第十八章 第二节 微生物的培养技术及应用-【创新教程】2022-2026五年高考生物真题分类特训

最新真题分类特训·生物学 第二节 微生物 1.（2026·山东卷，15,2分)某酱厂制作甜面酱 的流程为：选料→蒸料→接种→制曲→恒温发 酵→蒸煮→灌装。除米曲霉外，酵母菌、乳酸 菌等多种微生物也参与发酵过程。下列说法 错误的是 () A.制曲应在有氧条件下进行，以便于发酵过 程所用微生物均迅速增殖 B.恒温发酵过程中，pH和溶解氧的改变会影 响微生物代谢物的形成 C.蒸煮具有终止发酵和延长产品保存期的 作用 D.酵母菌和乳酸菌在参与发酵的过程中存在 竞争 2.(不定项)(2026·山东卷，20,3分)刚果红与 纤维素可形成红色复合物。在含刚果红和纤 维素的培养基中培养细菌时，细菌产生的纤维 素酶将纤维素分解，使菌落周围形成透明圈。 为获得分解纤维素能力强的菌株，将筛选到的 菌株a进行诱变处理得到菌株b、c、d。在相同 且适宜的条件下培养，选取大小相近的菌落进 行统计，相关数据如表所示。下列说法正确 的是 ( 菌株 a b d 菌落直径与透明 0.50.30.50.7 圈直径的比值 A.筛选菌株a所用培养基应以纤维素为唯一 碳源 B.将菌液接种到培养基进行菌株筛选时必须 使用平板划线法 C.从表中数据可得出，菌株c的纤维素酶合成 基因未发生突变 D.在4种菌株中，菌株b分解纤维素的能力最 强 3.（2026·安徽卷，15,3分)某种营养缺陷型细 菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上 需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷 型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添 加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌 落)，再分别放入含低浓度和高浓度物质M的 滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如 图。下列叙述正确的是 ( 的培养技术及应用 含低浓度M的滤纸片 含高浓度M的滤纸片 菌落a 基本培养基 完全培养基 A.固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进 行灭菌 B.牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺 陷型细菌 C.物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋 白质时不需要组氨酸 D.物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多 数能在基本培养基上生长 4.(2026·河南卷，16,3分)自然界存在着甲、乙 两种降解PET塑料（含碳有机物）的细菌。为 筛选这两种细菌，并探究两种细菌的协同降解 效果，研究人员进行了相关实验。下列叙述错 误的是 A.为筛选出目的菌，培养基应以PET塑料为 唯一碳源 B.细菌纯培养时，需用涂布器蘸取单个菌落进 行涂布 C.利用显微镜直接计数，可估算出菌悬液中细 菌的总数 D.探究甲、乙降解效果的协同性，至少需设三 个实验组 5.(不定项)(2026·黑吉辽蒙卷，18,3分)某奶 酒以牛奶为主要原料，经微生物发酵酿制而 成。为提高发酵效率，需筛选具有乳糖利用率 高、乙醇产量高等特性的酵母菌菌株。下列叙 述正确的是 ) A.选择培养基应以葡萄糖为唯一碳源 B.选择培养基中可添加抗生素抑制细菌生长 C.制备固体培养基需先高压蒸汽灭菌再倒 平板 D.接种后的平板应在37℃恒温培养 6.(不定项)(2025·河北卷，18,3分)隐甲藻是 一种好氧的异养真核微藻，多在海水中腐烂的 植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA(一种 功能性脂肪酸)的藻类之一。从海洋中筛选获 得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生 产。下列叙述正确的是 38 A.隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的 碳源 B.采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到 固体培养基，以获得隐甲藻 C.选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生 素，以减少杂菌生长 D.适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可 增加溶氧量，以提高DHA产量 7.(2025·陕晋青宁卷，3,3分)我国是世界上最 大的柠檬酸生产国。利用黑曲霉通过深层通 气液体发酵技术生产柠檬酸，流程如图。下列 叙述错误的是 ( 淀粉水解糖→灭菌 选育 扩大 发酵罐 分离、提 →接种 菌种 培养 内发酵 纯产物 无菌空气 A.淀粉水解糖为发酵提供碳源和能源 B.扩大培养可提供足量的黑曲霉菌种 C.培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同 D.通气、搅拌有利于溶解氧增加和柠檬酸 积累 8.