的基因被受体细胞限制酶“切割”，A符合题 D错误。] 意。载体在受体细胞中能够稳定存在，并且具有自我复制能力，使 7,A[获取基因的限制酶的作用部位是图中的①磷酸二酯键，A正： 目的基因效量扩大，B不符合题意。启动子是RNA聚合酶识别和 确：基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，质粒是基因工 结合的部位，能启动转录过程：终止子控制着转录的结束，所以载体 程中常用的载体，而不是工具酶，B错误：连接基因与载体的DNA 含有的启动子和终止子可协助目的基因表达，C不符合题意。载体 连接酶其作用部位是图中的①磷酸二酯键，C错误：一种限制酶只 具有标记基因，标记基因便于筛选含有目的基因的受体细胞，D不 能识别一种特定的脱氧核糖核苷酸序列，并在特定的切割位点上切 符合题意。] 割DNA分子，D错误。 ·3.A[水稻的花很小，不适合用花粉管通道法导入目的基因，A错误： 8.解析(1)限制酶切割DNA分子后可产生两种类型的末端，即平末：将目的基因导入动物细胞常用显微注射法，B正确：将目的基因导 端和黏性未端。(2)分析题图可知，限制酶X识别的序列为 入大肠杆菌最常用的方法是用C+处理，使其处于一种能吸收周 一GAATTC一，互补链是一CTTAAG一，切割的位点为G和A之 围环境中DNA分子的状态，C正确：将目的基因导入植物细胞最常 间的磷酸二酯键。(3)质粒载体可以用限制酶X切割，也可以用另 用的方法是农杆菌转化法，此外还有花粉管通道法，D正确。] 一种限制酶Y切割，说明该酶与限制酶X切割产生的黏性未端相同！4.B[基因表达载体由启动子、终止子，标记基因、复制原点和目的基 或互补。(4)基因工程使用的DNA连接酶，按来源可分为E.coi: 因等组成。题图中有终止子、标记基因（抗生素抗性基因）、目的基 DNA连接酶和T4DNA连接酶，其中只能连接一种末端的是E.co- 因、复制原点等，还缺少启动子。启动子位于基因的上游，所以X最 互DNA连接酶。(5)基因工程的载体有质粒、噬蓝体和动植物病毒。1 可能是启动子，B正确。] 答案(1)黏性末端平末端(2)一GAATTC一或一CTTAAG ,5.C[基因表达载体使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗 G和A之间的磷酸二酯键(3)两种限制酶切割后形成的黏性末： 传给下一代并表达和发挥作用，是基因工程的核心步骤，A正确：基 端相同或互补(4)T4E.coli(5)噬菌体动植物病毒 因表达载体包括启动子、终止子、目的基因、标记基因等，其中启动 TCaG浅GACT-、G号 9.解析(1)限制酶BglⅡ与BamH I切割形成的未端序列依次为：1 子位于目的基因的上游，终止子位于目的基因的下游，B正确：启动 -A GATCC- 子位于目的基因的上游，是启动转录的一段DNA,C错误；不同的目 A一、 一CCTAG或 G 的基因具有不同的核苷酸序列，其启动子也不尽相同，D正确。] (2)经BglⅡ酶切后的质粒与BmHI酶切后的目的基因形成的重·6.D[过程①表示基因表达载体的构建过程，即形成重组Ti质粒的 组DNA分子上没有BglⅡ酶的识别序列，因此使用BglⅡ处理重组： 过程，需要使用限制酶和DNA连接酶，不需要纤雏素酶和采胶酶， 质粒，得到的是长度为3300bp的环状DNA。 A错误：过程②是将目的基因导入受体细胞的过程，在将重组Ti质 (3)BglⅡ酶切后的质粒X与BamH I酶切后的目的基因Y具有相！ 粒导入烟草细胞前需要先使用CCl2处理农杆菌，B错误：过程③④ 同的黏性末端，根据碱基互补配对原则，它们能够连接形成重： 为再分化形成植株的过程，该过程中需要通过调节营养物质和植物 组DNA 激素的配比，从而实现由愈伤组织诱导出芽和根的顶端分生组织的 (4)由于质粒X含有leu2基因，可用于合成亮氯酸，目的基因Y含 目的，并由此再生出新植株，C错误：可通过进行个体水平的检测判 有卡那霉素抗性基因KanR,因此要筛选含有重组质粒的Z细菌，应 断转基因抗虫烟草是否培育成功，即让害虫吞食转基因烟草，观察 选择含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基。 害虫的存活情况进行判断，D正确。」 答案(TG或 GATCT一一G GATCC- 7.B「图示过程需要的工具有限制酶、DNA连接酶和载体，A错误： A 一CCTAG或 G 限制酶也具有专一性，B正确：图中的质粒可能来自原核细胞，也可 197 能来自真核细胞，如真菌也有质粒，C错误：限制酶作用于双链DNA! 