2027届高三生物一轮复习课件 微生物的培养技术及其应用

该高中生物学高考复习课件聚焦“微生物的培养技术及应用”专题，依据高考评价体系梳理了培养基、无菌技术、纯培养、选择培养及微生物计数五大核心考点，通过考点权重分析明确无菌技术和纯培养为高频考点，归纳出选择题和实验题等常考题型，构建了系统的备考知识框架。 课件亮点在于“真题解析+实验突破+素养提升”的复习策略，如结合21年山东高考题分析半固体培养基的应用，通过对比消毒与灭菌方法、解析稀释涂布平板法计数公式培养科学思维和探究实践素养。特设易错点警示（如培养基营养浓度误区）和实验步骤模板，助力学生掌握答题技巧，教师可据此精准复习，提升备考效率。

温故知新： 酸奶 第四届花生 课标内容要求 核心素养对接 1、阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提 2、 阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术 1.科学思维:根据微生物的代谢类型分析培养基组成。 2.科学探究:讨论并掌握无菌技术的实验操作方法;讨论并掌握微生物的纯培养的方法。 第四届花生 自制酸奶导致肠胃不适 葡萄酒、酸菜等变质 从社会中来： 思考2：怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？ 思考1：失败的原因是什么？ 主要原因是在制作过程中有杂菌混入。 应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。 第四届花生 第1章 发酵工程 第2节 微生物的培养技术及应用 第四届花生 总体概述： 1.研究和应用微生物的前提（发酵工程的重要基础）是：____________________________________。 2.微生物：______________的微小生物统称，包括____、____、____及一些原生生物。 难以用肉眼观察 细菌 真菌 病毒 防止杂菌污染、获得纯净的微生物培养物 ①提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件 ②确保其他微生物无法混入 ③并将需要的微生物分离出来 无菌技术 培养基 纯培养 3.在实验室培养微生物有哪些要求： 第四届花生 第四届花生 第四届花生 1.培养基： （1）概念： （2）作用： （3）分类： （4）营养成分： 2.无菌技术： 3.微生物的纯培养： 一、微生物的基本培养技术：（P9—11） 第四届花生 1.培养基： （1）概念：人们按照______对________的不同需求，配制出供其________的营养基质。 （2）作用：用以______________________微生物或____________。 （3）分类： 微生物 营养物质 生长繁殖 积累其代谢物 培养、分离、鉴定、保存 液体培养基 固体培养基 加凝固剂，如琼脂 （扩大培养、工业生产） （分离、鉴定、计数、保存菌种） 红藻中提取的多糖 第四届花生 1.培养基： （4）营养成分：一般都含有____________________等营养物质。 水、碳源、氮源、无机盐 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 氮源、碳源和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000mL 水 ①液体培养基，无凝固剂（琼脂）。 ②有机碳源作用：提供碳源、能源等；氮源：参与合成蛋白质、核酸等。 第四届花生 水：①良好的溶剂；②维持生物大分子结构的稳定 无机盐：①提供无机营养；②调节pH；③维持渗透压 碳源：①主要用于合成微生物体内各种有机物；②对于异养微生物有机碳既是碳源又是能源 氮源：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 微生物 碳源 氮源 能源 同化作用类型 蓝细菌 硝化细菌 根瘤菌 大肠杆菌 思考与讨论： 光能自养 化能自养 异养、固氮菌 异养 CO2 NH4＋、NO3-等 光能 CO2 NH3 NH3氧化的化学能 糖类等有机物 N2 有机物中的化学能 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质、NH4＋、 NO3-等 有机物中的化学能 ③自养型生物可以不加碳源、固氮微生物可以不加氮源。 ④无机物也可提供能源，如__________________。 ⑤多数含C、H、O、N的有机物是异养微生物的__________________。 硝化细菌利用的NH3 碳源、氮源、能源 第四届花生 随堂巩固： 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL ①液体培养基、异养微生物（无有机碳源）。 若除去①，此培养基能用来培养固氮菌吗？理由是？ 不能，固氮菌为异养型生物，培养基中必须提供有机碳源。 第四届花生 1.培养基： （4）营养成分：一般都含有____________________等营养物质。 ⑥还需满足微生物生长对_____________________的需求。eg：乳酸杆菌（ ）、霉菌（PH____）、细菌（PH____或______）、厌氧微生物（无氧条件）。 水、碳源、氮源、无机盐 pH、特殊营养物质、O2 维生素 酸性 中性 微碱性 热泉 冰川 油田 落叶 思考：我们如何得到想要的菌种？ 第四届花生 除上述营养物质外，培养基是否还需要其他物质呢？ 维生素可以提高这些酶的活性，至少提高50%以上，从而增强乳酸杆菌的代谢能力。