第35讲 微生物的培养技术和应用（高考考情+2大核心知识+2大题型必刷）（专项训练）（黑吉辽蒙专用）2027年高考生物一轮复习讲练测

第35讲 微生物的培养技术和应用 第一部分 五年考情·精准定向 黑吉辽蒙考情概览 黑吉辽蒙热点情境 黑吉辽蒙备考策略 第二部分 两大核心·主干速记 一图串联·核心梳理·易错辨析 核心01 微生物的基本培养技术 核心02 微生物的选择培养和计数 第三部分 分层专练·靶向攻关 题型专攻·基础题（全国视野，2大题型） 一年重难·创新题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，单选+不定项+非选择题） 三年真题·压轴题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，含2026年高考真题） 第一部分 五年考情·精准定向 考情概览 新课标要求 考题统计 1．分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法异同；选择培养基和鉴别培养基的区别 2．探究微生物培养的条件及如何分离某种微生物等。 2026·福建·微生物的接种、其他微生物的计数 2026·江苏·微生物的接种、其他微生物的计数 2026·重庆·其他微生物的分离与计数 2026·浙江·其他微生物的分离与计数 2026·湖南·微生物的接种、其他微生物的计数 2026·江西·微生物的接种、其他微生物的计数2026·河北·微生物的接种、其他微生物的计数2026·黑吉辽蒙·其他微生物的分离与计数 2025·黑吉辽蒙·其他微生物的分离与计数 2024·黑吉辽蒙·微生物的接种、其他微生物的计数 1． 考查频次：近5年黑吉辽蒙新高考中都有命题，考查频率较高，多数以单项选择题形式出现，非选择题较少。 2．考查要点：查内容聚焦板块： (1)基于基础知识考查：重点考查微生物培养的基本技术，如培养基的配制、无菌技术、平板划线法、稀释涂布平板法、微生物的计数等核心知识点，要求学生准确理解和掌握这些基础知识，并能进行准确的表述和应用； (2)结合实际情境考查：常以生产生活中的实际问题为背景，如从堆肥中筛选分解有机物的微生物、从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌等，要求学生运用所学的微生物培养知识，分析和解决实际问题，考查学生的知识迁移能力和综合运用能力。 热点情境 本地情境素材： 命题情境1：常以解决环境问题或生产实际问题为背景。例如，从受污染的土壤或水体中筛选能够降解特定污染物（如金霉素）的微生物菌株。 考查重点：选择培养基的设计原理（如以目标污染物为唯一碳源或氮源）、稀释涂布平板法与平板划线法的操作区别与应用、微生物数量的测定方法等。 命题情境2：涉及食品工业（如酸奶、发酵工程）、医学检测（如病原体筛查）或实验室研究等场景。 考查重点：对培养基、实验器皿进行灭菌的方法（如高压蒸汽灭菌、干热灭菌），对操作空间或手部进行消毒的方法，以及在酒精灯火焰附近操作等无菌操作的具体要求。 命题情境3：结合生态农业（如利用微生物菌剂防治土传病害、保护黑土地）、生物制造（如利用废弃原料发酵生产可降解材料）等具有地域特色或时代性的主题。 考查重点：培养基的营养成分配制、培养环境条件（如pH、温度、溶氧量）的控制，以及微生物代谢产物的应用等。 备考策略 1、 先建知识框架 把这一专题的核心模块理清：培养基类型、无菌技术、纯培养方法、选择与鉴别、微生物计数。复习时按“概念→用途→典型例子”整理，比零散背细节更有效。 2、 重点区分易混概念 尤其要分清消毒和灭菌、选择培养基和鉴别培养基、平板划线法和稀释涂布平板法。比如灭菌是杀死所有微生物包括芽孢和孢子，消毒只是杀死部分微生物；平板划线法主要用于分离，稀释涂布平板法才常用于活菌计数。 3、 死磕实验操作细节 高频考点往往落在具体操作上：倒平板约50℃左右、接种在酒精灯火焰旁进行、平板倒置培养、未接种空白对照检验灭菌效果等。这些细节常出现在选择题和实验题中，不能只懂原理不看操作。 4、 掌握两类经典筛选实例 尿素分解菌和纤维素分解菌是常考模型。尿素分解菌用“尿素为唯一氮源”选择，酚红指示剂变红说明有脲酶；纤维素分解菌用“纤维素为唯一碳源”选择，刚果红染色出现透明圈说明能分解纤维素。 5、 强化计数方法与误差分析 稀释涂布平板法适用于活菌计数，一般选择菌落数30～300的平板统计；显微镜直接计数会把死菌和活菌一起算，结果往往偏大。做题时要能判断题目要求的是“活菌数”还是“总菌数”。 6、 用情境题训练信息提取 黑吉辽蒙卷常把微生物知识与环境污染治理、食品安全、农业生态等真实情境结合。复习时不要只刷基础题，要多练材料题，训练从题干中提取“目的菌、选择条件、对照设置、变量控制”等信息的能力。 第二部分 两大核心·主干速记 内容速览：微生物的基本培养技术、微生物的选择培养和计数 一图串联 核心梳理 核心知识1 微生物的基本培养技术 考点1：培养基的配制和无菌技术 1．培养基的化学成分包括 水、无机盐、碳源、氮源 （基本成分）和生长因子等。 （1）碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 （2）氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO、NH等无机氮源；蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等有机氮源。 只有固氮微生物才能利用N2。 （3）水 （4）无机盐 （5）生长因子：微生物生长繁殖所必需的，但自身不能合成或合成能力有限，如维生素，氨基酸，碱基等。培养某些微生物时可以不用添加生长因子。 另外，培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时，一般需将培养基的pH调至酸性；培养细菌时，一般需要将pH调至中性或弱碱性；培养厌氧微生物时，则需要提供无氧的条件。 2．培养基的种类及用途： （1）按物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 （2）按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴别培养基。 3．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。 4．消毒 （1）消毒指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）。 （2）消毒方法常用到煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体），还有化学药剂消毒（如酒精、氯气、石炭酸等）、紫外线消毒。 5．灭菌 （1）灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 （2）灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌。 ①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法； ②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱 ； ③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅 。 6．比较消毒和灭菌 比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 强烈 全部微生物 能 考点2：微生物的纯培养 1．微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。 2．分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 3．通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板划线的具体操作见下面的流程图。 易错提醒 1、灭菌的效果比消毒要好。活体生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能灭菌。 2、实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。 核心知识2 微生物的选择培养和计数 考点1：微生物的选择培养 1．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2．如果想知道1 g土壤中有多少能分解尿素的细菌，仅有选择培养基是不够的，还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法。可采用稀释涂布平板法，其操作如图 稀释涂布平板法操作示意图 考点2： 微生物的数量测定 1．稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。 2．样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 3．值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 4．除上述的活菌计数外，利用显微镜进行直接计数，也是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。 5．细菌计数板和血细胞计数板的计数原理相同。血细胞计数板比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 6．绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 易错提醒 1．区分选择培养基与鉴别培养基 种类 特点 用途 举例 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品，进而产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌 常见选择培养基举例：(1)缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。(2)含青霉素的培养基可淘汰细菌。(3)无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。 2. 间接计数法和直接计数法 项目 间接计数法(稀释涂布平板法) 直接计数法(显微镜计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数 每毫升原液所含细菌数＝每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数 缺点 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不能区分活菌和死菌 结果 比实际值偏小 比实际值偏大 3、能在选择培养基上生长的不一定是所需要的目的菌。原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢物进行生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步的鉴定。 第三部分 分层专练·靶向攻关 题型专攻·基础题（全国视野，2大题型） 考查重点：微生物的基本培养技术、微生物的选择培养和计数 题型一：微生物的基本培养技术 1．（26-27高三上·辽宁·开学考试）下列有关微生物培养的叙述，正确的是（     ） A．一种物质可兼具碳源、氮源功能，碳源都能为微生物提供能量 B．配制牛肉膏蛋白胨培养基时，应先灭菌后调pH C．平板培养时应倒置，防止冷凝水回流污染培养基 D．从土壤样本中分离特定细菌应使用液体培养基 【答案】C 【详解】A、一种物质可同时作为碳源和氮源（比如牛肉膏），但并非所有碳源都能提供能量，例如自养型微生物利用的无机碳源（CO₂、碳酸盐等）就无法为微生物提供能量，A错误； B、配制培养基的正确操作是先调pH再灭菌，若先灭菌后调pH，会在调pH过程中引入杂菌，造成培养基污染，B错误； C、培养基表面蒸发的冷凝水会落到皿盖上，平板倒置培养时，可避免冷凝水回流滴落在培养基表面，防止造成培养基污染、菌落蔓延等问题，C正确； D、从土壤中分离特定细菌需要获得单菌落，应使用固体培养基；液体培养基的作用是扩大培养、增加微生物的数量，无法实现分离单菌落的目的，D错误。 2．（26-27高三上·辽宁鞍山·阶段检测）下列关于不同微生物对培养基需求的叙述，正确的是（　　） A．以纤维素为唯一碳源的培养基上可能长有不同形态的菌落 B．硝化细菌为自养微生物，培养基中无需添加营养物质 C．培养破伤风芽孢杆菌时需严格隔绝氧气，以避免有机物的分解 D．尿素分解菌只能由尿素提供氮源，因此培养基中以尿素为唯一氮源 【答案】A 【详解】A、能分解利用纤维素的微生物有多种类群，不同微生物的菌落特征存在差异，因此以纤维素为唯一碳源的选择培养基上可能长出不同形态的菌落，A正确； B、硝化细菌是化能自养型微生物，可利用氧化氨释放的化学能将CO2转化为有机物，但培养基中仍需添加水、无机盐等营养物质，并非无需添加任何营养物质，B错误； C、破伤风芽孢杆菌为严格厌氧菌，有氧环境会抑制其呼吸作用，进而抑制其生长繁殖甚至导致其死亡，因此培养时需隔绝氧气，与避免有机物分解无关，C错误； D、尿素分解菌可利用尿素作为氮源，也可利用其他含氮物质（如铵盐）作为氮源，使用以尿素为唯一氮源的培养基是为了筛选尿素分解菌，并非尿素分解菌只能利用尿素作为氮源，D错误。 3．（26高三·辽宁本溪·期末）丹东九九草莓含有丰富的维生素C，这是一种强大的抗氧化剂，能够帮助清除体内的自由基，减少它们对机体的损害。九九草莓易受土壤致病菌影响，从而减产。现从种植草莓的土壤中分离致病菌对其研究，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（     ） A．取土样时用的铁铲和取样袋在使用前无需灭菌 B．将土样加入蒸馏水混匀，梯度稀释后涂布，涂布后立即倒置放入恒温培养箱培养 C．同一稀释度下，应至少涂布3个平板，以便后续计数，除此之外平板划线法也可用来计数 D．可以根据菌落的形态、大小、颜色等对菌落进行初步鉴定 【答案】D 【详解】A、分离土壤致病菌时，为避免外来杂菌污染样品，取土样的铁铲和取样袋使用前必须经过灭菌处理，A错误； B、制备土壤悬液时需使用无菌水，避免蒸馏水携带的杂菌干扰实验；且涂布后需等菌液完全被培养基吸收后再倒置培养，防止菌液流动影响菌落形成，B错误； C、平板划线法仅用于微生物的分离纯化，无法对微生物进行计数，计数应采用稀释涂布平板法，C错误； D、不同微生物的菌落具有特定的形态、大小、颜色等特征，可通过这些菌落特征对菌种进行初步鉴定，D正确。 4．（26高三·辽宁朝阳·期末）黄曲霉素是一类由某些霉菌产生的有毒次级代谢产物，具有极强的毒性和致癌性，且具有一定的富集现象，对人类健康构成严重威胁。这些真菌尤其容易在温暖潮湿的条件下生长于谷物、坚果或其他农产品上。研究人员利用黄曲霉素筛选出能高效降解黄曲霉素的菌株，部分实验过程如图所示。鉴定时，S1表示不同菌种的菌落面积，S2表示菌落周围透明圈的面积。下列叙述正确的是（     ） A．人体长期摄食含低剂量的黄曲霉素的玉米无安全风险 B．利用2号培养基能精确测定食品和饲料中的黄曲霉菌含量 C．过程②摇床培养利于菌株与营养物质充分接触和增加溶氧量 D．过程④中，S1/S2最大的菌落是能高效降解黄曲霉素的目的菌 【答案】C 【详解】A、由题干可知，黄曲霉素具有强毒性、致癌性且存在富集效应，长期摄入低剂量黄曲霉素也会在体内积累，存在严重健康风险，A错误； B、2号培养基用稀释涂布平板法接种，统计的菌落数通常低于实际活菌数，仅能估算数量无法精确测定；且该培养基用于筛选降解黄曲霉素的菌株，不能用于测定黄曲霉菌含量，B错误； C、过程②的摇床振荡培养，一方面可提高培养液的溶氧量，另一方面能让菌株与营养物质充分接触，提升营养利用率，利于菌株生长繁殖，C正确； D、透明圈（）是黄曲霉素被降解的区域，降解能力越强的菌株，相同菌落面积（）对应的透明圈越大，即越大（或越小）的菌株降解能力越强，因此最小的菌落才是高效降解的目的菌，D错误。 题型二：微生物的选择培养和计数 5．（26高三·辽宁鞍山·阶段检测）马铃薯种植过程中很容易受到棒形杆菌的侵染导致维管束环状腐烂。棒形杆菌主要在种薯上传播，也可在土壤中存活。如图所示，利用特定的选择培养基可以从土壤中筛选出棒形杆菌，下列说法不正确的是（     ） A．若用平板划线法接种结果如图乙所示，则接种过程中接种环共需灼烧6次 B．稀释涂布平板法和平板划线法都可以被用于土壤中棒形杆菌的分离和计数 C．若培养后的棒形杆菌菌落平均数为120个，则每克土壤约含该菌1.2×108个 D．为使实验结果可信，需增设未接种的选择培养基及接种后的完全培养基作对照 【答案】B 【详解】A、平板划线法操作时，每次划线前需灼烧接种环以杀死残留菌种，划线全部结束后还需灼烧接种环避免菌种污染环境，图乙共有5个划线区域，因此接种环共需灼烧5+1=6次，A正确； B、稀释涂布平板法既可以分离微生物也可以对活菌进行计数，平板划线法只能用于菌种的分离纯化，无法对微生物进行计数，B错误； C、分析稀释过程：1g土壤加入99mL无菌水后稀释倍数为102，后续3次每次取0.5mL菌液加入4.5mL无菌水，每次稀释10倍，最终涂布前总稀释倍数为102×103=105，取0.1mL该稀释液涂布，因此每克土壤含菌量为120÷0.1×105=1.2×108个，C正确； D、增设未接种的选择培养基作对照，可判断培养基是否被杂菌污染；增设接种后的完全培养基作对照，可验证选择培养基的选择作用，能保证实验结果的可信度，D正确。 6．（2026·辽宁朝阳·三模）利用植物秸秆生产酒精的关键步骤包括原料预处理、水解、发酵和蒸馏。预处理后的秸秆中的纤维素和半纤维素需通过水解转化为可发酵的糖(如葡萄糖、木糖)，利用酶解法水解，反应条件温和，催化效率高，且副产物少，但纤维素酶的成本较高。从牛、羊等草食性动物的瘤胃中分离高效降解纤维素的分解菌，可降低上述酶成本较高的问题，实验流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．利用植物秸秆生产酒精的发酵阶段，发酵菌有酵母菌 B．①和②过程使用石蜡主要是为目的菌营造无氧环境 C．②过程所用接种工具为涂布器，平板甲上菌落数要求在30-300之间 D．平板乙上，菌落a由降解纤维素效率最高的菌株繁殖而来 【答案】C 【详解】A、植物秸秆水解得到葡萄糖等可发酵糖，酵母菌无氧呼吸可将糖类转化为酒精，因此生产酒精的发酵阶段发酵菌包含酵母菌，A正确； B、牛、羊瘤胃为无氧环境，其中的纤维素分解菌属于厌氧微生物，①②过程使用石蜡可隔绝空气，为目的菌营造无氧环境，B正确； C、②过程若采用平板划线法接种，接种工具为接种环而非涂布器；且菌落数在30~300之间是稀释涂布平板法用于活菌计数的要求，本实验是分离筛选菌株，不需要严格满足该要求，C错误； D、平板乙上，菌落a最小，但降解圈最大，菌落a由降解纤维素效率最高的菌株繁殖而来，D正确。 