内容正文:
考点40 微生物的培养、分离及计数
考点41 传统发酵技术的应用
第15章 微生物的培养与应用
高考考法突破
考法1 微生物的培养与纯化
应试基础必备
考点40 微生物的培养、分离及计数
考法2 微生物的分离、筛选与计数
应试基础必备
(1)培养基
①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养物质。
②成分:一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。
③培养基的制备: → → → → 。
(2)无菌技术
①关键:防止 。
②方法:实验室中常用紫外线或化学药物消毒,如用酒精擦拭双手;灭菌的方法主要有 灭菌、 灭菌和 灭菌。
1.微生物的培养
计算
称量
溶化
灭菌
倒平板
外来杂菌的入侵
灼烧
干热
高压蒸汽
(3)实验操作
①制备固体培养基
a.步骤:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
b.倒平板操作时待培养基冷却至50 ℃左右时,在酒精灯火焰附近倒平板。
②纯化菌种
a.原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
b.方法: 法、 法。
③菌种的保藏
a.临时保存:固体斜面培养基上4 ℃保存,菌种易被污染或产生变异。
b.甘油保存:甘油瓶中-20 ℃冷冻箱中保藏。
平板划线
稀释涂布平板
2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
( 1)筛选菌株
原理:人为提供有利目的菌生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长。
( 2)统计菌落数目的方法
①显微镜直接计数法(或细菌计数板法或血细胞计数板法)
a.原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
b.方法:用计数板计数。
c.缺点:不能区分死菌与活菌。
②间接计数法( 活菌计数法)
A.原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。
B.计算公式:每克样品中的菌株数=( C÷ V )× M,其中C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL),M 代表稀释倍数。
C.操作
a.设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
b.为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。
c . 所得数值一般比实际值偏低。
( 3)实验流程:土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。
3.培养基对微生物的选择作用
(1)纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶,它包括 酶、 酶和 酶,具有催化分解纤维素的作用,其作用过程如下:
(2)纤维素分解菌的筛选原理
以 作为唯一碳源的选择培养基上, +纤维素→ 色复合物,纤维素分解菌可分泌纤维素酶,分解纤维素使 色消失,出现 。即:可根据 来筛选纤维素分解菌。
(3)土壤中纤维素分解菌的筛选流程
土壤取样(要在富含纤维素的环境中取样)→选择培养→梯度稀释→将
样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。
C1
CX
葡萄糖苷
纤维素
刚果红
红
红
透明圈
透明圈
高考考法突破
1.对培养基的认识
考法1 微生物的培养与纯化
营养物质 含义 作用 主要来源
碳源 能提供碳元素的物质 构成细胞的物质,对异养生物来说,碳源也是能源物质 无机物:CO2、NaHCO3;
有机物:糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等
氮源 能提供氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物 无机物:N2、NH3、铵盐、硝酸盐;
有机物:尿素、牛肉膏、蛋白胨等
生长因子 微生物生长必不可少的微量有机物 酶和核酸的成分 维生素、氨基酸、碱基等
水 细胞生命活动必不可少的物质 不仅是良好的溶剂,还是结构物质 培养基、大气、代谢产物
无机盐 提供除碳、氮元素以外的各种重要元素,包括某些大量元素 细胞内的组成成分;生理调节物质;某些化能自养型细菌的能源;酶的激活剂等 培养基
(1)培养基的成分
(2)培养基的分类
划分
标准 培养基种类 特点 用途
物理
性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产
固体培养基 加凝固剂,如琼脂 对微生物分离、鉴定等
功能 选择培养基 培养基中加入某种化学物质,用来抑制不