第35讲 微生物的培养技术和应用 （专项训练）（黑吉辽蒙专用）2026年高考生物一轮复习讲练测

第35讲 微生物的培养技术和应用 目录 01 课标达标练 【题型一】微生物的基本培养技术 【题型二】微生物的选择培养与技术 02 能力突破练（新考法+新情境+新角度+新思维） 03 高考溯源练（含2025年高考真题） 【题型一】微生物的基本培养技术 1．某品牌推出了一款“气泡酸奶”，其独特之处在于酸奶中含有大量气泡，口感类似碳酸饮料。该产品是通过在传统酸奶发酵过程中额外添加酵母菌（如酿酒酵母）进行二次发酵制成的。下列说法错误的是（　　） A．乳酸菌是厌氧细菌，只分布在无氧环境中 B．酸奶中的气泡主要是酵母菌无氧呼吸产生的CO2，与乳酸菌无关 C．二次发酵前需调节环境条件以确保酵母菌活性 D．若要进行乳酸杆菌的纯培养，需要在培养基中添加维生素 【答案】A 【详解】A、乳酸菌是厌氧细菌，但“只分布在无氧环境中”表述错误。厌氧菌在有氧环境中可能被抑制或死亡，但并非完全不存在，例如在氧气含量较低的环境中仍可能存活，A错误； B、酸奶中的气泡是酵母菌无氧呼吸产生的CO₂。乳酸菌进行乳酸发酵时不产生CO₂，因此与乳酸菌无关，B正确； C、二次发酵前需调节温度、pH等条件，以确保酵母菌在适宜环境中进行无氧呼吸产气，C正确； D、乳酸杆菌为异养型细菌，其纯培养常需在培养基中添加维生素等生长因子以满足营养需求，D正确。 故选A。 2．为探究青霉素对某种细菌的选择作用，将菌液涂布在培养基平板上，①放置不含青霉素的滤纸片，②③④放置含等量青霉素的滤纸片，培养结果如图。下列相关叙述错误的是（    ）    A．培养基中应含有细菌生长所需的碳源、氮源等营养物质 B．盖上皿盖后，应将培养皿倒置并放在适宜温度下培养 C．培养过程中青霉素会诱导该细菌产生多种方向的变异 D．若从a处附近挑取细菌，重复上述操作，抑菌圈直径变小 【答案】C 【详解】A、培养基的基本成分包括碳源、氮源、水和无机盐等，这是细菌生长所必需的营养物质，所以培养基中应含有细菌生长所需的碳源、氮源等营养物质，A正确； B、盖上皿盖后，将培养皿倒置并放在适宜温度下培养，这样可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，B正确； C、变异是不定向的，在使用青霉素之前，细菌已经存在多种变异类型，青霉素只是对这些变异类型进行选择，而不是诱导细菌产生多种方向的变异，C错误； D、从a处附近挑取细菌，a处附近的细菌对青霉素的抗性较强，重复上述操作，经过多次选择，细菌的抗药性会增强，抑菌圈直径变小，D正确。 故选C。 3．野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长；氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长。某大肠杆菌氨基酸营养缺陷型突变株纯化的部分流程如图所示，其中①、②、③、④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，甲、乙为菌落。下列叙述正确的是（　　）    A．图中①②③是完全培养基 B．运用涂布平板法对菌液中的活菌进行计数统计结果可能比实际活菌数多 C．可使用紫外线处理野生型细菌使其发生染色体变异获得亮氨酸缺陷型突变株 D．为获得目的菌株，可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养 【答案】D 【详解】A、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，根据题干信息和图形分析，图中①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误； B、以运用稀释涂布平板法对菌液中的活菌进行计数，该方法统计的数目比实际活菌数少，原因是当两个或多个菌落靠近到一定程度连在一起时，平板上记录的只能作为一个菌落，B错误； C、大肠杆菌属于原核生物，细胞内不含染色体，C错误； D、据图可知，甲在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明甲是氨基酸缺陷型菌落，故为获得目的菌株，可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养，D正确。 故选D。 4．消毒和灭菌是两个不同的概念。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物（含芽孢和孢子）；消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。下列适用于消毒处理的是（　　） ①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀 A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩ C．①②③④⑤⑥⑧ D．以上全部 【答案】A 【详解】①皮肤应该进行消毒处理，①正确； ②饮用水应该进行消毒处理，②正确； ③牛奶应该进行消毒处理，一般采用巴氏消毒法，③正确； ④注射器需要进行灭菌处理，④错误； ⑤培养皿需要进行灭菌处理，一般采用干热灭菌，⑤错误； ⑥接种环需要进行灭菌处理，一般采用灼烧灭菌，⑥错误； ⑦培养基需要进行灭菌处理，一般采用高压蒸汽灭菌，⑦错误； ⑧果汁需要进行消毒处理，⑧正确； ⑨酱油需要进行消毒处理，⑨正确； ⑩手术刀应该进行灭菌处理，⑩错误。 故选A。 5．防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，下列关于微生物的基本培养技术的叙述，正确的是（　　） A．培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质 D．接种时，为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 【答案】A 【详解】A、培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染，A正确； B、倒平板时，不能将培养皿盖完全打开，而应只打开一条稍大于瓶口的缝隙，防止空气中的杂菌污染培养基，B错误； C、培养不同细胞的培养基所必须含的物质不同，培养自养菌一般不需要添加碳源，分离固氮菌的培养基中，不需加入氮源，C错误； D、接种时，接种环经火焰灭菌之后还需要冷却才能挑取菌落，以免高温杀死菌种，D错误。 故选A。 6．微生物的实验室培养有较高的技术要求，下列操作不符合规范的是（    ） A．倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置 B．配制培养基时，应先调节pH，再进行灭菌处理 C．浸泡在酒精中的玻璃涂布器无需再灼烧灭菌 D．用平板划线法分离大肠杆菌时，需要多次灼烧接种环 【答案】C 【详解】A、倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置，防止水珠落到培养基上，A正确； B、配制培养基的过程中，为了防止调pH时造成对培养基的污染，应先调节 pH，再进行灭菌处理，B正确； C、为防止杂菌污染，浸泡在酒精中的玻璃涂布器后需再灼烧灭菌，C错误； D、用平板划线法分离大肠杆菌时，第一次划线前和每次划线后，都要对接种环进行灼烧灭菌，D正确。 故选C。 7．某同学为验证转化因子的本质进行了系列实验，部分如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．步骤①中，利用了酶的专一性和自变量控制的“减法原理” B．步骤②中，加入甲或乙的量属于无关变量，应保持相等 C．步骤③中，用液体培养基可能比固体培养基更利于细菌转化 D．步骤④中，可在显微镜下观察菌落或细胞形态来检测实验结果 【答案】D 【详解】A、步骤①中，蛋白酶只能分解蛋白质，DNA酶只能分解DNA，利用了酶的专一性；同时分别用蛋白酶和DNA酶处理S型细菌的细胞提取物，是对自变量（处理提取物的酶种类）的控制，遵循了“减法原理”，A正确； B、步骤②中，加入的甲（经蛋白酶处理的提取物）或乙（经DNA酶处理的提取物）的量属于无关变量，无关变量应保持相等，这样才能保证实验的单一变量，B正确； C、液体培养基中细菌与转化因子接触更充分，比固体培养基更利于细菌转化，C正确； D、肉眼就可以观察到菌落，D错误。 故选D。 【题型二】微生物的选择培养与技术 8．关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验操作，错误的是（　　） A．配制的选择培养基要以尿素为唯一氮源 B．高压蒸汽灭菌后的培养基在接种前和接种后均要倒置保存 C．可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 D．同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数 【答案】C 【详解】A、本实验的目的是“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”，因此，配制的选择培养基要以尿素为唯一氮源，A正确； B、高压蒸汽灭菌后的培养基在接种前和接种后均要倒置保存，这样可以避免冷凝水滴落到培养基的表面造成污染，B正确； C、本实验的目的是“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”，因此接种的方法只能是稀释涂布平板法，不能用平板划线法，该接种方法不能用于计数，C错误； D、同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数，这样可以避免菌落的遗漏，D正确。 故选C。 9．幽门螺杆菌是导致胃炎、胃溃疡的常见病原体。临床上常用尿素呼气试验进行无创诊断，其原理是让受试者口服含13C标记的尿素胶囊，随后检测呼出气体中是否含13CO2（反应式见下图）。下列有关说法正确的是（　　） A．13CO2是幽门螺杆菌通过细胞呼吸产生的 B．脲酶可为13C尿素分解提供活化能，提高反应速率 C．毕希纳利用丙酮从刀豆种子中分离出脲酶并证明其是蛋白质 D．若受试者胃内存在其他可分解尿素的细菌，则检测结果不准确 【答案】D 【详解】A、幽门螺杆菌分解尿素产生13CO2的过程是脲酶催化尿素水解的化学反应，并非通过细胞呼吸产生，A错误； B、脲酶的作用是降低反应的活化能，而非提供活化能，B错误； C、毕希纳通过实验证明酵母菌研磨液能使葡萄糖发酵，提出“酶在细胞外也可起作用”；萨姆纳从刀豆中提取脲酶并证明其化学本质是蛋白质，C错误； D、其他分解尿素的细菌也会产生13CO2，导致无法区分CO2是否来源于幽门螺杆菌，干扰检测结果，D正确。 故选D。 10．下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（    ） A．⑨计数得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较多 B．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂 C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求 D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌 【答案】A 【详解】A、⑨计数方法为稀释涂布平板法，只能统计活菌数，且当两个或多个细胞聚集时会形成1个菌落；而细菌计数板计数法无论活菌还是死菌都统计在内，因此稀释涂布平板法统计得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较少，A错误； B、④和⑤所用培养基从物理性质分析，④是液体培养基，没有添加琼脂；⑤是固体培养基，加有琼脂，B正确； C、该实验是为了分离得到纤维素分解菌，④培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用纤维素的微生物才能生长繁殖，从而筛选出纤维素分解菌，此外还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求，C正确； D、当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来鉴别纤维素分解菌，即可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌，D正确。 故选A。 11．科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程如图，经步骤③最后一次稀释之后若在 3 个平板上分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，得到的结果是 39、38、37。