第1章 第2节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（Word教参）-【优化指导】2022-2023学年新教材高中生物选择性必修3 生物技术与工程 ( 浙科版2019)

第二节　纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 课程内容标准 核心素养对接 1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。 2．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。 3．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 1.理解微生物的选择培养和计数的原理。(生命观念) 2．开展稀释涂布平板法的操作和土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验。(科学探究) [对应学生用书P8] 一、釆用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化 1．接种 2．平板划线法 3．稀释涂布平板法 1．制作平板 2．接种 (1)用平板划线法接种：灼烧接种环→接种环降温→挑取菌种→在平板上划线。 (2)用稀释涂布平板法接种：①用无菌水对酵母菌菌液进行一定浓度的稀释。 ②取0.1_mL的稀释菌液加入平板中央。 ③使用涂布器对平板中的菌液进行涂布。 (3)将菌种接种到液体培养基中：在无菌条件下用接种环将菌液接种到液体培养基中 3．培养：将所有培养容器在25 ℃下培养24_h。 4．观察培养结果：获得单菌落后，可挑取菌落，并利用划线法接种至斜面培养基中。 三、稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量 1．稀释涂布平板法可对微生物进行计数 (1)原则 ①在保证能准确计数的前提下减小稀释度； ②将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算。 (2)公式：每毫升菌液中微生物细胞数＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释体积×稀释倍数 2．显微镜计数法可直接对菌液中的微生物进行计数 四、调整培养基的配方和培养方式可有目的地培养某种微生物 1．选择培养基 (1)定义 在培养基中添加(或减去)某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其他微生物均不能生长，这样的培养基称为选择培养基 (2)配制 原则 ①微生物的代谢类型不尽相同 ②微生物的代谢方式并不唯一 ③培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长 (3)实例 ①在培养基中添加青霉素后，只有对青霉素有抗性的细菌才能生长 ②在不添加任何氮源的培养基上，只有能固氮的微生物才能生长 2．活动：能分解尿素的微生物的分离与计数 1．判正误 (1)筛选分解尿素的细菌所用的培养基为液体培养基。(×) (2)统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。(×) (3)只要培养基中有尿素即可筛选出分解尿素的细菌。(×) (4)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的pH降低。(×) 2．微思考 (1)在纯化酵母菌操作中，如何验证培养基灭菌是否彻底？ 提示　将接种后的培养基和一个未接种的培养基，都放在37 ℃恒温箱中培养，观察并记录结果。 (2)如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你认为是由什么原因造成的？ 提示　培养基灭菌不彻底或接种过程中感染了杂菌。 (3)在“能分解尿素的微生物的分离与计数”实验中，为什么要制备两种培养基(LB固体培养基和尿素固体培养基)? 提示　两种培养基形成对照，判断尿素固体培养基是否具有选择作用。 (4)如何对土壤悬液进行梯度稀释？ 提示　将1 g土样加入99 mL无菌水中，振荡后即成10－2稀释液。取上清液1 mL，转移至9 mL无菌水中，制备出10－3稀释液，摇匀。依此方法制备出10－4、10－5、10－6、10－7稀释液。 [对应学生用书P10] 任务驱动一　微生物的分离和纯化 平板划线法和稀释涂布平板法如何操作？ 阅读教材P11～P15内容，结合甲、乙两图，回答相关问题。 (1)图甲是利用平板划线法进行微生物接种，图乙是利用稀释涂布平板法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器；对这两种接种工具进行灭菌的方法依次是灼烧灭菌和沾上酒精引燃。 (2)在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环。在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始。这样做的原因是什么？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。同时注意最后一区(图中5区)的划线与第一区(图中1区)不要相连。 (3)接种过程的所有操作为什么一定要在火焰附近进行？ 提示　火焰附近存在着无菌区域。 (4)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？ 提示　避免培养过程中皿盖上冷凝水落入培养基，造成污染。 (5)如下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是图乙(填“图甲”或“图乙”)。 1．平板划线操作的注意事项 (1)平板划线操作时蘸取菌液及每次划线之前都需灼烧接种环，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的不同。 蘸取菌液前灼烧 每次