第39讲 微生物的纯培养和应用（复习课件）（2大考点+4大知识+长句作答）（全国通用）2027年高考生物一轮复习讲练测

第九单元 大概念九 利用生物技术与工程生产对人类有用的产品 2027年高考一轮复习讲练测 生物学 概念体系 大概念09 发酵工程利用微生物的特定功能规模化生产对人类有用的产品 第九单元 第39讲 微生物的培养技术和应用 全国通用 2027年高考一轮复习讲练测 生物学 3 01命题透视·考情前瞻 对标素养，研判高考命题趋势 拆解核心考点，突破命题考向 溯源真题逻辑，感知高考考向 搭建知识框架，构建系统思维 目录 目录总览 路径指引 02知识建联·脉络梳理 03考点精讲·靶向突破 04真题溯源·考向感知 考点一 微生物的基本培养技术 知识点1 培养基的配制和无菌技术 知识点2 微生物的纯培养 考点二 微生物的选择培养和计数 深挖素材脉络，规范长句作答 05情境探究·素养拓展 知识解构 即时演练 高分破译 知识点1 微生物的选择培养 知识点2 微生物的计数 命题透视·考情前瞻 对标素养，研判高考命题趋势 01 5 命题透视·考情前瞻 对标素养，研判高考命题趋势 考查概述 从命题内容上看，通常考查微生物的培养技术与应用，涉及对基本概念、原理、操作方法等的理解和简单应用。以复杂的情境，考查学生对知识的综合运用能力、分析问题和解决问题的能力以及实验设计和分析能力等。 考查形式 以选择题为主，重点考查微生物培养的基本技术，如培养基的配制、无菌技术、平板划线法、稀释涂布平板法、微生物的计数等核心考点。常以生产生活中的实际问题为背景，要求学生运用所学的微生物培养知识，分析和解决实际问题，也会涉及到实验设计、实验结果分析等内容 课标要求 明确目标 1．分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法异同；选择培养基和鉴别培养基的区别。(科学思维) 2．探究微生物培养的条件及如何分离某种微生物等。(科学探究) 高考前沿 1.微生物的基本培养技术 2026·河南·T16；2026·安徽·T15；2025·江苏·T7；2024·湖南·T6；2024·山东·T15 2.微生物的选择培养和计数 2026·河北·T18；2026·黑吉辽蒙卷·T18；2026·湖南·T13；2026·山东·T20；2025·山东·T15；2025·黑吉辽·T4；2024·江西·T17；2023·山东·T15 6 知识建联·脉络梳理 搭建知识框架，构建系统思维 02 7 思维建模·脉络梳理 搭建知识框架，构建系统思维 培养基和无菌技术 微生物的培养技术和应用 无菌技术 物理状态分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基 微生物的选择培养和计数 功能分：选择培养基和鉴别培养基；成分分：合成培养基和天然培养基 培养基 碳源、氮源、水和无机盐，除了营养物质外，培养基还要满足微生物对PH、氧气、特殊营养物质的需求。 消毒：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒 灭菌：灼烧灭菌法、干热灭菌法、湿热灭菌法 微生物的选择培养 微生物的数量测定 平板划线法：在固体培养基表面用接种环连续划线，将混合菌分散获得单菌落 概念：从混杂的微生物群体中获得单一微生物纯种的过程 间接计数法--稀释涂布平板法；选择30-300个菌落的平板进行计数 微生物的纯培养 步骤：配置培养基→灭菌→接种→培养→分离纯化→鉴定 选择培养基 稀释涂布平板法 直接计数 —显微镜直接计数法（包括活菌和死菌） 考点精讲·靶向突破 拆解核心考点，突破命题考向 03 9 考点精讲·靶向突破 拆解核心考点，归纳解题范式 自主研学·梳理教材 1. 培养基一般都含什么营养物质？举例说明培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。 2. 培养基的分类？ 3. 大肠杆菌的纯化培养需配置什么培养基？原理是什么？ 4. 什么是消毒和灭菌？消毒、灭菌的方法有什么？ 5. 酵母菌纯培养的操作顺序？平板倒置的目的是？防止杂菌污染的做法有什么？ 6. 土壤中分解尿素的细菌的分离涉及的原理？测定微生物数量的常用方法有什么？ 7. 微生物接种最常用的方法是什么？ 8. 纤维素分解菌的分离与鉴定的原理？ 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 1．培养基的化学成分：包括 水、无机盐、碳源、氮源 （基本成分）和生长因子等。 （1）碳源 无机碳源： 有机碳源： （2）氮源 N2、NH3、NH4＋、NO3-等。 蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等。 CO2、NaHCO3等。 糖类、石油、花生粉饼等。 无机氮源： 有机氮源： （3）水 异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 自养微生物 异养微生物 为什么培养基需要氮源？ 是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 （4）无机盐 （5）生长因子：微生物生长繁殖所必需的，但自身不能合成或合成能力有限，如维生素，氨基酸，碱基等。培养某些微生物时可以不用添加生长因子。 思考：所有微生物是否都可以用培养基进行培养? 否。病毒是没有细胞结构的微生物,必须在活细胞内寄生并以复制的方式增殖,因此不能用培养基进行培养。 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 另外，培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 微生物名称 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物 对培养基的 特殊要求 “个性定制” 添加 维生素 pH调至酸性 pH调至中性或弱碱性 提供 无氧条件 2．