下列叙述正确的是（　　）    A．步骤②振荡 20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中 B．步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径与菌落直径比值较小的菌落培养 C．步骤⑤中的接种方法为平板划线法，3 次划线时需要对接种环灼烧 3 次 D．每克土样中的活菌数为 3.8×104个，该法统计的结果往往比实际值偏低 【答案】A 【详解】A、步骤②振荡 20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，减小实验误差，A正确； B、溶磷圈直径与菌落直径的比值较大，说明细菌分解磷酸盐的能力较强，所以应选择溶磷圈直径与菌落直径比值较大的菌落，B错误； C、采用步骤⑤中的平板划线法接种时，由于每次划线前后都要灼烧接种环，而图中共有 3 个划线区域，故接种环需要灼烧 4 次，C错误； D、步骤③进行了 3 次稀释，每次稀释了 10 倍，则共将土壤悬浮液稀释了 104 倍，（39 + 38 + 37）÷3÷0.1×104 = 3.8×106个/克；由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低，D错误。 故选A。 12．饮用被细菌污染的水后，细菌在消化道内会繁殖并产生毒素，引起急性肠胃炎。某同学利用图1所示方法，检测饮用水的细菌含量，图2为不同稀释度下得到的平板。下列相关叙述不正确的是（    ） A．配制图1所示固体培养基时，需要先调整到适宜的pH，再灭菌 B．图1中①～③三个培养皿菌落数的平均值乘稀释倍数即为样品中细菌数 C．图2是稀释涂布平板法的结果，统计的菌落数比活菌的实际数目要少 D．图2所示的平板中，a和c的计数结果不适合用于计算样品中的细菌数 【答案】B 【分析】纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将菌液涂布到制备好的培养基上进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 【详解】A、配制图1所示固体培养基时，需要先调整到适宜的pH，再分装、灭菌，A正确； B、图1中①～③三个培养皿菌落数的平均值乘稀释倍数再乘以10（各接种0.1mL），即为样品中细菌数，B错误； C、图2是稀释涂布平板法的结果，统计的菌落数比活菌的实际数目要少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C正确； D、为了保证结果准确，在每个稀释浓度内，至少要涂布3个平板，而且选择菌落数在30～300的平板进行记数。图2所示的平板中，a中菌落数太多，c中菌落数太少，a和c的计数结果不适合用于计算样品中的细菌数，D正确。 故选B。 13．某兴趣小组在“探究培养液中酵母菌种群数量变化”的实验中，将酵母菌培养液稀释1000倍后，用血细胞计数板（规格为lmm×1mm×0.1mm，由400个小格组成）进行计数，观察到一个中格的菌体数如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．对酵母菌逐个计数很困难，常采用取样器取样的方法计数 B．据图估算培养液酵母菌的种群密度约为1.92×107个/ml C．将培养液滴入血细胞计数板的计数室，待酵母菌全部沉降后盖上盖玻片 D．用该方法测得的结果往往比实际值偏大，可用台盼蓝染色法区分活菌和死菌 【答案】D 【详解】A、酵母菌体积微小，因此，对酵母菌逐个计数很困难，常采用抽样检测法借助显微镜和血细胞计数板进行计数，A错误； B、图中一个中格（16小格）内有12个酵母菌，血细胞计数板一个大方格有25个中格，每个大方格体积为1mm×1mm×0.1mm = 10-4mL。先计算一个大方格内的酵母菌数：一个中格12个，一个大方格有16个中格，则一个大方格内酵母菌数为12×16 = 192个。因为培养液稀释了1000倍，所以培养液酵母菌的种群密度为192×104×1000 = 1.92×109个/mL，B错误； C、用血细胞计数板计数时应先盖盖玻片，将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，稍等片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部，再进行观察计数，C错误； D、用图示方法测得的结果往往比实际值偏大，因为统计过程中既统计了活菌也统计了死菌，因此为了统计活菌数目，可用台盼蓝染色法区分活菌和死菌，D正确。 故选D。 14．为探究不同类型的口罩的防传染效果，某兴趣小组进行了如下实验：让某同学分别佩戴不同类型的口罩并在距离培养基20cm处讲话，然后将培养基进行培养。下列叙述错误的是（    ） A．该实验应设置空白培养基和不佩戴口罩讲话组用于对照 B．应将接种后的培养基置于30℃的恒温箱中进行培养 C．接种培养基上的菌落数越少，说明口罩的防传染效果越好 D．应对实验后的培养基进行灭菌处理 【答案】B 【详解】A、实验中设置空白培养基（不处理）用于检测培养基是否被污染，不佩戴口罩讲话组作为阳性对照，以比较口罩的防护效果，A正确； B、人体口腔中细菌的最适生长温度通常接近体温（约37℃），若在30℃下培养可能导致菌落生长不充分，影响实验结果准确性，B错误； C、菌落数越少，说明口罩阻隔微生物的效果越好，C正确； D、实验后的培养基可能含有致病菌，必须灭菌处理以防止污染环境，D正确。 故选B。 1．脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（    ） A．镍是组成脲酶的重要元素 B．镍能提高尿素水解反应的活化能 C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 【答案】B 【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2、只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 【详解】A、根据题意，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组成脲酶的重要元素，A正确； B、脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降低尿素水解反应的活化能有关，B错误； C、产脲酶细菌可利用NH4Cl里的氮源进行代谢活动，因此产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖，C正确； D、产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源，不能产脲酶的细菌则无法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D正确。 故选B。 2．垃圾分类有利于变废为宝，减少环境污染。如图为分类后餐厨垃圾资源化处理的流程设计。下列叙述错误的是（    ）    A．压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品 B．添加的木屑有利于堆肥体通气，还可作为某些微生物的碳源 C．X中需要添加合适的菌种，才能产生沼气 D．为保证堆肥体中微生物的活性，不宜对堆肥体进行翻动 【答案】D 【分析】生态系统的功能包括能量流动、物质循环和信息传递，三者缺一不可；物质循环是生态系统的基础，能量流动是生态系统的动力，信息传递则决定着能量流动和物质循环的方向和状态；信息传递是双向的，能量流动是单向的，物质循环具有全球性。 【详解】A、压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品，有利于实现物质的循环再生和能量的多级利用，A正确； B、添加的木屑有利于堆肥体通气，木屑也可作为某些微生物的碳源，B正确； C、X中需要添加合适的菌种，通过分解有机物才能产生沼气，C正确； D、为保证堆肥体中微生物的活性，可以对堆肥体进行翻动，D错误。 故选D。 3．细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m³）。下列叙述错误的是（    ） A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理 B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置 C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值 D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高 【答案】D 【分析】稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 【详解】A、为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样器进行灭菌，对实验操作者的双手进行消毒，A正确； B、纯化培养时，为防止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正确； C、微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30～300的平板进行计数，以确保实验的准确性，C正确； D、使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细胞连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，D错误。 故选D。 4．下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（　　） A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比 B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大 C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌 D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定 【答案】A 【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。灭菌常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。 【详解】A、细菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物对营养物质的需求是不一样，通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比，A正确； B、通常细菌的生长速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定细菌的大于酵母菌的，与细菌的种类有关，部分细菌的菌落小于酵母菌，B错误； C、通常细菌和酵母菌的培养基都可以用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误； D、血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等，D错误。 故选A。 5．根瘤菌是最早用于生物肥料研发的微生物，其菌肥生产需经菌种选育、种子液制备、发酵罐发酵、质量检测等流程。下列说法正确的是（　　） A．菌种选育时，需用含碳源、氮源等营养的培养基进行筛选 B．在质量检测中的活菌计数时，可采用涂布平板法进行接种 C．发酵罐发酵条件不同，仅影响代谢产物含量不影响其种类 D．田间应用时，根瘤菌主要通过产生有机酸来增加土壤肥力 【答案】B 【详解】A、根瘤菌可以利用空气中的氮，在进行菌种选育时，培养基不含氮源，A错误； B、常采用涂布平板法进行接种对菌体进行计数，B正确； C、发酵罐发酵条件不同，既影响代谢产物含量也影响其种类，如氧气条件，可影响厌氧型菌和好氧型菌的选择，C错误； D、根瘤菌可以将空气中的氮气转变为含氮养料（NH3等），有利于增加土壤肥力，D错误。 故选B。 6．关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列说法错误的是（　　） A．取样时要选择表层土，取土样的铁铲和取样纸袋要进行灭菌处理 B．本实验中使用的平板较多，需要在各培养皿底上做好标记避免混淆 C．利用显微镜直接计数结果通常较稀释涂布平板法进行计数的结果偏高 D．