一年重难·创新题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，单选+不定项+非选择题） 设题创新:制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂、AM促进根瘤形成的机制、显微镜直接计数法测定菌群数量变化、分解纤维素能力强的菌株等 1．【制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂】（26-27高三上·四川眉山·阶段检测）厨余垃圾若处理不当，可能造成严重的污染。圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌组合可以将有机厨余垃圾迅速分解成水和二氧化碳，减轻环境污染。为制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂，某科研小组对两菌种进行了最佳接种量比例的探究实验，并得出如图所示的实验结果。下列叙述错误的是（     ） A．圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌生长过程中都需要氮源 B．可根据菌落形态特征区分圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌 C．将1 mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别接种0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、39和36，据此可得出每升菌液中的活菌数为3.9×107个 D．处理该类有机厨余垃圾，两菌种的最佳接种量比例肯定是1∶1 【答案】D 【知识点】培养基的成分及其功能、其他微生物的分离与计数 【详解】A、氮源是微生物生长的必需营养物质，圆褐固氮菌可将空气中的氮气作为氮源，巨大芽孢杆菌需要利用外源氮源，二者生长过程中都需要氮源，A正确； B、不同菌种的菌落（形态、大小、颜色、隆起程度等）特征存在差异，因此可根据菌落形态特征区分圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌，B正确； C、三个平板的平均菌落数为（42+39+36）÷3=39，每升菌液的活菌数为39÷0.1×100×1000=3.9×107个，C正确； D、本实验仅设置了1:1、2:1的接种量比例组，并未探究其他接种比例的处理效果，因此不能得出两菌种的最佳接种量比例“肯定”是1:1的结论，D错误。 2．【AM促进根瘤形成的机制】（26-27高三上·河南南阳·期中）AM（真菌）可促使Rh（根瘤菌）诱导根的局部膨大，形成根瘤。研究人员为研究AM促进根瘤形成的机制，将灭菌的土壤分为甲、乙、丙、丁4组，进行了如表所示的实验。下列有关叙述错误的是（     ） 组别 甲 乙 丙 丁 接种 AM＋＋Rh－ AM－＋Rh＋ AM＋＋Rh+ AM－＋Rh－ 大豆根瘤数量 － ＋ ＋＋＋ － 注：AM+、Rh+、表示接种相应生物，AM－、Rh－表示未接种相应生物，“－”表示未长出根瘤，“＋”表示长出根瘤，且“＋”越多，根瘤数量越多。 A．对土壤进行灭菌处理是为了排除土壤原有微生物对实验结果的影响 B．设置丁组是为了形成空白对照 C．单独接种AM或Rh均能诱导大豆根系形成根瘤 D．AM可能会刺激豆科植物根部形成分泌物吸引根瘤菌，形成更多的根瘤 【答案】C 【知识点】群落中生物的种间关系、无菌技术、验证性实验与探究性实验 【详解】A、本实验的自变量为是否接种AM和Rh，对土壤进行灭菌处理可以排除土壤中原有微生物对实验结果的干扰，保证实验结果是由人工接种的AM、Rh导致的，A正确； B、丁组既不接种AM也不接种Rh，属于空白对照，可排除土壤等无关变量对实验结果的影响，B正确； C、甲组仅接种AM，实验结果显示未长出根瘤，说明单独接种AM不能诱导大豆根系形成根瘤，C错误； D、丙组同时接种AM和Rh，根瘤数量远多于仅接种Rh的乙组，据此可推测AM可能会刺激豆科植物根部产生吸引根瘤菌的分泌物，从而促进更多根瘤形成，D正确。 3．【显微镜直接计数法测定菌群数量变化】（不定项）（26-27高三上·辽宁·开学考试）根据抗菌特性可将抗菌剂分为抑菌剂和杀菌剂两种类型，其中抑菌剂可抑制细菌生长，杀菌剂可直接杀死细菌。研究者将不同种类的抗菌剂分别添加到细菌悬液中，用显微镜直接计数法测定菌群数量变化，菌群数量变化曲线可大体概括为两种趋势（图中类型1、类型2）。下列叙述正确的是（     ） A．对照组的主要作用是验证无抗菌剂时菌群可正常增殖 B．实验需控制抗菌剂添加量等无关变量，确保结果可信 C．抑菌剂处理的结果最可能对应类型2 D．计数时，使用台盼蓝进行染色可使计数结果更可信 【答案】ABD 【知识点】微生物的培养与菌种保藏、其他微生物的分离与计数 【详解】A、对照组添加无菌水，作用就是验证在没有抗菌剂的条件下，菌群可以正常增殖，作为参照，A正确； B、抗菌剂类型为自变量，抗菌剂添加量为无关变量，B正确； C、抑菌剂抑制细菌生长，菌群数量增长缓慢，对应类型1，杀菌剂使细菌死亡，对应类型2，C错误； D、题目中采用的是“显微镜直接计数法”，该方法的原理是统计视野内所有细胞的数量，无法区分活菌和死菌；台盼蓝只能对死菌进行染色，因此计数时，使用台盼蓝进行染色可使计数结果更可信，D正确。 4．【分解纤维素能力强的菌株】（不定项）（2026·湖南益阳·一模）获得分解纤维素能力强的菌株有利于解决农业玉米秸秆资源化利用问题。科研人员将筛选到的纤维素分解菌株A进行诱变处理得到菌株B、C、D。在相同且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如图所示。下列说法错误的是（     ） A．透明圈的产生是由于纤维素被分解，不能形成红色复合物 B．筛选菌株A所用培养基应以纤维素为唯一碳源，属于鉴别培养基 C．从图中数据可得出，菌株C的纤维素酶合成基因未发生突变 D．在4种菌株中，菌株D分解纤维素的能力最强 【答案】BCD 【知识点】基因突变、微生物的培养与应用综合、培养基的类型及其应用、分解纤维素的微生物的分离 【详解】A、刚果红可与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，无法形成该红色复合物，培养基上就会出现以菌落为中心的透明圈，A正确； B、以纤维素为唯一碳源的培养基，仅允许能分解纤维素的微生物生长，抑制其他不能利用纤维素的微生物生长，该类培养基属于选择培养基，而非鉴别培养基，B错误； C、密码子具有简并性，即使菌株C的纤维素酶合成基因发生突变，也可能翻译出氨基酸序列相同的蛋白质，表现出和菌株A相同的纤维素分解能力，因此无法得出其纤维素酶合成基因未发生突变的结论，C错误； D、菌落直径与透明圈直径的比值越小，说明相同大小的菌落分解纤维素产生的透明圈越大，纤维素分解能力越强，其中菌株B的该比值最小，分解能力最强，菌株D的比值最大，分解能力最弱，D错误。 5．【土样进行产淀粉酶的细菌的分离操作和计数操作】（不定项）（26-27高三上·辽宁大连·开学考试）淀粉酶在工业生产上应用最早，迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。为了提高淀粉酶的生产水平，首先要从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株。某研究人员对所取土样进行产淀粉酶的细菌的分离操作（A组）和计数操作（B组），过程如下图Ⅰ。下图Ⅱ是一种接种方法示意图。下列相关叙述正确的是（　　） A．步骤③、④所用培养基的成分，最大的区别是碳源种类不同 B．步骤⑤、⑧接种时需设置未接种培养基做阴性对照 C．步骤⑦后，每种稀释度经过步骤⑧时，每个平板上接种0.1 mL菌液 D．图Ⅱ中甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成整个接种过程，接种环要进行3次灭菌 【答案】ABC 【知识点】培养基的成分及其功能、培养基的类型及其应用、微生物的接种方法、其他微生物的分离与计数 【详解】A、步骤③是扩大培养，使用完全培养基，含有多种可被利用的碳源；步骤④是选择培养，使用以淀粉为唯一碳源的选择培养基，只有能产淀粉酶的菌株可以生长，二者培养基成分最大的区别是碳源种类不同，A正确； B、步骤⑤、⑧分别为划线接种和稀释涂布平板接种，设置未接种的空白培养基作为阴性对照，可以检验培养基灭菌是否合格、是否被杂菌污染，排除无关变量对实验结果的干扰，B正确； C、稀释涂布平板法计数时，为避免菌液过多影响菌落生长和计数，通常每个平板接种0.1mL对应稀释度的菌液，C正确； D、平板划线法操作中，接种环需要在接种前、每次划线前、划线操作结束后分别灭菌，三个划线区域共需要4次灭菌，D错误。 6．【土壤中筛选出尿素分解菌】（不定项）（26-27高三上·吉林长春·阶段检测）尿素分子结构式如图，能被脲酶分解，产物能使酚红指示剂变红。为从土壤中筛选出尿素分解菌，实验人员配制不含氮源的培养基（添加酚红指示剂），向其中加入过滤除菌的尿素后用HCl调至橙黄色，然后倒平板。将1g土壤样品溶于99 mL无菌水后再稀释104倍，取菌液0.1mL涂布于上述平板并培养，统计平均菌落数为120个。剩余菌液加等体积的台盼蓝染色后用血细胞计数板检测活菌数。下列错误的是（     ） A．红色圈与菌落直径比值大的菌落中的菌株分解尿素能力强 B．若中格内菌数量代表所有中格菌数量的平均数，则1 g土壤中活菌数约为4.5×1012个 C．1 g土壤样品中尿素分解菌的数目约为1.2×1010个 D．