内容正文:
课题2 土壤分解尿素的细菌的分离与计数
课前预习检测
判断正误
1、科学家从70-80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶( )
2、筛选分解尿素的细菌的培养基上不需要添加尿素( )
3、只要培养基中有尿素就可以筛选出分解尿素的细菌( )
4 、稀释涂布平板法既可用于统计活菌数也可用于统计样品中死菌数( )
5、统计菌落数目也可以用平板划线法( )
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课题背景
尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。
只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用
CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3
脲酶
实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
思考:
该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质?
碳源:葡萄糖、尿素
氮源:尿素
此配方能否筛选出产生脲酶的细菌?为什么?
只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。
在微生物学中,将允许______________________,同时_________________________生长的培养基。
特定种类的微生物生长
抑制或阻止其他种类微生物
选择培养基:
实验流程:
样品稀释涂布平板
微生物的培养与观察
菌落计数
二、实验设计
土壤取样
制备培养基
(一)土壤取样
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的信封中。
“微生物的天然培养基”
数量最大、种类最多
大约70%—90%是细菌
(二)制备培养基
选择培养基(尿素为唯一氮源)
相同的菌液,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
如何判断培养基是否起到了选择作用?
设置对照的
排除实验组中非测试因素对试验结果的影响,提高实验结果的可信度。
牛肉膏蛋白胨培养基
(三)样品稀释涂布平板
测定细菌的数量一般用104、105、106倍稀释。测定放线菌一般选用103、104、105倍稀释,测定真菌的数量一般选用102、103、104倍稀释。每个稀释度均用3个