第38讲 微生物的培养（专项训练）（1图4核心6易错+3层精练）（江苏专用）2027年高考生物一轮复习讲练测

第38 讲 微生物的培养 第一部分 五年考情·精准定向 ……………………………………………………………… 1 江苏考情概览 高频考点情境 高效备考策略 第二部分 三大核心·主干速记………………………………………………………………… 3 一图串联·核心梳理·速记口诀 核心 01 微生物的培养基 核心 02　无菌技术 核心 03　微生物的基本培养技术 核心 04　微生物的选择培养和计数 第三部分 六大易错·逐点击破………………………………………………………………… 11 易错01 灭菌与消毒混淆 易错02 培养基成分与碳源氮源理解误区 易错03 平板划线法与稀释涂布平板法混淆 易错04 计数结果偏大偏小混淆 易错05 选择培养基与鉴别培养基混淆 易错06 灭菌的适用范围与对象混淆 第四部分 分层专练·靶向攻关 ……………………………………………………………………12 两年模拟·基础题（全国视野，单选+多选） 一年重难·情境题（侧重江苏，辐射全国，单选+多选+非选择题） 三年真题·压轴题（侧重江苏，辐射全国，单选+多选+非选择题） 江苏考情概览 新课标要求 考题统计 1. 举例说明微生物的实验室培养技术，说明培养基的种类与成分、无菌技术（灭菌与消毒）的原理。 2. 阐明微生物的分离、纯化与计数方法（平板划线法、稀释涂布平板法、显微镜直接计数法）。 3. 举例说明选择培养与选择培养基的原理，说明土壤中分解尿素的细菌、分解纤维素的微生物等的分离与计数应用。 2025·江苏　稀释涂布平板法计数与培养基配制判断2024·江苏　微生物纯化与无菌操作、选择培养基筛选 2023·江苏　微生物分离纯化、菌落特征辨析 2022·江苏　微生物的培养与观察、选择培养原理 2021·江苏　平板划线法与稀释涂布平板法比较 高频考点情境 1. 考查频次：江苏高考高频，单选、多选、非选择题均会考查；常结合微生物实验室培养、土壤微生物筛选、环境治理（降解污染物）等真实实验情境命题。 2. 考查要点： 培养基与无菌技术：培养基的种类（液体/固体、通用/选择/鉴别）、成分（碳源、氮源、无机盐、水）；灭菌与消毒的区分及适用对象；培养基配制流程。 微生物纯化与计数：平板划线法、稀释涂布平板法；菌落特征与纯培养判断；活菌计数与显微镜直接计数；菌种保存方法。 选择培养与应用：选择培养基筛选目的菌；土壤中分解尿素细菌（脲酶、酚红指示剂）；分解纤维素微生物（刚果红染色法）；环保降解菌筛选。 3. 命题情境：实验室微生物培养操作、土壤微生物筛选、环境降解菌筛选；侧重实验探究、证据意识，常结合流程图、平板图片、曲线图、表格考查。 备考策略 1. 抓牢核心概念：必背：培养基、碳源、氮源、灭菌、消毒、平板划线法、稀释涂布平板法、选择培养基、鉴别培养基、菌落、脲酶。 2. 构建知识网络：微生物培养基本流程（配制培养基→灭菌→倒平板→接种→培养→观察计数）；灭菌（灼烧/干热/湿热高压蒸汽）与消毒（煮沸/巴氏/化学/紫外线）区分；平板划线法与稀释涂布平板法的操作与用途对比。 3. 联系实际应用：土壤中分解尿素细菌的分离（以尿素为唯一氮源+酚红指示剂）；分解纤维素微生物（刚果红染色，菌落周围出现透明圈）；筛选降解石油、塑料的环保菌。 4. 强化题型方法：流程图题（配基→灭菌→倒板→接种→培养→计数）；平板菌落图片题（计数、纯度判断）；计数计算题（菌落数=平均菌落数×稀释倍数÷涂布体积）；选择/鉴别培养基辨析题。 5. 紧扣命题趋势：新课标强调科学探究与实验实践；微生物培养常与发酵工程、基因工程、环境治理综合出题。 一图串联 速记口诀 培养基中水无机，碳源氮源生长因子；固体液体按物理，通用选择鉴别按用途。 无菌技术分灭菌消毒：灼烧干热湿热为灭菌，煮沸巴氏酒精紫外线是消毒。 纯化纯靠平板划线，涂布平板能分离能计数；活菌计数偏小，显微计数偏大。 尿素菌酚红把氮源筛，纤维素菌刚果红透明圈；配制灭菌倒平板，接种培养再计数。 核心梳理 核心 01 微生物的培养基 1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2．类型 划分标准 培养基类型 配制特点 主要应用 物理性质 固体培养基 加入凝固剂较多 菌种分离、鉴定、计数　 半固体培养基 加入凝固剂较少 菌种保存 液体培养基 不加入凝固剂 工业生产，连续培养 化学组成 合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 菌种分类、鉴定 天然培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生产，降低成本 目的用途 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别 选择培养基 添加(或缺少)某种化学成分 菌种的分离 3．培养基的营养构成 (1)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。 营养物质 作用 主要来源 水 良好的溶剂、细胞结构的重要组成成分 培养基、空气、代谢产物 碳源 提供碳元素，有机碳源是异养生物的能源物质 葡萄糖、蔗糖、淀粉、纤维素、牛肉膏、蛋白胨等 氮源 提供氮元素，合成蛋白质核酸、磷脂以及含氮代谢产物 无机氮源，如铵盐、硝酸盐等；有机氮源，如酵母粉、牛肉膏、蛋白胨　等 无机盐 组成细胞结构和许多化合物，调节生命活动；某些化能自养菌的能源 如磷酸盐等无机化合物 (2)培养基的其他条件：满足微生物对pH、特殊营养物质以及O2等的需求。 培养微生物种类 特殊要求 乳酸杆菌 培养基中添加维生素 霉菌 培养基的pH调至酸性 细菌 培养基的pH调至中性或弱碱性 厌氧微生物 需要提供无氧的条件 指点迷津 不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。如，自养型微生物所需的营养物质主要是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源、氮源主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。 核心 02　无菌技术 获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括：消毒和灭菌。 1．消毒和灭菌 项目 消毒 灭菌 概念 使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物 使用强烈的理化方法杀死物体内外　所有的微生物，包括芽孢和孢子 常用 方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、酒精消毒法、紫外线消毒法 湿热灭菌(如高压蒸汽灭菌法)、干热灭菌、灼烧灭菌 区别 最大区别在于是否杀死芽孢和孢子 2．三种灭菌方法的比较 方法 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 媒介 沸水、流通蒸汽或高压蒸汽 热空气 火焰的充分燃烧层 方法 高压蒸汽灭菌：100 kPa、121 ℃，维持15～30 min 160～170 ℃、1～2 h 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 对象 培养基等 耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 接种工具、试管口、瓶口等 原理 高温或高温、高压使蛋白质变性失活，导致微生物活体以及芽孢和孢子全部死亡 核心 03　微生物的基本培养技术 1.微生物的纯培养 (1)相关概念 培养物 接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 纯培养物 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 纯培养 获得纯培养物的过程 (2)酵母菌的纯培养 ①菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的　子细胞群体。 ②获得单菌落的两种常用方法：平板划线法和稀释涂布平板法。 ③酵母菌的纯培养步骤 (3)分离纯化，获得单菌落的两种方法 ①平板划线法 项目 图像 a.将接种环放在火焰(外焰)上灼烧，直到接种环的金属丝烧红 b.在火焰旁冷却接种环(防止温度过高杀死菌种)。 同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞 c.将试管口通过火焰 d.在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 e.将试管口通过火焰，并塞上棉塞 f.在火焰附近将皿盖打开一条缝隙(不能完全打开，防止杂菌污染)，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖 g.灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连 指点迷津：灼烧接种环的目的 ①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物； ②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端； ③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。 ②稀释涂布平板法 a.取样，将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的瓶中，摇匀，取1_mL上清液加入盛有9_mL无菌水的试管中，依次等比稀释。从最后一支试管中取0.1_mL菌液滴加到培养基表面进行涂布。如下图所示： b稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液器枪头等均需灭菌；操作时，试管口和移液器应在离火焰 1～2 cm处。 c涂布平板时： 涂布器用体积分数为70%的酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上灼烧； 不要将过热的涂布器放入盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精； 酒精灯与培养皿距离要合适，移液器枪头不要接触任何物体； 培养皿盖不能完全打开，应只打开一条缝隙。 核心 04　微生物的选择培养和计数 1.微生物的选择培养 (1)选择培养的作用原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。  (2)分离纯化菌种的两种方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 接种用具 接种环 涂布器 分离结果 单菌落的获得 单菌落从后划线的区域挑取 只有达到合适的稀释度才能得到单菌落 应用 都会在培养基表面形成单菌落，达到分离纯化微生物的目的；都可用于观察菌落特征 不能用于微生物的计数 可对微生物进行计数 其他共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都可以在培养基上形成由单个微生物繁殖而来的纯培养物——单菌落 知识2　微生物的计数 1．测定微生物数量常用的方法 方法 稀释涂布平板　法 直接计数法(显微计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的　菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定的血细胞计数板在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 每克样品中的菌体数：C×M÷V C：某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数；M：稀释倍数；V：涂布所用的稀释液体积数(mL) 每毫升原液所含细菌数：①每小格平均细菌数×400×10 000×稀释倍数；②5(或4)个中方格的菌体数×5(或4)×10 000×稀释倍数 结果 比实际值偏小，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示) 比实际值偏大，因为此法不能区分活菌和死菌 注 稀释涂布平板法计数中，为了使结果接近真实值，应设置三个或三个以上的平板(平行重复原则，增强实验的说服力和准确性)，计算菌落平均数。另外，为了保证结果准确，一般选择同一稀释度的、菌落数在30～300　的平板进行计数。 较大的真核细胞，如酵母菌、霉菌孢子等，用特定的血细胞计数板；某些较大的原核细胞或相对较小的细菌，用细菌计数板 指点迷津：微生物的计数方法 (1)微生物的计数方法非常多样，应根据实际情况选择合适的方法。涉及一些新的微生物计数方法，应根据具体情境，弄清其背后的原理。列举两个其他计数方法： ①比浊法：随着微生物的繁殖，液体培养基的浑浊程度会增加，因此可根据液体培养物的浑浊程度来估计微生物的数量，通常使用分光光度计测定光的透过率。 ②实时荧光定量PCR (qPCR)：通过定量PCR技术检测特定微生物的DNA，可以精确测定微生物的数量。 2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。 CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3 (2)分离方法：利用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行选择培养。 (3)鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红说明菌落中的菌体为分解尿素的细菌。 (4)统计菌落数目：统计样品中的活菌数一般用稀释涂布平板法。 (5)实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。 3．分解纤维素的微生物的分离 项目 内容 分离方法 利用富含纤维素的选择培养基进行选择培养 原理 培养基以纤维素为主要碳源，能分解纤维素的微生物可利用纤维素获取营养，在该培养基上生存机会更多，大量繁殖；不能利用纤维素的微生物生长受抑制，从而达到富集目的。 培养基成分 以纤维素为唯一碳源，添加刚果红染料 鉴定原理 刚果红可与纤维素结合形成红色复合物；纤维素被纤维素分解菌产生的纤维素酶分解后，红色复合物消失，菌落周围出现透明圈，以此筛选纤维素分解菌。 4.