2013步步高大一轮生物复习 第十一单元 生物技术实践 Word版文档

第40课时　微生物的分离和培养 考点125　生物技术手段——微生物实验室培养 1．培养基的类型及作用 划分标准 培养基种类 特点 用途 物理性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、分类鉴定 固体培养基 微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 化学成分 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成) 分类、鉴别 用　途 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长 培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽) 2.培养基的配制原则和营养构成 (2)培养基的营养构成 ①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。 ②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 3．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 (1)步骤：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板 (2)注意事项 ①倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 ②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4．纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 (1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 (2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 ①平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图) 注意　a．划线时最后一区域不要与第一区域相连。 b．划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 ②稀释涂布平板法 Ⅰ.系列稀释操作(图1) a．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。 b．用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡 皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。 c．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。以此类推，直到完成最后1支试管的稀释。 图1 注意　移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处。 Ⅱ.涂布平板操作如图2所示： 图2 注意　稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证“无菌”。具体如下： ①酒精灯与培养皿的距离要合适； ②吸管头不要接触任何其他物体； ③吸管要在酒精灯火焰周围使用。 1．自养微生物和异养微生物的营养比较 营养类型 碳　源 氮　源 生长因子 自养微生物 CO2、NaHCO3等含碳无机物 NH3、铵盐、硝酸盐等 一般不需要 异养微生物 糖类、脂肪酸等 铵盐、硝酸盐、蛋白质等 有些微生物需要 2.划分依据：自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源无关。自养微生物以CO2或碳酸盐为主要或唯一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。 3．自养微生物的能源 (1)利用光能，如蓝藻等。 (2)依靠物质氧化过程中释放的能量，如硝化细菌，能利用NH3氧化过程中释放的化学能， NH3既作为氮源，又作为能源。 4．异养微生物的能源 主要来源于有机物的氧化分解，碳源不仅为异养微生物提供构成细胞的物质，而且提供完 成整个生命活动所需的能量。 1．(2011·新课标全国卷，39)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题： (1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。 (2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________________和________________。 (3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力__________。 (4)通常情况下 ，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 考点126　生物