如某些维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。酵母浸粉、牛肉浸膏或植物组织提取液等天然物质中含有不同的生长因子。特殊营养物质：主要指生长因子(微生物生长所必须的、微量的、自身不能合成或合成很少的有机物) 种类：维生素、氨基酸、碱基、嘌呤、嘧啶、胺类等 来源：酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等 【过渡到选择培养基】自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢？思考：那么，如何从众多的微生物中筛选出单一菌种？ 拓展了解： 青霉菌 酵母菌 例.（21年山东20题）含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，分别将两种菌穿刺接种在含硫酸亚铁铵的半固体培养基上进行培养，假设两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（　　） A.乙菌的运动能力比甲菌强 B.为不影响菌的运动需选用液体培养基 C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.穿刺接种的核心是防止杂菌污染 半固体 B 第四届花生 2.无菌技术：（P10—P11） （1）目的： （2）主要内容及其区别： （3）具体措施： （4）常用的消毒方法： （5）常用的灭菌方法： 第四届花生 2.无菌技术：（P10—P11） （1）目的： （2）主要内容及其区别： ①____：指使用________的____、____或____等方法杀死物体表面或内部____微生物。 ②____：指使用____的________杀死物体内外的____微生物（包括____和____）。 ①防止培养物被污染； ②防止感染操作者自身。 消毒 灭菌 较为温和 物理 化学 生物 部分 强烈 理化因素 所有 芽孢 孢子 休眠体 繁殖体 (获得纯净培养物的关键) 第四届花生 2.无菌技术： （3）具体措施： ①对操作的____、操作者的____和__，进行清洁和____； ②将用于微生物培养的____、________和______等进行____； ③避免已经灭菌处理的材料用具与__________相接触； ④为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在__________上并在______________进行。 接种环 涂布器 空间 衣着 手 消毒 接种工具 培养基 灭菌 器皿 酒精灯火焰附近 周围的物品 超净工作台 第四届花生 判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。 ①豆浆 ②游泳池 ③超净工作台 ④玻棒、试管、吸管、锥形瓶 ⑤培养细菌用的培养皿 ⑥牛肉膏蛋白胨培养基 ⑦接种环、接种针 ⑧实验操作者的双手 煮沸消毒法 化学药物消毒法 紫外线消毒法 干热灭菌 干热灭菌 湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法） 灼烧灭菌 化学药物消毒法 第四届花生 （4）常用的消毒方法： ①煮沸消毒法： ②巴氏消毒法： ③化学药物消毒法： ④紫外线消毒法： 100℃煮5～6min，杀死营养细胞和一部分芽孢。 63～65℃、30min或 72～76℃、15min或80～85℃、10～15S 可杀死绝大部分微生物且不破坏食物的营养成分，如牛奶。 酒精擦拭双手、用氯气消毒水源 接种室、接种箱或超净工作台30min，以杀死物体表面或空气中的微生物。 （苯酚或煤酚皂溶液） ⑤生物消毒法： 利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。 如：微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，净化污水、污泥。 第四届花生 2.无菌技术：（P10—P11） （5）常用的灭菌方法： ③灼烧灭菌： ②干热灭菌： ①湿热灭菌： 高压蒸汽灭菌锅 干热灭菌箱 利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。 100kPa、121 ℃下，15～30min 培养基、金属用具、玻璃用具？ 如：培养基 在160〜170℃的热空气中维持1〜2 h。 耐高温、保持干燥的物品，如玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具等。 在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧。 可迅速灭菌，如：接种工具（涂布器、接种环、接种针或其他金属用具）；接种过程：试管口、瓶口等。 第四届花生 判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。 ①豆浆 ②游泳池 ③超净工作台 ④玻棒、试管、吸管、锥形瓶 ⑤培养细菌用的培养皿 ⑥牛肉膏蛋白胨培养基 ⑦接种环、接种针 ⑧实验操作者的双手 煮沸消毒法 化学药物消毒法 紫外线消毒法 干热灭菌 干热灭菌 湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法） 灼烧灭菌 化学药物消毒法 第四届花生 3.微生物的纯培养： （1）相关概念： ①培养物：在微生物学中，将接种于______内，在合适条件下形成的含______________的群体。 ②纯培养物：由____________所获得的微生物群体， ③纯培养：获得________的过程。 （2）纯培养的步骤： 纯培养物 培养基 特定种类微生物 单一个体繁殖 配制培养基 灭菌 接种、分离 培养等 如：单菌落 倒平板 第四届花生 1.实验原理： （1）菌落： （2）接种方法： 2.目的要求： 3.材料用具： 4.方法步骤——制备培养基： 5.方法步骤——接种、分离： 6.方法步骤——培养： 7.结果分析与评价： 二、实验——酵母菌的纯培养：（P12—13） 酵母菌 第四届花生 1.实验原理： （1）菌落：____的微生物在适宜的____培养基表面或内部可以____形成肉眼可见的、有一定形态结构的__________。 （2）接种方法： 分散 固体 繁殖 子细胞群体 不同微生物形成的菌落大小、颜色、形状等不同→鉴定菌种。 平板划线法、稀释涂布平板法 根霉 曲霉 青霉 酵母菌 酵母菌培养液 获得单个微生物繁殖形成的单菌落。 第四届花生 2.目的要求： （1）学会配制培养酵母菌的培养基并______。 （2）学会进行无菌操作。 （3）尝试通过________操作来获得纯化的酵母菌菌落。 3.材料用具： 倒平板 平板划线 酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸（或报纸）、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。 第四届花生 4.方法步骤——制备培养基： （1）配置培养基： （2）灭菌： （3）倒平板： 称取→煮沸→过滤→加葡萄糖、琼脂→蒸馏水定容 培养基：高压蒸汽灭菌， 培养皿：干热灭菌。 100 kPa、121℃，15〜30 min 160〜170 ℃灭菌2h 倒平板 第四届花生 4.方法步骤——制备培养基： （3）倒平板： ①待培养基冷却至50℃左右时： 原因：温度过高烫手不易操作，过低琼脂易凝固。 ②在酒精灯火焰附近倒平板： 估计方法：用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时为准。 灼烧灭菌 打开一条稍大于瓶口的缝隙、立即 冷却凝固后倒置 形成无菌环境、防止杂菌污染 第四届花生 （3）倒平板： ③平板冷凝后，倒置： 防止培养基表面的水分过度挥发； 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 ④将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位： 导致空气中的微生物滋生，只能重新制备。 ⑤如何验证制备是否合格（无杂菌污染）： 将未接种的培养基放在恒温箱培养中1-2d，观察是否有菌落生成。 ⑥先调PH再灭菌：防止调PH过程中引起杂菌污染。 第四届花生 5.方法步骤——接种、分离： （1）原理：通过______在固体培养基表面________的操作，将__ ____________________到培养基的表面；经数次划线后培养，可以分离得到______。 （2）步骤： （3）注意事项： 平板划线法 接种环 接种环 连续划线 单菌落 聚 集的菌种逐步稀释分散 酵母菌培养液（母液） 单菌落 灼烧接种环 冷却、拔塞 灼烧试管口 蘸取菌液 灼烧试管口、塞塞子 划线 灼烧接种环、重复划线 第四届花生 ①防止杂菌污染的措施？ ②灼烧接种环的目的一样吗？画5个区域灼烧次数？蘸取菌液次数？ ③在培养基表面迅速划线时，不能划破培养基： 关于平板划线法的几点思考： 灼烧灭菌、一条缝、操作迅速、酒精灯火焰附近操作等。 蘸取菌液前：杀死接种环上原有微生物，避免杂菌污染。 划线前：杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线 的末端→使菌种随着划线次数的增加逐渐减少→最终得到由单个微 生物繁殖而来的单菌落。 划线结束后：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 灼烧次数=n+1；只蘸取1次菌液。 划线不均匀，难以得到单菌落；菌落会沿着划破处生长，不利于观察菌落形态。 第四届花生 7.结果分析与评价： 6.方法步骤——培养： 制备培养基 接种、分离 培养 恒温培养箱 倒置 实验组：接种 对照组：未接种 实验组：菌落颜色、形状、大小几乎一致； 对照组：无菌落生成→培养基制备合格。 28℃、24～48h 第四届花生 （1）倒平板操作中，等待平板冷却凝固后，要将平板倒置。( ) （2）平板划线操作中，划完一个区域后要将接种环灼烧，再划下一个区域。( ) （3）平板划线法接种时，每一次划线前都要蘸取菌种。( ) （4）需要将一个不接种的培养基放在相同的条件下培养，以检验培养基的灭菌是否合格。( ) （5）倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿。 （ ） （6）检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温箱中培养。 （ ） √ √ × √ 【基础过关】 × √ 第四届花生 酵母菌的纯培养 2.接种和分离酵母菌 1.制备培养基 3.