选择培养基和鉴别培养基的比较 项目 选择培养基 鉴别培养基 原理 人为提供目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品，产生特定的颜色或其他变化 用途 从众多微生物中分离所需微生物(目的菌) 鉴别不同种类的微生物 举例 ①加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌； ②以尿素为唯一氮源，分离出分解尿素的微生物 ①以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂； ②利用刚果红染色法筛选分解纤维素的微生物(出现以纤维素分解菌为中心的透明圈)； ③用伊红—亚甲蓝琼脂培养基鉴别大肠杆菌(菌落呈深紫色，并有金属光泽) 易错01 灭菌与消毒混淆 消毒：温和，杀死部分微生物（不含芽孢和孢子），如煮沸消毒、巴氏消毒、酒精消毒、紫外线消毒。 灭菌：强烈，杀死一切微生物（含芽孢和孢子），如灼烧灭菌、干热灭菌、湿热（高压蒸汽）灭菌。 易错陷阱：误以为巴氏消毒能杀灭芽孢，或培养基只需消毒即可。 易错02 培养基成分与碳源氮源理解误区 碳源≠能源：无机碳源（如CO₂、碳酸盐）只提供碳元素，不提供能量；葡萄糖既是碳源又是能源。 氮源：含氮元素的物质才能作氮源；并不是所有微生物都能利用N₂固氮。 易错陷阱：误以为所有碳源都提供能量、所有微生物都能以N₂为氮源。 易错03 平板划线法与稀释涂布平板法混淆 平板划线法：用接种环划线，只能用于分离纯化，不能用于菌落计数。 稀释涂布平板法：先梯度稀释再涂布，既能分离纯化，又能用于活菌计数（统计结果偏小）。 易错陷阱：误以为平板划线法能用于菌落计数；混淆两者的适用场景与操作工具。 易错04 计数结果偏大偏小混淆 稀释涂布平板法：统计活菌数偏小（菌落可能由两个或多个细胞形成；可能漏计）。 显微镜直接计数：统计总数偏大（包含死亡个体，不能区分死活）。 易错陷阱：误以为稀释涂布平板法统计的是所有菌体、显微镜计数统计的是活菌。 易错05 选择培养基与鉴别培养基混淆 选择培养基：通过特定的营养或理化条件（如以尿素为唯一氮源）筛选目的菌。 鉴别培养基：通过显色反应（如酚红、刚果红）鉴别不同微生物。 易错陷阱：误把酚红显色当成选择作用；误以为鉴别培养基能筛选出目的菌。 易错06 灭菌的适用范围与对象混淆 接种环、涂布器→灼烧灭菌；玻璃器皿、金属器具→干热灭菌； 培养基、培养皿→湿热（高压蒸汽）灭菌； 空气→过滤除菌；操作台→紫外线消毒；手→化学药剂消毒。 易错陷阱：误以为培养基可用干热灭菌、玻璃器皿可用湿热灭菌、空气可用高压蒸汽灭菌。 两年模拟·基础题（全国视野，单选+多选） 亮点预览：依托泡菜肠道益生菌真实应用情境，辨析微生物接种方法、活菌计数计算与培养条件控制（T1）；借助植物根际促生菌筛选实验，考查缺陷型指示菌、生长圈法筛选菌株的实验逻辑与无菌取样操作（T2）；围绕实验室无菌操作专题，辨析灼烧、紫外线、高压蒸汽、过滤除菌等不同灭菌消毒手段适用对象（T3）；结合土壤几丁质降解菌筛选，考查选择培养基原理、纯化方法与水解圈筛选指标辨析（T8）。 一、单选题 1．【 情境分析・泡菜乳酸菌 】（2026·江苏徐州·模拟预测）泡菜中存在大量的乳酸菌，摄入一定量的乳酸菌利于保持肠道菌群平衡，但要发挥良好的保健作用，则要有足够量的活性菌经过胃到达小肠才可实现。下列叙述正确的是（     ） A．平板倒置培养可为乳酸菌生长创造无氧环境 B．图2中过程Ⅰ采用的接种方法可以纯化计数乳酸菌（平板划线法不能计数） C．图2中富集培养所用培养液的pH可控制在1.5左右 D．经图1过程获得了菌落数分别为80、79、81的三个平板，则10毫升陈泡菜水中的活菌数为8.0×106个 【答案】C 【详解】A、平板倒置培养的作用是防止皿盖的冷凝水滴落污染培养基、减少培养基水分蒸发，不能为乳酸菌创造无氧环境，A错误； B、图2过程Ⅰ是平板划线法，该方法仅能纯化乳酸菌，无法对活菌进行计数，B错误； C、据题干可知要发挥乳酸菌良好的保健作用，则要有足够量的活性菌经过胃到达小肠才可实现。胃中的pH为1.5左右，故富集培养所用培养液的pH可控制在1.5左右，C正确； D、三个平板的平均菌落数为（80＋79＋81）/3=80个，总稀释倍数为104，涂布体积为0.1mL，每毫升原泡菜水活菌数=C÷V×M（C为平均菌落数、V是涂布液的体积、M是稀释倍数）=80÷0.1×104=8.0×106个，则10毫升陈泡菜水中的活菌数为8.0×107个，D错误。 易错提醒： ①混淆平板倒置的作用。平板倒置≠创造无氧环境，作用是防止冷凝水滴落污染培养基、减少水分蒸发；无氧环境需要密封 / 厌氧培养装置，很多同学误认为倒置就能厌氧。 ②平板划线法只可纯化，不能活菌计数；只有稀释涂布平板法可以计数。 2．【筛选实验・生长圈法 】（2026·江苏扬州·三模）某些植物根际促生菌能够大量合成泛酸，科研人员欲筛选高效产泛酸菌株，将长有待测菌株的琼脂块置于涂布有高浓度指示菌的平板上，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．选用的指示菌应具有自主合成泛酸的能力 B．配制的培养基可以提供图中微生物生长所需的全部营养物质 C．用消毒后的铁铲将植物根系及黏附的土壤一同装入无菌袋中 D．据图应选择C21菌株做进一步鉴定 【答案】D 【详解】A、若指示菌具备自主合成泛酸的能力，无论待测菌株是否产泛酸，指示菌都可正常生长，无法实现筛选目标，因此指示菌应不能自主合成泛酸，A错误； B、本实验需通过指示菌的生长位置判断泛酸的来源，因此培养基不能添加泛酸，无法提供微生物生长所需的全部营养物质，否则指示菌可在培养基各处均匀生长，无法判断待测菌株的产泛酸能力，B错误； C、为避免工具上的杂菌污染样本，取样用的铁铲需要经过灭菌处理，消毒仅能杀死部分微生物，无法清除全部杂菌，C错误； D、指示菌生长范围越大，说明对应菌株分泌的泛酸量越多、扩散范围越广，产泛酸效率越高，图中C21周围指示菌生长范围最大，因此应选择C21菌株做进一步鉴定，D正确。 3．【基础辨析・无菌操作】（2026·江苏盐城·模拟预测）下列关于无菌操作的叙述，错误的是（　　） A．接种环、试管口、涂布器可通过灼烧法进行灭菌 B．用紫外线照射接种室可杀死物体表面、内部和空气中的微生物 C．PCR实验中使用的微量离心管、枪头等在使用前必须进行高压灭菌处理 D．不耐高温的植物激素过滤除菌后添加到已灭菌的培养基中 【答案】B 【详解】A、灼烧灭菌法可快速彻底杀灭微生物，接种环、涂布器属于接种工具，试管口易被杂菌污染，均可用灼烧法灭菌，A正确； B、紫外线的穿透能力极弱，仅能杀死物体表面和空气中的微生物，无法杀灭物体内部的微生物，B错误； C、PCR实验需避免外源杂菌、核酸的干扰，微量离心管、枪头等耗材使用前需经高压蒸汽灭菌处理，C正确； D、植物激素不耐高温，高压灭菌会导致其分解失活，因此需先过滤除菌，再添加到冷却至适宜温度的已灭菌培养基中，D正确。 4．【筛选实验・缺陷型指示菌】（2026·江苏南通·三模）为初步筛选高产异亮氨酸菌株，研究人员将待测菌接种在琼脂块上，再将琼脂块转接到含有异亮氨酸缺陷型指示菌的平板上，培养后观察琼脂块周围指示菌的生长圈，结果如下图。相关叙述正确的是（　　） A．该筛选原理与抑菌圈法相同，待测菌抑制指示菌的生长 B．培养基以异亮氨酸为唯一氮源，采用湿热灭菌法灭菌 C．接种指示菌时应在酒精灯火焰旁采用平板划线法接种 D．指示菌生长圈越大，待测菌产异亮氨酸的能力越强 【答案】D 【详解】A、抑菌圈法的原理是待测物抑制指示菌生长，表现为琼脂块周围无指示菌生长，本实验是待测菌产生的异亮氨酸促进指示菌生长，二者原理完全不同，A错误； B、若培养基以异亮氨酸为唯一氮源，整个平板的指示菌均可生长，无法区分不同待测菌的产异亮氨酸能力，本实验所用培养基应不含异亮氨酸，B错误； C、接种指示菌需要使其均匀分布在整个平板表面，应采用稀释涂布平板法，平板划线法用于分离单菌落，无法让指示菌均匀铺满平板，C错误； D、指示菌生长圈越大，说明琼脂块中待测菌分泌、扩散到周围的异亮氨酸含量越高，即待测菌产异亮氨酸的能力越强，D正确。 5．【概念对比・灭菌方法】（2026·江苏南京·二模）下列关于常见灭菌方法及应用的叙述正确的是（    ） A．化学药剂（如甲醛、高锰酸钾等）常用于培养基的灭菌 B．灼烧灭菌法常用于接种环、涂布器、接种针等灭菌 C．过滤除菌法在工业生产上常用于固体培养基的灭菌 D．干热灭菌法因穿透力强，常用于液体的快速灭菌 【答案】B 【详解】A、甲醛、高锰酸钾等化学药剂属于消毒剂，常用于接种空间、操作台表面的消毒，培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法，化学药剂残留会抑制培养基中微生物生长，不能用于培养基灭菌，A错误； B、灼烧灭菌法利用酒精灯火焰的高温杀灭微生物，接种环、接种针、涂布器等耐高温的接种工具，常用该方法灭菌，B正确； C、过滤除菌法利用滤膜截留微生物，仅适用于不耐高温的液体成分（如抗生素、血清）的除菌，无法对固体培养基除菌，C错误； D、干热灭菌法适用于耐高温且需保持干燥的物品（如玻璃器皿、金属工具）的灭菌，其穿透力弱，且高温会导致液体蒸发，不能用于液体灭菌，液体常用高压蒸汽灭菌，D错误。 6．【代谢类型・自养细菌】（2026·江苏·二模）图示高效产出乙醇和单细胞蛋白的液态厌氧发酵工艺。下列相关叙述正确的是（　　） A．乙醇梭菌利用工业尾气中的无机碳作为碳源，故其可属于自养型生物 B．发酵过程中需不断搅拌，以促进营养物质和O2与乙醇梭菌充分接触 C．发酵液进行蒸馏后，通常采用平板划线法对其中的乙醇梭菌进行计数 D．通过发酵获得的单细胞蛋白含有丰富的蛋白质，但不含有糖类和脂质 【答案】A 【详解】A、培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，乙醇梭菌以CO、CO2等无机碳作为碳源，故其可属于自养型生物，A正确； B、乙醇梭菌是自养厌氧型细菌，其厌氧发酵的过程需要进行搅拌，通过搅拌可使细菌和营养物质充分混合，提高培养基的使用效率，B错误； C、发酵液进行蒸馏后，通常可采用稀释涂布平板法对其中的乙醇梭菌进行计数，C错误； D、通过发酵获得的单细胞蛋白含有丰富的蛋白质，且含有少量的糖类和脂质，因为单细胞蛋白是微生物菌体本身，D错误。 7．【实验设计・变量组合】（2026·安徽合肥·二模）生存在极端恶劣的沙漠环境中的微生物具备特殊的抗逆能力，是生物工程、生物医药等领域的重要资源。为找出培养某沙漠土壤中极端微生物的最适碳源-氨基酸培养基组合，科研人员采集土壤后，以海藻糖-脯氨酸（TP）培养基为对照，通过更换TP培养基中不同的碳源（海藻糖等4种）和氨基酸（脯氨酸等20种）对土壤微生物进行分离培养，观察并统计菌落。下列操作正确的是（    ） A．取样时应使用灭菌的铲子铲取表层土壤，装入无菌纸袋后密封 B．菌落数量最多的平板，其接种溶液的稀释度即为最适稀释度 C．除对照组外，理论上还需设置79个实验组进行稀释涂布培养 D．培养过程中需控制好温度和时间，菌落出现后即可记录为结果 【答案】C 【详解】A、土壤取样时应先铲去表层土壤，取表层以下的土壤，避免表层杂菌干扰或目标极端微生物含量过低影响实验结果，A错误； B、稀释涂布平板法统计菌落时，最适稀释度对应的是平板菌落数在30~300区间的稀释度，菌落数过多的平板易发生菌落重叠，计数误差极大，B错误； C、本实验中碳源共4种，氨基酸共20种，所有碳源-氨基酸组合总数为4×20=80种，除去对照组的1种海藻糖-脯氨酸培养基，理论上需额外设置79个实验组，C正确； D、培养后需等待菌落数目稳定后再进行记录，若菌落刚出现就记录，会因部分菌落未完全长出导致统计结果偏小，D错误。 8．【选择培养基・唯一碳源】（2026·江苏镇江·模拟预测）土壤中某些微生物能合成分泌几丁质酶抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，并通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法正确的是（    ） A．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 B．对土壤浸出液进行纯化培养时，须用稀释涂布平板法 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．可依据单菌落周围水解圈直径的值来筛选目的菌株 【答案】A 【详解】A、筛选能降解几丁质的目的菌株时，用以几丁质为唯一碳源的选择培养基，只有能分解利用几丁质获得碳源的菌株可以生长繁殖，其余微生物因缺少碳源无法存活，可实现筛选目的，A正确； B、纯化培养微生物的常用方法包括稀释涂布平板法和平板划线法，并非必须使用稀释涂布平板法，B错误； C、在以几丁质为唯一碳源的培养基上，部分无法分泌几丁质酶的微生物，可利用其他降解几丁质菌株的代谢产物生长，因此生长的菌落并非都能分泌几丁质酶，C错误； D、筛选目的菌株时，需依据水解圈直径与菌落直径的比值判断几丁质降解能力，仅水解圈直径无法准确反映菌株降解效率，D错误。 9．【富集培养・流程辨析】（2026·江苏南通·一模）科研人员从胡杨腐朽木及其周边土壤中分离筛选高效木质素降解菌，具体过程如下图。相关叙述正确的是（　　） A．过程①的主要目的是增加目标菌的数量，提高筛选成功率 B．过程②可使用微量移液器，该过程菌液被稀释了105倍 C．过程③用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面时不可转动培养皿 D．过程④在最后一个划线区域所得到的不同菌落的形态均相同 【答案】A 【详解】A、过程①是微生物富集培养，目的是在以木质素为唯一碳源的选择培养基中，让目标木质素降解菌大量繁殖，从而增加其在菌群中的数量比例，提高后续筛选的成功率，A正确； B、过程②是梯度稀释：每次取 1mL 菌液加入 9mL 无菌水，稀释倍数为 10 倍。 若图中进行了6次梯度稀释（从菌液开始），则总稀释倍数为 106 倍，B错误； C、过程③是涂布分离操作：用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面时，需要转动培养皿，使菌液均匀分布，这样才能形成单菌落，C错误； D、过程④是平板划线法纯化菌株： 若操作规范且最后一次划线足够稀释，理论上可得到单菌落； 但如果初始菌液中仍存在多种不同菌株，或划线操作不彻底，最后一个划线区域可能出现形态不同的菌落，D错误。 故选A。 10．【透明圈・降解菌筛选】（2026·福建龙岩·二模）除草剂莠去津是一种含氮的有机物，长期使用易对土壤造成污染。研究人员从土壤中筛选莠去津降解菌的过程如下图所示（含过量莠去津的固体培养基不透明）。下列叙述错误的是（　　） A．从A瓶到C瓶的目的是逐步稀释培养液中的目的菌 B．应选择固体培养基中出现的有透明带菌落进行再纯化 C．图中进行再纯化的接种过程至少需要灼烧6次接种环 D．