培养基的种类及用途： 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 （1）按物理性质分 有无 凝固剂琼脂 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 液体培养基应用于工业或生活生产 固体培养基应用于微生物的分离和鉴定 半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等 2．培养基的种类及用途： 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 （2）按照培养基的用途 选择培养基 鉴别培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。P16 在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。 以尿素为唯一氮源的培养基可用于选择培养_____________； 以纤维素为唯一碳源的培养基可用于选择培养_______________。 尿素分解菌 纤维素分解菌 伊红美蓝培养基（大肠杆菌） 大肠杆菌的代谢产物（有机酸）能与伊红美蓝结合，从而形成深紫色、并带有绿色金属光泽的菌落。 3．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品 。 清洁和消毒 灭菌 酒精灯火焰 相接触 无菌技术除了用来 外，还能 。 防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 有效避免操作者自身被微生物感染 4．消毒 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 （1）消毒指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 （不包括芽孢和孢子） 芽 孢 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。 孢 子 细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。孢子的特点是能直接长成新个体。 4．消毒 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 （2）消毒方法常用到煮沸消毒法， （对于一些不耐高温的液体），还有化学药剂消毒（如 、氯气、石炭酸等）、 消毒。 巴氏消毒法 酒精 紫外线 5．灭菌： 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物。 （包括芽孢和孢子） 灭菌方法有 、 、 。 灼烧灭菌 干热灭菌 湿热灭菌 ①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法； ②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱 ； ③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅 。 6．比较消毒和灭菌 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 培养基的配制和无菌技术 比较 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 灭菌 较为温和 强烈 部分生活状态 的微生物 全部微生物 不能 能 培养物 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的纯培养 接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体。 获得纯培养物的过程。 纯培养物 纯培养 由 繁殖所获得的微生物群体。 单一个体 1．微生物的纯培养步骤：包括 培养基、 、接种、分离和培养等。 配置 灭菌 2.菌落：指分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 2．菌落： 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的纯培养 毛霉 不同菌落的形状、大小、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。 获得单菌落的方法： ①平板划线法 ②稀释涂布平板法 3．平板划线得到单菌落的具体操作见图 考点一 微生物的基本培养技术 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的纯培养 ①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。 ②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞 ③将试管口通过火焰 ④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 ⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞 ⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次划线相连。 考点一 知识解构 高分破译 即时演练 易混易错 （1）灭菌的效果比消毒要好。活体生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能灭菌。 （2）实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 微生物的基本培养技术 （3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。 (1)在培养细菌时，要将培养基调至中性或弱酸性。（ ） (2)蛋白胨中含有糖、维生素和有机氮等营养物质。（ ） (3)玻璃器皿、金属用具等可以采用干热灭菌法。（ ） (4)微生物的纯培养步骤为配制培养基→接种→灭菌→分离和培养等。（ ） (5)待灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。（ ） (6)不含氮源的平板不能用于微生物培养。（ ） ——PH调至中性或弱碱性。 