两个尿素分子经缩合反应形成双缩脲（H2N-CO-NH-CO-NH2）不可与双缩脲试剂反应生成紫色络合物 【答案】CD 【知识点】检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【详解】A、尿素分解菌产生的脲酶可分解尿素产生氨，使酚红指示剂变红，菌株分解尿素能力越强，产生的氨越多，菌落周围红色圈范围越大，因此红色圈与菌落直径比值大的菌株分解尿素能力更强，A正确； B、血细胞计数板规格为25中格×16小格；台盼蓝等体积稀释菌液（稀释2倍）。一个中格内无色活菌9个、蓝色死菌3个，平均每中格活菌=9个，总计数室活菌数=9×25=225，计数板体积为0.0001mL，原稀释梯度：土壤总稀释106倍，台盼蓝又等体积稀释×2，因此1g土壤活菌总数=225÷0.0001×106×2=4.5×1012个，B正确； C、1g土壤溶于99mL无菌水，相当于稀释了102倍，再稀释104倍后总稀释倍数为102×104=106倍，取0.1mL涂布得到120个菌落，因此1g土壤中尿素分解菌的数目为120÷0.1×106=1.2×109个，C错误； D、双缩脲试剂显色原理是双缩脲试剂与两个及以上的肽键结合显紫色； 双缩脲（H2N−CO−NH−CO−NH2）分子中含有2 个肽键结构，可和双缩脲试剂生成紫色络合物，D错误。 7．（26-27高三上·辽宁·开学考试）尿素分解菌产生的脲酶可用于降解黄酒中的尿素，避免尿素与乙醇反应生成潜在致癌物氨基甲酸乙酯，从而提升黄酒的品质与安全性。回答下列问题： (1)从生物生境的角度分析，分离尿素分解菌时，应从___________的土壤中取样，所用的培养基属于___________（填“通用培养基”“选择培养基”或“鉴别培养基”），其成分特点是___________。若要统计样品中尿素分解菌的活菌数量，常采用___________法，为了保证结果准确，一般选择菌落数在___________的平板上进行计数。该方法的统计结果往往比实际活菌数目___________。 (2)脲酶能将尿素水解为氨，使培养基pH升高，培养基中加入的酚红指示剂在碱性条件下由橙红色变为亮黄色，在菌落周围形成变色圈。在尿素分解菌初筛的实验中，图中___________（填“A”或“B”）为高产菌株。 (3)研究人员利用高产脲酶的菌种在不同条件下分批发酵生产脲酶，测定培养液中的脲酶活力，结果如图所示。推测pH是该菌种高脲酶活力的关键因素，依据是_______________________。 【答案】(1) 富含尿素 选择培养基 以尿素为唯一氮源 稀释涂布平板 30～300 低 (2)A (3)甲组培养过程中pH由6.5下降至4.5左右，乙组添加了缓冲液pH保持6.5左右，（培养5h后，）乙组脲酶活力明显高于甲组 【知识点】酶促反应的因素及实验、培养基的类型及其应用、微生物的接种方法、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【详解】（1）分离尿素分解菌应从富含尿素的土壤中取样，因为这类环境中尿素分解菌数量较多；所用培养基为选择培养基，其成分特点是以尿素为唯一氮源，只有能分解尿素的细菌才能生长繁殖；统计活菌数量常采用稀释涂布平板法，为保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板计数；该方法统计结果往往比实际活菌数目低，因为当两个或多个细胞连在一起发育为菌落时，平板上观察到的只是一个菌落。 （2）脲酶能将尿素水解为氨，使培养基pH升高，酚红指示剂在碱性条件下由橙红色变为红色，形成变色圈。变色圈越大，说明菌株产生的脲酶越多，分解尿素的能力越强，因此菌落周围变色圈大的A菌株为高产菌株。 （3）甲组未添加缓冲液，培养过程中pH逐渐下降，脲酶活力先升高后降低；乙组添加缓冲液，pH维持稳定，脲酶活力显著升高；对比两组实验可知，pH稳定是该菌种高脲酶活力的关键因素，因为pH下降会抑制脲酶活性，而维持pH稳定可显著提高脲酶活力。 8．【筛选出纳豆激酶高产菌株的实验流程】（26-27高三上·辽宁·开学考试）纳豆是由纳豆芽孢杆菌发酵大豆制成的食品，纳豆芽孢杆菌合成的纳豆激酶具有溶解纤维蛋白（即溶解血栓）等功能。该酶的活性可作为反映纳豆营养价值的指标。如图展示了科研人员从东北传统发酵酱块中，依据菌落的形态特征挑选纳豆芽孢杆菌并从中筛选出纳豆激酶高产菌株的实验流程，图中Ⅰ～Ⅴ表示相应步骤，所用的生理盐水已提前灭菌。 回答下列问题： (1)实验全程所用生理盐水提前灭菌，灭菌常用方法为___________________________________。步骤Ⅱ梯度稀释后接种到培养基a，该接种方法为___________________________________。若稀释倍数过高，平板上菌落数目过少，统计结果误差大；适宜计数的平板菌落数范围为__________个。 (2)步骤Ⅱ～Ⅴ中，需无菌操作的有__________。步骤Ⅴ中纤维蛋白平板需预先打相同直径孔的原因__________________________________________________。 (3)实验设置空白对照组：取未接种菌液的空白培养基培养一段时间，若空白平板长出菌落，说明________________________________________。 【答案】(1) 高压蒸汽灭菌法 稀释涂布平板法 30~300 (2) Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 遵循单一变量原则，保证各孔加入的酶液体积一致、酶与纤维蛋白的接触面积相同，排除孔大小差异对实验结果的干扰，使溶解圈大小仅反映纳豆激酶的活性差异 (3) 培养基灭菌不彻底（或实验操作过程中被杂菌污染） 【知识点】无菌技术、微生物的接种方法、微生物的培养与菌种保藏、其他微生物的分离与计数 【详解】（1）对液体试剂的常规灭菌方法为高压蒸汽灭菌法；梯度稀释后将菌液涂布到平板的接种方法是稀释涂布平板法，该方法可用于菌落计数；为了保证统计结果的准确性，平板上适宜计数的菌落数范围为30~300个。 （2） 本实验全程需要避免杂菌污染影响菌株筛选，步骤Ⅱ梯度稀释接种、Ⅲ单菌落的挑取传代、Ⅳ制备酶提取液、Ⅴ点样测定酶活性都需要严格无菌操作；在纤维蛋白平板上打相同直径的孔是为了控制无关变量一致，遵循单一变量原则，保证各孔加入的酶液体积一致、酶与纤维蛋白的接触面积相同，排除孔大小差异对实验结果的干扰，使溶解圈大小仅反映纳豆激酶的活性差异。 （3）未接种的空白平板理论上不应长出菌落，若空白平板长出菌落，说明培养基灭菌不彻底（或实验操作过程中被杂菌污染）。 三年真题·压轴题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国） 高频考点：微生物的基本培养技术、微生物的选择培养和计数 1．（2026·重庆·高考真题）在发酵生产青霉素的过程中总会有头孢霉素产生，下图为青霉菌的部分代谢途径。结合发酵工程生产青霉素的过程，下列叙述正确的是（     ） A．可通过选育高表达酰基转移酶的青霉菌来阻断头孢霉素的合成 B．扩大培养时，培养基中添加Lys，青霉菌才能繁殖 C．可通过检测培养液中青霉菌数量和青霉素浓度了解发酵进程 D．发酵结束后，将菌体分离干燥可获得纯化的青霉素 【答案】C 【详解】A、由代谢途径可知，IPN在酰基转移酶催化下生成青霉素，在扩环酶催化下生成头孢霉素。高表达酰基转移酶只会使更多IPN流向青霉素合成途径，无法阻断头孢霉素的合成，A错误； B、青霉菌可利用基础营养物质自行合成Lys，扩大培养时无需额外添加Lys青霉菌即可繁殖，B错误； C、发酵过程中，青霉菌的种群数量、产物青霉素的积累浓度可反映发酵的进程，因此可通过检测这两个指标了解发酵情况，C正确； D、青霉素是青霉菌分泌到发酵液中的次级代谢产物，需从发酵液中提取纯化，D错误。 2．（2026·浙江·高考真题）在含CaCO3的培养基中，醋酸菌产生的乙酸能与CaCO3反应，使其菌落周围出现透明圈。拟从果园附近的土壤中筛选产酸能力强的醋酸菌，按照取样、扩大培养、筛选、鉴定等步骤进行实验。下列叙述正确的是（     ） A．采集土壤样本时，取地表以下30cm的深层土 B．将土样稀释后，接种至以葡萄糖为唯一碳源的液体培养基进行振荡培养 C．将扩大培养后的菌液进行梯度稀释，涂布于含乙醇及CaCO3的平板上培养 D．挑选平板上直径最大的菌落，提取DNA，测序后比对序列进行鉴定 【答案】C 【详解】A、醋酸菌是好氧微生物，主要分布在氧气充足的土壤表层，30cm深层土氧气含量低，醋酸菌数量少，A错误； B、筛选醋酸菌应使用以乙醇为唯一碳源的选择培养基，葡萄糖为唯一碳源的培养基可支持多种异养微生物生长，无法针对性筛选醋酸菌，B错误； C、梯度稀释后涂布平板可分离得到单菌落，含乙醇的培养基能筛选出可利用乙醇的醋酸菌，CaCO3 可与醋酸菌产生的乙酸反应形成透明圈，便于筛选产酸菌株，C正确； D、产酸能力的判断依据是透明圈直径与菌落直径的比值，比值越大产酸能力越强，而非直接挑选菌落直径最大的菌落，D错误。 3．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 【答案】D 【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 【详解】A、以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物被抑制），符合选择培养基的设计原理，A正确； B、逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株（类似“驯化”过程），B正确； C、培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸性），是配制培养基的基本要求，C正确； D、稀释涂布平板法需用​​涂布器​​将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂布无法保证菌液均匀，D错误。 