丙，A正确：BamH I会使两种抗性基因被破坏，选择的限制酶应 中的磷酸二酯键，将其断开，D错误。 在目的基因两端存在识别位点，同时为防止目的基因自身环化，因 8.B[PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片 此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割，B正确：将目的基因 段。4-9号是转基因植株，理论上都应包含目的基因，结合2号野 导入微生物大肠杆菌细胞中，需要用C+处理大肠杆菌，使之成 生型和10号蒸馏水组的结果，推测包含目的基因的片段大小应为 为感受态细胞，C正确：由于选择BclI和HindⅢ这两种限制酶， 250~500bp,A合理；3号PCR结果包含250~500bp片段，应包含 破坏了氨苄青霉素抗性基因，但没有破坏四环素抗性基因，因此应 目的基因，B不合理：9号PCR结果不包含250~-500bp片段，所以 该先用含四环素的培养基箭选出含有基因表达载体和普通质粒的 不是所需的转基因桩株，C合理：10号为蒸馏水，可排除反应体系等 大肠杆萌，再用含氯苄青雾素的培养基筛选含重组质粒的大肠杆 对结果的千扰，D合理。] 菌，D错误。」 9.解析(1)获取的HSA基因可以利用PCR技术进行快速扩增，15.解析(1)引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对 PCR过程中，需要一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物，还需 的短单链核苷酸，因此设计扩增P基因的引物，需要两种引物分别 要耐高温的DNA聚合酶等条件。(2)一个基因表达载体除了目的 与两条模板链3'端的碱基序列互补配对。DNA聚合酶延仲时，是 基因外，还应包括启动子、终止子和标记基因等。(3)将日的基因导 将脱氧核苷酸加到引物的3'端，为了不破坏目的基因，该限制酶识 入Ⅱ大肠杆菌细胞时常用感受态细胞法，即用C+处理微生物细 别序列应添加在引物的5'端。(2)融合基因转录出的mRNA序列 胞，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态。(4)由于大 正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氯基酸序列正确，但P基因对 肠杆菌是原核生物，其细胞中不含内质网和高尔基体，而人体合成！ 应的氨基酸序列与P不同，说明P基因翻译时出错。由图可看出， 的初始HSA多肽，需要经过系统加工形成正确的空间结构才能有！ 在转录出的mRNA中，限制酶识别序列对应的最后两个碱基与P 活性，所以，选择I途径获取HSA更有优势。(5)检测目的基因是！ 基因对应的第一个碱基构成一个密码子，导致读码框改变，翻译出 否表达形成蛋白质可以采用抗原一抗体杂交法 的氨基酸序列改变，可通过在E(oRI识别序列前后增加碱基，使 答案(1)PCR引物耐高温的DNA聚合(2)启动子终止子！ 其碱基数目加上FLAG的碱基数目为3的倍数，这样能保证P基 标记基因(3)Ca2+ (4)I(5)抗原-抗体杂交 因转录出的mRNA上的读码框不改变，能够正常翻译。(3)①组 10.解析(1)获得目的基因的方法有PCR技术、从基因文库中获取、 仅添加UBC,处理后，用UB℃抗体检测，不出现杂交带：②组添加 人工合成。(2)采用PCR扩增目的基因的原理是DNA半保留复 UBC和FLAG-P,出现杂交带：③组添加UBC、药物A和FLAG 制，由图2可知，DNA复制只能从5'到3'，因此构建前利用PCR技 P,杂交带更加明显，说明药物A的作用是促进UBC与FLAG-P 术扩增基因时，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取B和C作 的结合。②④组或③⑤组的差异在于②③组使用FLAG-P,出现 为引物。(3)DNA的基本骨架由脱氧核糖与磷酸交替连接而成，a 杂交带：④⑤组使用FLAG-P△，不出现杂交带，据此推测P△中 正确：其结构中G一C碱基对越多，分子结构越稳定，b错误：PCR 缺失的特定序列是与UBC结合的关键序列。(4)根据(3)的分析 技术利用高溫解开氢键，不需要解旋酶，c错误：由图3可知，该片 推测，药物A促进UBC与FLAG-P的结合，从而促进蛋白P被 段碱基A有2个，复制6次至少需要碱基A的数量为2X2一2 蛋白酶识别并降解，达到治疗的目的。 126个，d错误，故选bcd。