考点一 回归教材·易错辨析 知识解构 高分破译 即时演练 判断以下表述是否正确： ✘️ ✓️ ️ ✘️ 微生物的基本培养技术 ✓️ ——应该先灭菌后接种。 ✓️ ✘️ 考向01 培养基的配制和无菌技术 知识解构 高分破译 即时演练 考点一 1.在实验室培养微生物，需要人为地为微生物提供适宜的营养和环境条件。下列关于培养基配制的说法正确的是(　　) A.培养基中需要碳源、氮源、水和无机盐齐全 B.培养基中必须添加琼脂 C.培养基制备中均需调节pH至酸性 D.无论哪种培养基均需要灭菌 D 培养固氮微生物时，培养基中可以不添加氮源 微生物的基本培养技术 只有配制固体(或半固体)培养基时才需要添加琼脂 适宜的pH是微生物生长的必需条件，因此配制过程中需要调节pH，培养霉菌时需要将pH调至酸性，培养细菌时需要将pH调至中性或弱碱性 考向01 培养基的配制和无菌技术 知识解构 高分破译 即时演练 考点一 2.β-苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β-苯乙醇的酵母菌应用于白酒生产。下列叙述错误的是（    ） A．所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和灼烧灭菌 B．通过配制培养基、灭菌、分离和培养能获得该酵母菌 C．还需进行发酵实验检测该酵母菌产β-苯乙醇的能力 D．该酵母菌的应用有利于白酒新产品的开发 B 微生物的基本培养技术 分离纯化酵母菌，操作如下：配制培养基→灭菌→接种→培养→挑选菌落 考向02 微生物的纯培养 知识解构 高分破译 即时演练 考点一 1．如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是(　　) A．步骤①后需将培养基灭菌并调节pH B．步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行 C．步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次 D．步骤①结束后需倒置平板，步骤④结束后不需要 B 微生物的基本培养技术 步骤①表示倒平板，培养基需要先调节pH后灭菌 接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，步骤③到④的过程中共需灼烧接种环6次 步骤④操作结束后需在培养皿的底上做好标记，并倒置放入培养箱中进行培养 考向02 微生物的纯培养 知识解构 高分破译 即时演练 考点一 2. 平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列叙述正确的是 (　　) A．都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作 C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 D．都会在培养基表面形成单个的菌落 D 微生物的基本培养技术 平板划线法不需要进行梯度稀释，平板划线法是将菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作 稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面 考点一 知识解构 高分破译 即时演练 两种纯化方法的比较 微生物的基本培养技术 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 分离结果 关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 接种用具 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 缺点 操作复杂，需要涂布多个平板 共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落，都可用于观察菌落特征 ①一系列的梯度稀释； ②涂布平板操作 接种环 涂布器 可以计数，可以观察菌落特征 不能计数 考点一 知识解构 高分破译 即时演练 典型例题 微生物的基本培养技术 1.下列关于酵母菌纯培养的说法正确的是（    ） A．培养基煮沸冷却后于酒精灯旁倒平板 B．倒好的平板凝固后和接种后的平板都要倒置 C．平板划线法划5个区域时全程需灼烧接种环5次 D．接种完成后需在培养皿盖标注菌种及接种日期 B 纯培养所用培养基需经过高压蒸汽灭菌，应灭菌后冷却至适宜温度再于酒精灯旁倒平板 平板培养时需倒置，为便于观察、避免标记混淆，菌种及接种日期等信息应标注在培养皿的皿底 平板划线法划5个区域时，接种前要灼烧接种环1次以杀灭杂菌，每次划完一个区域后需灼烧接种环1次（共5次），全程共需灼烧6次 考点一 知识解构 高分破译 即时演练 典型例题 微生物的基本培养技术 2.某小组探究了某公园土壤中分解尿素的细菌的数量，部分结果如图所示。下列相关叙述错误的是（　　） A．培养基中应以尿素为唯一氮源，以筛选分解尿素的细菌 B．先用无菌水对土壤浸出液进行梯度稀释，再涂布接种 C．若统计的菌落数量过多，应适当增大涂布样液的稀释度 D．若在显微镜下观察并计数，则可采用平板划线法接种后观察 D 平板划线法是用于分离纯化微生物的接种方法，无法用于微生物计数，若要显微镜计数需使用血细胞计数板，活菌计数通常采用稀释涂布平板法接种 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 微生物的选择培养 1．选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 不加氮源 自养微生物 固氮微生物 加入青霉素 加高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物 不加碳源 酵母菌和霉菌(青霉素能杀死细菌、放线菌) 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照 基础培养基 选择培养基 Q：如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？ 