实验2 分离以尿素为氮源的微生物 课件-2020-2021学年高二生物浙科版选修1

分离以尿素为氮源的微生物 实验2 实验目的： 1. 使用专一的培养基（含尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。 2.使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。 实验原理： 脲即尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作为其生长的氮源。 (NH2) 2C=O+H2O 2NH3+CO2 脲酶 本实验目的是从土壤中分离出能利用尿素的细菌，了解它在生态平衡中的作用，并与LB全营养培养基做对照。 细菌 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： 黄色 红色 变色范围是pH6.4-8.2 细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的氨使培养基变碱，于是酚红由黄变红。随着培养时间的延长，红色区域的面积越来越大。 有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？ 能将尿素分解为氨 和二氧化碳，有利于氮循环 有脲酶的细菌周围为什么有红色的环带出现？如何判定细菌分解尿素能力的大小？ 以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向四周扩散，将培养基中的尿素分解，产生氨，使培养基的PH由中性变为碱性，于是培养基中的酚红由黄色变为红色。圆形的红色区域越大，表明这种菌利用尿素的能力越强。 设备及用品： 灭菌锅或高压锅、250ml的三角瓶1个和100 ml的三角瓶2个、封口膜和橡皮圈、培养皿4个、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、有盖的试管（15mm×150mm）3支和试管架 实验材料： (1)25mlLB固体培养基：蛋白胨0.25g、酵母提取物0.12g、NaCl 0.25g、琼脂糖0.5g、加水25ml。 (2) 25ml尿素固体培养基：0.025g葡萄糖、NaCl 0.12g、K2HPO40.12g、酚红0.25mg、琼脂糖0.5g、加水15ml。灭菌冷却到60℃时加入经G6玻璃漏斗过滤（使其无菌）的尿素。 (3) 为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？ 琼脂是未被纯化的混合物