(4)在构建目的基因表达载体时，用 答案(1)两种引物分别与两条模板链3'端的職基序列互补配对 Ps1I、EcoR I两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种 5'端(2)在转录出的mRNA中，限制酶识别序列对应的最后两 酶切割时产生目的基因与载体反向连接。限制酶破坏的是磷酸二 个碱基与P基因对应的第一个碱基构成一个密码子，导致读码框 酯键，图中目的基因切割需要破坏4个磷酸二酯键，因此需要消耗！ 改变，翻译出的氨基酸序列改变在EcoR I识别序列前后增加碱 4个水分于。由图可知，不选用限制酶PstI和HimdⅢ同时对质！ 基，使其碱基数目加上FLAG的碱基数目为3的倍数(3)促进 粒和目的基因进行切割的原因是会破坏标记基因。 UBC与FLAG-P的结合与UBC结合(4)药物A促进UBC 答案(1)从基因文库中获取、人T合成(2)DNA半保留复制 与FLAG-P的结合，从而促进蛋白P被蛋白酶识别并降解，达到 B、C(3)bcd(4)目的基因与载体反向连接4 会破坏标记 治疗的目的 基因 课时分层检测（十四） 11.BC[设计扩增目的基因的引物时，引物应当可以与表达栽体两端， 的序列进行互补配对，所以设计引物时需要考虑基因表达载体的：1.C[我国的抗虫棉是转入了B抗虫蛋白基因培育出来的，A错误： 序列，A正确：AT对之间有二个氢键，GC对之间有三个氢键，GC 抗虫基因主要有B抗虫蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制 含量高时稳定性高，所以GC含量高的引物在与模板链结合时，需 剂基因、植物凝集素基因等，B错误：抗真菌转基因植物中，可使用 要更高的温度，B错误；过程I是逆转录过程，所以需要加入缓冲 的基因有几丁质酶基因和抗毒素合成基因，C正确：导入可以调节 液、原料、逆转录酶和引物A等，C错误：该技术用于对某些微量· 细胞渗透压的基因，可提高作物抗盐碱和抗干旱的能力，D错误。] RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度，D正确。] ·2.D[A、B和C均采用了基因工程技术，基因工程依据的原理是基 12.C[根据题意，目的基因的两端有EcoR I、BamH I的酶切位点，： 因重组，且参与繁殖的细胞中均含有目的基因，故可遗传给子代，A、 将含有目的基因的DNA用EcoR I酶切，会得到目的基因片段：根： B、C不符合题意：D也采用了基因工程技术，但只有患者的淋巴细 据质粒的简图可知，将质粒用EcoR I酶切，会得到一条链状！ 胞中含有目的基因，患者的生殖细胞中不含目的基因，故不能遗传 DNA;因此将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR I酶切，在 给子代，D符合题意。] DNA连接酶作用下，可生成目的基因一目的基因片段、目的基！3.B[将乙肝病毒相关基因转入酵母菌，获得乙肝疫苗，运用了基因 因一质粒片段、质粒一质粒片段三种产物，A错误。DNA连接酶 工程，A不符合题意：将一种植物的叶绿体移入另一种植物以提高 的作用是将酶切后得到的黏性未端连接起来形成一个重组质粒， 光合作用效率，这属于细胞工程技术的应用，与基因工程无关，B符 该过程形成四个磷酸二酯键，B错误。EcoR I和BamH I的识别 合题意：选择“工程菌”来生产胰岛素属于基因工程技术的应用，C 序列不同，获取目的基因和切割质粒时，同时选用EoRI和BamH切 不符合题意：培育转基因抗虫棉属于基因工程技术的应用，D不符 割，目的基因两端形成的末端不同，切割开的质粒两端形成的末端不 合题意。 同，再用DNA连接酶连接，可以防止目的基因反向连接和质粒自·4.D[土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒，在侵染植物细胞的过程 身环化，C正确。题图显示，在构建基因表达载体的过程中质粒中 中，其中的T-DNA片段可转入桩物的基因组，所以若用Ti质粒作 的青霉素抗性基因和四环素抗性基因都不会被破坏，因此能在含· 为抗旱基因的载体时，目的基因的插入位置应该在T-DNA片段 青霉素和四环素的培养基中生长的受体细胞不能表明目的基因已： 内，且要保证复制起，点和用于转移T一DNA的基因片段不被破坏， 成功导入该细胞，D错误。] A合理：将目的基因导入土壤农杆菌时，需要用Ca+处理农杆菌， I3.CD[为避免酶切后质粒的自身环化，可同时使用EcoR I和 使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，B合理：用含有 BamH I切割质粒，A正确：转化方法是将质粒表达栽体溶于缓冲 重组T质粒的土壤农杆菌去侵染植物细胞，使其具有抗旱基因，然 液后与经Ca+处理的大肠杆菌混合，B正确：用EcoR I和 后再通过植物组织培养技术将受体细胞培养成具有抗旱基因的植 BamH I两种限制酶对质粒进行切割时，会破坏四环素抗性基因，！ 