内容正文:
易错点19 现代生物科技专题
易错题【01】 对复杂背景下的基因工程的综合应用不能把握核心基本操作
易错题【02】 对植物体细胞杂交和动物的单克隆抗体技术认识不到位
易错题【03】 对胚胎工程的应用不熟悉
01 对复杂背景下的基因工程的综合应用不能把握核心基本操作
基因工程的原理是人工进行的一种基因重组过程,由于其属于前沿生物科技故有大量科技文献可以作为背景呈现考题,但考查的仍旧是基础的操作步骤和基本工具等内容,较为复杂的就是限制酶的选择和处理结果等,但学生常被题干背景迷惑,而无法做出正确判断和解答。
(2020山东)水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉,直链淀粉所占比例越小糯性越强。科研人员将能表达出基因编辑系统的DNA序列转入水稻,实现了对直链淀粉合成酶基因(Wx基因)启动子序列的定点编辑,从而获得了3个突变品系。
(1)将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒构建重组载体时,所需的酶是_____,重组载体进入水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为_____。
(2)根据启动子的作用推测,Wx基因启动子序列的改变影响了_____,从而改变了 Wx基因的转录水平。与野生型水稻相比,3个突变品系中Wx基因控制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸序列_____ (填:发生或不发生)改变,原因是_____。
(3)为检测启动子变化对Wx基因表达的影响,科研人员需要检测Wx基因转录产生的mRNA (Wx mRNA)的量。检测时分别提取各品系胚乳中的总RNA,经_____过程获得总 cDNA.通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出 Wx基因的cDNA,原因是_____。
(4)各品系Wx mRNA量的检测结果如图所示,据图推测糯性最强的品系为_____,原因是_____。
【错因】被复杂背景给“吓住”,没有抓住问题的关键,就是基础的基因工程操作步骤的识记和理解应用。
【问诊】
(1)将目的基因与Ti质粒构建基因表达载体时,需要限制酶的切割,将目的基因插入载体时需要DNA连接酶的连接,重组载体进入水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程叫做转化。
(2)根据以上分析可知,启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点,如果启动子序列改变将会影响RNA聚合酶与之结合和识别,进而影响基因的转录水平,在真核生物中,编码蛋白质的序列是基因中编码区,编码区中不包括启动子序列,因此直链淀粉合成酶的基因碱基序列中不含有启动子,因此3个突变品系中Wx基因中控制合成直链淀粉酶的氨基酸序列不发生改变。
(3)以mRNA为模板合成cDNA的过程为逆转录,利用PCR技术扩增Wx基因的cDNA,需要以Wx基因合成的引物,这样引物能够在总cDNA中与Wx基因的cDNA特异性结合,从而利用PCR扩增技术转移性扩增出Wx基因的cDNA。
(4)识图分析可知,图中品系3的Wx基因的mRNA的含量最少,那么合成的直链淀粉酶最少,直链淀粉合成量最少,因此该水稻胚乳中含的直链淀粉比例最小,糯性最强。
【答案】
(1)限制性核酸内切酶和DNA连接酶 转化
(2)RNA聚合酶与启动子的识别和结合 不发生 编码直链淀粉合成酶的碱基序列中不含启动子 (3)逆转录(或:反转录) 引物是根据Wx基因的一段已知序列设计合成的(或:引物能与Wx基因的cDNA特异性结合)
(4)品系3 品系3的Wx mRNA最少,控制合成的直链淀粉合成酶最少,直链淀粉合成量最少,糯性最强
【叮嘱】
基因工程的操作步骤:
1、获取目的基因(从基因组文库中获取、利用PCR技术扩增目的基因、化学合成法);
2、基因表达载体的构建(这也是基因工程的核心);一个完整的基因表达载体包括:
(1)启动子:位于基因的首端,是RNA聚合酶识别并结合的位点,驱动目的基因的转录;(2)目的基因:编码蛋白质的基因;(3)终止子:位于基因的尾端,其作用使转录在需要的地方停止;(4)标记基因:作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的受体细胞筛选出来。
3、将目的基因导入受体细胞(植物、动物、微生物):目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为转化。
4、目的基因的检测与鉴定 (DNA分子杂交技术,分子杂交技术、抗原抗体杂交)。
【点睛】
本题考查基因工程的知识点,要求学生掌握基因工程的操作工具和操作步骤是解决问题的关键。识记并理解基因工程中工具酶的种类和作用,把握基因表达载体构建的过程,理解启动子的功能和编码蛋白质的基因的结构,这是该题考查的难点;把握PCR扩增技术的操作过程和引物的作用,这是突破第(3)问的关键。
1.(2021·全国乙卷)用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人类需要的