实验过程中需设置未接种的培养基作为对照 【答案】A 【详解】A、从A瓶到C瓶的培养基是以莠去津为唯一氮源的选择培养基，且转接后会振荡培养适当时间，目的是富集培养，提高能降解莠去津的目的菌的浓度，并非稀释目的菌，A错误； B、含过量莠去津的固体培养基原本不透明，若菌落周围出现透明带，说明该菌落可降解周围的莠去津，属于所需的目的菌，因此应选择有透明带的菌落进行再纯化，B正确； C、图中再纯化采用平板划线法，共划分5个划线区域，每次划线前需要灼烧接种环杀灭上次划线残留的菌种，划线结束后还需灼烧接种环杀灭残留菌种避免污染环境，因此至少需要灼烧次接种环，C正确； D、实验设置未接种的培养基作为对照，可检验培养基灭菌是否合格、培养过程中是否被杂菌污染，保证实验结果的可信度，D正确； 二、多选题 11．【综合实验・生物技术操作判断】（2026·江苏镇江·三模）下列有关生物技术与工程的叙述错误的有（　　） A．涂布平板操作时，应待涂布器稍冷却后蘸取菌液在平板上涂布 B．单克隆抗体制备时，经选择培养基筛选出的杂交瘤细胞均能产生所需抗体 C．胚胎工程中常以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志 D．PCR实验中，将各组分加入离心管后离心以保证反应液集中在底部 【答案】AB 【详解】A、涂布平板操作时，需先使用移液工具取定量菌液滴加至培养基表面，再将灼烧灭菌后稍冷却的涂布器将菌液均匀涂开，无需用涂布器蘸取菌液，操作描述错误，A错误； B、单克隆抗体制备时，选择培养基仅能筛选出杂交瘤细胞（淘汰未融合细胞、同种核融合的细胞），但不同杂交瘤细胞分泌的抗体种类不同，还需经过抗体阳性检测才能筛选出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞，B错误； C、胚胎工程中，当观察到卵细胞膜和透明带间隙存在两个极体，或观察到雌、雄原核时，均可作为受精完成的标志，C正确； D、PCR实验加样时，部分反应液可能沾附在离心管壁或管盖上，离心可使所有反应液集中在管底，保证反应体系体积准确、反应充分进行，D正确。 12．【生物防治・抑菌实验】（2026·江苏南通·二模）苹果树腐烂由苹果树腐烂菌感染引起，为开发生物防治途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂菌生长的芽孢杆菌，实验流程如下图。相关叙述正确的是（    ） A．过程①取5g土壤加入45mL无菌水中 B．过程③应用涂布法进行接种，在适宜条件下培养 C．过程③可通过观察芽孢杆菌的形状、大小、颜色进行筛选 D．乙组A处长出的菌落直径应大于甲组A处长出的菌落直径 【答案】ABD 【详解】A、过程①是制备土壤悬液，取 5g 土壤加入 45mL 无菌水中，可得到稀释度为10−1的土壤悬液，A正确； B、过程③是分离筛选芽孢杆菌，梯度稀释后常用涂布法进行接种，在适宜条件下培养，以获得单菌落，B正确； C、不同微生物的菌落形态具有特异性，因此可通过观察菌落特征对芽孢杆菌进行初步筛选，C错误； D、甲组 A 处（苹果树腐烂菌）周围接种了芽孢杆菌（B），芽孢杆菌会抑制腐烂菌生长，导致甲组 A 处腐烂菌菌落直径较小，乙组 A 处仅接种苹果树腐烂菌，无芽孢杆菌抑制，其菌落生长不受限制，因此乙组 A 处菌落直径应大于甲组 A 处，D正确。 一年重难·情境题（侧重江苏，辐射全国，单选+多选+非选择题） 设题创新：结合微塑料环境污染修复情境，探究双降解菌株混合体系降解效果，考查实验变量分析与后续探究实验设计（T2）；基于深海极端环境微生物分离培养，依托多组碳源梯度培养曲线，考查种群数量影响因素、计数方法辨析与酶工程应用价值（T4）；以污水有机污染物降解菌筛选流程图为载体，考查富集培养原理、计数工具选择与工程菌实际应用风险评估（T5）；利用诱变育种获得纤维素分解突变菌株，依托折线图数据，考查透明圈比值分析、基因突变特点与筛选逻辑判断（T12）。 一、单选题 1．【课本经典实验・分解尿素细菌】（2025·江苏无锡·模拟预测）某同学开展“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，具体流程如下：土壤取样→制备培养基→土样稀释→涂布平板→微生物的培养、观察和计数。下列叙述错误的是（    ） A．土壤取样时用到的纸袋需要预先灭菌而铁铲不需要 B．本实验需要制备以尿素为唯一氮源的培养基和牛肉膏蛋白胨培养基 C．稀释土样时，每一次从试管中吸取稀释液前都要充分摇匀 D．本实验中，每个稀释倍数的稀释液至少要涂布三个平板 【答案】A 【详解】A、土壤取样时，铁铲直接接触土壤样本，若未灭菌可能引入杂菌污染，破坏实验准确性；纸袋用于盛放样本，也需灭菌以保证无菌操作。A错误； B、本实验需制备以尿素为唯一氮源的选择培养基（筛选分解尿素细菌），同时需牛肉膏蛋白胨培养基作为对照（验证选择培养基的有效性），B正确； C、稀释土样时，每次吸取前充分摇匀可确保菌液分布均匀，使涂布后单菌落计数更准确，属于稀释涂布平板法的规范操作，C正确； D、为了保证计数结果的准确性，每个稀释倍数的稀释液至少要涂布三个平板，以减少实验误差，取平均值进行计算，D正确。 故选A。 2．【柱状图・混合菌株降解】（2026·江苏徐州·一模）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X：Y=1：1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如图。下列叙述正确的是（　　） A．用平板划线法能测定各菌组中的活菌数 B．X菌组降解微塑料能力和菌浓度均高于Y菌组 C．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 D．可进一步探究X菌和Y菌不同比例混合液对微塑料的降解能力 【答案】D 【详解】A、平板划线法主要用于微生物的分离和纯化，不能用于测定活菌数，测定活菌数常用稀释涂布平板法，A错误； B、X菌组的残留率低于Y菌组，说明X菌组的降解微塑料能力高于Y菌组，但无法证明X菌组的菌浓度高于Y菌组，B错误； C、该培养基中含有蛋白胨，能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等，但不一定都能降解微塑料，C错误； D、由图可知，X+Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组，对于该实验，可进一步探究X菌和Y菌不同比例混合液对微塑料的降解能力的影响，D正确。 故选D。 3．【基础辨析・无菌与消毒灭菌】（2025·江苏南通·一模）无菌技术是生物学实验中的重要操作。下列叙述正确的是（　　） A．配制培养基通常需加入碳源、氮源、无菌水、无机盐 B．培养基可置于160～170 ℃的热空气中维持2～3 h进行干热灭菌 C．酸奶灌装前进行巴氏消毒，既能防止发酵过度又能延长其保质期 D．稀释涂布过程中移液枪取稀释液后通常需消毒枪头再进行下次取样 【答案】C 【详解】A、配制培养基的核心成分是碳源、氮源、无机盐和水，但此处的水无需提前无菌处理，培养基配制完成后，会通过高压蒸汽灭菌等方式进行整体灭菌，A错误； B、培养基灭菌需用高压蒸汽灭菌法，而干热灭菌适用于耐高温且干燥的物品（如玻璃器皿），B错误； C、巴氏消毒在酸奶制作中通常用于原料牛奶的灭菌，但若在发酵完成后、灌装前进行，可杀死乳酸菌以终止发酵，防止过度产酸并延长保质期，C正确； D、稀释涂布时，移液枪枪头需每次更换灭菌枪头，而非仅消毒，否则可能导致交叉污染，D错误。 故选C。 4．【曲线图・碳源对菌株影响】（2026·甘肃天水·一模）研究者从某海域1146米深海冷泉附近的沉积物中分离得到了拟杆菌新菌株。为了进一步研究其生物学特性，研究者用不同的碳源对其进行培养，得到的结果如图所示。下列相关分析合理的是（     ） A．碳源是影响培养液中拟杆菌种群数量变化的非密度制约因素 B．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于拟杆菌的分离和计数 C．该拟杆菌属于分解者，其分泌的各种多糖降解酶具有耐低温特性 D．以纤维素为碳源，在低温、厌氧环境中筛选拟杆菌有利于获得适宜人类广泛应用的突变株 【答案】C 【详解】A、碳源属于食物资源，其对种群数量的影响强度随种群密度升高而增大，属于密度制约因素，A错误； B、平板划线法仅可用于拟杆菌的分离纯化，无法进行活菌计数，只有稀释涂布平板法可同时用于分离和计数，B错误； C、该拟杆菌可分解利用纤维素、淀粉等多糖类有机物，营腐生生活，属于生态系统的分解者；菌株分离自深海冷泉低温环境，因此其分泌的多糖降解酶具有耐低温特性，C正确； D、人类广泛应用的酶类通常需要在常温下具备较高活性，题干的筛选条件获得的是耐低温的菌株，不适宜广泛应用，D错误。 5．【流程图・污染物降解菌筛选】（2026·湖南永州·一模）为了筛选出能高效降解污水中有害化合物甲的细菌（目的菌）。研究团队做了相关实验，主要步骤如图，下列叙述错误的是（     ） A．在培养基中加入化合物甲的目的是筛选出可以降解化合物甲的微生物 B．振荡培养若干天后，应选择培养瓶中化合物甲含量高的培养液进行接种 C．若要研究目的菌的生长规律，可用细菌计数板进行计数 D．将目的菌用于环境保护实践时，要考虑是否会产生二次污染等问题 【答案】B 【详解】A、本实验的目的是筛选能降解化合物甲的目的菌，在培养基中加入化合物甲作为唯一碳源/氮源，只有可降解利用甲的微生物才能存活，起到选择筛选的作用，A正确； B、振荡培养后，化合物甲含量越低说明对应培养液中微生物降解甲的能力越强，因此应当选择化合物甲含量低的培养液进行接种，B错误； C、研究细菌生长规律需要统计不同时期的细菌数量，可以使用细菌计数板进行直接计数，C正确； D、将目的菌应用于实际环境前，需要评估其安全性，避免其产生有害代谢产物、造成生态入侵等二次污染问题，D正确。 6．【实验操作辨析・PCR 与微生物培养】（2026·广东广州·一模）下列相关实验操作正确的是（     ） A．为得到两条长度完全一致的目的DNA片段，最多只需进行PCR两轮循环 B．利用添加核酸染料的凝胶对PCR产物进行电泳后，在紫外灯下观察结果 C．将配制的酵母培养基煮沸并冷却后，在酒精灯火焰旁倒平板 D．将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养，获得单菌落 【答案】B 【详解】A、PCR扩增时，第一轮循环的产物长度均大于目的DNA片段，第二轮循环仅能得到2条长度符合要求的单链，无法形成两条长度完全一致的双链目的DNA，至少需要三轮循环才能得到目标产物，A错误； B、核酸染料可与DNA结合，在紫外光照射下会发出荧光，因此用添加核酸染料的凝胶电泳分离PCR产物后，可在紫外灯下观察条带结果，B正确； C、仅煮沸无法彻底杀灭培养基中的芽孢等耐热微生物，培养基需要经过高压蒸汽灭菌后，再冷却到不烫手（50℃左右）后，在酒精灯火焰旁倒平板，C错误； D、接种环烧红后温度极高，直接蘸取菌液会杀死酵母菌，需要冷却后再蘸取菌液进行划线操作，D错误。 7．【无菌操作・不规范操作判断】（2026·广东广州·一模）下列关于微生物纯培养的操作，不规范的是（     ） A．平板划线操作在火焰旁进行 B．将试管棉塞放置在超净工作台上 C．稀释涂布平板法涂布后需将平板倒置培养 D．培养基配制后采用湿热灭菌法进行灭菌 【答案】B 【详解】A、酒精灯火焰旁为无菌区域，平板划线操作在火焰旁进行可避免杂菌污染，操作规范，A正确； B、试管棉塞直接放置在超净工作台上会导致棉塞沾染杂菌，后续塞回试管时会污染培养基，正确操作应将棉塞夹在手指间，该操作不规范，B错误； C、稀释涂布平板法涂布后将平板倒置培养，既可避免皿盖上的冷凝水滴落污染培养基，也可减少培养基水分挥发，操作规范，C正确； D、培养基配制后常采用高压蒸汽灭菌（属于湿热灭菌法）灭菌，可彻底杀灭包括芽孢在内的所有微生物，操作规范，D正确。 8．【传统发酵・苹果酵素】（2026·福建漳州·一模）苹果酵素是以苹果为原料，经天然菌群协同发酵制成的传统发酵食品，发酵过程中酵母菌、醋酸菌、乳酸菌等先后成为优势菌群。下列叙述正确的是（     ） A．制作前需对苹果高压蒸汽灭菌，以防止杂菌污染 B．苹果酵素中的蛋白酶被人体吸收后具有催化作用 C．各阶段优势菌的细胞呼吸均产生CO2，使发酵液pH逐渐降低 D．优势菌群的变化与发酵液中氧气、pH等环境变化密切相关 【答案】D 【详解】A、高压蒸汽灭菌会杀死苹果表面参与发酵的天然菌群，还会破坏苹果的营养结构，制作苹果酵素前仅需对苹果进行清洗，无需高压蒸汽灭菌，A错误； B、蛋白酶的化学本质是蛋白质，进入人体消化道后会被分解为氨基酸才能被吸收，无法以完整蛋白酶的形式进入人体发挥催化作用，B错误； C、乳酸菌无氧呼吸的产物是乳酸，不产生CO2，且发酵液pH降低还与乳酸菌产乳酸、醋酸菌产醋酸有关，C错误； D、酵母菌是兼性厌氧菌、醋酸菌是好氧菌、乳酸菌是厌氧菌，且不同微生物适宜生长的pH范围不同，因此发酵过程中氧气含量、pH等环境变化会导致优势菌群发生更替，D正确。 9．【课本基础实验综合判断】（2026·湖南邵阳·一模）关于下表中生物学实验的相关叙述，正确的是（     ） 选项 实验名称 相关叙述 A 低温诱导植物细胞染色体数目的变化 使用体积分数为95%的酒精漂洗，防止解离过度 B 调查人群中的遗传病 调查遗传方式时，需选择在患者家系中并选择单基因遗传病调查 C 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 接种时先将稀释液滴加到涂布器上再均匀地涂布在培养基表面 D 培养液中酵母菌种群数量的变化 利用血细胞计数板计数时，应先滴加样液再盖盖玻片 A．A B．B C．C D．D 【答案】B 【详解】A、低温诱导植物细胞染色体数目变化实验中，解离后需用清水漂洗来洗去解离液，防止解离过度；95%酒精在该实验中用于配制解离液、洗去卡诺氏固定液，A错误； B、调查遗传病的遗传方式时，需选择单基因遗传病作为调查对象，且在患者家系中展开调查，B正确； C、稀释涂布平板法接种操作中，应先将稀释液滴加到培养基表面，再用灼烧冷却后的涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，而非将稀释液滴在涂布器上，C错误； D、用血细胞计数板计数酵母菌时，需先盖盖玻片，再将样液滴加在盖玻片边缘使其自行渗入计数室，若先滴加样液再盖盖玻片，会因液面张力使盖玻片上浮，导致计数体积偏大，结果不准确，D错误。 10．【透明圈筛选・产酶酵母菌】（2026·福建福州·一模）产酯能力高的酵母菌酿制的酒往往具有较好的香型，而产酯能力往往与胞外的酯水解酶活力正相关，因此常用含有不透明的三丁酸甘油酯的培养基初筛酿酒酵母。研究人员以商业酿酒酵母F33为对照，采用稀释涂布平板法从土壤和果实样品中分离酵母菌ZL-16和X-1，初步筛选结果如表所示。下列叙述错误的是（　　） A．稀释涂布平板法计数时得到的菌落数小于实际的活菌数 B．培养基接种后需将平板倒置，从而防止冷凝水落入平板 C．透明圈是酵母菌分泌的酯酶水解三丁酸甘油酯所形成的 D．