若涂布0.2mL稀释103倍的培养液，获得菌落平均值为58，则每克土样中尿素分解菌数为2.9×105个 【答案】A 【详解】A、取样时一般要铲去表层土，取距地表3~8cm的土壤层，A错误； B、本实验中使用的平板较多，由于菌落是涂布在培养皿底部倒置培养，需要在各培养皿底上做好标记避免混淆，B正确； C、利用显微镜直接计数时活菌和死菌都会被统计，而稀释涂布平板法仅能统计活菌的数目，且多个菌可能共同形成一个菌落，因此前者的统计结果会比后者偏高，C正确； D、若取稀释103倍的0.2mL培养液进行涂布，获得菌落的平均值为58，根据公式C平均菌落数÷V涂布的体积数×M稀释倍数，可以计算出，58÷0.2×103=2.9×105个，即每克土样中尿素分解菌的数量为2.9×105个，D正确。 故选A。 7．下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（    ） A．⑨计数得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较多 B．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂 C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求 D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌 【答案】A 【详解】A、⑨计数方法为稀释涂布平板法，只能统计活菌数，而细菌计数板计数法无论活菌还是死菌都统计在内，因此稀释涂布平板法统计得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较少，A错误； B、④和⑤所用培养基从物理性质分析，④是液体培养基，没有添加琼脂；⑤是固体培养基，加有琼脂，B正确； C、该实验是为了分离得到纤维素分解菌，④培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用纤维素的微生物才能生长繁殖，从而筛选出纤维素分解菌，此外还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求，C正确； D、当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来鉴别纤维素分解菌，即可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌，D正确。 故选A。 8．随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。下列说法正确的是（　　）    A．诱变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，选择透明圈大的即为目的菌株 B．可使用紫外线进行诱变，无需筛选即可得到产纤维素酶高的菌种 C．能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株一定是纤维素分解菌 D．富集培养应使用液体培养基，目的是能得到更多能产纤维素酶的菌株 【答案】D 【分析】采用富集培养的方法筛选出高产纤维素酶菌株，经过的一般步骤是采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定，在进行富集培养前一般不对黑土壤进行高压蒸汽灭菌处理，避免杀死菌种。 【详解】A、变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，应选择透明圈直径/菌落直径值最大的为目的菌株，A错误； B、基因突变具有不定向性和多害少利性，因此使用紫外线进行诱变需要对菌株进行筛选，B错误； C、能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株可能是纤维素分解菌，也可能是一些自养型细菌，C错误； D、富集培养应使用液体培养基，有利于微生物与培养液的接触，有利于微生物的增殖，能得到更多能产纤维素酶的菌株，D正确。 故选D。 9．为探究某种细菌A抑制真菌B生长的原理，实验组将细菌A接种在A1平板上，B1平板中央接种直径为0.5cm的真菌B菌落，把两个培养皿对扣，两平板上菌株无接触，放在适宜环境中培养5d，菌体生长情况如图中甲组所示。下列叙述正确的是（　　） A．接种前需对培养基和培养皿通过干热法进行灭菌 B．需将含有细菌A的菌液进行稀释后涂布在A1平板上 C．乙组为对照组，且A2平板上接种的是无菌水 D．细菌A通过与真菌B竞争营养物质抑制其生长 【答案】C 【详解】A、培养基常用高压蒸汽灭菌法，培养皿常用干热灭菌发，A错误； B、根据图片可知A1平板上应该是采用平板划线法得到的平板，B错误； C、乙组A2平板上接种的是无菌水，起对照作用，可排除其他因素的干扰，C正确； D、由题干 “两平板上菌株无接触” 可知，细菌A不是通过竞争营养物质抑制真菌B生长，可能是分泌了抑制真菌B生长的物质，D错误。 故选C。 10．发酵技术广泛应用于食品、医药、农业等领域。下列叙述正确的是（    ） A．菌落的大小、颜色、有无荚膜等肉眼可见的特征都可作为菌种鉴定的依据 B．显微直接计数法具有直观、快速和操作简便等优点，但测得结果往往偏小 C．防止杂菌污染是获得纯培养物的关键，对血清等生物制品常采用过滤除菌法 D．玻璃制品涂布器在使用前后都必须进行严格的消毒，避免杂菌污染培养基 【答案】C 【详解】A、菌落的大小、颜色等肉眼可见特征可用于菌种鉴定，但荚膜属于细菌个体结构，需借助显微镜观察，无法通过菌落直接判断，A错误； B、显微直接计数法具有直观、快速和操作简便等优点，但测得结果往往偏大，因为无法区分死菌与活菌，把死菌也计算在内了，B错误； C、防止杂菌污染是纯培养的关键，血清等不耐高温的生物制品需用过滤除菌法，避免高压灭菌破坏有效成分，C正确； D、涂布器需灭菌而非消毒，使用前需酒精浸泡后灼烧灭菌，使用后也需灼烧灭菌，仅消毒无法彻底杀灭芽孢等微生物，D错误。 故选C。 11．聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA的菌种，流程图如下。下列叙述正确的是（　　） A．步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上 B．步骤③所用的培养基中营养物质浓度越高，对嗜盐细菌的生长越有利 C．扩大培养所用的培养基应加入琼脂，放置摇床上培养，以便于挑取菌落获得纯化菌株 D．挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定各菌落中嗜盐细菌的PHA产量 【答案】D 【分析】1、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 2、微生物培养基需要为微生物繁殖提供碳源、氮源、水、无机盐等营养物质，此外还要满足微生物对特殊营养物质、pH和O2的需求。 3、培养基按照其物理状态可以分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。液体培养基常应用于工业或生活生产。 【详解】A、PHA是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，要筛选嗜盐细菌，步骤②可用稀释涂布平板法接种到含盐量较高的选择培养基上，A错误； B、步骤③培养基浓度过高，会导致菌体失水死亡，不利于嗜盐细菌的生长，B错误； C、扩大培养应选用液体培养基，液体培养基中无需加入琼脂，C错误； D、要挑选高产聚羟基脂肪酸酯（PHA）的嗜盐细菌，挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定各菌落中嗜盐细菌的PHA产量，进行比较，D正确。 故选D。 12．在生活饮用水中如果大肠杆菌含量超标，会造成细菌性痢疾，严重时会造成脱水，甚至会危及生命。可利用表中的培养基对生活饮用水中的大肠杆菌进行分离和计数，下列叙述正确的是（    ） 成分 蛋白胨 蔗糖 乳糖 K2HPO4 显色剂（伊红美蓝） 琼脂 含量 10.0g 5.0g 5.0g 2.0g 0.2g 12.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL A．根据用途划分该培养基属于选择培养基 B．在配制培养基时应先调节pH值，再灭菌后倒平板 C．使用后的培养基在丢弃前一定要经过消毒处理，以免污染环境 D．为防止杂菌污染，还可以向培养基中添加适量抗生素 【答案】B 【分析】分析表格可知，该培养基中加入了显色剂，属于鉴别培养基，该培养基中的碳源有蔗糖、乳糖和蛋白胨，蛋白胨还可提供氮源，在配制培养基时应先调节pH，再灭菌后倒平板，若先灭菌，后调PH，可能在调PH的过程中再次引发杂菌污染。 【详解】A、该培养基中含伊红美蓝显色剂，根据用途划分该培养基属于鉴别培养基，A错误； B、在配制培养基时应先调节pH值，再灭菌后倒平板，B正确； C、使用后的培养基在丢弃前一定要经过灭菌处理，以免污染环境，C错误； D、不可以在培养基中添加抗生素，以免影响大肠杆菌的生长，D错误。 故选B。 13．（不定项）泡菜汁中乳酸菌的分离与计数可采用稀释涂布平板法。下列叙述错误的是（    ） A．培养基要维持正常的pH，一般应在灭菌前调pH B．完成接种后，培养乳酸菌的平板需要放置在有氧环境下培养 C．稀释涂布平板法计数时，需将泡菜汁中的乳酸菌稀释至30~300个/mL D．用稀释涂布平板法统计活菌数目可能会比用细菌计数板统计的数目多 【答案】BCD 【分析】平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；稀释涂布平板法则是菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 【详解】A、培养基要维持正常的pH，一般应先调pH，再灭菌，A正确； B、乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型，所以完成接种后，培养乳酸菌的平板需要放置在无氧环境下培养，B错误； C、涂布时所用菌液通常不超过0.1mL，平板上的菌落数应介于30～300个，则涂布用的菌浓度应控制在300-3000个/mL，C错误； D、细菌计数板计数法统计细菌数时不能区分活菌和死菌，因而会使结果偏大，而用稀释涂布平板法计数时，则存在多个细菌形成一个菌落的情况，因而会使计数的结果偏小，故用稀释涂布平板法统计活菌数目可能会比用细菌计数板统计的数目少，D错误。 故选BCD。 14．（不定项）某兴趣小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了相关实验。下列叙述错误的有（    ） A．以尿素为唯一氮源的培养基上生长的微生物不一定都能合成脲酶 B．土壤样液先在锥形瓶内进行富集培养，再等比稀释后涂布计数 C．甲组中a培养基上的菌落连成一片，是稀释度不够造成的 D．以乙组计数，5g土壤中尿素分解菌的估算数目是2.8×107个 【答案】BCD 【详解】A、本实验是探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，因此图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，但在此培养基中能生长的微生物不一定都能合成脲酶，固氮菌也能在该培养基上生存，A正确； B、土壤样液先溶解在锥形瓶无菌水中进行稀释，未进行富集培养，B错误； C、甲组中a培养基上的菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的，菌液未分散开，C错误； D、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30 - 300的平板进行计数，乙组中三个平板的菌落数分别为275、285、280，均在30 - 300之间，应以乙组计数。 计算5g土壤中含分解尿素菌的估算数目时，应根据公式：每克样品中的菌株数 = （C÷V）×M（其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数）。5g该土壤含分解尿素的细菌数是（275+285+280）÷3÷0.1×105×5=1.4×109，D错误。 故选BCD。 15．（不定项）研究人员对布氏田鼠盲肠中的纤维素分解菌进行分离、鉴定，过程如图。下列说法正确的是（　　） A．①②③应在95%空气和5%氧气的气体环境中倒置培养 B．①②③中的培养基是以纤维素为唯一碳源的选择培养基 C．通过比较透明圈大小可知，甲分解纤维素的能力强于乙 D．