物，C合理：能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，只能说明目的 但不会破坏青露素抗性基因，因此导入重组质粒的大肠杆菌能在！ 基因导入成功，不能说明该基因成功表达，即不能说明该基因工程 含有青霉素的培养基上生存，但不能在含有四环素的培养基上生 项目获得成功，D不合理。] 存，所以培养基A和培养基B分别含有青霉素、四环素，含目的基！5.C[将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组是为了增加该目 因X的菌落是4和6，C、D错误。] 的基因的基因频率，还可防止基因污染，A错误：花粉中的精子几乎 14.D[PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿 不含细胞质，但是卵胞中含有叶绿体基因组，B错误；受精卵中的 相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图乙中引物甲和引物： 细胞质几乎全部来自卵细胞，特子中几乎不含叶绿体基因组，即叶 198班级 姓名 得分 课时分层检测（十三） 基因工程的基本操作程序 A.目的基因插入位点 4…0 基础达标练0… B.启动子 1.下列不属于获取目的基因的方法是( ) C.标记基因 A.从基因文库中提取 D.DNA聚合酶识别位点 B.利用PCR技术合成 5.关于基因表达载体的说法不正确的是 C.利用DNA转录合成 A.基因表达载体的构建是基因工程的核心 D.利用化学方法人工合成 步骤 2.基因工程的核心是构建基因表达载体，下列 B.基因表达载体包含启动子、目的基因、终 不属于载体作用的是 ( 止子、标记基因等 A.载体能防止目的基因被受体细胞限制酶 C.启动子位于目的基因的上游，能够启动 “切割” 翻译 B.载体能协助目的基因在受体细胞中复制 D.不同的目的基因所需的启动子不一定 C.载体含有启动子和终止子协助目的基因： 相同 表达 : 6.如图为转基因抗虫烟草的培育流程，下列叙 D.载体具有标记基因，便于筛选含目的基因 述正确的是 的受体细胞 苏云 金杆菌抗虫基因 3.下列关于目的基因导入受体细胞的叙述，错 误的是 四环素抗性基因 - A.培育“黄金大米”可用花粉管通道法导入 烟草 愈伤 青霉素抗性基内 细胞 组织 抗虫烟草 目的基因 A.培育过程①需要使用纤维素酶和果胶酶 B.显微注射技术是将目的基因导入动物细： B.培育过程②将重组Ti质粒导入烟草细胞 胞采用最多的方法 前需要使用CaCO3处理农杆菌 C.目的基因导入大肠杆菌最常用的方法是： C.培育过程③④仅通过调节植物激素可诱 Ca2+处理法 导愈伤组织再生出新植株 D.农杆菌转化法是将目的基因导入植物细： D.可通过观察害虫吞食转基因烟草后的存 胞最常用的方法 活情况进行个体水平检测 ; 7.如图是利用基因工程技术生产可食用疫苗 …0 能力提升练 0 的部分过程，其中PstI、SmaI、EcoR I 4.如图是基因工程中基因表达载体的模式图， 和ApaI为四种限制性内切核酸酶。下列 若结构X是表达载体所必需的，则X最可： 说法正确的是 能是 Pst I Sma I EcoR I 含抗原基 士 目的基因 因的DNA 抗原基因 表达 终止子 Pst I 载体 抗生素抗 性基因 质粒 Sma I_ 复制原点 卡那霉素 EcoR I 抗性基因 Apa I 135 班级 姓名 得分 A.图示过程需要的工具只有限制酶和载体 (4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过系 B.限制酶识别的核苷酸序列和切割位点是 统加工形成正确的空间结构才能有活性，所 特定的 以，选择 (填“I”或“Ⅱ”)构建获取 C.图中的质粒只能来自原核细胞 rHSA更有优势 D.限制酶作用于双链DNA中的氢键，将其： (5)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可 断开 以用 8.用PCR方法检测转基因植株是否成功导入 方法来进行检验。 目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号：10.下列几幅图与基因工程有关。图1为限制 为DNA标准样液(Marker),10号为蒸馏 酶EcoR I的识别序列，图2表示目的基因 水，PCR时加入的模板DNA如图所示。