浙科版高中生物选修一 第四部分 实验13 DNA片段的PCR扩增(共23张PPT)

DNA片段的PCR扩增 实验13 《生物学·选修1》浙科版 1 中央电视台综合频道大型公益寻人行动《等着我》是全国首档国家力量全媒体大型公益寻人节目，也是中央电视台2014年重磅推出的全新公益栏目。 DNA的体内复制和体外复制 体内DNA复制 体外DNA复制 4 体内DNA复制 体外DNA复制 模板DNA 4种dNTP Taq聚合酶（耐高温） 引物Ⅰ，引物Ⅱ（DNA） 模板 原料 酶 引物 亲代DNA 4种脱氧核苷酸（dNTP） 解旋酶,DNA聚合酶等 RNA 原则 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 PCR-聚合酶链式反应(polymerase chain reaction） 是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制。 PCR仪 PCR实验操作 1.每组取81μL已配好的预混液（在标有TaqDNA聚合酶的离心管中）加入到1个0.5ml离心管内，然后按下表依次加入相关液体得到反应液。 2.每组取20μL刚配好的反应液 （0.5ml的离心管中）加入到1个 0.2ml离心管内，加入15μL石蜡封闭体系 3.将离心管放入全自动基因扩增仪中， 按下面程序设定参数，进行PCR扩增实验 反应试剂 用量 dNTPmixture 4μL 引物I 5μL 引物II 5μL 模板DNA 5μL 循环过程 温度 时间 循环次数 预变性 95℃ 30s 变性 95℃ 20s 0次或12次或30次 退火 52℃ 20s 延伸 72℃ 20s 保温 72℃ 30s 总计 0s或780s或1860s 7 问题2 经12次复制后可得到多少种分子量不同的DNA片段？ 其中哪种类型的DNA片段含量最多？ 问题1 复制几次后可得到只含有目的基因的DNA片段？ 活动：绘制PCR扩增目的基因模式图 目的基因 活动：绘制PCR扩增目的基因模式图 目的基因 12次循环后 第一次复制 第二次复制 第三次复制 复制三次后出现只含有目的基因的DNA片段 30次循环后 活动：绘制PCR扩增目的基因模式图 问题3 扩增获得的这些DNA片段，用怎样的方法来检测或分离目的基因呢？ 问题2 经12次复制后可得到多少种分子量不