D、d分别表示菌落和透明圈直径，挑选ZL-16菌株复筛 【答案】D 【详解】A、稀释涂布平板法计数时，若两个或多个活菌连在一起，平板上只会形成一个菌落，因此统计得到的菌落数小于实际的活菌数，A正确； B、培养基接种后倒置培养，可防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，同时也能减少培养基水分过快蒸发，B正确； C、培养基中的三丁酸甘油酯是不透明的，酵母菌分泌的酯酶可将其水解为可溶性小分子物质，从而形成透明圈，C正确； D、D为透明圈直径、d为菌落直径，D/d值越大说明相同菌落大小的菌株产酯酶能力越强，表中X-1的D/d值最大，应挑选X-1菌株复筛，D错误。 二、多选题 11．【选择培养基・降解菌富集】（2026·江西九江·一模）科研人员从淤泥中分离高效降解S（一种含有C、H、N的有机物）的细菌，流程如下：取淤泥样品富集培养后获得摇瓶M，稀释后涂布于乙培养基（含无机盐、水、S和Y），挑取单菌落接种至甲培养基（含无机盐、水和S），经多次筛选得到目标菌株。下列说法错误的是（    ） A．富集培养时培养基中需要添加S和Y B．实验中盛水或培养基的摇瓶需采用高压蒸汽灭菌法灭菌 C．甲、乙培养基中加入S浓度越高，越有利于筛选出目的菌株 D．除水、无机盐外，甲、乙培养基中还需要加入牛肉膏和蛋白胨 【答案】ACD 【详解】A、物质Y是琼脂，富集培养用液体培养基，不能加入琼脂，A错误； B、实验中的盛水或培养基的摇瓶需要进行高压蒸汽灭菌，以杀灭其中的杂菌，避免对实验造成干扰，B正确； C、甲、乙培养基中加入的S是目标菌的营养物质，但如果S浓度过高，会导致培养基渗透压过高，抑制目标菌的生长，并非越有利于筛选出目的菌株，C错误； D、甲、乙培养基是为了筛选能降解S的菌株，除水、无机盐外，不需要加入牛肉膏和蛋白胨，因为要以S作为唯一的营养来源来筛选，D错误。 故选ACD。 12．【折线图・纤维素分解菌诱变】（2026·湖南益阳·一模）获得分解纤维素能力强的菌株有利于解决农业玉米秸秆资源化利用问题。科研人员将筛选到的纤维素分解菌株A进行诱变处理得到菌株B、C、D。在相同且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如图所示。下列说法错误的是（     ） A．透明圈的产生是由于纤维素被分解，不能形成红色复合物 B．筛选菌株A所用培养基应以纤维素为唯一碳源，属于鉴别培养基 C．从图中数据可得出，菌株C的纤维素酶合成基因未发生突变 D．在4种菌株中，菌株D分解纤维素的能力最强 【答案】BCD 【详解】A、刚果红可与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，无法形成该红色复合物，培养基上就会出现以菌落为中心的透明圈，A正确； B、以纤维素为唯一碳源的培养基，仅允许能分解纤维素的微生物生长，抑制其他不能利用纤维素的微生物生长，该类培养基属于选择培养基，而非鉴别培养基，B错误； C、密码子具有简并性，即使菌株C的纤维素酶合成基因发生突变，也可能翻译出氨基酸序列相同的蛋白质，表现出和菌株A相同的纤维素分解能力，因此无法得出其纤维素酶合成基因未发生突变的结论，C错误； D、菌落直径与透明圈直径的比值越小，说明相同大小的菌落分解纤维素产生的透明圈越大，纤维素分解能力越强，其中菌株B的该比值最小，分解能力最强，菌株D的比值最大，分解能力最弱，D错误。 13．【抑菌圈・抗生素耐药实验】（2026·湖南衡阳·三模）下表是金黄色葡萄球菌对两种抗生素耐药性实验结果。下列相关叙述错误的是（　　） 抗生素/（5mg⋅mL-1） 抑菌圈大小/cm 对照组 第一代 第二代 第三代 第四代 第五代 第六代 四环素 0.60 4.00 3.53 3.07 3.03 2.97 3.06 恩诺沙星 0.60 2.70 2.33 1.63 1.93 1.77 1.90 A．实验中对照组用0.60 cm不含抗生素的滤纸片进行处理 B．四环素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要比恩诺沙星强 C．实验中可使用平板划线法对金黄色葡萄球菌进行接种 D．据结果推测，持续使用同种抗生素抑菌圈的大小保持不变 【答案】CD 【详解】A、本实验要探究金黄色葡萄球菌对两种抗生素的耐药性，因此正常对照组使用不含抗生素的滤纸片，实验组用含抗生素的滤纸片，A正确； B、四环素各代抑菌圈（如第一代4.00cm）均大于恩诺沙星（第一代2.70cm），说明四环素的抑菌效果更强，B正确； C、平板划线法不能使细菌均匀分布在培养基上，而本实验需要观察抑菌圈的大小，要求细菌均匀分布，所以一般采用稀释涂布平板法进行接种，C错误； D、两种抗生素的抑菌圈随代次增加呈下降趋势，表明耐药性增强，抑菌圈会发生改变，D错误。 14．【诱变育种・抗生素生产菌株】（2026·江西吉安·模拟预测）亚热带链霉菌可产生白霉素。科研人员将X射线处理过的野生型菌种（WT）菌液均匀涂布在MS培养基表面，一周后，以每个平板上挑取的100个单菌落为一组，分别培养后逐一测定白霉素产量，统计结果如下表。下列叙述错误的是（　　） 组别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ 辐射剂量（Gy） 0 105 2×105 3×105 4×105 5×105 6×105 所取菌落中正突变占比（%） 0 11 24 59 26 19 8 注：正突变指白霉素产量提高的突变株 A．X射线能损伤WT细胞内的DNA，提高突变率 B．可先进行实验探究辐射剂量对WT存活率的影响 C．Ⅰ组统计结果说明未经过辐射处理的WT未发生突变 D．结果说明，Ⅳ组中可获得白霉素产量最高的突变株 【答案】CD 【详解】A、X射线属于物理诱变因素，可破坏DNA分子结构，引起基因突变，提高突变率，A正确； B、探究辐射剂量对存活率的影响可筛选适宜剂量，避免因剂量过高导致菌体死亡过多，影响突变株筛选，B正确； C、Ⅰ组（0 Gy）正突变占比为0%，仅说明未发生正突变，但可能发生负突变或中性突变（如产量不变），不能推断完全未突变，C错误； D、Ⅳ组正突变占比59%，是各组中正突变最高的，但正突变占比高仅说明高产菌株数量多，需逐一测定产量才能确定具体菌株的产量高低，故无法得出“Ⅳ组中可获得白霉素产量最高的突变株”的结论，D错误。 三、非选择题 15．【基因工程・耐盐菌改造发酵】（2026·江苏扬州·三模）某些极端微生物具有耐高温、耐盐碱、不易污染等优点。我国科学家在新疆艾丁湖筛选出耐盐菌——H菌，并对其进行基因改造，用于生产聚羟基脂肪酸酯(PHA)。 (1)PHA为可降解生物基塑料，兼具经济效益与环境友好。它还可作为缝合线等医学材料，其优点是___________。 (2)H菌进行如图1所示的开放式发酵，该系统中___________条件抑制了杂菌污染。长期保存菌种时，取菌液与灭菌的___________充分混匀后，置于-80℃的冰箱保存。 (3)利用接合转化构建含有Cas9、sgRNA1基因和sgRNA2基因的H菌，如图2所示。 ①将质粒pQ08通过接合转化导入H菌时，需将供体菌与受体菌混合于___________(填“低盐”或“高盐”)锥形瓶中，37℃培养8小时。培养基Ⅰ和Ⅱ中添加的抗生素分别为___________、___________。 ②鞭毛与H菌运动有关，耗能多，利用CRISPR/Cas9系统敲除鞭毛合成的基因，有利于提高PHA产量。sgRNA指导Cas9切割DNA，使DNA分子的___________(填“单”或“双”)链断裂，进而引发细胞内同源重组修复，如图3。与单sgRNA相比，双sgRNA系统的优点是___________。 ③挑取菌落，利用图3中的引物F、R进行PCR并电泳检测，目标片段大小约为___________，则表明敲除成功。 (4)H菌合成分泌的胞外多糖是保护细胞的屏障，科学家将胞外多糖的基因敲除后细胞自发凝聚，有利于发酵产物PHA的分离，相关研究结果如图4所示。据此推测细胞自发凝聚的机理为___________。 【答案】(1)可以被人体组织吸收，避免拆线痛苦 (2) 高盐、高pH（或NaCl 60g/L，pH=9） 甘油 (3) 低盐 壮观霉素 氯霉素和壮观霉素 双 精准识别DNA上两个不同的位点，并切除两个位点之间的片段 2kb (4)高盐环境下，细胞表面疏水性增强，促使细胞自发凝聚 【详解】（1）由题目所给信息可知，PHA是可降解生物基塑料，可推测其作为手术缝合线时的优点是能被人体组织吸收，避免拆线痛苦。 （2）题图1装置中，NaCl的浓度较高，pH为9说明其碱性较强，则该系统中高盐、高pH的环境可抑制杂菌污染，保证只有耐盐碱的H菌才能生存。若要长期保存菌种，应取待保存的菌液与经灭菌的甘油充分混匀，然后置于-80℃的冰箱中。 （3）①由于锥形瓶放入的既有供体菌也有受体菌，受体菌为耐盐碱的H菌，供体菌为含pQ08质粒的大肠杆菌，供体菌不具有耐盐碱特性，所以为保证供体菌存活，锥形瓶的环境应为低盐环境。结合题图2中pQ08质粒的结构分析，含有pQ08质粒的大肠杆菌具有壮观霉素抗性，所以高盐培养基Ⅰ中应含有壮观霉素，以便筛选出成功转入pQ08质粒的H菌。经培养基Ⅰ筛选出来的“阳性H菌”是含有pQ08质粒的H菌，该菌与大肠杆菌混养后将转入pSEVA241质粒（该质粒含氯霉素），所以高盐培养基Ⅱ筛选出的应该是同时含有pQ08质粒和pSEVA241质粒的H菌，这种菌同时具有壮观霉素抗性和氯霉素抗性，所以培养基Ⅱ应同时含有壮观霉素和氯霉素。 ②DNA分子具有双链结构，sgRNA指导Cas9切割DNA可使其双链断裂，从而引发细胞内同源重组修复。对比单sgRNA与题图3中双sgRNA的作用特点可知，单sgRNA只能识别并切割DNA上单个的位点，但双sgRNA可以识别DNA上两个不同的位点，并切除之间的片段，所以精准度更高。③题图3中，引物F和R之间是同源臂1和同源臂2，两个同源臂的总长为2 kb，所以若目标片段的大小为2kb，说明鞭毛合成基因已成功敲除并被替换为两个同源臂。 （4）由题目所给信息可知：野生型H菌含有胞外多糖，细胞不能自发凝聚，细胞表面疏水性小于0%；突变体不含胞外多糖，可以发生自发凝聚，细胞表面疏水性较高，且题图4左图显示在高盐环境下细胞自发凝聚效率较高。综合以上信息可推测，细胞自发凝聚的机理是在高盐环境下，细胞表面疏水性增强，促使细胞自发凝聚。 16．【选择培养基・污染物降解菌】（2026·广东广州·一模）啶分子式为C5H5N，是典型污染物。某焦化废水处理厂曝气池的活性污泥中存在多种微生物，但吡啶去除效率一直较低。研究人员按照下图所示流程，从该活性污泥中分离得到能高效降解吡啶的细菌菌株S。实验过程中需要甲液体培养基、乙固体培养基，甲的组分为无机盐、水、吡啶和S，乙的组分为无机盐、水、S、X和Y。请回答下列问题： (1)甲培养基中吡啶的作用是______________。乙培养基中物质X、Y分别是______________。 (2)研究人员将5 g活性污泥样品置于100 mL甲培养基中，富集培养后，取5 mL菌悬液进行梯度稀释，分别稀释至______________（稀释度），取各稀释液0.1 mL涂布于乙培养基平板上。培养后，适合计数的104稀释度的三个平板上长出的菌落数分别为186、178和191，则每毫升活性污泥样品中的活菌数约为______________个。该结果比实际活菌数偏低的原因是______________。 (3)研究人员从分离得到的菌株中筛选出4株吡啶降解能力不同的菌株，编号为①、②、③、④。将各菌株分别接种于含500 mg/L吡啶的甲培养基中，30℃培养48 h后测定吡啶残留量，结果如下表： 菌株 ① ② ③ ④ 吡啶残留量（mg/L） 45 12 89 38 降解吡啶能力最强的菌株是______________。请写出如何进一步筛选出更高降解率菌株的简单实验思路______________。 【答案】(1) 作为唯一碳源和氮源（用于筛选能以吡啶为碳源和氮源生长的细菌） 吡啶、琼脂（顺序可调换） (2) 101、102、103、104、105（3个以上，且其中1个小于104，1个大于104） 1.85×107 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（或有些细胞在涂布过程中死亡） (3) ② 将菌株放在含吡啶浓度更高的甲培养基中连续传代培养，测定每代吡啶降解率，获取目的菌株 【详解】（1）本实验目的是筛选能高效降解吡啶的细菌，甲是选择液体培养基，不含其他额外碳源、氮源，因此吡啶可作为唯一的碳源和氮源，仅允许能利用吡啶的菌株生长，起到选择作用。乙是固体选择培养基，需要添加凝固剂琼脂，同时要维持选择功能，因此也需要以吡啶作为唯一碳氮源，故X、Y分别是吡啶和琼脂。 （2）梯度稀释涂布分离细菌时，通常选择一系列梯度稀释度（如101、102、103、104、105）涂布，保证能获得菌落数在30~300之间的适宜计数平板。 活菌数计算：三个平板平均菌落数为(186+178+191)/3=185，则每毫升活性污泥样品中（稀释度104）的活菌数为185÷0.1×104=1.85×107 ，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（或有些细胞在涂布过程中死亡），所以涂布计数统计值小于实际活菌数。 （3）相同初始吡啶浓度下，菌株②的吡啶残留量最低，说明其降解吡啶的能力最强。进一步筛选高降解率菌株的思路是将菌株放在含吡啶浓度更高的甲培养基中连续传代培养，测定每代吡啶降解率，获取目的菌株。 三年真题·压轴题（侧重江苏，辐射全国，单选题） 设题创新：结合青霉菌次级代谢分支代谢途径，考查发酵工程进程检测、产物分离提取等工业发酵实际问题（T1）；基于土壤功能微生物筛选高考经典模型，以醋酸菌产酸透明圈为载体，综合土壤取样、选择培养、涂布分离、菌种鉴定全流程实验（T2）；创设营养缺陷型细菌诱变筛选新情境，依托平板滤纸片实验，考查培养基灭菌、完全 / 基本培养基功能、诱变与抑菌现象辨析（T4）；借助 VB₁₂微生物定量检测的全新实验范式，以流程图为载体考查对照实验设置、菌体培养条件、实验结果判读逻辑（T11）。 一、单选题 1．【代谢途径・次级代谢产物】（2026·重庆·高考真题）在发酵生产青霉素的过程中总会有头孢霉素产生，下图为青霉菌的部分代谢途径。结合发酵工程生产青霉素的过程，下列叙述正确的是（     ） A．可通过选育高表达酰基转移酶的青霉菌来阻断头孢霉素的合成 B．扩大培养时，培养基中添加Lys，青霉菌才能繁殖 C．可通过检测培养液中青霉菌数量和青霉素浓度了解发酵进程 D．发酵结束后，将菌体分离干燥可获得纯化的青霉素 【答案】C 【详解】A、由代谢途径可知，IPN在酰基转移酶催化下生成青霉素，在扩环酶催化下生成头孢霉素。