内容正文:
第三节 动物的克隆
动物克隆的技术基础:动物的细胞培养
和组织培养
植物克隆的技术基础:植物组织培养
动物细胞的培养和
克隆形成
1、动物细胞培养
(一)动物细胞
将动物体内的一部分组织取出
分散成单个细胞
放在适宜的培养基培养
细胞得以生存并保持生命活动现象
生存、生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等
一、动物细胞的培养和克隆形成
机械消化或胰酶消化
(1)定义
为什么要分散成单个细胞培养?
为什么进行动物细胞培养?获取细胞或细胞分泌蛋白
3
正常细胞
癌细胞
接触抑制
(2)动物细胞培养的条件
1)离体
2)营养物质:无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、
动物血清
3)恒温和pH,无需光照
4)无菌无毒的环境
保证细胞顺利的生长增殖
1. 培养基营养物质:氨基酸、糖类、维生素、无机盐、激素、其他成分(生长因子【添加动物血清】)
培养条件:
2. 气体:CO2 O2【 CO2 培养箱:5% CO2和95%的空气 ,培养时培养瓶的盖子处于拧松状态】 CO2的作用:调节PH
3. 理化条件:PH【 5% CO2调节PH ,培养基中加入PH缓冲剂,培养过程中细胞代谢产生很多酸性物质,PH发生改变,为了实时监控培养基中PH的变化,一般在培养基中加入酚红指示剂,若培养基颜色变化超过一定程度,即使细胞密度不大,也要更换培养基。 】、渗透压、温度、湿度【 CO2 培养箱:37℃,湿度很高】
4. 无菌条件
5. 大部分细胞是贴壁细胞,需要一个可贴附的表面【细胞培养瓶或卡氏瓶的壁,培养皿的壁】,会接触抑制,培养密度不能过大。
少部分细胞是悬浮细胞,悬浮培养,悬浮细胞的密度可远远大于贴壁细胞,因此利用动物细胞进行工业大规模生产一些药物时,最好使用悬浮细胞。
(3)动物细胞的培养过程
取动物胚胎
或幼龄动物器官
和组织
剪碎组织
胰蛋白酶处理
细胞培养
单个细胞
因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛,分裂能力强
分解组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分
(4)动物细胞生长特点:
(5)动物细胞培养的结果:
不能最终培养成生物体,而是细胞群。
1)贴壁生长:培养瓶中的悬浮液细胞,紧贴培养瓶内壁才能生长;
2)接触抑制:当培养瓶中贴壁生长细胞彼此紧密接触时,细胞不再分裂;
3)细胞只分裂不分化。
思考:
2、为什么选用动物胚胎或