培养酵母菌 ①配制培养基 ②灭菌 ③倒平板（在酒精灯火焰附近操作） 培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅） 培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅） 用接种环在固体培养基上用平板划线法接种 平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱培养 【课堂小结】 第四届花生 P14：思维训练——评估论点的可信程度 水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、 切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水，密封，置于阴凉处发酵一至两周。 有人说，吃水果“酵素”可以美容、减 肥、促进消化和提高免疫力。 “酵素”，是“酶”的另一种说法。 “酵素”制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。 “酵素”中可能有糖类(包括一些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质； 其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。 因此，吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力的论点是值得怀疑的。 第四届花生 水果“酵素”的本质：水果中的糖分在微生物（如酵母菌等）作用下进行发酵，会产生一些有机酸、醇类、酯类等物质，同时可能有一些水果中的酶以及微生物产生的酶等成分。 美容：水果“酵素”中的一些抗氧化物质如维生素C等可能对皮肤有一定益处，但声称其有特殊的美容功效证据不足。且自制“酵素”如果受到杂菌污染等，可能存在安全隐患，反而不利于健康和美容。 减肥：水果“酵素”中可能含有一些促进肠道蠕动的成分，但单纯依靠它来减肥并不科学。如果摄入过多，其中的糖分等还可能导致热量超标，不利于减肥。 促进消化：水果“酵素”中的有机酸和酶等成分，理论上可能有助于促进消化液分泌等，对消化有一定帮助，但作用有限，不能夸大其功效。 提高免疫力：目前没有足够的科学依据表明水果“酵素”能显著提高免疫力。人体免疫力是一个复杂的系统，受多种因素影响，仅靠吃水果“酵素”难以达到明显提升免疫力的效果。 总体而言，水果“酵素”可能有一定的营养价值，但宣称其具有神奇的美容、减肥、促进消化和提高免疫力等功效是缺乏科学依据的，不能将其作为改善健康的主要手段，且自制水果“酵素”要注意卫生和安全，避免受到污染而引发健康问题。 第四届花生 练习与应用 一、概念检测 1.判断下列相关表述是否正确。 （1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（ ） （2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。 （ ） （3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（ ） × √ × ①干制：降低食品的含水量； ②腌制：食盐、糖等制造高渗环境，抑制微生物的生长和繁殖； ③低温储存：降低微生物的代谢速率从而抑制微生物的生长和繁殖。 2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物 生长的？ 第四届花生 1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请回答： （1）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有________________。 （2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于哪一步操作？ （3）洗手后我们就能进行无菌操作了吗？ 操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？ 培养皿和培养基 接种 洗手后手上还有一些微生物 通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。 二、拓展应用 第四届花生 2.将野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min， 230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如图。请分析： （1）摇床转速不同，意味着培养条件有什么不同？ 培养液中02含量不同。 （2）图中数据你可以得出什么结论?原因是什么? 培养液中02含量越高，酵母菌种群密度越大。 （3）为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定? 这时候已经达到了环境容纳量。 二、拓展应用 第四届花生 如何从自然界中分离出需要的特定微生物？ 现实：自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法很难实现。该怎么办？ 纯培养 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 恒温培养 纯培养物 由单一个体繁殖所获得的微生物群体。 温故知新： 第四届花生 资料分析：聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶（70-80℃）。 美国黄石公园 科学史——耐高温的DNA聚合酶的寻找 思考1：筛选耐高温的酶的思路是什么样的？ 耐高温的酶 耐高温生物 高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 思考2：为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？ 