若①②③菌落数分别为20、37、39，则内容物中纤维素分解菌密度为1.6×107个/mL 【答案】BC 【分析】1、刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，因此可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 2、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、分析题意，菌株是从盲肠中分离的厌氧菌，故平板培养时需置于厌氧环境中，A错误； B、要分离纤维素分解菌，①②③中的培养基应以纤维素为唯一碳源，这样只有能分解利用纤维素的微生物才能生存，从而起到选择作用，B正确； C、透明圈越大，说明该菌落的菌株分解纤维素的能力越强，从图中可以看出甲菌落周围的透明圈大于乙菌落周围的透明圈，所以甲分解纤维素的能力强于乙，C正确； D、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30 - 300的平板进行计数，①中菌落数为20，不在此范围内，应舍弃，所以计算时只用②③的数据。则内容物中纤维素分解菌密度为(37 + 39)/2÷0.2×105= 1.9×107个/mL，D错误。 故选BC。 16．合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。 (1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是 。 (2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。 (3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 ，冷却的目的是 。 (4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ，判断依据是 。（答出两点即可） (5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈 色。 【答案】(1)前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌 (2)5000 (3) 杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染 防止温度过高杀死菌种 (4) A A消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高 (5)黑 【详解】（1）显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法计数只计活菌数，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况，故前者的数量多于后者。 （2）从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，即稀释了10倍，1mL细菌原液中细菌浓度=（菌落数÷菌液体积）×稀释倍数=（100÷0.2）×10个=5000个。 （3）菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染，冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。 （4）A消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高，因此A消毒液杀菌效果最好。 （5）大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈黑色。 17．自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。 (1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。 (2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。 (3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现 。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。 (4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱） 。 【答案】(1)氮源、碳源 (2)A菌能在培养平板中生长繁殖 (3) 稀释 溶菌圈 (4)假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂 【分析】微生物的营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等。微生物的培养基按其特殊用途可分为选择性培养基和鉴别培养基，培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。 【详解】（1）蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。 （2）将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。 （3）将含菌量较高的湖泊水样稀释后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶菌圈。　 （4）根据实验材料和设备，圆形滤纸小片可用于吸收某种物质，离心机可用于分离菌体和细菌分泌物，为探究P菌溶解破坏A菌的方式，可假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂。 18．根瘤菌与豆科植物之间是互利共生关系，根瘤菌侵入豆科植物根内可引起根瘤的形成，根瘤中的根瘤菌具有固氮能力。为了寻找抗逆性强的根瘤菌，某研究小组做了如下实验：从盐碱地生长的野生草本豆科植物中分离根瘤菌；选取该植物的茎尖为材料，通过组织培养获得试管苗（生根试管苗）；在实验室中探究试管苗根瘤中所含根瘤菌的固氮能力。回答下列问题。 (1)从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌进行培养，可以获得纯培养物，此实验中的纯培养物是 。 (2)取豆科植物的茎尖作为外植体，通过植物组织培养可以获得豆科植物的试管苗。外植体经诱导形成试管苗的流程是：外植体愈伤组织试管苗。其中①表示的过程是 ，②表示的过程是 。由外植体最终获得完整的植株，这一过程说明植物细胞具有全能性。细胞的全能性是指 。 (3)研究小组用上述获得的纯培养物和试管苗为材料，研究接种到试管苗上的根瘤菌是否具有固氮能力，其做法是将生长在培养液中的试管苗分成甲、乙两组，甲组中滴加根瘤菌菌液，让试管苗长出根瘤。然后将甲、乙两组的试管苗分别转入 的培养液中培养，观察两组试管苗的生长状况，若甲组的生长状况好于乙组，则说明 。 (4)若实验获得一种具有良好固氮能力的根瘤菌，可通过发酵工程获得大量根瘤菌，用于生产根瘤菌肥。根瘤菌肥是一种微生物肥料，在农业生产中使用微生物肥料的作用是 （答出2点即可）。 【答案】(1)由根瘤菌繁殖形成的单菌落　 (2) 脱分化 再分化 细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。 (3) 无氮源 接种到试管苗上的根瘤菌具有固氮能力 (4)①促进植物生长，增加作物产量　②能够减少化肥使用，改良土壤，减少污染，保护生态环境 【分析】在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。获得纯培养物的过程称纯培养，包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。 细胞全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。 植物组织培养是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体等进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。 【详解】（1）在微生物学中将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体成为纯培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体。对于本实验来说就是根瘤菌繁殖得到的单菌落。 （2）植物组织培养的过程先是脱分化形成愈伤组织，后再分化形成试管苗。细胞全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。 （3）控制变量，因为甲组和乙组的区别是固氮菌，所以要保证培养液中没有氮源，探究的是接种到试管菌上的根瘤菌是否具有固氮能力，如果甲长得好，说明接种到试管菌上的根瘤能具有固氮能力。 （4）微生物肥料除了能够促进植物生长，起到肥料的作用之外，能够减少化肥的使用，改良土壤，保护环境。 19．某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。    回答下列问题。 (1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是 。 (2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是 （答出1点即可）。通常，可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项有 （答出2点即可）。 (3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是 。但是在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶盖，原因是 。发酵液中的乙醇可用 溶液检测。 (4)本实验收集的淋洗液中的 可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是 。 【答案】(1)菌T能够分泌纤维素酶 (2) 为合成微生物细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂） ①把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除；②为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15~30 min；③无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央，有利于蒸汽流通；④灭菌完成后，应使锅内蒸气压力缓慢降低，排气时间不少于10一12分钟。 (3) 制造无氧环境 排出二氧化碳 酸性的重铬酸钾溶液 (4) 葡萄糖 节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】（1）菌T能够分泌纤维素酶，纤维素酶能将纤维素最终分解为葡萄糖，因此在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解。 （2）培养基的主要成分：水、碳源、氮源、无机盐，其中氮源主要为合成微生物的细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂）。 高压蒸汽灭菌法的注意的事项有①把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，如果高压锅内的空气未排除或未完全排除，则蒸汽不能达到饱和，蒸汽的温度未达到要求的高度，结果导致灭菌的失败；②为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15~30 min；③无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央，有利于蒸汽流通；④灭菌完成后，应使锅内蒸气压力缓慢降低，排气时间不少于10一12分钟，否则锅内蒸气压力突然降低，液体突然沸腾，冲走瓶盖，使液体喷出或使容器破裂。 （3）果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，将酵母菌接种到灭菌后的培养基中进行酒精发酵，酒精发酵需要在无氧的条件下进行，此时拧紧瓶盖的主要目的是制造无氧环境。酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，在发酵过程中密闭，所以需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放出二氧化碳，酒精可用酸性重铬酸钾溶液来检测，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 （4）与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，利用纤维素为原料生产乙醇具有节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广等优点。 