故选D。 4．（2023·辽宁·高考真题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m³）。下列叙述错误的是（    ） A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理 B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置 C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值 D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高 【答案】D 【分析】稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 【详解】A、为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样器进行灭菌，对实验操作者的双手进行消毒，A正确； B、纯化培养时，为防止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正确； C、微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30～300的平板进行计数，以确保实验的准确性，C正确； D、使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细胞连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，D错误。 故选D。 5．（不定项）（2026·湖南·高考真题）科研人员拟筛选耐镉细菌用于生态修复。下列叙述正确的是（     ） A．宜从镉污染的土壤或水体中分离耐镉细菌 B．配制培养基时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分 C．含氯化镉的培养基可选择耐镉细菌并鉴定其种属 D．利用稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌实际数目多 【答案】AB 【详解】A、镉污染的土壤或水体中镉含量高，在长期自然选择下，该环境中耐镉细菌的比例远高于普通环境，因此宜从该类环境中分离目的菌，A正确； B、培养基的基本营养成分一般包含碳源、氮源、无机盐、水，因此配制时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分，B正确； C、含氯化镉的培养基属于选择培养基，仅能筛选出耐镉细菌，无法鉴定其种属，鉴定种属还需要结合形态观察、生理生化检测等其他实验，C错误； D、利用稀释涂布平板法计数时，若两个或多个活菌连在一起，平板上只能形成一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌实际数目少，D错误。 6．（不定项）（2026·黑吉辽蒙卷·高考真题）某奶酒以牛奶为主要原料，经微生物发酵酿制而成。为提高发酵效率，需筛选具有乳糖利用率高、乙醇产量高等特性的酵母菌菌株。下列叙述正确的是（　　） A．选择培养基应以葡萄糖为唯一碳源 B．选择培养基中可添加抗生素抑制细菌生长 C．制备固体培养基需先高压蒸汽灭菌再倒平板 D．接种后的平板应在37℃恒温培养 【答案】BC 【详解】A、本实验目的是筛选乳糖利用率高的酵母菌，选择培养基应以乳糖为唯一碳源，才能保证仅能利用乳糖的菌株存活，以葡萄糖为唯一碳源无法达到筛选目的，A错误； B、抗生素可抑制细菌生长繁殖，酵母菌属于真菌，对抗生素不敏感，因此添加抗生素可排除细菌杂菌的干扰，B正确； C、制备固体培养基的流程为计算→称量→溶化→调pH→高压蒸汽灭菌→倒平板，先灭菌再倒平板可避免杂菌污染，C正确； D、酵母菌的最适培养温度约为28℃，37℃是细菌培养的常用温度，不符合酵母菌的培养要求，D错误。 7．（不定项）（2024·辽宁·高考真题）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作正确的是（    ） A．在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品 B．将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测 C．将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落 D．判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小 【答案】CD 【分析】1、获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌。 2、稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30〜300的平板进行计数。 【详解】A、题干信息：某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，故在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从未感病植株上采集样品，A错误； B、获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染；将采集的样品充分消毒后，用无菌水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测，B错误； C、题图可知，样品研磨后进行了稀释涂布，可见将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落，C正确； D、题图抗性检测可知，判断内生菌的抗性效果需设置对照组和实验组，对照组不接种内生菌得到病原菌菌斑，实验组接种内生菌得到病原菌菌斑，然后比较对照组和实验组的菌斑大小，实验组病原菌菌斑越小表明内生菌抗性效果越好，D正确。 故选CD。 1 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 第35讲 微生物的培养技术和应用 题型专攻·基础题（全国视野，2大题型） 题号 1 2 3 4 5 6 答案 C A D C B C 一年重难·创新题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，单选+不定项+非选择题） 题号 1 2 3 4 5 6 答案 D C ABD BCD ABC CD 7【答案】(1) 富含尿素 选择培养基 以尿素为唯一氮源 稀释涂布平板 30～300 低 (2)A (3)甲组培养过程中pH由6.5下降至4.5左右，乙组添加了缓冲液pH保持6.5左右，（培养5h后，）乙组脲酶活力明显高于甲组 8【答案】(1) 高压蒸汽灭菌法 稀释涂布平板法 30~300 (2) Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 遵循单一变量原则，保证各孔加入的酶液体积一致、酶与纤维蛋白的接触面积相同，排除孔大小差异对实验结果的干扰，使溶解圈大小仅反映纳豆激酶的活性差异 (3) 培养基灭菌不彻底（或实验操作过程中被杂菌污染） 三年真题·压轴题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，单选+多选+非选择题） 题号 1 2 3 4 5 6 7 答案 C C D D AB BC CD 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 第35讲 微生物的培养技术和应用 第一部分 五年考情·精准定向 黑吉辽蒙考情概览 黑吉辽蒙热点情境 黑吉辽蒙备考策略 第二部分 两大核心·主干速记 一图串联·核心梳理·易错辨析 核心知识1 微生物的基本培养技术 核心知识2 微生物的选择培养和计数 第三部分 分层专练·靶向攻关 题型专攻·基础题（全国视野，2大题型） 一年重难·创新题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，单选+不定项+非选择题） 三年真题·压轴题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，含2026年高考真题） 第一部分 五年考情·精准定向 考情概览 新课标要求 考题统计 1．分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法异同；选择培养基和鉴别培养基的区别 2．探究微生物培养的条件及如何分离某种微生物等。 2026·福建·微生物的接种、其他微生物的计数 2026·江苏·微生物的接种、其他微生物的计数 2026·重庆·其他微生物的分离与计数 2026·浙江·其他微生物的分离与计数 2026·湖南·微生物的接种、其他微生物的计数 2026·江西·微生物的接种、其他微生物的计数2026·河北·微生物的接种、其他微生物的计数2026·黑吉辽蒙·其他微生物的分离与计数 2025·黑吉辽蒙·其他微生物的分离与计数 2024·黑吉辽蒙·微生物的接种、其他微生物的计数 1． 