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是一种重要的农业氮肥，尿素不能直接被农作物吸收，土壤中的细菌将尿素分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收 。 土壤中的细菌分解尿素是因为他们能合成脲酶。 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 微生物的选择培养 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 微生物的选择培养 2．如果想知道1 g土壤中有多少能分解尿素的细菌，可采用稀释涂布平板法。 ②火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀,制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9mL无菌水 90mL无菌水 10g ①铲取土壤，将样品装入纸袋中 （1）梯度稀释 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点01 微生物的选择培养 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 2.涂布平板 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的计数 1．稀释涂布平板法： 除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个 。 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 为了保证结果准确，一般选择菌落数为 的平板进行计数。 活菌️ 30～300️ 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的计数 2．样品的稀释度： 直接影响平板上的 数目。 在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为 、适于计数的平板。 在同一稀释度下，应至少对 个平板进行重复计数，然后求出 。 菌落️ 30～300️ 3️ 平均值️ 3．统计菌落数的误差分析： 统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是 个菌落。因此，统计结果一般用 而不是用活菌数来表示。 少 一️ 菌落数 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的计数 4．显微镜直接计数法： 除上述的活菌计数外，利用 进行直接计数，也是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的 或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数得，统计的结果一般是 数和 数的总和。 显微镜️ 细菌计数板️ 活菌️ 死菌️ 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的计数 5．细菌计数板和血细胞计数板的比较： 比细菌计数板厚，常用于相对较大的 细胞、霉菌孢子等的计数。用细菌计数板可对 等较小的细胞进行观察和计数。 血细胞计数板️ 酵母菌️ 细菌️ 考点二 微生物的选择培养和计数 知识解构 即时演练 高分破译 知识点02 微生物的计数 6．分离出分解尿素的细菌： 绝大多数微生物都能利用 ，但是只有能合成 的微生物才能分解尿素。利用 的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 葡萄糖️ 脲酶️ 以尿素作为唯一氮源️ 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红： 考点二 知识解构 高分破译 即时演练 易混易错 微生物的选择培养和计数 （1）区分选择培养基与鉴别培养基 种类 特点 用途 举例 选择培养基 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品，进而产生特定的颜色或其他变化 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长️ 鉴别不同种类的微生物 用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌 考点二 知识解构 高分破译 即时演练 易混易错 微生物的选择培养和计数 常见选择培养基举例： 筛选能利用大气中N2的微生物 缺少氮源的培养基 可淘汰细菌 含青霉素的培养基 可筛选出自养微生物 无有机碳源的培养基 考点二 知识解构 高分破译 即时演练 易混易错 微生物的选择培养和计数 （2）间接计数法和直接计数法 项目 间接计数法(稀释涂布平板法) 直接计数法(显微镜计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 缺点 结果 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：平均菌落数；V：稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数 每毫升原液所含细菌数＝每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不能区分活菌和死菌 比实际值偏小 比实际值偏大 考点二 知识解构 高分破译 即时演练 易混易错 微生物的选择培养和计数 （3）能在选择培养基上生长的不一定是所需要的目的菌。原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢物进行生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步的鉴定。 (1)平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒。（ ） (2)稀释涂布平板法既可分离菌株又可用于计数。