以： 及限制酶切割位点，图3表示目的基因上 下据此作出的分析，不合理的是 的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列 bp 1 2 3 45678910 问题： 2000 EcoR I EcoR I 目的基因 EcoR I 1Q00 GaAttc 5 AD■ 500 —CTTAAG B Pst SmaHindⅢ 250 图2 100 图1 2号：野生型植株DNA3号：？ ① 4~9号：转基因植株DNA Q Pst 四环素 A.PCR产物的分子大小在250~500bp ② 抗性基因 0 HindⅢl→ 质粒 之间 EcoR I B.3号样品为不含目的基因的载体DNA 图3 图4 C.9号样品对应植株不是所需的转基因植株： (1)获得图2中目的基因的方法除PCR技 D.10号确定反应体系等对结果没有干扰 术外，还有 9.人血清白蛋白(HSA)是血浆中含量最丰富： 的蛋白质，在维持血浆渗透压、抗凝血等方 (2)采用PCR扩增目的基因的原理是 面起着重要作用，具有重要的医用价值。如 图是用基因工程技术获取重组HSA(rHSA) 图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有 的两条途径。请据图分析回答问题： 两种引物(DNA复制方向由5'3')。 (3)图3为目的基因中的某一片段，下列有 农杆菌 水稻 水稻胚乳细胞中 受体细胞 的rHSA HSA基因 关叙述错误的是 (填下列字母，不 大肠杆菌 大肠杆菌中的rHSA 定项)。 (1)获取的HSA基因可以利用 a.该片段的基本骨架由脱氧核糖与磷酸交 技术进行快速扩增，这一过程需要以HSA: 替连接而成 基因的一段序列合成的 ,以及 b.该片段含A一T碱基对比较多，故其结 酶等条件。 构比较稳定 (2)一个基因表达载体除了目的基因外，还 c.若利用PCR扩增该片段，则需解旋酶将 应包括 等。 ①氢键全部解开 (3)为了提高Ⅱ过程的导入成功率，通常用： d.若该片段复制6次，则需要碱基A的数 处理大肠杆菌。 量至少是252个 136 班级 姓名 得分 (4)在构建目的基因表达载体时，用PstI、 下列有关叙述，正确的是 ( EcoR I两种酶同时切割目的基因和质粒， A.将含有目的基因的DNA与质粒分别用 是为了防止一种酶切割时产生 EcoR I酶切，在DNA连接酶作用下，生 ,从图2切割下目的基因需要消耗 成由两个DNA片段连接形成的产物有 个水分子。不选用限制酶PsI: 两种 和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切： B.DNA连接酶的作用是将酶切后得到的 割的原因是 黏性末端连接起来，形成一个重组质粒 时形成两个磷酸二酯键 创新拓展练0… C.为了防止目的基因反向连接和质粒自行 环化，酶切时可选用的酶是EcoR I和 11.(不定项)RT-PCR是将RNA逆转录 Bam HI (RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相 D.能在含青霉素的培养基中生长的受体细 结合的技术，可利用此技术获取目的基因， 胞表明该目的基因己成功导入该细胞 具体过程如图所示，以下说法错误的是 13.(不定项)基因工程是一种DNA操作技术， 其表达载体的构建和检测筛选是两个重要 3 步骤。如图1为某种质粒简图，箭头所指 3 5 CDNA 分别为限制酶EcoR I、BamH I的酶切位 3 5B 点。已知目的基因X的两端分别有包括 5 5 EcoR I、BamH I在内的多种酶的酶切位 点。图2表示运用影印培养法（指在一系 A.设计扩增目的基因的引物时需考虑基因 列平板培养基的相同位置上接种并培养出 表达载体的序列 相同菌落的一种微生物培养方法)检测表 B.AT含量高的引物在与模板链结合时，需 达载体是否导入大肠杆菌。下列有关叙述 要更高的温度 错误的是 C.过程I需要加入缓冲液、原料、耐高温的 DNA聚合酶和引物A等 青霉素启动子EcoR I 培养基B 质粒 抗性基因 BamH I 菌落 12 D.该技术用于对某些微量RNA病毒的检 四环素 12 抗性基因 终 54.6 、复制原点 测，可提高检测的灵敏度 大肠杆菌 培养基A 12.如图为某种质 图1 图2 EcoR I 粒的简图，小箭 BamH I A.同时使用EcoR I和BamH I切割质粒， 头所指分别为 青霉素 可避免酶切后质粒的自身环化 抗性基因 限制性内切核 四环素 B.转化方法是将质粒表达载体溶于缓冲液 酸酶EcoR I、 抗性基因 后与经Ca+处理的大肠杆菌混合 BamH I的酶 C.