内容正文:
一、分子生物学进展
1.————的建立,奠定了现代分子生物学的基础,给整个生物科学乃至整个人类社会带来了一场革命。
2.“基因克隆”一经提出,世界各国的生物科学家便立刻意识到————和基因克隆的重大作用和深远意义。
3.目前我国基因工程已投入生产的有————。
4.在动物基因工程方面,我国已成功培育出————等多种转基因动物,在动物乳汁中得以表达的物质有————。
聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction,PCR)
原理:利用碱基互补配对的原则,人为的将适量的DNA复制过程中所需要的组分组合在一起,经过多次变性、退火、延伸的循环,从而使目的基因在体外得到扩增,最终得到大量的目的基因。
二、PCR技术(聚合酶链式反应)
PCR反应中的主要成份
1. 引物(两种寡核甘酸)
2. 反应物(4种脱氧核苷酸)
3. DNA聚合酶(常用Taq 聚合酶)
4. 模板DNA
5. Mg 2+ (提供反应的离子条件)
6. 反应缓冲液(提供反应的溶液体系)
PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法。
包括三个基本步骤:
(1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链;
(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(40 ℃~60 ℃)下与模板上的目的序列通过氢键配对;
(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度
下(72 ℃左右),以目的DNA为模板进行合成。
由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使
目的DNA扩增一倍,这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板,所以经30轮循环就可使DNA扩增出230 个拷贝。
PCR 循环 – 第一步 –变性(94℃)
靶序列
靶序列
PCR 循环- 第二步 –退火(40 ℃-60 ℃)
靶序列
靶序列
Primer 1
Primer 2
Biotin
Biotin
5’
3’
5’
5’
3’
5’
3’
3’
PCR 循环 - 第三步 – 链延伸(72 ℃左右)
靶序列
靶序列
Primer 1
Primer 2
Biotin
Biotin
5’
3’
5’
5’
3’
5’
3’
3’
Taq D