（ ） (3)血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定。（ ） (4)稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细菌计数。（ ） (5)利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物。（ ） ——细菌计数板主要用于细菌的数量测定。 考点二 回归教材·易错辨析 知识解构 高分破译 即时演练 判断以下表述是否正确： ✘️ ️ ✓️ ——用于计数的只能用稀释涂布平板法。 ✘️ ✘️ ✘️ ——利用只含有尿素作为氮源的选择培养基，其它微生物不能生长，但固氮微生物还是可以生长。 微生物的选择培养和计数 1.研究者从温泉中筛选出能高效产生耐高温淀粉酶的嗜热细菌的过程如图1所示。将得到的嗜热细菌悬液转接到特定固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，结果如图2所示。下列说法错误的是(　　) A．过程①②一般都取1 mL菌液转移 B．试管甲、乙都通过无菌水稀释 C．图2中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种 D．过程①②属于稀释涂布平板法，能对分离得到的微生物进行计数 考向01 微生物的选择培养 知识解构 高分破译 即时演练 A 考点二 过程①为稀释过程，一般取1 mL菌液转移，过程②为涂布平板过程，一般取0.1 mL菌液进行涂布 微生物的选择培养和计数 2.下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是(　　) A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株 B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源 C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落 D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌 考向01 微生物的选择培养 知识解构 高分破译 即时演练 D 考点二 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定 微生物的选择培养和计数 3.为探究细菌抗药性变异的产生机制，科研人员将含大肠杆菌的培养液稀释后涂布于平板甲，培养长出菌落；用丝绒布将平板甲的所有菌落原位接种于含青霉素的平板乙；培养一段时间后，利用平板乙上存活的菌落，对应找到平板甲上相同位置的同源菌落，发现这些同源菌落显著小于其他菌落且具有抗药性。下列说法错误的是（    ） A．丝绒布、滤纸片均需灭菌处理，接种操作要在酒精灯火焰旁进行 B．平板乙培养基中含青霉素，属于选择培养基 C．大肠杆菌的抗药性状可能影响其增殖，体现了适应的普遍性 D．平板甲上的同源菌落具有抗药性，说明抗药性可以在接触青霉素之前产生 考向01 微生物的选择培养 知识解构 高分破译 即时演练 C 考点二 抗药性同源菌落在无青霉素的平板甲上显著更小，说明抗药性状在无青霉素的环境中不利于大肠杆菌增殖，有利性状仅在特定环境下发挥优势，体现的是适应的相对性 微生物的选择培养和计数 考向02 微生物的计数 知识解构 高分破译 即时演练 1．某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验，具体操作流程如下图所示。下列相关叙述错误的是(　　) A．在酒精灯火焰附近称取土壤并将其倒入锥形瓶中 B．梯度稀释时可用移液管或微量移液器进行操作 C．振荡的目的是增加尿素分解菌的浓度 D．由图示菌落计数结果可知10 g土样中的菌株数约为3.2×107个 C 振荡培养的目的是提高培养液的溶解氧的含量，使菌体充分接触培养液，提高营养物质的利用率 考点二 微生物的选择培养和计数 考向02 微生物的计数 知识解构 高分破译 即时演练 2.产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题： (1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是______(填编号)。 (2)称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌____________________个。 考点二 微生物的选择培养和计数 编号 ① ② ③ ④ 物品 培养基 接种环 培养皿 涂布器 灭菌方法 高压蒸汽 火焰灼烧 干热 臭氧 ④ 等比稀释 4.6×105(或460 000) 考向02 微生物的计数 知识解构 高分破译 即时演练 (3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行_______育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以______为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。 考点二 微生物的选择培养和计数 (4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株 进行后续相关研究，理由是 。 诱变 脂肪 较大 B 该菌株增殖速度快， 单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好 真题溯源·考向感知 溯源真题逻辑，感知高考考向 04 52 题组一 情景设定：列出培养微生物的物质 知识溯源：微生物的培养基及无菌技术 真题溯源·考向感知 1.（2026·安徽·高考真题）某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落），再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是（　　） 题组一 情景设定：列出培养微生物的物质 知识溯源：微生物的培养基及无菌技术 真题溯源·考向感知 1.下列叙述正确的是（　　） A. 