高表达酰基转移酶只会使更多IPN流向青霉素合成途径，无法阻断头孢霉素的合成，A错误； B、青霉菌可利用基础营养物质自行合成Lys，扩大培养时无需额外添加Lys青霉菌即可繁殖，B错误； C、发酵过程中，青霉菌的种群数量、产物青霉素的积累浓度可反映发酵的进程，因此可通过检测这两个指标了解发酵情况，C正确； D、青霉素是青霉菌分泌到发酵液中的次级代谢产物，需从发酵液中提取纯化，D错误。 2．【筛选鉴定・产酸醋酸菌】（2026·浙江·高考真题）在含CaCO3的培养基中，醋酸菌产生的乙酸能与CaCO3反应，使其菌落周围出现透明圈。拟从果园附近的土壤中筛选产酸能力强的醋酸菌，按照取样、扩大培养、筛选、鉴定等步骤进行实验。下列叙述正确的是（     ） A．采集土壤样本时，取地表以下30cm的深层土 B．将土样稀释后，接种至以葡萄糖为唯一碳源的液体培养基进行振荡培养 C．将扩大培养后的菌液进行梯度稀释，涂布于含乙醇及CaCO3的平板上培养 D．挑选平板上直径最大的菌落，提取DNA，测序后比对序列进行鉴定 【答案】C 【详解】A、醋酸菌是好氧微生物，主要分布在氧气充足的土壤表层，30cm深层土氧气含量低，醋酸菌数量少，A错误； B、筛选醋酸菌应使用以乙醇为唯一碳源的选择培养基，葡萄糖为唯一碳源的培养基可支持多种异养微生物生长，无法针对性筛选醋酸菌，B错误； C、梯度稀释后涂布平板可分离得到单菌落，含乙醇的培养基能筛选出可利用乙醇的醋酸菌，CaCO3 可与醋酸菌产生的乙酸反应形成透明圈，便于筛选产酸菌株，C正确； D、产酸能力的判断依据是透明圈直径与菌落直径的比值，比值越大产酸能力越强，而非直接挑选菌落直径最大的菌落，D错误。 3．【实验操作・酵母菌纯培养】（2026·广东·高考真题）“酵母菌的纯培养”实验中，下列操作不规范的是（     ） A．在火焰旁冷却接种环 B．试管棉塞放超净台上 C．接种前灼烧试管口 D．划线时轻柔而迅速 【答案】B 【详解】A、接种环灼烧灭菌后需在酒精灯火焰旁的无菌区冷却，既可以避免高温烫死待接种的酵母菌，也能防止接种环被环境杂菌污染，操作规范，A不符合题意； B、试管棉塞放在超净台台面上时，会被台面上可能存在的杂菌污染，后续塞回试管时会造成培养基、菌种污染，正确操作应将棉塞夹在手指缝隙中，该操作不规范，B符合题意； C、接种前灼烧试管口可以杀灭试管口附着的杂菌，避免杂菌侵入试管内部污染培养物，属于标准无菌操作，C不符合题意； D、划线时动作轻柔可防止划破固体培养基表面影响菌落分离，动作迅速可减少培养物和空气的接触时间，降低杂菌污染概率，操作规范，D不符合题意。 4．【诱变实验・营养缺陷型细菌】（2026·安徽·高考真题）某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落），再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是（　　） A．固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B．牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C．物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D．物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 【答案】B 【详解】A、培养基需要采用湿热灭菌法进行灭菌，A错误； B、牛肉膏蛋白胨培养基中含有微生物生长所需的碳源、氮源（包括组氨酸在内的有机氮源）、磷酸盐和维生素等，属于完全培养基，因此牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌，B正确； C、已知基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落，据图示可知，基本培养基上只有滤纸片周围出现了少数的几个菌落a，其它部位的营养缺陷型菌体没有形成菌落，因此可推测低浓度的物质M具有诱变作用，可使营养缺陷型菌体突变为可自身合成组氨酸的突变体，该突变体可利用自身合成的组氨酸合成蛋白质，因此可形成菌落a，并非菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸，C错误； D、根据右图可知，含有高浓度M的滤纸片周围缺陷型菌体不能生长形成菌落，说明物质M有抑制作用，即使M有诱变作用，但由于基因突变的频率较低，因此抑菌圈边缘的菌落大多数仍为缺陷型菌体，不能在基本培养基上生长，D错误。 5．【土壤致病菌分离・基础流程】（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（    ） A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 【答案】B 【详解】A、制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误； B、将土样加入无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B正确； C、连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开始无法有效分离单菌落，C错误； D、斜面培养基保存菌种需置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法（-20℃），室温下无法长期保存，D错误。 故选B。 6．【条件探究・深海细菌培养】（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + 注： “+”表示有；“一”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 【答案】D 【详解】A、平板划线法是用来分离和纯化微生物，获得单个菌落的技术，其主要目的是分离而不是计数。用于活菌计数的方法通常是稀释涂布平板法，A错误； B、制备固体培养基（琼脂平板）的正确流程是：先将培养基成分溶解、调整pH值后，分装到三角瓶中，然后进行高压蒸汽灭菌。待培养基冷却至50℃左右时，再在无菌条件下（如超净工作台）倒入无菌的培养皿中（即“倒平板”），B错误； C、组②为常压 + 纤维素，结果无菌落，而组④为高压 + 纤维素，结果是有菌落。 这个对比恰好说明，在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长，C错误； D、③④组形成了一个对照实验，变量是碳源。实验结果表明，在高压条件下，该细菌可以利用纤维素生长（组④），但不能利用淀粉生长（组③），D正确。 故选D。 7．【筛选降解菌株・稀释涂布平板】（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 【答案】D 【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 【详解】A、以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物被抑制），符合选择培养基的设计原理，A正确； B、逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株（类似“驯化”过程），B正确； C、培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸性），是配制培养基的基本要求，C正确； D、稀释涂布平板法需用​​涂布器​​将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂布无法保证菌液均匀，D错误。 故选D。 易错提醒 易错点①：工具混淆。涂布操作使用涂布器；接种环用于平板划线。很多学生记混工具，以为接种环可以涂布。 易错点②：选择培养基逻辑。唯一碳源 / 氮源筛选：只有可以利用该物质的微生物存活；逐步提高目标物质浓度属于人工驯化，筛选高耐受性菌株。 易错点③：配制培养基必调 pH。细菌一般中性弱碱，霉菌调酸性，忽略 pH 条件是高频丢分点。 二、多选题 8．【选择培养基・耐镉细菌筛选】（2026·湖南·高考真题）科研人员拟筛选耐镉细菌用于生态修复。下列叙述正确的是（     ） A．宜从镉污染的土壤或水体中分离耐镉细菌 B．配制培养基时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分 C．含氯化镉的培养基可选择耐镉细菌并鉴定其种属 D．利用稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌实际数目多 【答案】AB 【详解】A、镉污染的土壤或水体中镉含量高，在长期自然选择下，该环境中耐镉细菌的比例远高于普通环境，因此宜从该类环境中分离目的菌，A正确； B、培养基的基本营养成分一般包含碳源、氮源、无机盐、水，因此配制时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分，B正确； C、含氯化镉的培养基属于选择培养基，仅能筛选出耐镉细菌，无法鉴定其种属，鉴定种属还需要结合形态观察、生理生化检测等其他实验，C错误； D、利用稀释涂布平板法计数时，若两个或多个活菌连在一起，平板上只能形成一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌实际数目少，D错误。 9．【透明圈・纤维素分解菌诱变筛选】（2026·山东·高考真题）刚果红与纤维素可形成红色复合物。在含刚果红和纤维素的培养基中培养细菌时，细菌产生的纤维素酶将纤维素分解，使菌落周围形成透明圈。为获得分解纤维素能力强的菌株，将筛选到的菌株a进行诱变处理得到菌株b、c、d。在相同且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如表所示。下列说法正确的是（　　） 菌株 a b c d 菌落直径与透明圈直径的比值 0.5 0.3 0.5 0.7 A．筛选菌株a所用培养基应以纤维素为唯一碳源 B．将菌液接种到培养基进行菌株筛选时必须使用平板划线法 C．从表中数据可得出，菌株c的纤维素酶合成基因未发生突变 D．在4种菌株中，菌株b分解纤维素的能力最强 【答案】AD 【详解】A、筛选可分解纤维素的菌株a时，需使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，只有能分解利用纤维素的微生物可在该培养基上存活繁殖，A正确； B、将菌液接种到培养基进行菌株筛选时应使用稀释涂布平板法，B错误； C、菌株c的比值和菌株a相同仅说明二者分解纤维素的能力相近，若发生同义突变、突变未影响纤维素酶的活性或表达量，也会出现该结果，不能判定其纤维素酶合成基因未发生突变，C错误； D、菌落直径与透明圈直径的比值越小，说明同等大小的菌落分解纤维素的范围越大，分解能力越强，菌株b的比值最小，故其分解纤维素的能力最强，D正确。 10．【酵母菌筛选・乳糖利用】（2026·黑吉辽蒙卷·高考真题）某奶酒以牛奶为主要原料，经微生物发酵酿制而成。为提高发酵效率，需筛选具有乳糖利用率高、乙醇产量高等特性的酵母菌菌株。下列叙述正确的是（　　） A．选择培养基应以葡萄糖为唯一碳源 B．选择培养基中可添加抗生素抑制细菌生长 C．制备固体培养基需先高压蒸汽灭菌再倒平板 D．接种后的平板应在37℃恒温培养 【答案】BC 【详解】A、本实验目的是筛选乳糖利用率高的酵母菌，选择培养基应以乳糖为唯一碳源，才能保证仅能利用乳糖的菌株存活，以葡萄糖为唯一碳源无法达到筛选目的，A错误； B、抗生素可抑制细菌生长繁殖，酵母菌属于真菌，对抗生素不敏感，因此添加抗生素可排除细菌杂菌的干扰，B正确； C、制备固体培养基的流程为计算→称量→溶化→调pH→高压蒸汽灭菌→倒平板，先灭菌再倒平板可避免杂菌污染，C正确； D、酵母菌的最适培养温度约为28℃，37℃是细菌培养的常用温度，不符合酵母菌的培养要求，D错误。 三、非选择题 11．【微生物定量检测・VB₁₂生物检测法】（2026·江西·高考真题）检测食品中维生素B12(VB12)的含量具有重要意义。微生物法是一种检测VB12含量的常用方法，其基本原理是测试菌的生长依赖VB12，培养的生物量与培养基提供的VB12量成对应关系，流程如图(培养物OD值是一种能反映菌体浓度的测量指标，与菌体浓度正相关)。 回答下列问题： (1)图中液体培养基(b)与(c)________(选填“相同”或“不相同”)。 (2)制备测试菌液的“洗涤”和“重悬”操作需使用________溶液，以防止杂菌污染、保证菌体活性。 (3)在“检测食品中的VB12含量”过程中需设计空白(阴性)对照实验，其培养管内包括________[选填序号①液体培养基(c)；②测试菌液；③一定浓度的VB12；④待测样品液；⑤用于提取VB12的溶液]；同时还需设计“不接种测试菌液”的培养管作为另一组对照实验，具体目的是___________________________________。 (4)实验中需每隔一段时间检测培养物OD值。当OD值________时才能用于计算食品中VB12浓度，原因是___________________________________。 【答案】(1)不相同 (2)无菌等渗 (3) ①②⑤ 检测培养基和培养过程是否被杂菌污染，排除杂菌污染对OD值检测结果的干扰 (4) 稳定不再变化 VB12是测试菌生长的限制因子，只有当菌体生长达到稳定期，菌体浓度不再改变，OD 值才能稳定，OD值才与VB12浓度形成稳定对应关系，保证计算结果准确 【详解】（1）液体培养基(b)用于培养活化测试菌，需要含有VB12才能供测试菌生长繁殖；液体培养基(c)用于检测样品中VB12含量，本身不含VB12，因此二者成分不相同。 （2）无菌的等渗溶液，可维持菌体正常形态和活性，同时无菌条件能防止杂菌污染，符合操作要求。 （3）阴性空白对照的目的是排除提取VB12的溶剂本身对实验的影响，因此需要保留液体培养基(c)、测试菌液，用提取VB12的溶液代替待测样品液，故选①②⑤。不接种测试菌的对照，可通过OD值变化判断培养体系是否被杂菌污染，排除杂菌对结果的干扰。 （4）该方法依靠最终菌体生物量反映初始VB12浓度，VB12是测试菌生长的限制因子，只有当菌体生长达到稳定期，菌体浓度不再改变，OD 值才能稳定，OD值才与VB12浓度形成稳定对应关系，保证计算结果准确。 20 / 21 学科网（北京）股份有限公司 $ 第38 讲 微生物的培养 两年模拟·基础题（全国视野，单选+多选） 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C D B D B A C A A A 题号 11 12 答案 AB ABD （一年重难·情境题（侧重江苏，辐射全国，单选+多选+非选择题） 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 A D C C B B B D B D 题号 11 12 13 14 答案 ACD BCD CD CD 15． 