水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 适应 思考3：有什么启示？ 第四届花生 1.选择培养基： （1）原理： （2）概念： （3）实例： （4）如何证明有选择作用： 2.微生物的选择培养和计数： 三、微生物的选择培养和计数：（P16—19） 美国黄石公园 第四届花生 1.选择培养基： （1）原理：人为提供________________的条件（包括____、____和___等），同时__________________________。 （2）概念：在微生物学中，将________________________，同时_____________________________的培养基。 （3）实例： 有利于目的菌生长 营养 温度 PH 抑制或阻止其他微生物的生长 允许特定种类的微生物生长 抑制或阻止其他种类微生物生长 尿素［CO(NH2)2］ CO(NH2)2 脲酶 CO2 + 2NH3 + H2O 思考1：培养基的成分？选择培养基的区别？ 水、碳源、氮源、无机盐 第四届花生 15.0g 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 琼脂 H2O 定容至1000mL 1.选择培养基： （3）实例： 尿素［CO(NH2)2］ CO(NH2)2 脲酶 CO2 + 2NH3 + H2O 尿素分解菌的筛选 该培养基以尿素为唯一的氮源，能合成脲酶的微生物可分解尿素获得氮源并生长繁殖，缺乏脲酶的微生物无法分解尿素、缺少氮源而受抑制。 拓展了解：芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 第四届花生 1.选择培养基： （3）实例： ①____________：纤维素为唯一碳源或不加碳源或不加氮源 _______________、____________、__________。 ②______________________：加入高浓度食盐或青霉素的：______________、___________________。 ③____________：高温、无氧、PH： 固氮微生物 纤维素分解细菌 自养型微生物 酵母菌、霉菌等真菌 金黄色葡萄球菌 改变营养成分 加入某种特殊的化学物质 改变培养条件 思考2：如何证明选择培养基具有选择作用？ 第四届花生 1.选择培养基： （4）如何证明有选择作用： 对照组 牛肉膏蛋白胨培养基 选择培养基 实验组 选择培养基菌落数明显少于全营养培养基，且菌落形状、大小、颜色等特征几乎一致； 对照组 选择培养基 空白选择培养基无菌落生长。 有些微生物能够利用其他微生物的代谢产物生长繁殖→选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物。 第四届花生 知识拓展——鉴别培养基：P20 资料分析：刚果红是一 种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。 思考1：“文字+箭头形式”表示实验原理。 思考2：降解能力强弱？ 思考3：去什么环境中寻找纤维素分解菌？ 思考4：滤纸埋入图中？ 思考5：从土壤中分离的实验方案？ 第四届花生 知识拓展——鉴别培养基：P20 资料分析：刚果红是一 种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 ①土壤取样→②制备培养基→③样品梯度稀释→④涂布平板→⑤微生物的培养与观察→⑥挑选产生透明圈的菌落 第四届花生 知识拓展——鉴别培养基：P20 CO(NH2)2 脲酶 CO2 + 2NH3 + H2O 酚红：尿素分解菌 刚果红：纤维素分解菌 淀粉培养基 念珠菌群显色培养基 伊红—美蓝：大肠杆菌 第四届花生 2.微生物的选择培养和计数： 三、微生物的选择培养和计数：（P16—19） 思考：怎样知道1g 土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 尿素［CO(NH2)2］ 选择培养： 接种、分离： 平板划线法 稀释涂布平板法 计 数： 获得能分解尿素的细菌的培养物。 第四届花生 仅通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？ 由于土壤细菌的数量庞大，要想对分解尿素的细菌进行计数，必须要对土壤进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上。 2.微生物的选择培养和计数——稀释涂布平板法： （1）步骤： 土壤取样→等比稀释→涂布平板→培养观察 土壤取样 等比稀释 涂布平板 灼烧灭菌 第四届花生 2.微生物的选择培养和计数——稀释涂布平板法： （1）步骤： 土壤取样 资料1：细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3 ~ 8 cm 的土壤层。 ①土壤取样要求：仪器提前灭菌、铲去表层土、pH≥7的土壤环境。 第四届花生 1 2 3 4 5 6 2.微生物的选择培养和计数——稀释涂布平板法： （1）步骤： 等比稀释 10g土样 90mL无菌水 1×10 1ml 9mL无菌水 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 ②5g土样稀释10倍？为什么要稀释？为什么要等比稀释？ 第四届花生 2.