2019-2020学年苏教版高中生物选修一（课件+检测）：第1章 素能提升课 无菌操作技术实践 (2份打包)

一、微生物的分离与鉴定 　微生物的分离方法有很多种，本专题中常用的是平板划线法、涂布平板法、微生物的选择培养等。针对不同微生物的特点选择不同的方法，对目的微生物进行筛选。以下是尿素分解菌和纤维素分解菌的分离与鉴定比较。 项目 尿素分解菌的分离与鉴定 纤维素分解菌的分离与鉴定 分离选 择条件 利用尿素为唯一氮源 利用纤维素为唯一碳源 鉴定 方法 培养基中加入酚红指示剂，变红色 在以纤维素为唯一碳源的培养基上，利用刚果红染色法，出现透明圈 鉴定 原理 细菌等微生物合成脲酶，将尿素分解产生NH3，使pH升高，加入酚红变红色 分解纤维素的微生物产生纤维素酶，将纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使纤维素—刚果红复合物降解而出现透明圈 步骤 土壤取样→制备培养基→样品梯度稀释→涂布平板→培养观察→进一步鉴定 土壤取样→制备培养基→选择培养→富集培养→梯度稀释→涂布培养→刚果红染色法→挑取菌落→进一步鉴定 二、纯化细菌的方法 1．倒平板与涂布平板法的操作 (1)倒平板操作 (2)涂布平板操作 ①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 ②取少量菌悬液(不超过0.1 mL） 滴加到培养基表面 ③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃， ④用涂布器将菌悬液均匀地涂布在 待酒精燃尽后，冷却8～10 s 培养基表面，涂布时可转动培养皿 使涂布均匀 2．两种纯化细菌的方法比较 项目 优点 缺点 适用范围 平板划线法 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 不能计数 适用于好氧菌 稀释涂布平 板法 可以计数，可以观察菌落特征 吸收量较少，较麻烦，平板不干燥，效果不好，容易蔓延 适用于厌氧菌 和兼性厌氧菌 三、影响植物组织培养过程的几种主要因素 1．培养材料 不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短对培养也有影响。幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。 2．无菌条件 培养基上有细菌等微生物存在时，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此在培养过程中要求进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。 3．植物激素 在配制好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。其中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响实验结果。 1．在进行分离分解尿素的细菌的实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。某同学的实验结果产生的原因可能有(　　) ①土样不同　②培养基污染　③操作失误　④没有设置对照 A．①②③　　　　　　 B．②③④ C．①②④ D．①③④ A　[某同学从培养基上筛选出的菌落较多，存在多种原因，如土样不同、培养基可能被杂菌污染或操作过程失误混入杂菌造成污染等。] 2．下列有关平板划线操作的说法正确的是(　　) A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养 D　[在培养基上接种时，一定要做到无菌操作，以防止杂菌污染影响实验或研究的结果。在酒精灯火焰附近约10 cm的四周为无菌区，因而含菌种试管和待接种试管管口不能离开火焰附近，接种环、棉塞也不能离开火焰附近。接种完毕之后为了防止菌体污染，保证安全，要用火焰灼烧管口和接种环，立即盖上皿盖。为防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，应将平板倒置。] 3．菊花的组织培养需要严格的无菌操作，下列说法不正确的是(　　) A．培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 B．幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间 C．用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，一旦感染杂菌则前功尽弃 D．将菊花茎段插入时应注意方向，不应倒插，是为了防止杂菌污染 D　[植物的组织培养需要严格的无菌操作，将菊花茎段插入时，不应倒插是因为倒插的茎段不能形成愈伤组织，而不是为了防止杂菌污染。] 4．美国科学家斯图尔德应用植物组织培养技术，将二倍体胡萝卜韧皮部的一些细胞进行离体培养，最终发育成完整的新植株(如图)。关于这一科学事实，下列叙述中错误的是(　　) A．该实验证明了植物细胞具有全能性 B．在此过程必须确保无菌操作 C．韧皮部细胞通过减数分裂增加数目 D．此种生殖产生的后代能保持亲本的性状