【答案】(1)可以被人体组织吸收，避免拆线痛苦 (2) 高盐、高pH（或NaCl 60g/L，pH=9） 甘油 (3) 低盐 壮观霉素 氯霉素和壮观霉素 双 精准识别DNA上两个不同的位点，并切除两个位点之间的片段 2kb (4)高盐环境下，细胞表面疏水性增强，促使细胞自发凝聚 16． 【答案】(1) 作为唯一碳源和氮源（用于筛选能以吡啶为碳源和氮源生长的细菌） 吡啶、琼脂（顺序可调换） (2) 101、102、103、104、105（3个以上，且其中1个小于104，1个大于104） 1.85×107 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（或有些细胞在涂布过程中死亡） (3) ② 将菌株放在含吡啶浓度更高的甲培养基中连续传代培养，测定每代吡啶降解率，获取目的菌株 (4)定期分批或者连续补充营养物质，同时收集发酵罐中的培养液 三年真题·压轴题（侧重江苏，辐射全国，单选题） 题号 1 2 3 4 5 6 7 答案 C C B B B D D 8 9 10 AB AD BC 11． 【答案】(1)不相同 (2)无菌等渗 (3) ①②⑤ 检测培养基和培养过程是否被杂菌污染，排除杂菌污染对OD值检测结果的干扰 (4) 稳定不再变化 VB12是测试菌生长的限制因子，只有当菌体生长达到稳定期，菌体浓度不再改变，OD 值才能稳定，OD值才与VB12浓度形成稳定对应关系，保证计算结果准确 20 / 21 学科网（北京）股份有限公司 $ 第38 讲 微生物的培养 第一部分 五年考情·精准定向 ……………………………………………………………… 1 江苏考情概览 高频考点情境 高效备考策略 第二部分 三大核心·主干速记………………………………………………………………… 3 一图串联·核心梳理·速记口诀 核心 01 微生物的培养基 核心 02　无菌技术 核心 03　微生物的基本培养技术 核心 04　微生物的选择培养和计数 第三部分 六大易错·逐点击破………………………………………………………………… 11 易错01 灭菌与消毒混淆 易错02 培养基成分与碳源氮源理解误区 易错03 平板划线法与稀释涂布平板法混淆 易错04 计数结果偏大偏小混淆 易错05 选择培养基与鉴别培养基混淆 易错06 灭菌的适用范围与对象混淆 第四部分 分层专练·靶向攻关 ……………………………………………………………………12 两年模拟·基础题（全国视野，单选+多选） 一年重难·情境题（侧重江苏，辐射全国，单选+多选+非选择题） 三年真题·压轴题（侧重江苏，辐射全国，单选+多选+非选择题） 江苏考情概览 新课标要求 考题统计 1. 举例说明微生物的实验室培养技术，说明培养基的种类与成分、无菌技术（灭菌与消毒）的原理。 2. 阐明微生物的分离、纯化与计数方法（平板划线法、稀释涂布平板法、显微镜直接计数法）。 3. 举例说明选择培养与选择培养基的原理，说明土壤中分解尿素的细菌、分解纤维素的微生物等的分离与计数应用。 2025·江苏　稀释涂布平板法计数与培养基配制判断2024·江苏　微生物纯化与无菌操作、选择培养基筛选 2023·江苏　微生物分离纯化、菌落特征辨析 2022·江苏　微生物的培养与观察、选择培养原理 2021·江苏　平板划线法与稀释涂布平板法比较 高频考点情境 1. 考查频次：江苏高考高频，单选、多选、非选择题均会考查；常结合微生物实验室培养、土壤微生物筛选、环境治理（降解污染物）等真实实验情境命题。 2. 考查要点： 培养基与无菌技术：培养基的种类（液体/固体、通用/选择/鉴别）、成分（碳源、氮源、无机盐、水）；灭菌与消毒的区分及适用对象；培养基配制流程。 微生物纯化与计数：平板划线法、稀释涂布平板法；菌落特征与纯培养判断；活菌计数与显微镜直接计数；菌种保存方法。 选择培养与应用：选择培养基筛选目的菌；土壤中分解尿素细菌（脲酶、酚红指示剂）；分解纤维素微生物（刚果红染色法）；环保降解菌筛选。 3. 命题情境：实验室微生物培养操作、土壤微生物筛选、环境降解菌筛选；侧重实验探究、证据意识，常结合流程图、平板图片、曲线图、表格考查。 备考策略 1. 抓牢核心概念：必背：培养基、碳源、氮源、灭菌、消毒、平板划线法、稀释涂布平板法、选择培养基、鉴别培养基、菌落、脲酶。 2. 构建知识网络：微生物培养基本流程（配制培养基→灭菌→倒平板→接种→培养→观察计数）；灭菌（灼烧/干热/湿热高压蒸汽）与消毒（煮沸/巴氏/化学/紫外线）区分；平板划线法与稀释涂布平板法的操作与用途对比。 3. 联系实际应用：土壤中分解尿素细菌的分离（以尿素为唯一氮源+酚红指示剂）；分解纤维素微生物（刚果红染色，菌落周围出现透明圈）；筛选降解石油、塑料的环保菌。 4. 强化题型方法：流程图题（配基→灭菌→倒板→接种→培养→计数）；平板菌落图片题（计数、纯度判断）；计数计算题（菌落数=平均菌落数×稀释倍数÷涂布体积）；选择/鉴别培养基辨析题。 5. 紧扣命题趋势：新课标强调科学探究与实验实践；微生物培养常与发酵工程、基因工程、环境治理综合出题。 一图串联 速记口诀 培养基中水无机，碳源氮源生长因子；固体液体按物理，通用选择鉴别按用途。 无菌技术分灭菌消毒：灼烧干热湿热为灭菌，煮沸巴氏酒精紫外线是消毒。 纯化纯靠平板划线，涂布平板能分离能计数；活菌计数偏小，显微计数偏大。 尿素菌酚红把氮源筛，纤维素菌刚果红透明圈；配制灭菌倒平板，接种培养再计数。 核心梳理 核心 01 微生物的培养基 1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2．类型 划分标准 培养基类型 配制特点 主要应用 物理性质 固体培养基 加入凝固剂较多 菌种分离、鉴定、计数　 半固体培养基 加入凝固剂较少 菌种保存 液体培养基 不加入凝固剂 工业生产，连续培养 化学组成 合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 菌种分类、鉴定 天然培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生产，降低成本 目的用途 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别 选择培养基 添加(或缺少)某种化学成分 菌种的分离 3．培养基的营养构成 (1)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。 营养物质 作用 主要来源 水 良好的溶剂、细胞结构的重要组成成分 培养基、空气、代谢产物 碳源 提供碳元素，有机碳源是异养生物的能源物质 葡萄糖、蔗糖、淀粉、纤维素、牛肉膏、蛋白胨等 氮源 提供氮元素，合成蛋白质核酸、磷脂以及含氮代谢产物 无机氮源，如铵盐、硝酸盐等；有机氮源，如酵母粉、牛肉膏、蛋白胨　等 无机盐 组成细胞结构和许多化合物，调节生命活动；某些化能自养菌的能源 如磷酸盐等无机化合物 (2)培养基的其他条件：满足微生物对pH、特殊营养物质以及O2等的需求。 培养微生物种类 特殊要求 乳酸杆菌 培养基中添加维生素 霉菌 培养基的pH调至酸性 细菌 培养基的pH调至中性或弱碱性 厌氧微生物 需要提供无氧的条件 指点迷津 不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。如，自养型微生物所需的营养物质主要是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源、氮源主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。 核心 02　无菌技术 获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括：消毒和灭菌。 1．消毒和灭菌 项目 消毒 灭菌 概念 使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物 使用强烈的理化方法杀死物体内外　所有的微生物，包括芽孢和孢子 常用 方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、酒精消毒法、紫外线消毒法 湿热灭菌(如高压蒸汽灭菌法)、干热灭菌、灼烧灭菌 区别 最大区别在于是否杀死芽孢和孢子 2．三种灭菌方法的比较 方法 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 媒介 沸水、流通蒸汽或高压蒸汽 热空气 火焰的充分燃烧层 方法 高压蒸汽灭菌：100 kPa、121 ℃，维持15～30 min 160～170 ℃、1～2 h 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 对象 培养基等 耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 接种工具、试管口、瓶口等 原理 高温或高温、高压使蛋白质变性失活，导致微生物活体以及芽孢和孢子全部死亡 核心 03　微生物的基本培养技术 1.微生物的纯培养 (1)相关概念 培养物 接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 纯培养物 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 纯培养 获得纯培养物的过程 (2)酵母菌的纯培养 ①菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的　子细胞群体。 ②获得单菌落的两种常用方法：平板划线法和稀释涂布平板法。 ③酵母菌的纯培养步骤 (3)分离纯化，获得单菌落的两种方法 ①平板划线法 项目 图像 a.将接种环放在火焰(外焰)上灼烧，直到接种环的金属丝烧红 b.在火焰旁冷却接种环(防止温度过高杀死菌种)。 同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞 c.将试管口通过火焰 d.在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 e.将试管口通过火焰，并塞上棉塞 f.在火焰附近将皿盖打开一条缝隙(不能完全打开，防止杂菌污染)，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖 g.灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连 指点迷津：灼烧接种环的目的 ①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物； ②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端； ③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。 ②稀释涂布平板法 a.取样，将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的瓶中，摇匀，取1_mL上清液加入盛有9_mL无菌水的试管中，依次等比稀释。从最后一支试管中取0.1_mL菌液滴加到培养基表面进行涂布。如下图所示： b稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液器枪头等均需灭菌；操作时，试管口和移液器应在离火焰 1～2 cm处。 c涂布平板时： 涂布器用体积分数为70%的酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上灼烧； 不要将过热的涂布器放入盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精； 酒精灯与培养皿距离要合适，移液器枪头不要接触任何物体； 培养皿盖不能完全打开，应只打开一条缝隙。 核心 04　微生物的选择培养和计数 1.微生物的选择培养 (1)选择培养的作用原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。  (2)分离纯化菌种的两种方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 接种用具 接种环 涂布器 分离结果 单菌落的获得 单菌落从后划线的区域挑取 只有达到合适的稀释度才能得到单菌落 应用 都会在培养基表面形成单菌落，达到分离纯化微生物的目的；都可用于观察菌落特征 不能用于微生物的计数 可对微生物进行计数 其他共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都可以在培养基上形成由单个微生物繁殖而来的纯培养物——单菌落 知识2　微生物的计数 1．测定微生物数量常用的方法 方法 稀释涂布平板　法 直接计数法(显微计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的　菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定的血细胞计数板在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 每克样品中的菌体数：C×M÷V C：某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数；M：稀释倍数；V：涂布所用的稀释液体积数(mL) 每毫升原液所含细菌数：①每小格平均细菌数×400×10 000×稀释倍数；②5(或4)个中方格的菌体数×5(或4)×10 000×稀释倍数 结果 比实际值偏小，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示) 比实际值偏大，因为此法不能区分活菌和死菌 注 稀释涂布平板法计数中，为了使结果接近真实值，应设置三个或三个以上的平板(平行重复原则，增强实验的说服力和准确性)，计算菌落平均数。另外，为了保证结果准确，一般选择同一稀释度的、菌落数在30～300　的平板进行计数。 较大的真核细胞，如酵母菌、霉菌孢子等，用特定的血细胞计数板；某些较大的原核细胞或相对较小的细菌，用细菌计数板 指点迷津：微生物的计数方法 (1)微生物的计数方法非常多样，应根据实际情况选择合适的方法。涉及一些新的微生物计数方法，应根据具体情境，弄清其背后的原理。列举两个其他计数方法： ①比浊法：随着微生物的繁殖，液体培养基的浑浊程度会增加，因此可根据液体培养物的浑浊程度来估计微生物的数量，通常使用分光光度计测定光的透过率。 ②实时荧光定量PCR (qPCR)：通过定量PCR技术检测特定微生物的DNA，可以精确测定微生物的数量。 