微生物的选择培养和计数——稀释涂布平板法： （1）步骤： 涂布平板 稀释后的菌液 涂布器：灼烧灭菌 0.1ml ③酒精滴尽再烧、燃尽冷却。 ④菌液不超过0.1ml：过多会在培养基表面形成积液，导致菌体堆积，影响分离效果。 ⑤涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 ⑥除取样外，其余操作均在酒精灯火焰附近进行。 选择培养基 第四届花生 0.1 mL 0.1 mL 0.1 mL 思考：是否每个稀释度都涂、一个稀释度涂几个？还需设置其他对照吗？ 一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。 3个选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 空白选择培养基 第四届花生 2.微生物的选择培养和计数——稀释涂布平板法： （1）步骤： 培养观察 ①培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板____，放入—_________的恒温培养箱中培养_____。 ②观察：每隔____统计一次菌落数目，选取______________的记录作为结果。 ③记录： 30～37℃ 倒置 1～2d 24h 菌落数目稳定时 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目。 一般来说， 在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征（如形状、大小和颜色等）。 第四届花生 2.微生物的选择培养和计数——稀释涂布平板法： （2）作用： 用于分离微生物、统计样品中活菌的数目。 212218215 思考：分离、计数的原理？每克样品中大概有多少菌株？ 第四届花生 1.活菌计数法： （1）原理：当样品的____________时，培养基表面生长的______ ____，来源于样品稀释液中的________；通过统计平板上的_____ __，就能推测出样品中大约含有多少____。 （2）注意事项： 2.显微镜直接计数法： 四、微生物的数量测定：（P18） 稀释度足够高 菌落 一个活菌 数 活菌 一个单 菌落 稀释涂布平板法 第四届花生 1.活菌计数法——稀释涂布平板法： （2）注意事项： ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在_______的平板上进行计数。 ②样品的______将直接影响平板上的菌落数目。 ③同一稀释度的平板至少涂布__个，培养计算出菌落______。若统计的数据间差距较大，则应________。 ④统计的菌落数往往比活菌的实际数目___。这是因_____________ _______________,___________________________。 ⑤结果一般用______而不是用______来表示。 30～300 3 平均数 重新操作 低 细胞连在一起时 平板上观察到的只是一个菌落 菌落数 活菌数 当两个或多个 稀释度 第四届花生 1.活菌计数法——稀释涂布平板法： 2.显微镜直接计数法： （1）特点： （2）原理：利用特定的__________或____________， 在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 四、微生物的数量测定：（P18） 常用的、快速直观、死活一起计。 细菌计数板 血细胞计数板 第四届花生 推算方法： （1）1个大方格=___个中方格=____个小方格； 体积=______________。 （2）若小方格酵母菌平均数为A、稀释倍数为B， 则1mL=______________。 A1 A2 A3 A4 A5 25 400 0.1mm3=10-4mL 400A×B×104个 第四届花生 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 接种工具 单菌落的获得 用途 效果图 相同点 连续划线 梯度稀释→涂布平板 接种环 涂布器 从最后划线区挑取 稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落 分离纯化菌种， 获得单菌落 ①分离纯化菌种，获得单菌落 ②用于计数 ①都能分离纯化菌种；②都在固体培养基上进行 平板划线法和稀释涂布平板法的比较 第四届花生 一、概念检测 1. （1）√ （2）√ （3）√ 2. D 二、拓展应用 1. 反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此从中分离能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。 练习与应用 第四届花生 连续划线法 分区划线法 1 2 3 4 5 第四届花生 空白对照 稀释104倍 稀释105倍 稀释106倍 第四届花生 科技探索之路：（P2—3） 第四届花生 第四届花生 第四届花生 酵母菌的纯培养（视频） 第四届花生 第四届花生 念珠菌显色培养基 大肠杆菌培养基 酵母菌培养基 金黄色葡萄球菌和 枯草杆菌培养基 样品 样品悬液 梯度稀释 涂布 第四届花生 超净工作台 第四届花生 培养皿灭菌桶 第四届花生 Lavf57.83.100 Lavf57.83.100 Lavf58.51.100 Lavf58.51.100 Lavf58.29.100 Bilibili VXCode Swarm Transcoder v1.0.5 Lavf58.51.100 $