(2025·江苏卷，11,2分)从种植草莓的土壤 中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、 分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是 A.制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B.将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液 加入平板并涂布 C.连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D.鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上， 并在室温下长期保存 9.(2025·黑吉辽蒙卷，4,2分)科研人员通过稀 释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素 (C22H23ClN2O8)能力强的菌株，旨在解决金 霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列 叙述错误的是 A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获 得高耐受的菌株 1: 第十八章发酵工程 C.配制选择培养基时，需确保pH满足实验 要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 10.(2023·山东，15,2分)平板接种常用在微生 物培养中。下列说法正确的是 () A.不含氮源的平板不能用于微生物培养 B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出 合成脲酶的微生物 11.(2023·湖南，5,2分)食品保存有干制、腌 制、低温保存和高温处理等多种方法。下列 叙述错误的是 () A.干制降低食品的含水量，使微生物不易生 长和繁殖，食品保存时间延长 B.腌制通过添加食盐、糖等制造高渗环境，从 而抑制微生物的生长和繁殖 C.低温保存可抑制微生物的生命活动，温度 越低对食品保存越有利 D.高温处理可杀死食品中绝大部分微生物， 并可破坏食品中的酶类 12.(2023·广东，10,2分)研究者拟从堆肥中取 样并筛选能高效降解羽100 80 毛、蹄角等废弃物中角蛋 白的嗜热菌。根据堆肥温 40 20/a 度变化曲线（如图）和选择 00123456 堆肥时间（天） 培养基筛选原理来判断， 下列最可能筛选到目标菌的条件组合是( A.a点时取样、尿素氮源培养基 B.b点时取样、角蛋白氮源培养基 C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D.c点时取样、角蛋白氮源培养基 13.（2026·浙江1月卷，24,12分)农杆菌能侵 染真菌，介导真菌细胞的转基因。3-磷酸甘 油脱氢酶是假丝酵母中甘油合成代谢途径的 关键酶，将3-磷酸甘油脱氢酶基因(Gpd)构 建到表达载体上，如图1所示。通过农杆菌 介导法，转化假丝酵母野生型菌株，获得转 Gpd的重组菌株。野生型菌株与某重组菌株 分别进行发酵实验，生产甘油的结果如图2 所示。 39 最新真题分类特训·生物学 HindⅢ Gpd HindⅢ BamH I EcoR I Zeo EcoR I Kan 图1 ■一重组菌株 一◇一野生型菌株 0-0-0000- ◆ o 时间 图2 注：ZeoR是腐草霉素抗性基因，KanR是卡那 霉素抗性基因 回答下列问题： (1)表达载体导入农杆菌细胞：用CaCl2溶液 处理农杆菌，制备 再用电击法将表达载体导人农杆菌细胞，经 筛选获得阳性克隆。为验证阳性克隆是否为 转化成功的农杆菌，从繁殖后的菌株细胞中 提取质粒，经 限制酶酶切后电泳，若 出现4条DNA条带，则表明转化成功。 (2)假丝酵母重组菌株的获得：在 中 的酒精灯火焰旁，取野生型假丝酵母菌种，采 用 方法接种在固体培养基上培养， 适时挑选 再接种到液体培养基进行 培养。取适量的假丝酵母与农杆菌进行共培 养一段时间后，杀灭农杆菌，然后在含有 的选择培养基中筛选，最终获得重组 菌株。 (3)重组菌株生产甘油能力的分析：根据图2 可知，与野生型菌株相比，该重组菌株用于发 酵生产甘油的2个优点是 若某生长正常的重组菌株发酵液 中甘油的含量显著低于野生型菌株，从引起 变异的因素分析，可能的原因有：在培养过程 中重组菌株发生了突变，或 ,导致甘油合成代谢受阻。 14.(2023·全国乙，37,15分)某研究小组设计 了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实 验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆 放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌 T,培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆 (清水淋洗时菌T不会流失)，在装有淋洗液 的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发 酵)。实验流程如图所示。 