固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B. 牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C. 物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D. 物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 C 【分析】培养基需要采用湿热灭菌法进行灭菌，A错误；牛肉膏蛋白胨培养基中含有微生物生长所需的碳源、氮源、磷酸盐和维生素等，属于完全培养基，因此牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌，B正确；已知基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落，据图示可知，基本培养基上只有滤纸片周围出现了少数的几个菌落a，其它部位的营养缺陷型菌体没有形成菌落，因此可推测低浓度的物质M具有诱变作用，可使营养缺陷型菌体突变为可自身合成组氨酸的突变体，该突变体可利用自身合成的组氨酸合成蛋白质，因此可形成菌落a，C错误；根据右图可知，含有高浓度M的滤纸片周围缺陷型菌体不能生长形成菌落，说明物质M有抑制作用，即使M有诱变作用，但由于基因突变的频率较低，因此抑菌圈边缘的菌落大多数仍为缺陷型菌体，不能在基本培养基上生长，D错误。 2.（2026·河南·高考真题）自然界存在着甲、乙两种降解PET塑料（含碳有机物）的细菌。为筛选这两种细菌，并探究两种细菌的协同降解效果，研究人员进行了相关实验。下列叙述错误的是（　　） A. 为筛选出目的菌，培养基应以PET塑料为唯一碳源 B. 细菌纯培养时，需用涂布器蘸取单个菌落进行涂布 C. 利用显微镜直接计数，可估算出菌悬液中细菌的总数 D. 探究甲、乙降解效果的协同性，至少需设三个实验组 真题溯源·考向感知 题组二 情景设定：生产生活中获得某种微生物 知识溯源：微生物的纯培养 B 【分析】以PET为唯一碳源的选择培养基中，只有能分解利用PET的目的菌可以获取碳源存活繁殖，其他微生物无法生长，能实现目的菌的筛选，A正确；细菌纯培养时，涂布器的作用是将梯度稀释后的菌悬液均匀涂布在培养基表面；若要利用单个菌落进行纯培养，应使用接种环挑取单个菌落，进行平板划线或接种到液体培养基中，不能用涂布器蘸取单个菌落涂布，B错误；使用血细胞计数板可在显微镜下直接统计单位体积菌悬液中的细菌数量（含活菌和死菌），能够估算菌悬液的细菌总数，C正确；探究甲、乙的协同降解效果，需要设置单独接种甲、单独接种乙、同时接种甲和乙三个实验组，对比三组的降解效果才可判断是否存在协同作用，因此至少设三个实验组，D正确。 题组三 情景设定： 筛选某种微生物 知识溯源：微生物选择培养 3.（2026·山东·高考真题）（多选）刚果红与纤维素可形成红色复合物。在含刚果红和纤维素的培养基中培养细菌时，细菌产生的纤维素酶将纤维素分解，使菌落周围形成透明圈。为获得分解纤维素能力强的菌株，将筛选到的菌株a进行诱变处理得到菌株b、c、d。在相同且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如表所示。下列说法正确的是（　　） A. 筛选菌株a所用培养基应以纤维素为唯一碳源 B. 将菌液接种到培养基进行菌株筛选时必须使用平板划线法 C. 从表中数据可得出，菌株c的纤维素酶合成基因未发生突变 D. 在4种菌株中，菌株b分解纤维素的能力最强 真题溯源·考向感知 AD 题组三 情景设定： 筛选某种微生物 知识溯源：微生物选择培养 真题溯源·考向感知 【分析】筛选可分解纤维素的菌株a时，需使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，只有能分解利用纤维素的微生物可在该培养基上存活繁殖，A正确；将菌液接种到培养基进行菌株筛选时应使用稀释涂布平板法，B错误；菌株c的比值和菌株a相同仅说明二者分解纤维素的能力相近，若发生同义突变、突变未影响纤维素酶的活性或表达量，也会出现该结果，不能判定其纤维素酶合成基因未发生突变，C错误；菌落直径与透明圈直径的比值越小，说明同等大小的菌落分解纤维素的范围越大，分解能力越强，菌株b的比值最小，故其分解纤维素的能力最强，D正确。 题组三 情景设定： 筛选某种微生物 知识溯源：微生物选择培养 4.（2026·河北·高考真题）（多选）窖泥中的微生物是影响白酒风味的因素之一。现从某酒厂窖泥中分离筛选与白酒风味物质形成相关的己酸菌，下列分析错误的是（ ） A. 分离培养己酸菌时，需对培养基、培养皿和窖泥进行灭菌 B. 通过稀释涂布平板法统计的菌落数一般比活菌的实际数偏多 C. 依据己酸菌的特异基因序列设计引物，可通过PCR对目的菌株进行鉴定 D. 获得的己酸菌优良菌种需扩大培养后再用于白酒的规模化生产 真题溯源·考向感知 AB 【分析】分离培养己酸菌时，为避免杂菌污染，需对培养基、培养皿进行灭菌，但窖泥是分离目标菌的原材料，若对窖泥灭菌会杀死其中的己酸菌，无法完成目标菌的分离筛选，A错误；使用稀释涂布平板法统计活菌数时，若两个或多个活菌聚集在一起，平板上只会形成一个菌落，因此统计得到的菌落数一般比活菌的实际数偏少，B错误；不同物种的基因序列具有特异性，依据己酸菌的特异基因序列设计引物进行PCR，可根据是否扩增出目标产物完成对目的菌株的鉴定，C正确；筛选获得的己酸菌优良菌种初始数量较少，需先进行扩大培养，获得足够多的菌种后才能用于白酒的规模化生产，D正确。 题组三 情景设定： 筛选某种微生物 知识溯源：微生物选择培养 5.（2026·黑吉辽蒙卷·高考真题）（多选） 某奶酒以牛奶为主要原料，经微生物发酵酿制而成。为提高发酵效率，需筛选具有乳糖利用率高、乙醇产量高等特性的酵母菌菌株。下列叙述正确的是（　　） A. 选择培养基应以葡萄糖为唯一碳源 B. 选择培养基中可添加抗生素抑制细菌生长 C. 制备固体培养基需先高压蒸汽灭菌再倒平板 D. 接种后的平板应在37℃恒温培养 真题溯源·考向感知 BC 【分析】本实验目的是筛选乳糖利用率高的酵母菌，选择培养基应以乳糖为唯一碳源，才能保证仅能利用乳糖的菌株存活，以葡萄糖为唯一碳源无法达到筛选目的，A错误；抗生素可抑制细菌生长繁殖，酵母菌属于真菌，对抗生素不敏感，因此添加抗生素可排除细菌杂菌的干扰，B正确；制备固体培养基的流程为计算→称量→溶化→调pH→高压蒸汽灭菌→倒平板，先灭菌再倒平板可避免杂菌污染，C正确；酵母菌的最适培养温度约为28℃，37℃是细菌培养的常用温度，不符合酵母菌的培养要求，D错误。 