20．某研究小组分离提纯葡萄皮上的野生酵母菌时，选取了从自然界中采集到的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中进行培养。请回答下列问题： (1)该研究小组成功分离出某品种的酵母菌后，取等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中,并分别置于转速为150 r/min、200 r/min、250 r/min的摇床上培养，检测结果如图1所示，摇床转速为250 r/min的酵母菌种群密度大的原因是 。 (2)图2是采用血细胞计数板直接计数和稀释涂布平板法计数两种方法计数培养液中酵母菌数量时得到的结果，其中采用稀释涂布平板法计数得到的是曲线 ，下列判断依据中正确的有 （填序号）。 ①稀释涂布平板法只计数活的酵母细胞，死细胞无法形成菌落 ②采用血细胞计数板直接计数时，可能会将死细胞与活细胞一起计数 ③采用稀释涂布平板法计数时，两个或多个细胞连在一起时，只能观察到一个菌落 ④采用稀释涂布平板法计数时，可能因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 (3)通过如图3所示的方法进行纯化培养时，用移液枪取最终的酵母菌稀释液0.1mL滴在培养基表面，然后将沾有少量酒精的涂布器 后再进行涂布。在恒温培养箱中培养一段时间后，其中某组的3个平板上菌落数分别为69个、52个、44个，则可以推测原酵母菌液中每毫升含菌数为 个。计数一般要选取 进行计数。 【答案】(1)摇床转速越高，提供的氧气越充足，酵母菌代谢旺盛，增殖快 (2) 乙 ①② (3) 灼烧冷却 5.5×107 菌落数在30-300的平板 【分析】1、酵母菌是兼性厌氧型的单细胞真菌，能够进行产酒精的无氧呼吸，酵母菌对青霉素不敏感，酵母菌在有氧条件下可以迅速增殖。进行酵母菌计数时需要将菌液进行梯度稀释。 2、微生物常见的接种的方法： （1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 （2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）根据题意可知，摇床转速越高，提供的氧气越充足，从图中可看出摇床转速越高，酵母菌代谢旺盛，增殖快，因此繁殖的速度和总量越高，种群密度最大。 （2）根据图2可知，由于稀释涂布平板法只计数活的酵母菌，血细胞计数板直接计数会将死细胞一起计数，稀释涂布平板法获得的菌落数目比血细胞计数法计数时微生物数目少，因此采用稀释涂布平板法计数的是曲线乙，因此判断依据有①②。 （3）在培养基上进行涂布时，要将涂布器灼烧（杀死杂菌）冷却后（以免杀死菌种）才能进行操作；根据图解可知菌液被稀释了105倍（M），同时选择菌落数目在30-300的进行计数，所以每毫升含菌数为 （69+52+44）÷3÷0.1×105=5.5×107个。为保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数。 1．（2025·四川·高考真题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（    ） A．用平板划线法能测定X菌组中的活菌数 B．Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高 C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种 D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 【答案】C 【分析】接种最常用的方法： （1）平板划线分离法：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 （2）稀释平板法：首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。 【详解】A、平板划线法主要用于微生物的分离和纯化，不能用于测定活菌数，测定活菌数常用稀释涂布平板法，A错误； B、Y菌组微塑料残留率较高，说明Y菌对微塑料的降解能力相对较弱，而不是菌浓度高，微塑料残留率与菌对微塑料的降解能力有关，而非直接与菌浓度相关，B错误； C、由图可知，X+Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组，说明混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种，C正确； D、该培养基中含有蛋白胨，能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等，但不一定都能降解微塑料，D错误。 故选C。 2．（2025·云南·高考真题）黄酒是我国古老的发酵酒之一，传统酿制中，先用蒸煮过的小麦或麸皮为原料，对之前发酵留存的少量酒曲（曲种）进行扩大制曲；再将酒曲和蒸煮后的糯米、大米混合处理一段时间后，添加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨成品。下列说法错误的是（　　） A．小麦、麸皮等原料为酒曲中微生物的生长繁殖提供了碳源和氮源等营养物质 B．为避免制曲过程被杂菌污染影响黄酒品质，扩大制曲前需对留存的酒曲灭菌 C．糯米、大米蒸煮后立即与酒曲混合会导致酶空间结构改变而降低其催化效率 D．将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，是为了获得酒母发酵时的底物葡萄糖 【答案】B 【分析】酵母菌是兼性厌氧菌，有氧呼吸产生二氧化碳和水，无氧呼吸产生酒精和二氧化碳；酿酒利用的是酵母菌进行无氧呼吸，从而产生酒精。 【详解】A、小麦、麸皮等原料含有蛋白质、糖类等多种营养成分，蛋白质可以为微生物提供氮源，糖类等可以为微生物提供碳源，所以能为酒曲中微生物的生长繁殖提供碳源和氮源等营养物质，A正确； B、扩大制曲前对留存的酒曲不能灭菌，因为酒曲本身含有发酵所需的菌种，若灭菌会杀死这些菌种，导致无法进行正常的发酵过程，B错误； C、糯米、大米蒸煮后温度较高，立即与酒曲混合，高温会使酶的空间结构改变，导致酶活性降低，从而降低其催化效率，C正确； D、酒曲中含有淀粉酶等酶类，将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，淀粉酶可将糯米、大米中的淀粉分解为葡萄糖，从而为后续酒母（含酵母菌）发酵提供底物葡萄糖，D正确。 故选B。 3．（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（　　） A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 【答案】B 【分析】微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线主要是用来纯化的，稀释涂布主要用来计数；此外，利用分离对象对某一营养物质的“嗜好”，专门在培养基中加入该营养物质，制备选择培养基，从而使该微生物大量增殖，也可用于微生物的分离和纯化。 【详解】A、稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A错误； B、平板划线法操作后需设置未接种的平板作为空白对照，以验证培养基灭菌是否彻底，B正确； C、醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误； D、筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨（含其他氮源），则无法筛选目标菌，D错误。 故选B。 4．（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（    ） A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 【答案】B 【分析】微生物常见的接种方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误； B、将土样加入无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B正确； C、连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开始无法有效分离单菌落，C错误； D、斜面培养基保存菌种需置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法（-20℃），室温下无法长期保存，D错误。 故选B。 5．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + 注： “+”表示有；“一”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 【答案】D 【分析】选择培养基是将允许特定种类的微生物生长、同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基；鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物的培养基。 【详解】A、平板划线法是用来分离和纯化微生物，获得单个菌落的技术，其主要目的是分离而不是计数。用于活菌计数的方法通常是稀释涂布平板法，A错误； B、制备固体培养基（琼脂平板）的正确流程是：先将培养基成分溶解、调整pH值后，分装到三角瓶中，然后进行高压蒸汽灭菌。待培养基冷却至50℃左右时，再在无菌条件下（如超净工作台）倒入无菌的培养皿中（即“倒平板”），B错误； C、组②为常压 + 纤维素，结果无菌落，而组④为高压 + 纤维素，结果是有菌落。 这个对比恰好说明，在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长，C错误； D、③④组形成了一个对照实验，变量是碳源。实验结果表明，在高压条件下，该细菌可以利用纤维素生长（组④），但不能利用淀粉生长（组③），D正确。 故选D。 6．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 【答案】D 【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 【详解】A、以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物被抑制），符合选择培养基的设计原理，A正确； B、逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株（类似“驯化”过程），B正确； C、培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸性），是配制培养基的基本要求，C正确； D、稀释涂布平板法需用​​涂布器​​将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂布无法保证菌液均匀，D错误。 故选D。 7．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（    ） 组别 培养条件 实验结果 ① 基础培养基 无法生长 ② 基础培养基+甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长 ③ 基础培养基+甲、乙2种氨基酸 无法生长 ④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长 ⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长 A．组别①是②③④⑤的对照组 B．培养温度和时间属于无关变量 C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸 D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型 【答案】D 【分析】实验的自变量为培养条件（基础培养基中是否添加氨基酸及添加氨基酸的种类），因变量为粗糙脉孢霉突变株的生长状况，其他的培养条件为无关变量，应该保持相同且适宜。 