考查频次：近5年黑吉辽蒙新高考中都有命题，考查频率较高，多数以单项选择题形式出现，非选择题较少。 2．考查要点：查内容聚焦板块： (1)基于基础知识考查：重点考查微生物培养的基本技术，如培养基的配制、无菌技术、平板划线法、稀释涂布平板法、微生物的计数等核心知识点，要求学生准确理解和掌握这些基础知识，并能进行准确的表述和应用； (2)结合实际情境考查：常以生产生活中的实际问题为背景，如从堆肥中筛选分解有机物的微生物、从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌等，要求学生运用所学的微生物培养知识，分析和解决实际问题，考查学生的知识迁移能力和综合运用能力。 热点情境 本地情境素材： 命题情境1：常以解决环境问题或生产实际问题为背景。例如，从受污染的土壤或水体中筛选能够降解特定污染物（如金霉素）的微生物菌株。 考查重点：选择培养基的设计原理（如以目标污染物为唯一碳源或氮源）、稀释涂布平板法与平板划线法的操作区别与应用、微生物数量的测定方法等。 命题情境2：涉及食品工业（如酸奶、发酵工程）、医学检测（如病原体筛查）或实验室研究等场景。 考查重点：对培养基、实验器皿进行灭菌的方法（如高压蒸汽灭菌、干热灭菌），对操作空间或手部进行消毒的方法，以及在酒精灯火焰附近操作等无菌操作的具体要求。 命题情境3：结合生态农业（如利用微生物菌剂防治土传病害、保护黑土地）、生物制造（如利用废弃原料发酵生产可降解材料）等具有地域特色或时代性的主题。 考查重点：培养基的营养成分配制、培养环境条件（如pH、温度、溶氧量）的控制，以及微生物代谢产物的应用等。 备考策略 1、 先建知识框架 把这一专题的核心模块理清：培养基类型、无菌技术、纯培养方法、选择与鉴别、微生物计数。复习时按“概念→用途→典型例子”整理，比零散背细节更有效。 2、 重点区分易混概念 尤其要分清消毒和灭菌、选择培养基和鉴别培养基、平板划线法和稀释涂布平板法。比如灭菌是杀死所有微生物包括芽孢和孢子，消毒只是杀死部分微生物；平板划线法主要用于分离，稀释涂布平板法才常用于活菌计数。 3、 死磕实验操作细节 高频考点往往落在具体操作上：倒平板约50℃、接种在酒精灯火焰旁进行、平板倒置培养、未接种空白对照检验灭菌效果等。这些细节常出现在选择题和实验题中，不能只懂原理不看操作。 4、 掌握两类经典筛选实例 尿素分解菌和纤维素分解菌是常考模型。尿素分解菌用“尿素为唯一氮源”选择，酚红指示剂变红说明有脲酶；纤维素分解菌用“纤维素为唯一碳源”选择，刚果红染色出现透明圈说明能分解纤维素。 5、 强化计数方法与误差分析 稀释涂布平板法适用于活菌计数，一般选择菌落数30～300的平板统计；显微镜直接计数会把死菌和活菌一起算，结果往往偏大。做题时要能判断题目要求的是“活菌数”还是“总菌数”。 6、 用情境题训练信息提取 黑吉辽蒙卷常把微生物知识与环境污染治理、食品安全、农业生态等真实情境结合。复习时不要只刷基础题，要多练材料题，训练从题干中提取“目的菌、选择条件、对照设置、变量控制”等信息的能力。 第二部分 两大核心·主干速记 内容速览：微生物的基本培养技术、微生物的选择培养和计数 一图串联 核心梳理 核心知识1 微生物的基本培养技术 考点1：培养基的配制和无菌技术 1．培养基的化学成分包括 __________________________________________________等。 （1）_____：能为微生物的代谢提供___________的物质。如CO2、NaHCO3等_________；糖类、石油、花生粉饼等________。____________只能利用_____________。单质碳_________碳源。 （2）________：能为微生物的代谢提供________的物质。如N2、NH3、NO、NH等___________；蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等___________。 只有____________才能利用_________。 （3）水 （4）无机盐 （5）生长因子：微生物生长繁殖所必需的，但__________________或__________，如________，______，______________等。培养某些微生物时可以不用添加生长因子。 另外，培养基还要满足微生物生长对______、_________________以及_____________的要求。例如，培养_____________时需要在培养基中添加___________，培养________时，一般需将培养基的pH调至______；培养___________时，一般需要将pH调至_______________；培养____________，则需要提供_________的条件。 2．培养基的种类及用途： （1）按___________可分为_____________、_______________和______________。____________应用于工业或生活生产，_______________应用于微生物的分离和鉴定，____________则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 （2）按照培养基的用途，可将培养基分为________________和_____________。 3．获得纯净培养物的关键是____________________，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行___________________。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行___________。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在______________附近进行。 ④实验操作时应避免_____________________________________。 无菌技术除了用来_____________________外，还能________________________________。 4．消毒 （1）消毒指________________________________________________（不_________________________）。 （2）消毒方法常用到__________________，_______________（对于一些不耐高温的液体），还有__________（如_______、___________、____________等）、________________。 5．灭菌 （1）灭菌是指_____________________________________________________________。 （2）灭菌方法有_______________、_____________、___________________。 ①接种环、接种针、试管口等使用________________； ②玻璃器皿、金属用具等使用__________________，所用器械是____________________ ； ③培养基、无菌水等使用________________________，所用器械是________________________ 。 6．比较消毒和灭菌 比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 ____________________ __________________ ______________ 灭菌 __________ __________ __________ 考点2：微生物的纯培养 1．微生物的纯培养包括____________、______、_________、_________和___________等步骤。 2．____________________________________________________________________________________，这就是菌落。采用_____________和_________________________能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 3．通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板划线的具体操作见下面的流程图。 易错提醒 1、灭菌的效果比消毒要好。活体生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能灭菌。 2、实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。 核心知识2 微生物的选择培养和计数 考点1：微生物的选择培养 1．在微生物学中，将允_______________________________________________-，称为选择培养基。 2．如果想知道1 g土壤中有多少能分解尿素的细菌，仅有选择培养基是不够的，还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法。可采用稀释涂布平板法，其操作如图 稀释涂布平板法操作示意图 考点2： 微生物的数量测定 1．稀释涂布平板法除可以用于___________________外，也常用来____________________。