题组三 情景设定： 筛选某种微生物 知识溯源：微生物选择培养 6.(2025·黑吉辽卷)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C23H23CIN208。)能力强的菌株,旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是:( ) A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C.配制选择培养基时,需确保 pH 满足实验要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 真题溯源·考向感知 D 【分析】该研究的目的是筛选出高耐受且降解金霉素能力强的菌株,可以以金霉素为唯一碳源制备选择培养基进行筛选且逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的株.B正确。微生物培养需要适宜的pH等,故C正确。错误项分析 稀释涂布法不需要接种环,而是需要涂布器,D错误。 题组四 情景设定： 测定土壤中微生物数量 知识溯源：微生物的计数 7.（2026·湖南·高考真题）（多选）科研人员拟筛选耐镉细菌用于生态修复。下列叙述正确的是（ ） A. 宜从镉污染的土壤或水体中分离耐镉细菌 B. 配制培养基时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分 C. 含氯化镉的培养基可选择耐镉细菌并鉴定其种属 D. 利用稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌实际数目多 真题溯源·考向感知 AB 【分析】镉污染的土壤或水体中镉含量高，在长期自然选择下，该环境中耐镉细菌的比例远高于普通环境，因此宜从该类环境中分离目的菌，A正确；培养基的基本营养成分一般包含碳源、氮源、无机盐、水，因此配制时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分，B正确；含氯化镉的培养基属于选择培养基，仅能筛选出耐镉细菌，无法鉴定其种属，鉴定种属还需要结合形态观察、生理生化检测等其他实验，C错误；利用稀释涂布平板法计数时，若两个或多个活菌连在一起，平板上只能形成一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌实际数目少，D错误。 情境探究·素养拓展 深挖素材脉络，规范长句作答 05 62 情境探究·长句作答 1.某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够高效分解纤维素的微生物。回答下列问题： （1）从富含纤维素的土壤中取样的原因是 。 （2）分离出分解纤维素的微生物，应该配制以__________为唯一碳源的培养基，目的是 。 纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中 纤维素 促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长 情境探究·长句作答 2.尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答： (1)如图是利用_____________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分离到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有 （写一种）。 平板划线 (2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上进行划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行_______（“消毒”或“灭菌”），灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是_________________________。 稀释稀释涂布平板法 灭菌 防止高温杀死需接种的微生物 情境探究·长句作答 (3)下面是两种培养基配方 表1：A培养基配方 表2：B培养基配方 ①配制培养基的操作步骤：__________________（用字母顺序回答）。 a．倒平板  b．计算  c．溶化  d．称量  e．灭菌 ②如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述______（A、B）配方的培养基，在该培养基中加入______指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。 ③据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是_______________。 bdcea A 酚红 异养型 情境探究·长句作答 ((4)三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为106的培养基中，取0.2ml稀释液涂布，得到以下统计结果： 甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260； 乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232； 丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163； 在三位同学的统计中，______同学的统计结果是相对准确可信的。按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是______________个。 乙 1.16×109 2027年高考一轮复习讲练测 生物学 67 $