【详解】A、由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确； B、由题意表中信息可知：实验的自变量为培养条件，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确； C、由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确； D、与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。 故选D。 8．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（    ） A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌 B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养 C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数 D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰 【答案】C 【分析】 微生物常见的接种的方法： （1）平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。 （2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 【详解】A、酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌和真菌，A错误； B、将含有酵母菌的培养基放置在28℃恒温培养箱中进行培养，B错误； C、稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，由此可知，可用稀释涂布平板法对酵母菌计数，C正确； D、酵母菌是真核细胞，具有高尔基体和内质网，可以对合成的蛋白质进行加工和修饰，D错误。 故选C。 9．（2024·江苏·高考真题）某同学进行下列实验时，相关操作合理的是（    ） A．从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌 B．观察黑藻的细胞质流动时，在高倍镜下先调粗准焦螺旋，再调细准焦螺旋 C．探究温度对酶活性的影响时，先将酶与底物混合，然后在不同温度下水浴处理 D．鉴定脂肪时，子叶临时切片先用体积分数为50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色 【答案】A 【分析】在进行实验操作时，需要遵循正确的操作规范和原则，以保证实验的准确性和安全性。 【详解】 A 、从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰，这样可以避免菌种被污染，A正确； B、在高倍镜下观察时，只能调节细准焦螺旋，B错误； C、探究温度对酶活性的影响时，应先将酶和底物分别在不同温度下处理，然后再混合，若先将酶与底物混合，再在不同温度下水浴处理，会在达到设定温度前就发生反应，影响实验结果，C错误； D、鉴定脂肪时，子叶临时切片先用苏丹Ⅲ染液染色，然后用体积分数为50%的乙醇洗去浮色，D错误。 故选A。 10．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（    ） A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 【答案】C 【分析】由图可知，所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂。图中②筛选的是不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验。 【详解】A、平板划线法无需稀释，A错误； B、由图可知，②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误； C、所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙，C正确； D、由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产生NH3，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。 故选C。 11．（不定项）（2025·江西·高考真题）为高效检测抗菌剂的抗菌效果，研究人员构建了能够表达外源荧光素酶的重组菌Q，将其接种到有足量荧光素的液体培养基中，一段时间后添加待测抗菌剂，定时检测培养液的荧光强度。下列有关该实验的叙述，正确的是（　　） A．需要设置一个对照组保证检测结果的准确性 B．实验过程中所用的培养基是一种选择培养基 C．在重组菌Q胞内的荧光素酶可催化荧光素水解 D．培养液的荧光强度变化可作为抗菌效果的判断依据 【答案】AD 【详解】A、实验中需设置不加抗菌剂的对照组，以排除菌体自然裂解等因素的影响，确保荧光强度变化由抗菌剂引起，A正确；   B、重组菌Q已构建成功，实验目的是检测抗菌效果，所用培养基含足量荧光素，属于鉴定培养基，B错误；   C、荧光素位于胞外，荧光素酶在胞内，两者无法直接接触反应。只有当菌体裂解后酶释放至胞外，才能催化荧光素发光，C错误；   D、抗菌剂有效时，菌体死亡裂解，荧光素酶释放催化荧光素，荧光强度显著增加；无效时，菌体存活，酶滞留胞内，荧光强度变化小。因此，荧光强度变化可直接反映抗菌效果，D正确。 故选AD。 12．（2025·北京·高考真题）链霉菌A能产生一种抗生素M，可用于防治植物病害，但产量很低。为提高M的产量，科研人员用紫外线和亚硝酸对野生型链霉菌A的孢子悬液进行诱变处理，筛选M产量提高的突变体（M+株），以应用于农业生产。 (1)紫外线和亚硝酸均通过改变DNA的 ，诱发基因突变。 (2)因基因突变频率低，孢子悬液中突变体占比很低；又因基因突变的 性，M+株在全部突变体中的占比低。要获得M+株，需进行筛选。 (3)链霉菌A主要进行孢子繁殖。研究者对链霉菌A发酵液进行了粗提浓缩，得到粗提液，测定粗提液对野生型链霉菌A孢子萌发的影响，结果如图。 由图可知，粗提液对野生型孢子萌发有 作用。 (4)随后研究者进行筛选实验。诱变处理后，将适量孢子悬液涂布在含有不同浓度粗提液的筛选平板上，每个浓度的筛选平板设若干个重复，28℃培养7天。从每个浓度的筛选平板上挑取100个单菌落，再次分别培养后逐一测定M产量，统计结果如下表。 组别 I II III IV V VI 筛选平板中粗提液浓度（mL/100mL） 2 5 8 10 12 15 所取菌落中M+株占比（%） 0 13 25 65 20 3 ①用图中信息，解释表中IV组M+株占比明显高于Ⅲ组的原因 。 ②表中Ⅲ组和V组中M+株占比接近，但在筛选平板上形成的菌落有差异。下列叙述正确的有 （多选）。 A．Ⅲ组中有野生型菌落，而V组中没有野生型菌落 B．V组中有M产量未提高的突变体菌落，而III组中没有 C．与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更多的突变体在V组中被抑制 D．与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更多的M+株在V组中被抑制 综上所述，用 粗提液筛选是获得M+株的有效方法。 【答案】(1)碱基序列（或脱氧核苷酸序列） (2)随机性、不定向 (3)抑制 (4) Ⅳ组无野生型菌落，Ш组仍有野生型菌落 ACD 10 mL/100mL 【分析】基因突变的原因主要有以下两类： 外因： 物理因素：如紫外线、X 射线及其他辐射，这些射线能损伤细胞内的 DNA，改变其碱基序列引发突变。 化学因素：像亚硝酸、碱基类似物等，可改变核酸的碱基，从而导致基因突变。 生物因素：某些病毒的遗传物质能影响宿主细胞的 DNA，引发突变。 内因：DNA 复制过程中，偶尔会发生碱基对的增添、缺失或替换，导致基因结构改变，引发基因突变 。 【详解】（1）紫外线和亚硝酸均通过改变 DNA 的碱基序列（或脱氧核苷酸序列），诱发基因突变。因为基因突变是指 DNA 分子中发生碱基对的替换、增添和缺失，而这些处理会影响 DNA 的碱基组成和排列顺序。 （2）因基因突变频率低，孢子悬液中突变体占比很低；又因基因突变的随机性、不定向性，M＋株在全部突变体中的占比低。要获得 M＋株，需进行筛选。基因突变具有不定向性，即一个基因可以向不同的方向发生突变，产生一个以上的等位基因，所以即使发生了基因突变，也不一定是我们想要的 M＋株。 （3）由图可知，随着培养基中粗提液浓度的升高，野生型孢子萌发率下降，所以粗提液对野生型孢子萌发有抑制作用。 （4）①IV 组粗提液浓度高于 Ⅲ 组，结合前面得出的粗提液对孢子萌发有抑制作用，且M＋株可能对粗提液有更强的耐受性，所以在较高浓度的粗提液下，更多的野生型孢子萌发受抑制，而 M＋株相对更容易存活，导致 IV 组 M＋株占比明显高于 Ⅲ 组。 ②A、Ⅲ组粗提液浓度较低，与对野生型孢子抑制作用较弱，筛选平板上有野生型菌落，据（3）表可知，Ⅴ组粗提液浓度较高，对野生型孢子抑制作用较强，筛选平板上没有野生型菌落，A 正确； B、Ⅲ 组和 V 组中都可能有 M 产量未提高的突变体菌落，B 错误； CD、与Ⅲ组相比，Ⅳ、Ⅴ组粗提液浓度较高，筛选平板上的菌落可能均为突变体，但Ⅵ组M+株显著少于Ⅳ组，说明诱变处理后的孢子悬液中更多的突变体株在Ⅴ组中被抑制，CD正确。 故选ACD。 据表可知，用10 mL/100mL 粗提液筛选是获得M+株的有效方法。 学科网（北京）股份有限公司1 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 第35讲 微生物的培养技术和应用 目录 01 课标达标练 【题型一】微生物的基本培养技术 【题型二】微生物的选择培养与技术 02 能力突破练（新考法+新情境+新角度+新思维） 03 高考溯源练（含2025年高考真题） 【题型一】微生物的基本培养技术 1．某品牌推出了一款“气泡酸奶”，其独特之处在于酸奶中含有大量气泡，口感类似碳酸饮料。该产品是通过在传统酸奶发酵过程中额外添加酵母菌（如酿酒酵母）进行二次发酵制成的。下列说法错误的是（　　） A．乳酸菌是厌氧细菌，只分布在无氧环境中 B．酸奶中的气泡主要是酵母菌无氧呼吸产生的CO2，与乳酸菌无关 C．二次发酵前需调节环境条件以确保酵母菌活性 D．若要进行乳酸杆菌的纯培养，需要在培养基中添加维生素 2．为探究青霉素对某种细菌的选择作用，将菌液涂布在培养基平板上，①放置不含青霉素的滤纸片，②③④放置含等量青霉素的滤纸片，培养结果如图。下列相关叙述错误的是（    ）    A．培养基中应含有细菌生长所需的碳源、氮源等营养物质 B．盖上皿盖后，应将培养皿倒置并放在适宜温度下培养 C．培养过程中青霉素会诱导该细菌产生多种方向的变异 D．若从a处附近挑取细菌，重复上述操作，抑菌圈直径变小 3．野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长；氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长。某大肠杆菌氨基酸营养缺陷型突变株纯化的部分流程如图所示，其中①、②、③、④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，甲、乙为菌落。下列叙述正确的是（　　）    A．图中①②③是完全培养基 B．运用涂布平板法对菌液中的活菌进行计数统计结果可能比实际活菌数多 C．可使用紫外线处理野生型细菌使其发生染色体变异获得亮氨酸缺陷型突变株 D．为获得目的菌株，可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养 4．消毒和灭菌是两个不同的概念。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物（含芽孢和孢子）；消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。下列适用于消毒处理的是（　　） ①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀 A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩ C．①②③④⑤⑥⑧ D．以上全部 5．防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，下列关于微生物的基本培养技术的叙述，正确的是（　　） A．培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质 D．接种时，为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 6．微生物的实验室培养有较高的技术要求，下列操作不符合规范的是（    ） A．倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置 B．配制培养基时，应先调节pH，再进行灭菌处理 C．浸泡在酒精中的玻璃涂布器无需再灼烧灭菌 D．用平板划线法分离大肠杆菌时，需要多次灼烧接种环 7．某同学为验证转化因子的本质进行了系列实验，部分如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．步骤①中，利用了酶的专一性和自变量控制的“减法原理” B．步骤②中，加入甲或乙的量属于无关变量，应保持相等 C．步骤③中，用液体培养基可能比固体培养基更利于细菌转化 D．步骤④中，可在显微镜下观察菌落或细胞形态来检测实验结果 【题型二】微生物的选择培养与技术 8．关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验操作，错误的是（　　） A．配制的选择培养基要以尿素为唯一氮源 B．高压蒸汽灭菌后的培养基在接种前和接种后均要倒置保存 C．可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 D．同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数 9．幽门螺杆菌是导致胃炎、胃溃疡的常见病原体。临床上常用尿素呼气试验进行无创诊断，其原理是让受试者口服含13C标记的尿素胶囊，随后检测呼出气体中是否含13CO2（反应式见下图）。下列有关说法正确的是（　　） A．13CO2是幽门螺杆菌通过细胞呼吸产生的 B．脲酶可为13C尿素分解提供活化能，提高反应速率 C．毕希纳利用丙酮从刀豆种子中分离出脲酶并证明其是蛋白质 D．若受试者胃内存在其他可分解尿素的细菌，则检测结果不准确 10．下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（    ） A．⑨计数得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较多 B．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂 C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求 D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌 11．科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程如图，经步骤③最后一次稀释之后若在 3 个平板上分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，得到的结果是 39、38、37。下列叙述正确的是（　　）    A．步骤②振荡 20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中 B．步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径与菌落直径比值较小的菌落培养 C．步骤⑤中的接种方法为平板划线法，3 次划线时需要对接种环灼烧 3 次 D．每克土样中的活菌数为 3.8×104个，该法统计的结果往往比实际值偏低 12．饮用被细菌污染的水后，细菌在消化道内会繁殖并产生毒素，引起急性肠胃炎。某同学利用图1所示方法，检测饮用水的细菌含量，图2为不同稀释度下得到的平板。下列相关叙述不正确的是（    ） A．配制图1所示固体培养基时，需要先调整到适宜的pH，再灭菌 B．图1中①～③三个培养皿菌落数的平均值乘稀释倍数即为样品中细菌数 C．图2是稀释涂布平板法的结果，统计的菌落数比活菌的实际数目要少 D．图2所示的平板中，a和c的计数结果不适合用于计算样品中的细菌数 13．某兴趣小组在“探究培养液中酵母菌种群数量变化”的实验中，将酵母菌培养液稀释1000倍后，用血细胞计数板（规格为lmm×1mm×0.1mm，由400个小格组成）进行计数，观察到一个中格的菌体数如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．对酵母菌逐个计数很困难，常采用取样器取样的方法计数 B．据图估算培养液酵母菌的种群密度约为1.92×107个/ml C．将培养液滴入血细胞计数板的计数室，待酵母菌全部沉降后盖上盖玻片 D．用该方法测得的结果往往比实际值偏大，可用台盼蓝染色法区分活菌和死菌 14．为探究不同类型的口罩的防传染效果，某兴趣小组进行了如下实验：让某同学分别佩戴不同类型的口罩并在距离培养基20cm处讲话，然后将培养基进行培养。下列叙述错误的是（    ） A．该实验应设置空白培养基和不佩戴口罩讲话组用于对照 B．应将接种后的培养基置于30℃的恒温箱中进行培养 C．接种培养基上的菌落数越少，说明口罩的防传染效果越好 D．应对实验后的培养基进行灭菌处理 1．脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（    ） A．镍是组成脲酶的重要元素 B．镍能提高尿素水解反应的活化能 C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 2．垃圾分类有利于变废为宝，减少环境污染。如图为分类后餐厨垃圾资源化处理的流程设计。下列叙述错误的是（    ）    A．压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品 B．添加的木屑有利于堆肥体通气，还可作为某些微生物的碳源 C．X中需要添加合适的菌种，才能产生沼气 D．为保证堆肥体中微生物的活性，不宜对堆肥体进行翻动 3．细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m³）。下列叙述错误的是（    ） A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理 B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置 C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值 D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高 4．下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（　　） A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比 B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大 C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌 D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定 5．根瘤菌是最早用于生物肥料研发的微生物，其菌肥生产需经菌种选育、种子液制备、发酵罐发酵、质量检测等流程。下列说法正确的是（　　） A．菌种选育时，需用含碳源、氮源等营养的培养基进行筛选 B．在质量检测中的活菌计数时，可采用涂布平板法进行接种 C．发酵罐发酵条件不同，仅影响代谢产物含量不影响其种类 D．田间应用时，根瘤菌主要通过产生有机酸来增加土壤肥力 6．关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列说法错误的是（　　） A．取样时要选择表层土，取土样的铁铲和取样纸袋要进行灭菌处理 B．本实验中使用的平板较多，需要在各培养皿底上做好标记避免混淆 C．利用显微镜直接计数结果通常较稀释涂布平板法进行计数的结果偏高 D．若涂布0.2mL稀释103倍的培养液，获得菌落平均值为58，则每克土样中尿素分解菌数为2.9×105个 7．下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（    ） A．⑨计数得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较多 B．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂 C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求 D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌 8．随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。下列说法正确的是（　　）    A．诱变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，选择透明圈大的即为目的菌株 B．可使用紫外线进行诱变，无需筛选即可得到产纤维素酶高的菌种 C．能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株一定是纤维素分解菌 D．富集培养应使用液体培养基，目的是能得到更多能产纤维素酶的菌株 9．为探究某种细菌A抑制真菌B生长的原理，实验组将细菌A接种在A1平板上，B1平板中央接种直径为0.5cm的真菌B菌落，把两个培养皿对扣，两平板上菌株无接触，放在适宜环境中培养5d，菌体生长情况如图中甲组所示。下列叙述正确的是（　　） A．接种前需对培养基和培养皿通过干热法进行灭菌 B．需将含有细菌A的菌液进行稀释后涂布在A1平板上 C．乙组为对照组，且A2平板上接种的是无菌水 D．细菌A通过与真菌B竞争营养物质抑制其生长 10．发酵技术广泛应用于食品、医药、农业等领域。下列叙述正确的是（    ） A．菌落的大小、颜色、有无荚膜等肉眼可见的特征都可作为菌种鉴定的依据 B．显微直接计数法具有直观、快速和操作简便等优点，但测得结果往往偏小 C．防止杂菌污染是获得纯培养物的关键，对血清等生物制品常采用过滤除菌法 D．玻璃制品涂布器在使用前后都必须进行严格的消毒，避免杂菌污染培养基 11．聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA的菌种，流程图如下。下列叙述正确的是（　　） A．步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上 B．步骤③所用的培养基中营养物质浓度越高，对嗜盐细菌的生长越有利 C．扩大培养所用的培养基应加入琼脂，放置摇床上培养，以便于挑取菌落获得纯化菌株 D．挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定各菌落中嗜盐细菌的PHA产量 12．在生活饮用水中如果大肠杆菌含量超标，会造成细菌性痢疾，严重时会造成脱水，甚至会危及生命。可利用表中的培养基对生活饮用水中的大肠杆菌进行分离和计数，下列叙述正确的是（    ） 成分 蛋白胨 蔗糖 乳糖 K2HPO4 显色剂（伊红美蓝） 琼脂 含量 10.0g 5.0g 5.0g 2.0g 0.2g 12.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL A．根据用途划分该培养基属于选择培养基 B．在配制培养基时应先调节pH值，再灭菌后倒平板 C．使用后的培养基在丢弃前一定要经过消毒处理，以免污染环境 D．为防止杂菌污染，还可以向培养基中添加适量抗生素 13．（不定项）泡菜汁中乳酸菌的分离与计数可采用稀释涂布平板法。下列叙述错误的是（    ） A．培养基要维持正常的pH，一般应在灭菌前调pH B．完成接种后，培养乳酸菌的平板需要放置在有氧环境下培养 C．稀释涂布平板法计数时，需将泡菜汁中的乳酸菌稀释至30~300个/mL D．用稀释涂布平板法统计活菌数目可能会比用细菌计数板统计的数目多 14．（不定项）某兴趣小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了相关实验。下列叙述错误的有（    ） A．以尿素为唯一氮源的培养基上生长的微生物不一定都能合成脲酶 B．土壤样液先在锥形瓶内进行富集培养，再等比稀释后涂布计数 C．甲组中a培养基上的菌落连成一片，是稀释度不够造成的 D．以乙组计数，5g土壤中尿素分解菌的估算数目是2.8×107个 15．（不定项）研究人员对布氏田鼠盲肠中的纤维素分解菌进行分离、鉴定，过程如图。下列说法正确的是（　　） A．①②③应在95%空气和5%氧气的气体环境中倒置培养 B．①②③中的培养基是以纤维素为唯一碳源的选择培养基 C．通过比较透明圈大小可知，甲分解纤维素的能力强于乙 D．若①②③菌落数分别为20、37、39，则内容物中纤维素分解菌密度为1.6×107个/mL 16．合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。 (1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是 。 (2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。 (3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 ，冷却的目的是 。 (4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ，判断依据是 。（答出两点即可） (5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈 色。 17．自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。 (1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。 (2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。 (3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现 。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。 (4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱） 。 18．根瘤菌与豆科植物之间是互利共生关系，根瘤菌侵入豆科植物根内可引起根瘤的形成，根瘤中的根瘤菌具有固氮能力。为了寻找抗逆性强的根瘤菌，某研究小组做了如下实验：从盐碱地生长的野生草本豆科植物中分离根瘤菌；选取该植物的茎尖为材料，通过组织培养获得试管苗（生根试管苗）；在实验室中探究试管苗根瘤中所含根瘤菌的固氮能力。回答下列问题。 (1)从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌进行培养，可以获得纯培养物，此实验中的纯培养物是 。 (2)取豆科植物的茎尖作为外植体，通过植物组织培养可以获得豆科植物的试管苗。外植体经诱导形成试管苗的流程是：外植体愈伤组织试管苗。其中①表示的过程是 ，②表示的过程是 。由外植体最终获得完整的植株，这一过程说明植物细胞具有全能性。细胞的全能性是指 。 (3)研究小组用上述获得的纯培养物和试管苗为材料，研究接种到试管苗上的根瘤菌是否具有固氮能力，其做法是将生长在培养液中的试管苗分成甲、乙两组，甲组中滴加根瘤菌菌液，让试管苗长出根瘤。然后将甲、乙两组的试管苗分别转入 的培养液中培养，观察两组试管苗的生长状况，若甲组的生长状况好于乙组，则说明 。 (4)若实验获得一种具有良好固氮能力的根瘤菌，可通过发酵工程获得大量根瘤菌，用于生产根瘤菌肥。根瘤菌肥是一种微生物肥料，在农业生产中使用微生物肥料的作用是 （答出2点即可）。 19．某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。    回答下列问题。 (1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是 。 (2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是 （答出1点即可）。通常，可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项有 （答出2点即可）。 (3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是 。但是在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶盖，原因是 。发酵液中的乙醇可用 溶液检测。 (4)本实验收集的淋洗液中的 可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是 。 20．某研究小组分离提纯葡萄皮上的野生酵母菌时，选取了从自然界中采集到的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中进行培养。请回答下列问题： (1)该研究小组成功分离出某品种的酵母菌后，取等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中,并分别置于转速为150 r/min、200 r/min、250 r/min的摇床上培养，检测结果如图1所示，摇床转速为250 r/min的酵母菌种群密度大的原因是 。 (2)图2是采用血细胞计数板直接计数和稀释涂布平板法计数两种方法计数培养液中酵母菌数量时得到的结果，其中采用稀释涂布平板法计数得到的是曲线 ，下列判断依据中正确的有 （填序号）。 ①稀释涂布平板法只计数活的酵母细胞，死细胞无法形成菌落 ②采用血细胞计数板直接计数时，可能会将死细胞与活细胞一起计数 ③采用稀释涂布平板法计数时，两个或多个细胞连在一起时，只能观察到一个菌落 ④采用稀释涂布平板法计数时，可能因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 (3)通过如图3所示的方法进行纯化培养时，用移液枪取最终的酵母菌稀释液0.1mL滴在培养基表面，然后将沾有少量酒精的涂布器 后再进行涂布。在恒温培养箱中培养一段时间后，其中某组的3个平板上菌落数分别为69个、52个、44个，则可以推测原酵母菌液中每毫升含菌数为 个。计数一般要选取 进行计数。 1．（2025·四川·高考真题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（    ） A．用平板划线法能测定X菌组中的活菌数 B．Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高 C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种 D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 2．（2025·云南·高考真题）黄酒是我国古老的发酵酒之一，传统酿制中，先用蒸煮过的小麦或麸皮为原料，对之前发酵留存的少量酒曲（曲种）进行扩大制曲；再将酒曲和蒸煮后的糯米、大米混合处理一段时间后，添加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨成品。下列说法错误的是（　　） A．小麦、麸皮等原料为酒曲中微生物的生长繁殖提供了碳源和氮源等营养物质 B．为避免制曲过程被杂菌污染影响黄酒品质，扩大制曲前需对留存的酒曲灭菌 C．糯米、大米蒸煮后立即与酒曲混合会导致酶空间结构改变而降低其催化效率 D．将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，是为了获得酒母发酵时的底物葡萄糖 3．（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（　　） A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 4．（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（    ） A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 5．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + 注： “+”表示有；“一”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 6．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 7．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（    ） 组别 培养条件 实验结果 ① 基础培养基 无法生长 ② 基础培养基+甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长 ③ 基础培养基+甲、乙2种氨基酸 无法生长 ④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长 ⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长 A．组别①是②③④⑤的对照组 B．培养温度和时间属于无关变量 C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸 D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型 8．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（    ） A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌 B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养 C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数 D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰 9．（2024·江苏·高考真题）某同学进行下列实验时，相关操作合理的是（    ） A．从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌 B．观察黑藻的细胞质流动时，在高倍镜下先调粗准焦螺旋，再调细准焦螺旋 C．探究温度对酶活性的影响时，先将酶与底物混合，然后在不同温度下水浴处理 D．鉴定脂肪时，子叶临时切片先用体积分数为50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色 10．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（    ） A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 11．（不定项）（2025·江西·高考真题）为高效检测抗菌剂的抗菌效果，研究人员构建了能够表达外源荧光素酶的重组菌Q，将其接种到有足量荧光素的液体培养基中，一段时间后添加待测抗菌剂，定时检测培养液的荧光强度。下列有关该实验的叙述，正确的是（　　） A．需要设置一个对照组保证检测结果的准确性 B．实验过程中所用的培养基是一种选择培养基 C．在重组菌Q胞内的荧光素酶可催化荧光素水解 D．培养液的荧光强度变化可作为抗菌效果的判断依据 12．（2025·北京·高考真题）链霉菌A能产生一种抗生素M，可用于防治植物病害，但产量很低。为提高M的产量，科研人员用紫外线和亚硝酸对野生型链霉菌A的孢子悬液进行诱变处理，筛选M产量提高的突变体（M+株），以应用于农业生产。 (1)紫外线和亚硝酸均通过改变DNA的 ，诱发基因突变。 (2)因基因突变频率低，孢子悬液中突变体占比很低；又因基因突变的 性，M+株在全部突变体中的占比低。要获得M+株，需进行筛选。 (3)链霉菌A主要进行孢子繁殖。研究者对链霉菌A发酵液进行了粗提浓缩，得到粗提液，测定粗提液对野生型链霉菌A孢子萌发的影响，结果如图。 由图可知，粗提液对野生型孢子萌发有 作用。 (4)随后研究者进行筛选实验。诱变处理后，将适量孢子悬液涂布在含有不同浓度粗提液的筛选平板上，每个浓度的筛选平板设若干个重复，28℃培养7天。从每个浓度的筛选平板上挑取100个单菌落，再次分别培养后逐一测定M产量，统计结果如下表。 组别 I II III IV V VI 筛选平板中粗提液浓度（mL/100mL） 2 5 8 10 12 15 所取菌落中M+株占比（%） 0 13 25 65 20 3 ①用图中信息，解释表中IV组M+株占比明显高于Ⅲ组的原因 。 ②表中Ⅲ组和V组中M+株占比接近，但在筛选平板上形成的菌落有差异。下列叙述正确的有 （多选）。 A．Ⅲ组中有野生型菌落，而V组中没有野生型菌落 B．V组中有M产量未提高的突变体菌落，而III组中没有 C．与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更多的突变体在V组中被抑制 D．与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更多的M+株在V组中被抑制 综上所述，用 粗提液筛选是获得M+株的有效方法。 学科网（北京）股份有限公司1 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $