2027届高考生物人教版一轮复习训练：基因工程的应用、蛋白质工程和生物技术的安全性与伦理问题

**基本信息** 聚焦基因工程应用、蛋白质工程及生物技术安全伦理，通过基础辨析与综合应用构建从原理到实践的知识网络，强化科学思维与探究实践。 **综合设计** |模块|题量/典例|题型特征|知识逻辑| |----|-----------|----------|----------| |基础强化练|6道选择（含生物武器禁止、设计试管婴儿等）|概念辨析与法规理解|从基因工程/蛋白质工程基本原理到安全伦理规范的认知构建| |综合提升练|4道非选择（含维生素C发酵工程、抗虫棉基因改造等）|实验分析与工程应用|从基因表达载体构建、目的基因检测到蛋白质工程优化及实践应用的逻辑延伸|

2027届高考生物人教版一轮复习同步训练：基因工程的应用、蛋白质工程和生物技术的安全性与伦理问题 姓名： 学号： 班级： 一、基础强化练 1.关于生物技术的安全与伦理问题在我国相关法规明令禁止的是（　　） A.试管动物的培育 B.转基因食品的生产 C.治疗性克隆的研究 D.生物武器的发展和生产 2.（2026·湖北黄冈模拟）生物技术的安全性与伦理性一直是人类关注和讨论的热点问题。下列叙述正确的是（　　） A.转基因技术的原理是基因重组，不会改变生物的遗传多样性 B.“设计试管婴儿”需在胚胎移植前进行遗传学诊断 C.生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力 D.生殖性克隆人理论上能丰富人类基因的多样性，可在特定人群中进行相关实验 3.（2026·湖北武昌模拟）《中华人民共和国生物安全法》是为维护国家安全，防范和应对生物安全风险，保障人民生命健康，保护生物资源和生态环境，促进生物技术健康发展，推动构建人类命运共同体，实现人与自然和谐共生，制定的法律。根据其精神，结合生物学知识，下列叙述正确的是（　　） A.患免疫缺陷病的儿童不建议接种减毒活疫苗 B.市场上买来的野生动物应该放归当地自然环境 C.未经安全评估的转基因生物产品可小规模上市 D.畜禽养殖所用的饲料中应全面添加抗生素 4.抗虫和耐除草剂玉米双抗12－5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（　　） A.预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B.后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C.延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D.转基因品种经检测含有目的基因后即可上市 5.（2026·河南郑州模拟）香豆素是从豆科植物中提取的产物，肉桂酰辅酶A邻羟基化酶（CCHs）是其合成途径中的关键酶，研究者获得这种酶的途径如图所示。下列叙述正确的是（　　） A.对CCHs进行合理设计可能得到多种基因序列，但仍然可以表达出相同的蛋白质 B.蛋白质工程设计流程是从CCHs基因的碱基排列顺序出发 C.从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则完全一致 D.过程3中碱基互补配对的方式有A—T、T—A、G—C、C—G 6.（2026·甘肃兰州模拟）基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等多方面的应用发展迅速。下图表示利用基因工程技术生产人血清白蛋白的两条途径。下列叙述错误的是（　　） A.扩增目的基因时，利用耐高温的DNA聚合酶从引物a、b的3′端进行子链合成 B.目的基因要与能在绵羊乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子等调控元件重组在一起 C.若目的基因是从人的细胞内提取mRNA经逆转录形成的，则该目的基因中不含启动子序列 D.可以利用农杆菌转化法将含有目的基因的重组质粒直接整合到受体植物细胞的染色体DNA上 二、综合提升练 7.（2025·云南卷，21）我国研究人员发明了生产维生素C的两步发酵法，流程如图甲。为了减少氧化葡糖杆菌竞争性消耗山梨糖，需要进行灭菌以结束第一步发酵。 在两步发酵法的基础上，我国研究人员进一步尝试用三菌混菌体系建立一步发酵法。在氧化葡糖杆菌（原始菌MCS）中利用基因工程技术导入大肠杆菌基因ccdB，得到工程菌IR3C。MCS和IR3C单菌培养时，活菌数变化曲线如图乙，MCS、IR3C分别与普通生酮基古龙酸菌和巨大芽孢杆菌进行三菌混菌发酵时，产物含量变化曲线如图丙。 回答下列问题。 （1）要使基因ccdB在IR3C中稳定遗传、表达并发挥作用，构建的基因表达载体除启动子外，还必须有　 。  （2）绘制图乙需统计活菌数，常用方法是　　　　　　　　　　　　　。当活菌达到一定数量时，基因ccdB编码的蛋白质开始发挥作用，推测该蛋白质的作用是　 ，  开始发挥作用的时间是　　　　　　，判断理由是　 。  （3）基于图丙，利用IR3C三菌混菌发酵的产量　　　　（填“高于”或“低于”）MCS三菌混菌发酵的产量，其原因是　 。  8.将天然Ti质粒改造成含有Vir基因的辅助质粒（辅助T－DNA转移）和不含有Vir基因、含有T－DNA的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能力，进行如下操作。回答下列问题。 注：F1～F3，R1～R3表示引物；T－DNA－LB表示左边界；T－DNA－RB表示右边界；Ori表示复制原点；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。 （1）从苏云金杆菌提取DNA时，需加入蛋白酶，其作用是　　　　　　　　　　　　　　。提取过程中加入体积分数为95%的预冷酒精，其目的是　　　　　　　　　　。  （2）本操作中获取目的基因的方法是　　　　　　　　和　　　　　　　　　。  （3）穿梭质粒中p35s为启动子，其作用是　　　　　　　　　　　　　　，驱动目的基因转录；插入两个p35s启动子，其目的可能是　  　。  （4）根据图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位置，用　　　　基因对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。  （5）为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行PCR，应选用的引物是　　　　和　　　　。  （6）本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是　　　　。  A.通过含有双质粒的农杆菌转化棉花细胞 B.将苏云金杆菌Bt基因导入棉花细胞中表达 C.将1－1 362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列 D.用1－1 362合成基因序列和1 363－1 848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白 9.（2026·四川宜宾模拟）人的血清白蛋白在临床上需求量很大。将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，就可以利用牛的乳腺细胞生产人血清白蛋白。如图是利用奶牛乳腺生产人血清白蛋白的图解。下列相关说法错误的是（　　） A.作为乳腺生物反应器的奶牛B体内几乎所有细胞中都含有血清白蛋白基因 B.将②导入③之前要将目的基因与乳腺蛋白基因的启动子等结合构建表达载体 C.在④中检测到人血清白蛋白基因，说明目的基因在受体细胞中完成了表达 D.此过程涉及的现代生物技术有核移植技术、动物细胞培养技术、转基因技术等 10.（2025·河南卷，21）卡拉胶是一类源于海洋红藻的大分子多糖，可被某些细菌降解为具有多种应用前景的卡拉胶寡糖。某研究小组拟筛选具有高活性卡拉胶酶（CG）的菌种用于生产卡拉胶寡糖。回答下列问题。 （1）选择海藻和海泥作为样本筛选卡拉胶降解菌的原因是  　。  将培养后的菌液混匀并充分　　　　，再接种至微孔板中，经培养和筛选获得了CG活性最高的菌种。  （2）为构建携带cg（CG的编码基因）的大肠杆菌表达载体（图1），对cg的PCR扩增产物和质粒进行双酶切，随后用E.coli DNA连接酶连接。为保证连接准确性和效率，cg转录模板链的5′端最好含有　　　　酶切位点。