内容正文:
第2章 克隆技术
第3节 动物的克隆----动物的细胞融合技术及其应用
【学习目标】
1. 说出动物细胞融合技术的概念、原理及方法。
2. 辨别细胞融合与细胞杂交。
3. 简述单克隆抗体的制备过程。
【学习重难点】
1. 重点:动物细胞融合技术的概念、原理及方法;辨别细胞融合与细胞杂交;单克隆抗体的制备过程。
2. 难点:辨别细胞融合与细胞杂交;单克隆抗体的制备过程。
【课前导忆】
写下植物体细胞杂交(原生质体融合)的原理和诱导方法。
动物细胞克隆培养的方法和要求。
【课堂任务】
任务一:
请阅读p31,完成以下问题
细胞融合的概念:
细胞杂交的概念:
细胞融合的诱导方法:
植物原生质体融合、动物细胞融合的比较
比较项目
植物原生质体融合
动物细胞融合
原理
诱导方法
任务二:
选择下列材料,为制备针对肝癌细胞的单克隆抗体提供思路
(
艾滋病病毒、艾滋病病毒抗原、肝癌细胞、肝癌细胞抗原
小鼠、小鼠骨髓瘤细胞、兔子骨髓瘤细胞
细胞培养液
(细胞分离和培养、抗体分离的具体方法不作要求)
)
【归纳总结】
细胞融合:
概念
细胞杂交:
原理:
动物细胞的融合 物理:
诱导方法 化学:
生物:
应用:
【课堂练习】
1、 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图,请分析回答:
(1)制备单克隆抗体过程中要用到_________和__________技术。
(2)制备单克隆抗体过程中,给小鼠注射的HCG相当于________,使小鼠产生分泌相应
________的淋巴细胞,此过程属于特异性免疫中的______________免疫。
(3) 在细胞内DNA合成一般有两条途径,主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸,进而
合成DNA,而氨基喋呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存
在的情况下,经酶催化作用合成DNA,而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①.利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分,其中添加的_________
成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②.最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是___________________。
(4) 此过程生产的单克隆抗体可以与______________特异性结合,从而诊断早孕。
(
2
)
$$动物的细胞融合技术及其应用
世界卫生组织(WHO)预测21世纪恶性肿瘤将成为人类“第一杀手”。
中国已成为世界第一癌症大国,年新发病例约160万,死亡达130万,现癌症病人200多万,平均每死亡5人中,就有一人死于癌症。
癌症不仅严重威胁我国人民的生命与健康,而且给家庭、社会、国家造成了沉重的负担。
小资料:
癌症的可怕之处:
无限增殖,易转移
癌症治疗常用手段:
手术
中医
化疗
放疗
小资料:
缺点:
无法根除,“伤及无辜”
生物导弹
由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素配合,因带有单克隆抗体而能自动导向,精确地瞄准和捕获靶细胞(癌细胞),与之结合,并由其携带的药物产生治疗作用。
小资料:
抗体: 免疫中,由 分
泌,能特异性识别抗原并与之结合的Y型蛋
白质。
体液
效应B细胞(浆细胞)
单克隆抗体具有高度专一性,能够识别细胞表面抗原、各种受体、各种体液成分及细胞内和组织内的各种成分,能精确地瞄准和捕获靶细胞,特异性地与靶目标发生反应,因而有“生物导弹”之称。
4
人们如何获得针对某种抗原的抗体?
传统方法:产量低,特异性差
(单克隆抗体)
单个B淋巴细胞
细胞群
克隆
化学性质单一、特异性强的抗体
一个B淋巴细胞只产生一种特异性抗体
生产
不同B淋巴细胞产生不同抗体
(单克隆)
科勒
米尔斯坦
荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖
涉及细胞工程技术:动物细胞融合、动物细胞培养
方案:让B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,再进行细胞培养。
7
动物