浸润、接种菌T清水淋洗 粉碎的 秸秆 警培养 淋洗液 灭菌、接种酵母菌 培养、发酵乙醇 回答下列问题。 (1)在粉碎的秸秆中接种菌T,培养一段时间 后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分 解，其原因是 (2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗 液为原料制备培养基，培养基中还需要加入 氮源等营养成分，氮源的主要作用是 (答出1点即可)。通常，可采用高压蒸汽灭 菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时， 为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项 有 (答出2点即可)。 (3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧 瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖 的主要目的是 。 但是在酵母菌发酵过程中，还需适 时拧松瓶盖，原因是 发酵液中的乙醇可 用 溶液检测。 (4)本实验收集的淋洗液中的 可以 作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原 料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方 式的优点是 15.(2023·新课标，35(1)，2分)根瘤菌与豆科植 物之间是互利共生关系，根瘤菌侵入豆科植物 根内可引起根瘤的形成，根瘤中的根瘤菌具有 固氮能力。为了寻找抗逆性强的根瘤菌，某研 究小组做了如下实验：从盐碱地生长的野生草 本豆科植物中分离根瘤菌；选取该植物的茎尖 为材料，通过组织培养获得试管苗（生根试管 苗)；在实验室中探究试管苗根瘤中所含根瘤菌 的固氮能力。回答下列问题。 (1)从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌进行培 养，可以获得纯培养物，此实验中的纯培养物 是 16.(2023·湖南，21,13分)某些植物根际促生 菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等 作用。回答下列问题： (1)若从植物根际土壤中筛选分解淀粉的固 氮细菌，培养基的主要营养物质包括水和 (2)现从植物根际土壤中筛选出一株解淀粉 芽孢杆菌，其产生的抗菌肽抑菌效果见表。 据表推测该抗菌肽对 的抑制效果较 好，若要确定其有抑菌效果的最低浓度，需在 g·mL1浓度区间进一步实验。 抗菌肽浓度/(g·mL1) 测试菌 55.2027.6013.806.903.451.730.86 金黄色 葡萄 球菌 枯草芽 孢杆菌 禾谷镰 孢菌 假丝 酵母 注：“十”表示长菌，“一”表示未长菌。 141 第十八章发酵工程 (3)研究人员利用解淀粉芽孢杆菌H的淀粉 酶编码基因M构建高效表达质粒载体，转入 大肠杆菌成功构建基因工程菌A。在利用A 菌株发酵生产淀粉酶M过程中，传代多次 后，生产条件未变，但某子代菌株不再产生淀 粉酶M。分析可能的原因是 (答出两点 即可)。 (4)研究人员通过 88 88 肺上皮干细胞诱 肺上皮干细胞 体细胞 增殖分化 筛选 导生成肺类器官， 出 可自组装或与成 肺类器官A肺类器官B 熟细胞组装成肺 共培养‖共培养 类装配体，如图所 湖 示。肺类装配体 肺类装配体1肺类装配体2 培养需要满足适宜的营养、温度、渗透压、pH 以及 (答出两点) 等基本条件。肺类装配体形成过程中是否运 用了动物细胞融合技术？ (填“是” 或“否”)。 (5)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是 一种耐药菌，严重危害人类健康。科研人员 拟用MRSA感染肺类装配体建立感染模型， 来探究解淀粉芽孢杆菌H抗菌肽是否对 MRSA引起的肺炎有治疗潜力。以下实验 材料中必备的是 ①金黄色葡萄球菌感染的肺类装配体 ②MRSA感染的肺类装配体③解淀粉芽孢 杆菌H抗菌肽④生理盐水⑤青霉素（抗 金黄色葡萄球菌的药物)⑥万古霉素（抗 MRSA的药物) 17.(2022·全国甲，37,15分)某同学从被石油 污染的土壤中分离得到A和B两株可以降 解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法 比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株 的其他生理功能。 实验所用的培养基成分如下。 最新真题分类特训·生物学 培养基I:K2HPO4,MgSO4,NH4NO3, 石油。 培养基Ⅱ：K2HPO4,MgSO4,石油。 操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基 I中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基I、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平 板I、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、 乙两孔。 回答下列问题。 (1)实验所用培养基中作 为碳源的成分是 。 