另有两组同学选用了各不相同的双酶切组合和T4 DNA连接酶重复上述实验，获得的部分重组质粒分子大小符合预期，但均无法使用各自构建表达载体的双酶切组合进行切割，其原因是　  　。  限制酶的识别序列和切割位点如下： （3）为将构建好的表达载体转入大肠杆菌，需要先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，目的是  　，随后在含　　　　和　　　　的培养基中培养一段时间后，根据菌落周围有无水解透明圈筛选目的菌株。  （4）已知空间上邻近的两个半胱氨酸易形成二硫键，从而提升蛋白质的耐热性。为提高CG的耐热性，研究人员分析了五个氨基酸位点的空间距离和保守度（保守度值越大表明该位点对酶的功能越关键），如图2所示。根据分析结果，选择第　　位的氨基酸替换成半胱氨酸最合适，原因是　  　。  2027届高考生物人教版一轮复习同步训练：基因工程的应用、蛋白质工程和生物技术的安全性与伦理问题 姓名： 学号： 班级： 一、基础强化练 1.关于生物技术的安全与伦理问题在我国相关法规明令禁止的是（　　） A.试管动物的培育 B.转基因食品的生产 C.治疗性克隆的研究 D.生物武器的发展和生产 答案：D 解析：生物武器致病能力强、攻击范围广，我国奉行不发展、不生产、不储存生物武器的政策，并反对生物武器及其技术和设备的扩散。 2.（2026·湖北黄冈模拟）生物技术的安全性与伦理性一直是人类关注和讨论的热点问题。下列叙述正确的是（　　） A.转基因技术的原理是基因重组，不会改变生物的遗传多样性 B.“设计试管婴儿”需在胚胎移植前进行遗传学诊断 C.生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力 D.生殖性克隆人理论上能丰富人类基因的多样性，可在特定人群中进行相关实验 答案：B 解析：转基因技术的原理是基因重组，它将外源基因导入受体生物，会改变生物的基因组成，从而改变生物的遗传多样性；“设计试管婴儿”的目的是用于治疗某些疾病，需在胚胎移植前进行遗传学诊断；生物武器是用微生物、毒素及重组致病菌等来形成杀伤力，干扰素是一种免疫活性物质，不是生物武器的组成部分；生殖性克隆人会引发一系列伦理问题，而且克隆人只是对供体的复制，不能丰富人类基因的多样性，同时在任何人群中都不允许进行生殖性克隆人的相关实验。 3.（2026·湖北武昌模拟）《中华人民共和国生物安全法》是为维护国家安全，防范和应对生物安全风险，保障人民生命健康，保护生物资源和生态环境，促进生物技术健康发展，推动构建人类命运共同体，实现人与自然和谐共生，制定的法律。根据其精神，结合生物学知识，下列叙述正确的是（　　） A.患免疫缺陷病的儿童不建议接种减毒活疫苗 B.市场上买来的野生动物应该放归当地自然环境 C.未经安全评估的转基因生物产品可小规模上市 D.畜禽养殖所用的饲料中应全面添加抗生素 答案：A 解析：对于患免疫缺陷病儿童，接种减毒活疫苗后，由于自身免疫系统无法有效应对这些有活性的病原体，可能会引发严重的感染等不良反应，所以不建议接种减毒活疫苗；市场上买来的野生动物不能直接放归当地自然环境，需要经过安全检测，防范和应对生物安全风险，保障人民生命健康；未经安全评估的转基因生物产品也不可小规模上市，避免对人民的生命健康、生态环境等造成威胁；滥用抗生素会导致细菌等微生物耐药性增强，威胁公共健康。 4.抗虫和耐除草剂玉米双抗12－5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（　　） A.预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B.后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C.延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D.转基因品种经检测含有目的基因后即可上市 答案：B 解析：预变性过程可促进模板DNA解旋，没有促进复制；后延伸过程是为了让引物延伸完全并让单链产物完全退火形成双链结构，可使目的基因的扩增更加充分；延伸过程仍需引物参与才能完成半保留复制；转基因品种不只需要检测是否含有目的基因，还需检测目的基因是否表达以及安全性问题。 5.（2026·河南郑州模拟）香豆素是从豆科植物中提取的产物，肉桂酰辅酶A邻羟基化酶（CCHs）是其合成途径中的关键酶，研究者获得这种酶的途径如图所示。