当______________时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为____________的平板进行计数。 2．样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。在实际操作中，通常选用___________________进行培养，以保证获得菌落数为______________、适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对__________平板进行重复计数，然后求出平均值。 3．值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌的实际数目_____，这是因为______________________________。因此，统计结果一般用______________而不是用活菌数来表示。 4．除上述的活菌计数外，利用____________进行直接计数，也是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的______________或______________，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的_____________。 5．细菌计数板和血细胞计数板的计数原理相同。血细胞计数板比细菌计数板厚，常用于____________________、____________等的计数。用细菌计数板可对_____________的细胞进行观察和计数。 6．绝大多数微生物都能利用___________，但是只有能____________的微生物才能分解尿素。利用以_____作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 易错提醒 1．区分选择培养基与鉴别培养基 种类 特点 用途 举例 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品，进而产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌 常见选择培养基举例：(1)缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。(2)含青霉素的培养基可淘汰细菌。(3)无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。 2. 间接计数法和直接计数法 项目 间接计数法(稀释涂布平板法) 直接计数法(显微镜计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数 每毫升原液所含细菌数＝每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数 缺点 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不能区分活菌和死菌 结果 比实际值偏小 比实际值偏大 3、能在选择培养基上生长的不一定是所需要的目的菌。原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢物进行生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步的鉴定。 第三部分 分层专练·靶向攻关 题型专攻·基础题（全国视野，2大题型） 考查重点：微生物的基本培养技术、微生物的选择培养和计数 题型一：微生物的基本培养技术 1．（26-27高三上·辽宁·开学考试）下列有关微生物培养的叙述，正确的是（     ） A．一种物质可兼具碳源、氮源功能，碳源都能为微生物提供能量 B．配制牛肉膏蛋白胨培养基时，应先灭菌后调pH C．平板培养时应倒置，防止冷凝水回流污染培养基 D．从土壤样本中分离特定细菌应使用液体培养基 2．（26-27高三上·辽宁鞍山·阶段检测）下列关于不同微生物对培养基需求的叙述，正确的是（　　） A．以纤维素为唯一碳源的培养基上可能长有不同形态的菌落 B．硝化细菌为自养微生物，培养基中无需添加营养物质 C．培养破伤风芽孢杆菌时需严格隔绝氧气，以避免有机物的分解 D．尿素分解菌只能由尿素提供氮源，因此培养基中以尿素为唯一氮源 3．（26高三·辽宁本溪·期末）丹东九九草莓含有丰富的维生素C，这是一种强大的抗氧化剂，能够帮助清除体内的自由基，减少它们对机体的损害。九九草莓易受土壤致病菌影响，从而减产。现从种植草莓的土壤中分离致病菌对其研究，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（     ） A．取土样时用的铁铲和取样袋在使用前无需灭菌 B．将土样加入蒸馏水混匀，梯度稀释后涂布，涂布后立即倒置放入恒温培养箱培养 C．同一稀释度下，应至少涂布3个平板，以便后续计数，除此之外平板划线法也可用来计数 D．可以根据菌落的形态、大小、颜色等对菌落进行初步鉴定 4．（26高三·辽宁朝阳·期末）黄曲霉素是一类由某些霉菌产生的有毒次级代谢产物，具有极强的毒性和致癌性，且具有一定的富集现象，对人类健康构成严重威胁。这些真菌尤其容易在温暖潮湿的条件下生长于谷物、坚果或其他农产品上。研究人员利用黄曲霉素筛选出能高效降解黄曲霉素的菌株，部分实验过程如图所示。鉴定时，S1表示不同菌种的菌落面积，S2表示菌落周围透明圈的面积。下列叙述正确的是（     ） A．人体长期摄食含低剂量的黄曲霉素的玉米无安全风险 B．利用2号培养基能精确测定食品和饲料中的黄曲霉菌含量 C．过程②摇床培养利于菌株与营养物质充分接触和增加溶氧量 D．过程④中，S1/S2最大的菌落是能高效降解黄曲霉素的目的菌 题型二：微生物的选择培养和计数 5．（26高三·辽宁鞍山·阶段检测）马铃薯种植过程中很容易受到棒形杆菌的侵染导致维管束环状腐烂。棒形杆菌主要在种薯上传播，也可在土壤中存活。如图所示，利用特定的选择培养基可以从土壤中筛选出棒形杆菌，下列说法不正确的是（     ） A．若用平板划线法接种结果如图乙所示，则接种过程中接种环共需灼烧6次 B．稀释涂布平板法和平板划线法都可以被用于土壤中棒形杆菌的分离和计数 C．若培养后的棒形杆菌菌落平均数为120个，则每克土壤约含该菌1.2×108个 D．为使实验结果可信，需增设未接种的选择培养基及接种后的完全培养基作对照 6．（2026·辽宁朝阳·三模）利用植物秸秆生产酒精的关键步骤包括原料预处理、水解、发酵和蒸馏。预处理后的秸秆中的纤维素和半纤维素需通过水解转化为可发酵的糖(如葡萄糖、木糖)，利用酶解法水解，反应条件温和，催化效率高，且副产物少，但纤维素酶的成本较高。从牛、羊等草食性动物的瘤胃中分离高效降解纤维素的分解菌，可降低上述酶成本较高的问题，实验流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．利用植物秸秆生产酒精的发酵阶段，发酵菌有酵母菌 B．①和②过程使用石蜡主要是为目的菌营造无氧环境 C．②过程所用接种工具为涂布器，平板甲上菌落数要求在30-300之间 D．平板乙上，菌落a由降解纤维素效率最高的菌株繁殖而来 一年重难·创新题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国，单选+不定项+非选择题） 设题创新:制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂、AM促进根瘤形成的机制、显微镜直接计数法测定菌群数量变化、分解纤维素能力强的菌株等 1．【制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂】（26-27高三上·四川眉山·阶段检测）厨余垃圾若处理不当，可能造成严重的污染。圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌组合可以将有机厨余垃圾迅速分解成水和二氧化碳，减轻环境污染。为制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂，某科研小组对两菌种进行了最佳接种量比例的探究实验，并得出如图所示的实验结果。下列叙述错误的是（     ） A．圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌生长过程中都需要氮源 B．可根据菌落形态特征区分圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌 C．将1 mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别接种0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、39和36，据此可得出每升菌液中的活菌数为3.9×107个 D．处理该类有机厨余垃圾，两菌种的最佳接种量比例肯定是1∶1 2．【AM促进根瘤形成的机制】（26-27高三上·河南南阳·期中）AM（真菌）可促使Rh（根瘤菌）诱导根的局部膨大，形成根瘤。研究人员为研究AM促进根瘤形成的机制，将灭菌的土壤分为甲、乙、丙、丁4组，进行了如表所示的实验。下列有关叙述错误的是（     ） 组别 甲 乙 丙 丁 接种 AM＋＋Rh－ AM－＋Rh＋ AM＋＋Rh+ AM－＋Rh－ 大豆根瘤数量 － ＋ ＋＋＋ － 注：AM+、Rh+、表示接种相应生物，AM－、Rh－表示未接种相应生物，“－”表示未长出根瘤，“＋”表示长出根瘤，且“＋”越多，根瘤数量越多。 A．对土壤进行灭菌处理是为了排除土壤原有微生物对实验结果的影响 B．设置丁组是为了形成空白对照 C．单独接种AM或Rh均能诱导大豆根系形成根瘤 D．AM可能会刺激豆科植物根部形成分泌物吸引根瘤菌，形成更多的根瘤 3．【显微镜直接计数法测定菌群数量变化】（不定项）（26-27高三上·辽宁·开学考试）根据抗菌特性可将抗菌剂分为抑菌剂和杀菌剂两种类型，其中抑菌剂可抑制细菌生长，杀菌剂可直接杀死细菌。研究者将不同种类的抗菌剂分别添加到细菌悬液中，用显微镜直接计数法测定菌群数量变化，菌群数量变化曲线可大体概括为两种趋势（图中类型1、类型2）。下列叙述正确的是（     ） A．对照组的主要作用是验证无抗菌剂时菌群可正常增殖 B．实验需控制抗菌剂添加量等无关变量，确保结果可信 C．抑菌剂处理的结果最可能对应类型2 D．计数时，使用台盼蓝进行染色可使计数结果更可信 4．【分解纤维素能力强的菌株】（不定项）（2026·湖南益阳·一模）获得分解纤维素能力强的菌株有利于解决农业玉米秸秆资源化利用问题。科研人员将筛选到的纤维素分解菌株A进行诱变处理得到菌株B、C、D。在相同且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如图所示。下列说法错误的是（     ） A．透明圈的产生是由于纤维素被分解，不能形成红色复合物 B．筛选菌株A所用培养基应以纤维素为唯一碳源，属于鉴别培养基 C．从图中数据可得出，菌株C的纤维素酶合成基因未发生突变 D．在4种菌株中，菌株D分解纤维素的能力最强 5．【土样进行产淀粉酶的细菌的分离操作和计数操作】（不定项）（26-27高三上·辽宁大连·开学考试）淀粉酶在工业生产上应用最早，迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。为了提高淀粉酶的生产水平，首先要从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株。某研究人员对所取土样进行产淀粉酶的细菌的分离操作（A组）和计数操作（B组），过程如下图Ⅰ。下图Ⅱ是一种接种方法示意图。下列相关叙述正确的是（　　） A．步骤③、④所用培养基的成分，最大的区别是碳源种类不同 B．步骤⑤、⑧接种时需设置未接种培养基做阴性对照 C．步骤⑦后，每种稀释度经过步骤⑧时，每个平板上接种0.1 mL菌液 D．图Ⅱ中甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成整个接种过程，接种环要进行3次灭菌 6．【土壤中筛选出尿素分解菌】（不定项）（26-27高三上·吉林长春·阶段检测）尿素分子结构式如图，能被脲酶分解，产物能使酚红指示剂变红。为从土壤中筛选出尿素分解菌，实验人员配制不含氮源的培养基（添加酚红指示剂），向其中加入过滤除菌的尿素后用HCl调至橙黄色，然后倒平板。将1g土壤样品溶于99 mL无菌水后再稀释104倍，取菌液0.1mL涂布于上述平板并培养，统计平均菌落数为120个。剩余菌液加等体积的台盼蓝染色后用血细胞计数板检测活菌数。下列错误的是（     ） A．红色圈与菌落直径比值大的菌落中的菌株分解尿素能力强 B．若中格内菌数量代表所有中格菌数量的平均数，则1 g土壤中活菌数约为4.5×1012个 C．1 g土壤样品中尿素分解菌的数目约为1.2×1010个 D．两个尿素分子经缩合反应形成双缩脲（H2N-CO-NH-CO-NH2）不可与双缩脲试剂反应生成紫色络合物 7．（26-27高三上·辽宁·开学考试）尿素分解菌产生的脲酶可用于降解黄酒中的尿素，避免尿素与乙醇反应生成潜在致癌物氨基甲酸乙酯，从而提升黄酒的品质与安全性。回答下列问题： (1)从生物生境的角度分析，分离尿素分解菌时，应从___________的土壤中取样，所用的培养基属于___________（填“通用培养基”“选择培养基”或“鉴别培养基”），其成分特点是___________。若要统计样品中尿素分解菌的活菌数量，常采用___________法，为了保证结果准确，一般选择菌落数在___________的平板上进行计数。该方法的统计结果往往比实际活菌数目___________。 (2)脲酶能将尿素水解为氨，使培养基pH升高，培养基中加入的酚红指示剂在碱性条件下由橙红色变为亮黄色，在菌落周围形成变色圈。在尿素分解菌初筛的实验中，图中___________（填“A”或“B”）为高产菌株。 (3)研究人员利用高产脲酶的菌种在不同条件下分批发酵生产脲酶，测定培养液中的脲酶活力，结果如图所示。推测pH是该菌种高脲酶活力的关键因素，依据是_______________________。 8．【筛选出纳豆激酶高产菌株的实验流程】（26-27高三上·辽宁·开学考试）纳豆是由纳豆芽孢杆菌发酵大豆制成的食品，纳豆芽孢杆菌合成的纳豆激酶具有溶解纤维蛋白（即溶解血栓）等功能。该酶的活性可作为反映纳豆营养价值的指标。如图展示了科研人员从东北传统发酵酱块中，依据菌落的形态特征挑选纳豆芽孢杆菌并从中筛选出纳豆激酶高产菌株的实验流程，图中Ⅰ～Ⅴ表示相应步骤，所用的生理盐水已提前灭菌。 回答下列问题： (1)实验全程所用生理盐水提前灭菌，灭菌常用方法为___________________________________。步骤Ⅱ梯度稀释后接种到培养基a，该接种方法为___________________________________。若稀释倍数过高，平板上菌落数目过少，统计结果误差大；适宜计数的平板菌落数范围为__________个。 (2)步骤Ⅱ～Ⅴ中，需无菌操作的有__________。步骤Ⅴ中纤维蛋白平板需预先打相同直径孔的原因__________________________________________________。 (3)实验设置空白对照组：取未接种菌液的空白培养基培养一段时间，若空白平板长出菌落，说明________________________________________。 三年真题·压轴题（侧重黑吉辽蒙，辐射全国） 高频考点：微生物的基本培养技术、微生物的选择培养和计数 1．（2026·重庆·高考真题）在发酵生产青霉素的过程中总会有头孢霉素产生，下图为青霉菌的部分代谢途径。结合发酵工程生产青霉素的过程，下列叙述正确的是（     ） A．可通过选育高表达酰基转移酶的青霉菌来阻断头孢霉素的合成 B．扩大培养时，培养基中添加Lys，青霉菌才能繁殖 C．可通过检测培养液中青霉菌数量和青霉素浓度了解发酵进程 D．发酵结束后，将菌体分离干燥可获得纯化的青霉素 2．（2026·浙江·高考真题）在含CaCO3的培养基中，醋酸菌产生的乙酸能与CaCO3反应，使其菌落周围出现透明圈。拟从果园附近的土壤中筛选产酸能力强的醋酸菌，按照取样、扩大培养、筛选、鉴定等步骤进行实验。下列叙述正确的是（     ） A．采集土壤样本时，取地表以下30cm的深层土 B．将土样稀释后，接种至以葡萄糖为唯一碳源的液体培养基进行振荡培养 C．将扩大培养后的菌液进行梯度稀释，涂布于含乙醇及CaCO3的平板上培养 D．挑选平板上直径最大的菌落，提取DNA，测序后比对序列进行鉴定 3．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 4．（2023·辽宁·高考真题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m³）。下列叙述错误的是（    ） A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理 B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置 C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值 D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高 5．（不定项）（2026·湖南·高考真题）科研人员拟筛选耐镉细菌用于生态修复。下列叙述正确的是（     ） A．宜从镉污染的土壤或水体中分离耐镉细菌 B．配制培养基时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分 C．含氯化镉的培养基可选择耐镉细菌并鉴定其种属 D．利用稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌实际数目多 6．（不定项）（2026·黑吉辽蒙卷·高考真题）某奶酒以牛奶为主要原料，经微生物发酵酿制而成。为提高发酵效率，需筛选具有乳糖利用率高、乙醇产量高等特性的酵母菌菌株。下列叙述正确的是（　　） A．选择培养基应以葡萄糖为唯一碳源 B．选择培养基中可添加抗生素抑制细菌生长 C．制备固体培养基需先高压蒸汽灭菌再倒平板 D．接种后的平板应在37℃恒温培养 7．（不定项）（2024·辽宁·高考真题）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作正确的是（    ） A．在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品 B．将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测 C．将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落 D．判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小 1 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $