内容正文:
目的DNA片段的体外扩增
【学习目标】
1.本课题通过尝试PCR(DNA多聚酶链式反应)技术的基本操作,使学生体验PCR这一常规的分子生物学实验方法
2.理解PCR的原理,讨论PCR的应用。
【学习重难点】
课题重点: PCR的原理和PCR的基本操作。
课题难点: PCR的原理
注:考纲要求:PCR技术的基本操作和应用
考点:①PCR技术的基本操作和应用
【学习过程】
【基础知识】
PCR原理
1.PCR是一种 迅速扩增DNA片段的技术,它能以极少量的 为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。
2.填写下列表格
参与的组分
在DNA复制中的作用
解旋酶
DNA母链
合成子链的原料
DNA聚合酶
引物
3.DNA的两条链是反向平行的,通常将DNA的羟基末端称为 ,而磷酸基团的末端称为 。DNA聚合酶不能 开始合成DNA,而只能 ,因此,DNA复制需要引物。DNA的合成方向总是 。
4.在DNA的复制过程中,复制的前提是 。在体外可通过 来实现。在 的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为 。当温度 ,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。
PCR利用了DNA的 原理,通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高,导致DNA聚合酶失活,后来 的DNA聚合酶的发现和应用,大大增加了PCR的效率。
PCR反应需要在一定的缓冲溶液中提供: , ,
, ,同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
(二)PCR的反应过程
1.PCR一般要经历 循环,每次循环可以分为 、 和 三步。
2.从第二轮循环开始,上一次循