下列叙述正确的是（　　） A.对CCHs进行合理设计可能得到多种基因序列，但仍然可以表达出相同的蛋白质 B.蛋白质工程设计流程是从CCHs基因的碱基排列顺序出发 C.从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则完全一致 D.过程3中碱基互补配对的方式有A—T、T—A、G—C、C—G 答案：A 解析：由于密码子具有简并性，因此对CCHs进行合理设计可能得到多种基因序列，但均可表达出相同的蛋白质；蛋白质工程设计流程是从预期的蛋白质功能出发；由图可知，蛋白质工程的基本途径与中心法则相反；过程3是翻译过程，碱基互补配对的方式有A—U、U—A、G—C、C—G。 6.（2026·甘肃兰州模拟）基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等多方面的应用发展迅速。下图表示利用基因工程技术生产人血清白蛋白的两条途径。下列叙述错误的是（　　） A.扩增目的基因时，利用耐高温的DNA聚合酶从引物a、b的3′端进行子链合成 B.目的基因要与能在绵羊乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子等调控元件重组在一起 C.若目的基因是从人的细胞内提取mRNA经逆转录形成的，则该目的基因中不含启动子序列 D.可以利用农杆菌转化法将含有目的基因的重组质粒直接整合到受体植物细胞的染色体DNA上 答案：D 解析：mRNA是由基因启动子后面的碱基序列编码而来的，若某基因是从人的细胞内提取mRNA经逆转录形成的，则该基因中不含启动子序列；农杆菌中的Ti质粒上的T－DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上，根据农杆菌的这一特点，将目的基因插入Ti质粒的T－DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到受体植物细胞的染色体DNA上。 二、综合提升练 7.（2025·云南卷，21）我国研究人员发明了生产维生素C的两步发酵法，流程如图甲。为了减少氧化葡糖杆菌竞争性消耗山梨糖，需要进行灭菌以结束第一步发酵。 在两步发酵法的基础上，我国研究人员进一步尝试用三菌混菌体系建立一步发酵法。在氧化葡糖杆菌（原始菌MCS）中利用基因工程技术导入大肠杆菌基因ccdB，得到工程菌IR3C。MCS和IR3C单菌培养时，活菌数变化曲线如图乙，MCS、IR3C分别与普通生酮基古龙酸菌和巨大芽孢杆菌进行三菌混菌发酵时，产物含量变化曲线如图丙。 回答下列问题。 （1）要使基因ccdB在IR3C中稳定遗传、表达并发挥作用，构建的基因表达载体除启动子外，还必须有　 。  （2）绘制图乙需统计活菌数，常用方法是　　　　　　　　　　　　　。当活菌达到一定数量时，基因ccdB编码的蛋白质开始发挥作用，推测该蛋白质的作用是　 ，  开始发挥作用的时间是　　　　　　，判断理由是　 。  （3）基于图丙，利用IR3C三菌混菌发酵的产量　　　　（填“高于”或“低于”）MCS三菌混菌发酵的产量，其原因是　 。  答案：（1）标记基因、目的基因、终止子、复制原点 （2）稀释涂布平板法　抑制细菌增殖　15 h　在15 h时，IR3C数量开始下降，而MCS数量还在上升 （3）高于　ccdB基因编码的蛋白质抑制了工程菌IR3C的增殖，减少了其对山梨糖的竞争性消耗，从而使更多山梨糖被用于合成维生素C 解析：（1）基因工程中构建的基因表达载体，除启动子外，还要有标记基因、目的基因、终止子、复制原点等。 （2）统计活菌数目常用稀释涂布平板法，从图乙看出，随着时间推移，种群数量不断增加，在15 h后，IR3C数量开始下降，而MCS数量仍在上升，所以推测转入的基因ccdB编码的蛋白质能抑制细菌增殖或诱导细菌凋亡，发挥作用的时间大约在15 h。 （3）由图丙可知，IR3C三菌混菌发酵产生的2－酮－L－古龙酸含量比MCS三菌混菌发酵产量高，因此可以推测，IR3C三菌混菌发酵的维生素C产量更高，可能的原因是ccdB基因编码的蛋白质抑制了工程菌IR3C的增殖，减少了其对山梨糖的竞争性消耗，从而使更多山梨糖被用于合成维生素C。 8.