浙江省金华市云富高级中学高中生物浙科版选修一课件：第一部分 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 (共25张PPT)

实验2 分离以尿素为氮源的微生物 中性 碱性 橙色 酚红指示剂 红色 任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？ 利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。 原理：尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。 分离以尿素为氮源的微生物并计数 （2）酸碱指示剂（鉴定） 尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。 本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色， 一、配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml 只有能利用尿素的微生物才能繁殖，有选择功能，即选择培养基 琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物 思考：为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？ 思考：怎么获得无菌的尿素溶液？ G6玻璃砂漏斗过滤灭菌 过滤灭菌后的尿素 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml LB全营养培养基 蛋白胨： 0.25g 酵母粉： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组 实验组 倒平板 二、配制土壤菌悬液 1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水 得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液 1g土壤 哺乳动物排泄物 三、接种--涂布分离 高浓度→低浓度，换枪头 低浓度→高浓度，可不用换枪头 * 四、培养 按浓度捆成一摞 恒温37℃、倒置