2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。 CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3 (2)分离方法：利用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行选择培养。 (3)鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红说明菌落中的菌体为分解尿素的细菌。 (4)统计菌落数目：统计样品中的活菌数一般用稀释涂布平板法。 (5)实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。 3．分解纤维素的微生物的分离 项目 内容 分离方法 利用富含纤维素的选择培养基进行选择培养 原理 培养基以纤维素为主要碳源，能分解纤维素的微生物可利用纤维素获取营养，在该培养基上生存机会更多，大量繁殖；不能利用纤维素的微生物生长受抑制，从而达到富集目的。 培养基成分 以纤维素为唯一碳源，添加刚果红染料 鉴定原理 刚果红可与纤维素结合形成红色复合物；纤维素被纤维素分解菌产生的纤维素酶分解后，红色复合物消失，菌落周围出现透明圈，以此筛选纤维素分解菌。 4.选择培养基和鉴别培养基的比较 项目 选择培养基 鉴别培养基 原理 人为提供目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品，产生特定的颜色或其他变化 用途 从众多微生物中分离所需微生物(目的菌) 鉴别不同种类的微生物 举例 ①加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌； ②以尿素为唯一氮源，分离出分解尿素的微生物 ①以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂； ②利用刚果红染色法筛选分解纤维素的微生物(出现以纤维素分解菌为中心的透明圈)； ③用伊红—亚甲蓝琼脂培养基鉴别大肠杆菌(菌落呈深紫色，并有金属光泽) 易错01 灭菌与消毒混淆 消毒：温和，杀死部分微生物（不含芽孢和孢子），如煮沸消毒、巴氏消毒、酒精消毒、紫外线消毒。 灭菌：强烈，杀死一切微生物（含芽孢和孢子），如灼烧灭菌、干热灭菌、湿热（高压蒸汽）灭菌。 易错陷阱：误以为巴氏消毒能杀灭芽孢，或培养基只需消毒即可。 易错02 培养基成分与碳源氮源理解误区 碳源≠能源：无机碳源（如CO₂、碳酸盐）只提供碳元素，不提供能量；葡萄糖既是碳源又是能源。 氮源：含氮元素的物质才能作氮源；并不是所有微生物都能利用N₂固氮。 易错陷阱：误以为所有碳源都提供能量、所有微生物都能以N₂为氮源。 易错03 平板划线法与稀释涂布平板法混淆 平板划线法：用接种环划线，只能用于分离纯化，不能用于菌落计数。 稀释涂布平板法：先梯度稀释再涂布，既能分离纯化，又能用于活菌计数（统计结果偏小）。 易错陷阱：误以为平板划线法能用于菌落计数；混淆两者的适用场景与操作工具。 易错04 计数结果偏大偏小混淆 稀释涂布平板法：统计活菌数偏小（菌落可能由两个或多个细胞形成；可能漏计）。 显微镜直接计数：统计总数偏大（包含死亡个体，不能区分死活）。 易错陷阱：误以为稀释涂布平板法统计的是所有菌体、显微镜计数统计的是活菌。 易错05 选择培养基与鉴别培养基混淆 选择培养基：通过特定的营养或理化条件（如以尿素为唯一氮源）筛选目的菌。 鉴别培养基：通过显色反应（如酚红、刚果红）鉴别不同微生物。 易错陷阱：误把酚红显色当成选择作用；误以为鉴别培养基能筛选出目的菌。 易错06 灭菌的适用范围与对象混淆 接种环、涂布器→灼烧灭菌；玻璃器皿、金属器具→干热灭菌； 培养基、培养皿→湿热（高压蒸汽）灭菌； 空气→过滤除菌；操作台→紫外线消毒；手→化学药剂消毒。 易错陷阱：误以为培养基可用干热灭菌、玻璃器皿可用湿热灭菌、空气可用高压蒸汽灭菌。 两年模拟·基础题（全国视野，单选+多选） 亮点预览：依托泡菜肠道益生菌真实应用情境，辨析微生物接种方法、活菌计数计算与培养条件控制（T1）；借助植物根际促生菌筛选实验，考查缺陷型指示菌、生长圈法筛选菌株的实验逻辑与无菌取样操作（T2）；围绕实验室无菌操作专题，辨析灼烧、紫外线、高压蒸汽、过滤除菌等不同灭菌消毒手段适用对象（T3）；结合土壤几丁质降解菌筛选，考查选择培养基原理、纯化方法与水解圈筛选指标辨析（T8）。 一、单选题 1．【 情境分析・泡菜乳酸菌 】（2026·江苏徐州·模拟预测）泡菜中存在大量的乳酸菌，摄入一定量的乳酸菌利于保持肠道菌群平衡，但要发挥良好的保健作用，则要有足够量的活性菌经过胃到达小肠才可实现。下列叙述正确的是（     ） A．平板倒置培养可为乳酸菌生长创造无氧环境 B．图2中过程Ⅰ采用的接种方法可以纯化计数乳酸菌（平板划线法不能计数） C．图2中富集培养所用培养液的pH可控制在1.5左右 D．经图1过程获得了菌落数分别为80、79、81的三个平板，则10毫升陈泡菜水中的活菌数为8.0×106个 2．【筛选实验・生长圈法 】（2026·江苏扬州·三模）某些植物根际促生菌能够大量合成泛酸，科研人员欲筛选高效产泛酸菌株，将长有待测菌株的琼脂块置于涂布有高浓度指示菌的平板上，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．选用的指示菌应具有自主合成泛酸的能力 B．配制的培养基可以提供图中微生物生长所需的全部营养物质 C．用消毒后的铁铲将植物根系及黏附的土壤一同装入无菌袋中 D．据图应选择C21菌株做进一步鉴定 3．【基础辨析・无菌操作】（2026·江苏盐城·模拟预测）下列关于无菌操作的叙述，错误的是（　　） A．接种环、试管口、涂布器可通过灼烧法进行灭菌 B．用紫外线照射接种室可杀死物体表面、内部和空气中的微生物 C．PCR实验中使用的微量离心管、枪头等在使用前必须进行高压灭菌处理 D．不耐高温的植物激素过滤除菌后添加到已灭菌的培养基中 4．【筛选实验・缺陷型指示菌】（2026·江苏南通·三模）为初步筛选高产异亮氨酸菌株，研究人员将待测菌接种在琼脂块上，再将琼脂块转接到含有异亮氨酸缺陷型指示菌的平板上，培养后观察琼脂块周围指示菌的生长圈，结果如下图。相关叙述正确的是（　　） A．该筛选原理与抑菌圈法相同，待测菌抑制指示菌的生长 B．培养基以异亮氨酸为唯一氮源，采用湿热灭菌法灭菌 C．接种指示菌时应在酒精灯火焰旁采用平板划线法接种 D．指示菌生长圈越大，待测菌产异亮氨酸的能力越强 5．【概念对比・灭菌方法】（2026·江苏南京·二模）下列关于常见灭菌方法及应用的叙述正确的是（    ） A．化学药剂（如甲醛、高锰酸钾等）常用于培养基的灭菌 B．灼烧灭菌法常用于接种环、涂布器、接种针等灭菌 C．过滤除菌法在工业生产上常用于固体培养基的灭菌 D．干热灭菌法因穿透力强，常用于液体的快速灭菌 6．【代谢类型・自养细菌】（2026·江苏·二模）图示高效产出乙醇和单细胞蛋白的液态厌氧发酵工艺。下列相关叙述正确的是（　　） A．乙醇梭菌利用工业尾气中的无机碳作为碳源，故其可属于自养型生物 B．发酵过程中需不断搅拌，以促进营养物质和O2与乙醇梭菌充分接触 C．发酵液进行蒸馏后，通常采用平板划线法对其中的乙醇梭菌进行计数 D．通过发酵获得的单细胞蛋白含有丰富的蛋白质，但不含有糖类和脂质 7．【实验设计・变量组合】（2026·安徽合肥·二模）生存在极端恶劣的沙漠环境中的微生物具备特殊的抗逆能力，是生物工程、生物医药等领域的重要资源。为找出培养某沙漠土壤中极端微生物的最适碳源-氨基酸培养基组合，科研人员采集土壤后，以海藻糖-脯氨酸（TP）培养基为对照，通过更换TP培养基中不同的碳源（海藻糖等4种）和氨基酸（脯氨酸等20种）对土壤微生物进行分离培养，观察并统计菌落。下列操作正确的是（    ） A．取样时应使用灭菌的铲子铲取表层土壤，装入无菌纸袋后密封 B．菌落数量最多的平板，其接种溶液的稀释度即为最适稀释度 C．除对照组外，理论上还需设置79个实验组进行稀释涂布培养 D．培养过程中需控制好温度和时间，菌落出现后即可记录为结果 8．【选择培养基・唯一碳源】（2026·江苏镇江·模拟预测）土壤中某些微生物能合成分泌几丁质酶抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，并通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法正确的是（    ） A．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 B．对土壤浸出液进行纯化培养时，须用稀释涂布平板法 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．可依据单菌落周围水解圈直径的值来筛选目的菌株 9．【富集培养・流程辨析】（2026·江苏南通·一模）科研人员从胡杨腐朽木及其周边土壤中分离筛选高效木质素降解菌，具体过程如下图。相关叙述正确的是（　　） A．过程①的主要目的是增加目标菌的数量，提高筛选成功率 B．过程②可使用微量移液器，该过程菌液被稀释了105倍 C．过程③用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面时不可转动培养皿 D．过程④在最后一个划线区域所得到的不同菌落的形态均相同 10．【透明圈・降解菌筛选】（2026·福建龙岩·二模）除草剂莠去津是一种含氮的有机物，长期使用易对土壤造成污染。研究人员从土壤中筛选莠去津降解菌的过程如下图所示（含过量莠去津的固体培养基不透明）。下列叙述错误的是（　　） A．从A瓶到C瓶的目的是逐步稀释培养液中的目的菌 B．应选择固体培养基中出现的有透明带菌落进行再纯化 C．图中进行再纯化的接种过程至少需要灼烧6次接种环 D．实验过程中需设置未接种的培养基作为对照 二、多选题 11．【综合实验・生物技术操作判断】（2026·江苏镇江·三模）下列有关生物技术与工程的叙述错误的有（　　） A．涂布平板操作时，应待涂布器稍冷却后蘸取菌液在平板上涂布 B．单克隆抗体制备时，经选择培养基筛选出的杂交瘤细胞均能产生所需抗体 C．胚胎工程中常以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志 D．PCR实验中，将各组分加入离心管后离心以保证反应液集中在底部 12．【生物防治・抑菌实验】（2026·江苏南通·二模）苹果树腐烂由苹果树腐烂菌感染引起，为开发生物防治途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂菌生长的芽孢杆菌，实验流程如下图。相关叙述正确的是（    ） A．过程①取5g土壤加入45mL无菌水中 B．过程③应用涂布法进行接种，在适宜条件下培养 C．过程③可通过观察芽孢杆菌的形状、大小、颜色进行筛选 D．乙组A处长出的菌落直径应大于甲组A处长出的菌落直径 一年重难·情境题（侧重江苏，辐射全国，单选+多选+非选择题） 设题创新：结合微塑料环境污染修复情境，探究双降解菌株混合体系降解效果，考查实验变量分析与后续探究实验设计（T2）；基于深海极端环境微生物分离培养，依托多组碳源梯度培养曲线，考查种群数量影响因素、计数方法辨析与酶工程应用价值（T4）；以污水有机污染物降解菌筛选流程图为载体，考查富集培养原理、计数工具选择与工程菌实际应用风险评估（T5）；利用诱变育种获得纤维素分解突变菌株，依托折线图数据，考查透明圈比值分析、基因突变特点与筛选逻辑判断（T12）。 一、单选题 1．【课本经典实验・分解尿素细菌】（2025·江苏无锡·模拟预测）某同学开展“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，具体流程如下：土壤取样→制备培养基→土样稀释→涂布平板→微生物的培养、观察和计数。下列叙述错误的是（    ） A．土壤取样时用到的纸袋需要预先灭菌而铁铲不需要 B．本实验需要制备以尿素为唯一氮源的培养基和牛肉膏蛋白胨培养基 C．稀释土样时，每一次从试管中吸取稀释液前都要充分摇匀 D．本实验中，每个稀释倍数的稀释液至少要涂布三个平板 2．【柱状图・混合菌株降解】（2026·江苏徐州·一模）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X：Y=1：1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如图。下列叙述正确的是（　　） A．用平板划线法能测定各菌组中的活菌数 B．X菌组降解微塑料能力和菌浓度均高于Y菌组 C．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 D．可进一步探究X菌和Y菌不同比例混合液对微塑料的降解能力 3．【基础辨析・无菌与消毒灭菌】（2025·江苏南通·一模）无菌技术是生物学实验中的重要操作。下列叙述正确的是（　　） A．配制培养基通常需加入碳源、氮源、无菌水、无机盐 B．培养基可置于160～170 ℃的热空气中维持2～3 h进行干热灭菌 C．酸奶灌装前进行巴氏消毒，既能防止发酵过度又能延长其保质期 D．稀释涂布过程中移液枪取稀释液后通常需消毒枪头再进行下次取样 4．【曲线图・碳源对菌株影响】（2026·甘肃天水·一模）研究者从某海域1146米深海冷泉附近的沉积物中分离得到了拟杆菌新菌株。为了进一步研究其生物学特性，研究者用不同的碳源对其进行培养，得到的结果如图所示。下列相关分析合理的是（     ） A．碳源是影响培养液中拟杆菌种群数量变化的非密度制约因素 B．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于拟杆菌的分离和计数 C．该拟杆菌属于分解者，其分泌的各种多糖降解酶具有耐低温特性 D．以纤维素为碳源，在低温、厌氧环境中筛选拟杆菌有利于获得适宜人类广泛应用的突变株 5．【流程图・污染物降解菌筛选】（2026·湖南永州·一模）为了筛选出能高效降解污水中有害化合物甲的细菌（目的菌）。研究团队做了相关实验，主要步骤如图，下列叙述错误的是（     ） A．在培养基中加入化合物甲的目的是筛选出可以降解化合物甲的微生物 B．振荡培养若干天后，应选择培养瓶中化合物甲含量高的培养液进行接种 C．若要研究目的菌的生长规律，可用细菌计数板进行计数 D．将目的菌用于环境保护实践时，要考虑是否会产生二次污染等问题 6．【实验操作辨析・PCR 与微生物培养】（2026·广东广州·一模）下列相关实验操作正确的是（     ） A．为得到两条长度完全一致的目的DNA片段，最多只需进行PCR两轮循环 B．利用添加核酸染料的凝胶对PCR产物进行电泳后，在紫外灯下观察结果 C．将配制的酵母培养基煮沸并冷却后，在酒精灯火焰旁倒平板 D．将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养，获得单菌落 7．