将天然Ti质粒改造成含有Vir基因的辅助质粒（辅助T－DNA转移）和不含有Vir基因、含有T－DNA的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能力，进行如下操作。回答下列问题。 注：F1～F3，R1～R3表示引物；T－DNA－LB表示左边界；T－DNA－RB表示右边界；Ori表示复制原点；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。 （1）从苏云金杆菌提取DNA时，需加入蛋白酶，其作用是　　　　　　　　　　　　　　。提取过程中加入体积分数为95%的预冷酒精，其目的是　　　　　　　　　　。  （2）本操作中获取目的基因的方法是　　　　　　　　和　　　　　　　　　。  （3）穿梭质粒中p35s为启动子，其作用是　　　　　　　　　　　　　　，驱动目的基因转录；插入两个p35s启动子，其目的可能是　  　。  （4）根据图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位置，用　　　　基因对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。  （5）为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行PCR，应选用的引物是　　　　和　　　　。  （6）本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是　　　　。  A.通过含有双质粒的农杆菌转化棉花细胞 B.将苏云金杆菌Bt基因导入棉花细胞中表达 C.将1－1 362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列 D.用1－1 362合成基因序列和1 363－1 848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白 答案：（1）水解蛋白质　析出DNA （2）PCR　人工合成 （3）RNA聚合酶识别并结合的部位　利于RNA聚合酶的结合，提高目的基因的转录效率 （4）HygBR　（5）F3　R2　（6）D 解析：（1）从苏云金杆菌提取DNA时，需加入蛋白酶，其作用是水解DNA酶等蛋白质，防止DNA被分解，也使得DNA容易与蛋白质分离。提取过程中加入体积分数为95%的预冷酒精，其目的是溶解蛋白质等物质，析出不溶于酒精的DNA。 （2）本操作中获取目的基因的方法是PCR技术扩增（天然序列部分）和人工合成。 （3）穿梭质粒中p35s为启动子，其作用是RNA聚合酶识别并结合的部位，驱动目的基因转录；插入两个p35s启动子，利于RNA聚合酶的结合，增加目的基因的转录效率。 （4）结合基因表达载体的示意图，图中穿梭质粒上有KanR和HygBR两个标记基因，但KanR位于T－DNA序列外，可用HygBR基因对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。 （5）为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行PCR，应选用的引物是F3和R2。 （6）蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。本研究用1－1 362合成基因序列和1 363－1 848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白，属于蛋白质工程，将1－1 362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列，未产生新的蛋白质，不属于蛋白质工程。 9.（2026·四川宜宾模拟）人的血清白蛋白在临床上需求量很大。将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，就可以利用牛的乳腺细胞生产人血清白蛋白。如图是利用奶牛乳腺生产人血清白蛋白的图解。下列相关说法错误的是（　　） A.作为乳腺生物反应器的奶牛B体内几乎所有细胞中都含有血清白蛋白基因 B.将②导入③之前要将目的基因与乳腺蛋白基因的启动子等结合构建表达载体 C.在④中检测到人血清白蛋白基因，说明目的基因在受体细胞中完成了表达 D.