内容正文:
第17章 生物技术在其他方面的应用
考点44 DNA、血红蛋白的提取
考点45 植物有效成分的提取
考点44 DNA、血红蛋白的提取
高考考法突破
考法1 有关DNA和蛋白质的提取和分离
应试基础必备
应试基础必备
DNA和蛋白质分离提取的比较
提取物质 提取方法 提取原理 步骤
DNA 盐析法 DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同;DNA不溶于酒精,但蛋白质溶于酒精 将DNA溶解在2 mol/L的NaCl溶液中→加水使NaCl溶液稀释至 0.14 mol/L,使DNA析出,过滤→用2 mol/L NaCl溶液溶解并过滤→加入冷酒精析出
血红蛋白 凝胶色谱法、电泳法 根据相对分子质量的大小;各种分子带电性质差异 样品处理→粗提取→纯化→纯度鉴定
(1)DNA提取实验操作分析
① 4次过滤的比较
第一次过滤 第二次过滤 第三次过滤 第四次过滤
滤液中 含DNA的核物质 DNA 溶于0.14 mol/L
NaCl溶液的杂质 DNA
纱布上 细胞膜、核膜
等残片 不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质 DNA 不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质
过滤前加入 蒸馏水 NaCl溶液 蒸馏水 NaCl溶液
过滤的目的 去除细胞膜、
核膜等杂质 去除不溶于2 mol/L
NaCl溶液的杂质 去除溶于0.14 mol/L NaCl溶液的杂质 去除不溶于
2 mol/L
NaCl溶液的杂质
高考考法突破
考法1 有关DNA和蛋白质的提取和分离
1.DNA的粗提取和鉴定
②2次加蒸馏水的作用
a.加入鸡血细胞液中,使血细胞吸水涨破;
b.加入含DNA的2mol/L NaCl溶液中,使其稀释,从而析出DNA。
③3次使用纱布的作用
a.过滤血细胞破裂液,提取细胞核物质(DNA在滤液中);
b.过滤0.14mol/L NaCl溶液,滤出DNA(DNA在黏稠物中);
c.过滤溶有DNA的2mol/L NaCl溶液(DNA在滤液中)。
④3次使用 NaCl溶液的作用
a.2mol/L NaCl溶液, ;
b.0.14mol/L NaCl溶液, ;
c.2mol/L NaCl溶液, 。
(2)DNA的鉴定:DNA在 条件下,遇 会变 色。
溶解DNA,去除不溶于该溶液的杂质
使DNA析出
溶解滤出的DNA黏稠物
沸水浴
二苯胺
蓝
(1)常用的蛋白质分离方法
①凝胶色谱法(根据相对分子质量大小分离蛋白质)
相对分子质量大 相对分子质量小
凝胶内部 排阻在凝胶颗粒外面,迅速通过 进入凝胶颗粒内部,被滞留
运动方式 垂直向下 垂直向下和无规则扩散运动
运动路程 较短 较长
洗脱次序 先流出 后流出
【注意】a.凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果,但直径过大会造成洗脱液体积大,样品稀释度大;凝胶色谱柱的高度与分离度有关。
b.加快干凝胶膨胀的方法:可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热,逐渐升温至接近沸腾,通常只需1~2 h。这种方法不但节约时间,而且可以除去凝胶中可能带有的
微生物,排出胶粒内的空气。
2.血红蛋白的提取和分离方法
蛋白质
比较
②电泳法(带电粒子在电场作用下发生迁移)
a.在一定pH下,一些生物大分子(如多肽、核酸等)可解离的基团会带上正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
b.由于分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同,使带电分子产生不同的迁移速率,从而实现样品中各种分子的分离。判断纯化的蛋白质是否达到要求使用最多的是 法。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(2)蛋白质提取过程中需注意的问题
①红细胞的洗涤与离心要求:红细胞洗涤过程中,洗涤三次后,上清液仍有黄色,可增加洗涤次数,否则无法除去血浆蛋白;离心时转速要低,时间要短,否则白细胞等会一同沉淀,达不到分离效果。
②蒸馏水和甲苯的作用:血红蛋白释放过程中,蒸馏水的作用是 ,甲苯的作用主要是 。
涨破红细胞
溶解细胞膜
[江苏扬州大学附中2018四模]下图为某兴趣小组开展“DNA的粗提取与鉴定”实验过程中的一些操作示意图。下列有关叙述正确的是( )
例
A.正确的操作顺序是C→B→