【无菌操作・不规范操作判断】（2026·广东广州·一模）下列关于微生物纯培养的操作，不规范的是（     ） A．平板划线操作在火焰旁进行 B．将试管棉塞放置在超净工作台上 C．稀释涂布平板法涂布后需将平板倒置培养 D．培养基配制后采用湿热灭菌法进行灭菌 8．【传统发酵・苹果酵素】（2026·福建漳州·一模）苹果酵素是以苹果为原料，经天然菌群协同发酵制成的传统发酵食品，发酵过程中酵母菌、醋酸菌、乳酸菌等先后成为优势菌群。下列叙述正确的是（     ） A．制作前需对苹果高压蒸汽灭菌，以防止杂菌污染 B．苹果酵素中的蛋白酶被人体吸收后具有催化作用 C．各阶段优势菌的细胞呼吸均产生CO2，使发酵液pH逐渐降低 D．优势菌群的变化与发酵液中氧气、pH等环境变化密切相关 9．【课本基础实验综合判断】（2026·湖南邵阳·一模）关于下表中生物学实验的相关叙述，正确的是（     ） 选项 实验名称 相关叙述 A 低温诱导植物细胞染色体数目的变化 使用体积分数为95%的酒精漂洗，防止解离过度 B 调查人群中的遗传病 调查遗传方式时，需选择在患者家系中并选择单基因遗传病调查 C 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 接种时先将稀释液滴加到涂布器上再均匀地涂布在培养基表面 D 培养液中酵母菌种群数量的变化 利用血细胞计数板计数时，应先滴加样液再盖盖玻片 A．A B．B C．C D．D 10．【透明圈筛选・产酶酵母菌】（2026·福建福州·一模）产酯能力高的酵母菌酿制的酒往往具有较好的香型，而产酯能力往往与胞外的酯水解酶活力正相关，因此常用含有不透明的三丁酸甘油酯的培养基初筛酿酒酵母。研究人员以商业酿酒酵母F33为对照，采用稀释涂布平板法从土壤和果实样品中分离酵母菌ZL-16和X-1，初步筛选结果如表所示。下列叙述错误的是（　　） A．稀释涂布平板法计数时得到的菌落数小于实际的活菌数 B．培养基接种后需将平板倒置，从而防止冷凝水落入平板 C．透明圈是酵母菌分泌的酯酶水解三丁酸甘油酯所形成的 D．D、d分别表示菌落和透明圈直径，挑选ZL-16菌株复筛 二、多选题 11．【选择培养基・降解菌富集】（2026·江西九江·一模）科研人员从淤泥中分离高效降解S（一种含有C、H、N的有机物）的细菌，流程如下：取淤泥样品富集培养后获得摇瓶M，稀释后涂布于乙培养基（含无机盐、水、S和Y），挑取单菌落接种至甲培养基（含无机盐、水和S），经多次筛选得到目标菌株。下列说法错误的是（    ） A．富集培养时培养基中需要添加S和Y B．实验中盛水或培养基的摇瓶需采用高压蒸汽灭菌法灭菌 C．甲、乙培养基中加入S浓度越高，越有利于筛选出目的菌株 D．除水、无机盐外，甲、乙培养基中还需要加入牛肉膏和蛋白胨 12．【折线图・纤维素分解菌诱变】（2026·湖南益阳·一模）获得分解纤维素能力强的菌株有利于解决农业玉米秸秆资源化利用问题。科研人员将筛选到的纤维素分解菌株A进行诱变处理得到菌株B、C、D。在相同且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如图所示。下列说法错误的是（     ） A．透明圈的产生是由于纤维素被分解，不能形成红色复合物 B．筛选菌株A所用培养基应以纤维素为唯一碳源，属于鉴别培养基 C．从图中数据可得出，菌株C的纤维素酶合成基因未发生突变 D．在4种菌株中，菌株D分解纤维素的能力最强 13．【抑菌圈・抗生素耐药实验】（2026·湖南衡阳·三模）下表是金黄色葡萄球菌对两种抗生素耐药性实验结果。下列相关叙述错误的是（　　） 抗生素/（5mg⋅mL-1） 抑菌圈大小/cm 对照组 第一代 第二代 第三代 第四代 第五代 第六代 四环素 0.60 4.00 3.53 3.07 3.03 2.97 3.06 恩诺沙星 0.60 2.70 2.33 1.63 1.93 1.77 1.90 A．实验中对照组用0.60 cm不含抗生素的滤纸片进行处理 B．四环素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要比恩诺沙星强 C．实验中可使用平板划线法对金黄色葡萄球菌进行接种 D．据结果推测，持续使用同种抗生素抑菌圈的大小保持不变 14．【诱变育种・抗生素生产菌株】（2026·江西吉安·模拟预测）亚热带链霉菌可产生白霉素。科研人员将X射线处理过的野生型菌种（WT）菌液均匀涂布在MS培养基表面，一周后，以每个平板上挑取的100个单菌落为一组，分别培养后逐一测定白霉素产量，统计结果如下表。下列叙述错误的是（　　） 组别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ 辐射剂量（Gy） 0 105 2×105 3×105 4×105 5×105 6×105 所取菌落中正突变占比（%） 0 11 24 59 26 19 8 注：正突变指白霉素产量提高的突变株 A．X射线能损伤WT细胞内的DNA，提高突变率 B．可先进行实验探究辐射剂量对WT存活率的影响 C．Ⅰ组统计结果说明未经过辐射处理的WT未发生突变 D．结果说明，Ⅳ组中可获得白霉素产量最高的突变株 三、非选择题 15．【基因工程・耐盐菌改造发酵】（2026·江苏扬州·三模）某些极端微生物具有耐高温、耐盐碱、不易污染等优点。我国科学家在新疆艾丁湖筛选出耐盐菌——H菌，并对其进行基因改造，用于生产聚羟基脂肪酸酯(PHA)。 (1)PHA为可降解生物基塑料，兼具经济效益与环境友好。它还可作为缝合线等医学材料，其优点是___________。 (2)H菌进行如图1所示的开放式发酵，该系统中___________条件抑制了杂菌污染。长期保存菌种时，取菌液与灭菌的___________充分混匀后，置于-80℃的冰箱保存。 (3)利用接合转化构建含有Cas9、sgRNA1基因和sgRNA2基因的H菌，如图2所示。 ①将质粒pQ08通过接合转化导入H菌时，需将供体菌与受体菌混合于___________(填“低盐”或“高盐”)锥形瓶中，37℃培养8小时。培养基Ⅰ和Ⅱ中添加的抗生素分别为___________、___________。 ②鞭毛与H菌运动有关，耗能多，利用CRISPR/Cas9系统敲除鞭毛合成的基因，有利于提高PHA产量。sgRNA指导Cas9切割DNA，使DNA分子的___________(填“单”或“双”)链断裂，进而引发细胞内同源重组修复，如图3。与单sgRNA相比，双sgRNA系统的优点是___________。 ③挑取菌落，利用图3中的引物F、R进行PCR并电泳检测，目标片段大小约为___________，则表明敲除成功。 (4)H菌合成分泌的胞外多糖是保护细胞的屏障，科学家将胞外多糖的基因敲除后细胞自发凝聚，有利于发酵产物PHA的分离，相关研究结果如图4所示。据此推测细胞自发凝聚的机理为___________。 16．【选择培养基・污染物降解菌】（2026·广东广州·一模）啶分子式为C5H5N，是典型污染物。某焦化废水处理厂曝气池的活性污泥中存在多种微生物，但吡啶去除效率一直较低。研究人员按照下图所示流程，从该活性污泥中分离得到能高效降解吡啶的细菌菌株S。实验过程中需要甲液体培养基、乙固体培养基，甲的组分为无机盐、水、吡啶和S，乙的组分为无机盐、水、S、X和Y。请回答下列问题： (1)甲培养基中吡啶的作用是______________。乙培养基中物质X、Y分别是______________。 (2)研究人员将5 g活性污泥样品置于100 mL甲培养基中，富集培养后，取5 mL菌悬液进行梯度稀释，分别稀释至______________（稀释度），取各稀释液0.1 mL涂布于乙培养基平板上。培养后，适合计数的104稀释度的三个平板上长出的菌落数分别为186、178和191，则每毫升活性污泥样品中的活菌数约为______________个。该结果比实际活菌数偏低的原因是______________。 (3)研究人员从分离得到的菌株中筛选出4株吡啶降解能力不同的菌株，编号为①、②、③、④。将各菌株分别接种于含500 mg/L吡啶的甲培养基中，30℃培养48 h后测定吡啶残留量，结果如下表： 菌株 ① ② ③ ④ 吡啶残留量（mg/L） 45 12 89 38 降解吡啶能力最强的菌株是______________。请写出如何进一步筛选出更高降解率菌株的简单实验思路______________。 三年真题·压轴题（侧重江苏，辐射全国，单选题） 设题创新：结合青霉菌次级代谢分支代谢途径，考查发酵工程进程检测、产物分离提取等工业发酵实际问题（T1）；基于土壤功能微生物筛选高考经典模型，以醋酸菌产酸透明圈为载体，综合土壤取样、选择培养、涂布分离、菌种鉴定全流程实验（T2）；创设营养缺陷型细菌诱变筛选新情境，依托平板滤纸片实验，考查培养基灭菌、完全 / 基本培养基功能、诱变与抑菌现象辨析（T4）；借助 VB₁₂微生物定量检测的全新实验范式，以流程图为载体考查对照实验设置、菌体培养条件、实验结果判读逻辑（T11）。 一、单选题 1．【代谢途径・次级代谢产物】（2026·重庆·高考真题）在发酵生产青霉素的过程中总会有头孢霉素产生，下图为青霉菌的部分代谢途径。结合发酵工程生产青霉素的过程，下列叙述正确的是（     ） A．可通过选育高表达酰基转移酶的青霉菌来阻断头孢霉素的合成 B．扩大培养时，培养基中添加Lys，青霉菌才能繁殖 C．可通过检测培养液中青霉菌数量和青霉素浓度了解发酵进程 D．发酵结束后，将菌体分离干燥可获得纯化的青霉素 2．【筛选鉴定・产酸醋酸菌】（2026·浙江·高考真题）在含CaCO3的培养基中，醋酸菌产生的乙酸能与CaCO3反应，使其菌落周围出现透明圈。拟从果园附近的土壤中筛选产酸能力强的醋酸菌，按照取样、扩大培养、筛选、鉴定等步骤进行实验。下列叙述正确的是（     ） A．采集土壤样本时，取地表以下30cm的深层土 B．将土样稀释后，接种至以葡萄糖为唯一碳源的液体培养基进行振荡培养 C．将扩大培养后的菌液进行梯度稀释，涂布于含乙醇及CaCO3的平板上培养 D．挑选平板上直径最大的菌落，提取DNA，测序后比对序列进行鉴定 3．【实验操作・酵母菌纯培养】（2026·广东·高考真题）“酵母菌的纯培养”实验中，下列操作不规范的是（     ） A．在火焰旁冷却接种环 B．试管棉塞放超净台上 C．接种前灼烧试管口 D．划线时轻柔而迅速 4．【诱变实验・营养缺陷型细菌】（2026·安徽·高考真题）某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落），再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是（　　） A．固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B．牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C．物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D．物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 5．【土壤致病菌分离・基础流程】（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（    ） A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 6．【条件探究・深海细菌培养】（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + 注： “+”表示有；“一”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 7．【筛选降解菌株・稀释涂布平板】（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 二、多选题 8．【选择培养基・耐镉细菌筛选】（2026·湖南·高考真题）科研人员拟筛选耐镉细菌用于生态修复。下列叙述正确的是（     ） A．宜从镉污染的土壤或水体中分离耐镉细菌 B．配制培养基时需添加碳源、氮源和无机盐等营养成分 C．含氯化镉的培养基可选择耐镉细菌并鉴定其种属 D．利用稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌实际数目多 9．【透明圈・纤维素分解菌诱变筛选】（2026·山东·高考真题）刚果红与纤维素可形成红色复合物。在含刚果红和纤维素的培养基中培养细菌时，细菌产生的纤维素酶将纤维素分解，使菌落周围形成透明圈。为获得分解纤维素能力强的菌株，将筛选到的菌株a进行诱变处理得到菌株b、c、d。在相同且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如表所示。下列说法正确的是（　　） 菌株 a b c d 菌落直径与透明圈直径的比值 0.5 0.3 0.5 0.7 A．筛选菌株a所用培养基应以纤维素为唯一碳源 B．将菌液接种到培养基进行菌株筛选时必须使用平板划线法 C．从表中数据可得出，菌株c的纤维素酶合成基因未发生突变 D．在4种菌株中，菌株b分解纤维素的能力最强 10．【酵母菌筛选・乳糖利用】（2026·黑吉辽蒙卷·高考真题）某奶酒以牛奶为主要原料，经微生物发酵酿制而成。为提高发酵效率，需筛选具有乳糖利用率高、乙醇产量高等特性的酵母菌菌株。下列叙述正确的是（　　） A．选择培养基应以葡萄糖为唯一碳源 B．选择培养基中可添加抗生素抑制细菌生长 C．制备固体培养基需先高压蒸汽灭菌再倒平板 D．接种后的平板应在37℃恒温培养 三、非选择题 11．【微生物定量检测・VB₁₂生物检测法】（2026·江西·高考真题）检测食品中维生素B12(VB12)的含量具有重要意义。微生物法是一种检测VB12含量的常用方法，其基本原理是测试菌的生长依赖VB12，培养的生物量与培养基提供的VB12量成对应关系，流程如图(培养物OD值是一种能反映菌体浓度的测量指标，与菌体浓度正相关)。 回答下列问题： (1)图中液体培养基(b)与(c)________(选填“相同”或“不相同”)。 (2)制备测试菌液的“洗涤”和“重悬”操作需使用________溶液，以防止杂菌污染、保证菌体活性。 (3)在“检测食品中的VB12含量”过程中需设计空白(阴性)对照实验，其培养管内包括________[选填序号①液体培养基(c)；②测试菌液；③一定浓度的VB12；④待测样品液；⑤用于提取VB12的溶液]；同时还需设计“不接种测试菌液”的培养管作为另一组对照实验，具体目的是___________________________________。 (4)实验中需每隔一段时间检测培养物OD值。当OD值________时才能用于计算食品中VB12浓度，原因是___________________________________。 20 / 21 学科网（北京）股份有限公司 $