培养基A和培养基B分别含有四环素和 切位点，P为转录的启动部位。已知目的 青霉素 基因的两端有EcoR I、BamH I的酶切位 D.从筛选结果分析，含目的基因X的菌落 点，受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。 是1、2、3、5 137 班级 姓名 得分 14.图甲为培育转基因生物时选用的载体，图 融合基因，如图甲所示，其中“ATGTGCA” 乙是含有目的基因的一段DNA序列，图中 为P基因编码链起始序列。将该重组载体 标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述： 导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序 错误的是 列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨 四环素抗性基因 BamH I 基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序 Bel I BamH I引物甲 HindⅢ 质粒 BamH I 列与P不同。据图甲分析，出现该问题的 >HindⅢ 氨苄青霉素 Bcl I Sau3A I 原因是 复制原点 抗性基因 的引物丙引物乙 基因 甲 A.若通过PCR技术提取该目的基因，应该 修改扩增P基因时使用的带有EcoR I识 选用引物甲和引物丙 别序列的引物来解决该问题，具体修改方 B.构建表达载体时应选用BclI和HindⅢ 案是 这两种限制酶以及DNA连接酶 C.若将基因表达载体导人大肠杆菌中，需 EcoR I BamH I 重组载体 的部分结构 启动孔 P基因 终止了 用Ca2+处理大肠杆菌 放大 编码FLAG的序列 D.只利用含四环素的培养基就可以直接筛： EcoR I BamH I DNA编码链ATG GAC·AAG GCG AAT TCA TGT GCA·GGA TCC 选出成功导入表达载体的受体细胞 氨基酸序列Met Asp·Lys Ala Asn Ser Cys Ala Cly Ser FLAG 15.(2022·山东高考)某种类型的白血病由蛋 注：DNA编码链为转录时所用模板链的互补链 甲 白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别 (3)融合蛋白表达成功后，将FLAG-P、 并降解，药物A可通过影响这一过程对该 FLAG-P△、药物A和UBC按照图乙中 病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病 的组合方式分成5组。各组样品混匀后分 的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白 别流经含FLAG抗体的介质，分离出与介 FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特 质结合的物质并用UBC抗体检测，检测结 定氨基酸序列的P,FLAG是一种短肽，连 果如图丙所示。已知FLAG-P和FLAG 接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能与含！ P△不能降解UBC,由①②③组结果的差异 有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或： 推测，药物A的作用是 P△的功能 ；由②④组或③⑤组的差异 (1)为构建重组载体，需先设计引物，通过 推测，P△中缺失的特定序列的作用是 PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因 的引物需满足的条件是 ①②③④⑤注： 为使 FLAG-P “+”表示有 FLAG-P△- ++ “”表示无 ①②③④⑤ PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添 药物A +一 十 UBC +++++ UBC- 乙 丙 加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别 (4)根据以上结果推测，药物A治疗该病的 序列应添加在引物的 (填“3'端”或 机理是 “5端”)。 (2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插： 人载体后，与编码FLAG的序列形成一个 138