此过程涉及的现代生物技术有核移植技术、动物细胞培养技术、转基因技术等 答案：C 解析：经过转基因技术和核移植技术之后，重组细胞中含有血清白蛋白基因，由该细胞经过有丝分裂、分化得来的细胞都含有血清白蛋白基因，因此，作为乳腺生物反应器的奶牛B体内几乎所有细胞中都含有血清白蛋白基因；将②导入③之前要将目的基因与乳腺蛋白基因的启动子等结合构建表达载体，目的是让目的基因在乳腺细胞中特异性表达；在④中检测到人血清白蛋白基因，说明目的基因成功导入受体细胞，不能说明目的基因在受体细胞中完成了表达；此过程涉及的现代生物技术有核移植技术、动物细胞培养技术、转基因技术等。 10.（2025·河南卷，21）卡拉胶是一类源于海洋红藻的大分子多糖，可被某些细菌降解为具有多种应用前景的卡拉胶寡糖。某研究小组拟筛选具有高活性卡拉胶酶（CG）的菌种用于生产卡拉胶寡糖。回答下列问题。 （1）选择海藻和海泥作为样本筛选卡拉胶降解菌的原因是  　。  将培养后的菌液混匀并充分　　　　，再接种至微孔板中，经培养和筛选获得了CG活性最高的菌种。  （2）为构建携带cg（CG的编码基因）的大肠杆菌表达载体（图1），对cg的PCR扩增产物和质粒进行双酶切，随后用E.coli DNA连接酶连接。为保证连接准确性和效率，cg转录模板链的5′端最好含有　　　　酶切位点。另有两组同学选用了各不相同的双酶切组合和T4 DNA连接酶重复上述实验，获得的部分重组质粒分子大小符合预期，但均无法使用各自构建表达载体的双酶切组合进行切割，其原因是　  　。  限制酶的识别序列和切割位点如下： （3）为将构建好的表达载体转入大肠杆菌，需要先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，目的是  　，随后在含　　　　和　　　　的培养基中培养一段时间后，根据菌落周围有无水解透明圈筛选目的菌株。  （4）已知空间上邻近的两个半胱氨酸易形成二硫键，从而提升蛋白质的耐热性。为提高CG的耐热性，研究人员分析了五个氨基酸位点的空间距离和保守度（保守度值越大表明该位点对酶的功能越关键），如图2所示。根据分析结果，选择第　　位的氨基酸替换成半胱氨酸最合适，原因是　  　。  答案：（1）在富含卡拉胶的环境中，存在能够分解卡拉胶的微生物的可能性大　稀释 （2）BamHⅠ　重组质粒连接处的序列不再是原来的限制酶识别序列 （3）使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态　卡拉胶　四环素 （4）44　该位点的氨基酸空间上离半胱氨酸更近，容易形成二硫键，而且保守度低，替换后对酶功能的影响较小 解析：（2）E.coli DNA连接酶连接平末端的效率很低，因此切割质粒和目的基因时不能选择切成平末端的限制酶，即不能选择EcoRⅤ和SmaⅠ，而SpeⅠ与XbaⅠ切割后的黏性末端相同，若选择SpeⅠ与XbaⅠ切割，会导致质粒和目的基因出现自身环化或反向连接，因此切割质粒时SpeⅠ与XbaⅠ中只能选择一个，而另一个限制酶需要选择BamHⅠ，又由于转录的方向是由启动子→终止子，且mRNA合成的方向是5′→3′，因此基因模板链的3′端应靠近启动子，5′端靠近终止子，故为保证连接的准确性和效率，cg转录模板链的5′端最好含有BamHⅠ酶切位点。限制酶的识别序列具有专一性，若连接后的序列不存在最初限制酶的识别序列，则可能导致重组质粒无法使用各自构建表达载体的双酶切组合进行切割。 （3）为将构建好的表达载体转入大肠杆菌，需要先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，目的是使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，便于重组DNA进入受体细胞。含有重组质粒的大肠杆菌可分泌高活性卡拉胶酶（CG），可分解卡拉胶，使其菌落周围形成透明圈，且重组质粒上含有四环素抗性基因，因此将转化后的大肠杆菌接种在含卡拉胶和四环素的培养基中培养一段时间后，根据菌落周围有无水解透明圈筛选目的菌株。 （4）据图2可知，虚线长度代表氨基酸间的空间距离，由于第44位点的氨基酸空间上离半胱氨酸更近，容易形成二硫键，而且保守度低，替换后对酶功能的影响较小，因此选择第44位的氨基酸替换成半胱氨酸最合适。 高三生物学同步训练 第1页（共1页） 学科网（北京）股份有限公司 $