浙科版高中生物选修1 第一部分 实验2 分离以尿素为氮源的微生物_学案（无答案）

分离以尿素为氮源的微生物 【学习目标】 1．使用专一的培养基（含尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。 2．使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。 3．使用稀释平板法统计菌落数 【学习重难点】 1．使用专一的培养基（含尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。 2．使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。 3．使用稀释平板法统计菌落数 【学习过程】 【知识准备】 1．背景知识： 脲或称尿素，是蛋白质降解的产物，人和其他哺乳动物如家畜的尿中都含有尿素。自然界中有能够分解尿素的微生物，例如：土壤中有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。 2．实验原理： （1）利用选择培养基分离得到以尿素作为唯一氮源的细菌。 选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。目的是从多种微生物中分离得到所需要的微生物。 在本课题提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 （2）利用稀释涂布平板法统计菌落。 用一定稀释度的样品溶液在培养基上进行涂布，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过观察菌落数可以确定样品中的细菌数量。恰当的稀释度是成功地统计菌落的关键，一般来讲，每个培养皿中有20个以内的菌落适于计数。为保证结果的可信度，在同一稀释度下，至少要对3个平板进行重复计数，求出平均值。 样品中细菌数量的计算方法是： 平均菌落数÷涂布的稀释液体积×稀释倍数 （3）利用鉴别培养基确定细菌种类： 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高 。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 3．思考题： （1）农作物不能直接吸收利用尿素，但尿素却是农业生产上的重要氮肥。农作物如何利用尿素中的氮？ （2）怎样从杂菌中分离得到能利用尿素的细菌？ （3）怎样确定单位体积稀释液中细菌的数量？ （4）如何确定培养基中生长的细菌能够分解尿素？ 【材料用具】 尿素固体培养基和LB固体培养基、10-2和10-3土壤稀释液 70%酒精及酒精棉 试管架、有塞试管、广口瓶、镊子、