培养基中 NH4NO3的作用是为菌 株的生长提供氨源，氨源 在菌体内可以参与合成 (答出2种即可)等生物大分子。 (2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶 段，若最初接种N。个A细菌，繁殖n代后细 菌的数量是 (3)为了此较A、B降解石油的能力，某同学 利用步骤②所得到的平板I、Ⅱ进行实验，结 果如表所示(“十”表示有透明圈，“十”越多表 示透明圈越大，“一”表示无透明圈)，推测该 同学的实验思路是 透明圈大小 菌株 平板I 平板Ⅱ A 十十十 十十 B ++ (4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上 表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌 株是 ,理由是 142 18.(2022·全国乙，37,15分)化合物S被广泛 应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可 生产S,S的产量与菌株C培养所利用的碳源 关系密切。为此，某小组通过实验比较不同 碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。 碳源 细胞干重(g/L) S产量(g/L) 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.01 0.00 制糖废液 2.30 0.18 回答下列问题。 (1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需 的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有 (答出2点即可)。 (2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源 是 ;用菌株C生产S的最适碳源是 菌株C的生长除需要碳源 外，还需要 (答出2点即 可)等营养物质。 (3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不 能生长，其原因是 (4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生 产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实 验。请简要写出实验思路： (5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用， 其意义是 (答出1点即可)。下完成的，A正确；发酵池是泥质老窖，多年反复利用 的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物， 窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，使酿造过 程不易污染杂菌，B正确；从窖泥中分离的酿酒酵母扩 大培养时，需在有氧环境中进行，因为酵母菌在有氧条 件下可大量繁殖，C错误：谷物中含有大量淀粉，用谷物 原料发酵形成酒糟的过程中，有淀粉分解形成糖浆的 过程，因此，从谷物原料发酵形成的酒槽中，可分离出 产淀粉酶的微生物，D正确。 11.D黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧， 相同菌体密度下，菌球体越大越不利于菌体与氧气接 触，柠檬酸产生速率越慢，A正确；菌体内铵离子浓度 升高时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制，发酵 中期添加一定量的硫酸铵，提高铵离子浓度，菌体内可 提高柠檬酸产量，B正确；发酵过程中H下降导致细 菌生命活动所必须的酶失活，可抑制大部分细菌的生 长，C正确；发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行分 离、纯化、浓缩、干燥等一系列操作后才能获得柠檬酸 产品，D错误。 12.D食用醋的酸味主要来自醋酸，醋酸学名乙酸，A正 确：醋酸菌是好氧型细菌，不适宜在无氧的条件下生 存，B正确；制醋时，在缺失原料的情况下，醋酸菌将乙 醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，因此醋酸菌体内含有 催化乙醇氧化成乙酸的酶，C正确；醋酸菌属于细菌，没 有核膜包被的细胞核和众多细胞器，因此没有线粒体， D错误。 13.C泡莱的制作原理：泡莱的制作离不开乳酸菌。在无 氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸 (1)泡菜的制作流程是：选择原料、配置盐水、调味装 坛、密封发酵。 (2)选用火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好 的泡菜坛。 (3)原料加工：将新鲜蔬菜修整、洗涤、晾晒、切分成条 状或片状。 (4)配制盐水：按照比例配制盐水，并煮沸冷却。原因 是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等 微生物的生命活动不受影响。 (5)泡莱的制作：将经过预处理的新鲜蔬莱混合均匀， 装入泡莱坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香 辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使 盐水没过全部菜料，盖好坛盖。在坛盖边沿的水槽中 注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境。在 发酵过程中要注意经常补充水槽中的水。 A,①沸盐水冷却后再倒入坛中，是为了杀灭杂菌，冷却 之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受 影响，A错误；B.②盐水需要浸没全部莱料，造成无氧 环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；C.③盖好坛盖 后，向坛盖边沿的水槽中注满水，是排气减压、隔绝空 气、防止杂菌污染等，C正确；D.④检测泡菜中亚硝酸 盐的含量，腌制泡莱过程中亚硝酸盐的含量先增多后 减少，D错误。 14.AB果酒与啤酒的发酵原理均是酵母菌在无氧条件下 进行无氧呼吸产生酒精。 A,二者均利用了酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的原 理，A正确；B.发酵前期，均需要一定的有氧环境，使酵 母菌大量繁殖，B正确：C,果酒的家庭制作不需对原料 进行灭菌，C错误；D.果酒的家庭制作不需要进行消 毒，D错误。 15.DA.由于酿酒酵母不能直接利用淀粉发酵产生酒精 (乙醇)，故糖化过程主要是利用霉菌分泌的淀粉酶将 淀粉分解为葡萄糖，以供发酵利用，A正确：B.发酵液 样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检 测，若存在酒精，则酒精与酸性的重铬酸钾反应呈灰绿 色，B正确：C.酿造过程中应在无氧条件下进行，若密 封不严，会导致醋酸菌在有氧条件下发酵产生醋酸而 23 详解详析 使酒变酸，C正确；D.蒸熟并摊晾的原料需要冷却后才 可加入糟醅，以免杀死菌种，且需要在有氧条件下培养 一段时间，让酵母菌大量繁殖，此后再密封进行酒精发 酵，D错误。 第二节微生物的培养技术及应用 1,A参与发酵的微生物包含乳酸菌，乳酸菌为厌氧型微 生物，有氧条件下其增殖会受到抑制，因此有氧条件无 法让所有发酵所用微生物均迅速增殖，A错误；H、溶解 氧会影响微生物酶的活性，进而改变微生物代谢途径， 最终影响代谢物的种类与产量，B正确；高温蒸煮可以杀 灭发酵过程中的活性微生物，起到终止发酵的作用，同 时可杀灭杂菌，减少杂菌污染以延长产品的保存期，C正 确：酵母菌和乳酸菌共同利用发酵体系中的营养物质， 且生存空间重叠，因此二者在发酵过程中存在竞争关 系，D正确。 2.AD筛选可分解纤维素的菌株a时，需使用以纤维素为 唯一碳源的选择培养基，只有能分解利用纤维素的微生 物可在该培养基上存活繁殖，A正确：将菌液接种到培 养基进行菌株筛选时应使用稀释涂布平板法，B错误：菌 株c的比值和菌株a相同仅说明二者分解纤雏素的能力 相近，若发生同义突变、突变未影响纤雏素酶的活性或 表达量，也会出现该结果，不能判定其纤维素酶合成基 因未发生突变，C错误：菌落直径与透明圈直径的比值越 小，说明同等大小的菌落分解纤维素的范围越大，分解 能力越强，菌株b的比值最小，故其分解纤维素的能力 最强，D正确。 3B固体培养基配制后需采用高压蒸汽灭菌法灭菌，干 热灭菌法适用于玻璃器皿等耐高温、需千操的物品，A 错误：牛肉膏蛋白胨培养基含有碳源、氯源、维生素等营 养物质，可用于培养该营养缺陷型细菌，B正确；物质M 有诱变作用，菌落能在基本培养基上生长，说明其合成 组氨酸的能力恢复，并非合成蛋白质时不需要组氨酸，C 错误；物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落对M有一 定抗性，但仍为营养缺陷型，不能在基本培养基上生长， D错误。 4.B以PET为唯一碳源的选择培养基中，只有能分解利 用PET的目的菌可以获取碳源存活繁殖，其他微生物无 法生长，能实现目的菌的筛选，A正确：细菌纯培养时， 涂布器的作用是将梯度稀释后的菌悬液均匀涂布在培 养基表面：若要利用单个菌落进行纯培养，应使用接种 环挑取单个菌落，进行平板划线或接种到液体培养基 中，不能用涂布器蘸取单个菌落涂布，B错误；使用血细 胞计数板可在显微镜下直接统计单位体积菌悬液中的 细菌数量（含活菌和死菌），能够估算菌悬液的细菌总 数，C正确；探究甲、乙的协同降解效果，需要设置单独接 种甲、单独接种乙、同时接种甲和乙三个实验组，对比三 组的降解效果才可判断是否存在协同作用，因此至少设 三个实验组，D正确。 5,BC本实验目的是筛选乳糖利用率高的酵母菌，选择培 养基应以乳糖为唯一碳源，才能保证仅能利用乳糖的菌 株存活，以葡萄糖为唯一碳源无法达到筛选目的，A错 误：抗生素可抑制细菌生长繁殖，酵母菌属于真菌，对抗 生素不敏感，因此添加抗生素可抑制细菌的生长，B正 确：制备固体培养基的流程为计算·称量·溶化·调 pH·高压蒸汽灭菌·倒平板，先灭菌再倒平板可避免杂 菌污染，C正确；酵母菌的最适培养温度约为28℃， 37℃是细菌培养的常用温度，不符合酵母菌的培养要 求，D错误。 6.ACD根据题目信息“隐甲藻是一种好氧的异养真核微 藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖”可知，隐甲 藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确：采集 海水中腐烂的叶片进行湿热灭菌后，会杀死所有的微生 物，此时接种到固体培养基上无法获得隐甲藻，B错误； 根据题目信息可知，隐甲藻为真核生物，抗生素可通过 抑制细菌细胞壁合成或影响代谢过程来抑制细菌生长， 最新真题分类特训·生物学 不会影响真核生物的生命活动，因此在筛选或培养隐甲 藻时，加入抗生素可有效抑制细菌杂菌，提高隐甲藻的 纯度和生长效率，C正确：根据题目信息可知，隐甲藻为 好氧生物，因此利用隐甲藻进行DHA发酵生产时，适当 提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提 高DHA产量，D正确。 7.C淀粉水解形成的糖类可以作为黑曲霉生存所需的碳 源，氧化分解可以为黑曲霉提供能源，A正确；通过液体 培养基的扩大培养，可以为后续的发酵罐内发酵提供足 量的黑曲霉菌种，B正确：空气一般用过滤除菌的方式， 培养基一般用高压蒸汽灭菌的方式，发酵罐可以用高温 灭菌的方式等，因此它们的灭菌方法不相同，C错误；已 知利用黑曲霉通过深层通气液体发酵技术生产柠檬酸， 说明通气、搅拌有利于溶解氧增加，有利于发酵产物柠 檬酸的积累，D正确。 8.B制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅 用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误：将土样加入无 菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于 培养基表面，分离并计数，B正确；连续划线时，每次应从 上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开 始无法有效分离单菌落，C错误；斜面培养基保存菌种需 置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法（一20℃）， 室温下无法长期保存，D错误。 9,D以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用 金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物被 抑制)，符合选择培养基的设计原理，A正确：逐步提高 金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株 (类似“驯化”过程)，B正确；培养基的pH需根据目标微 生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸 性)，是配制培养基的基本要求，C正确：稀释涂布平板法 需用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用 于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂布无法保证 菌液均匀，D错误。 10.D1.培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需 求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培 养的物质基础。 2.按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和 鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化 学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微 生物的生长。 3.消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为 温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部 的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀 死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 A.不含氨源的平板可用于固氨菌的培养，A错误；B.平 板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰 上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误； C,使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行 灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；D.脲 酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氨源的平板上 能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氨源而进行生 长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氯源而无 法生长，因此以尿素为唯一氯源的平板能分离出合成 脲酶的微生物，D正确。 11.C本题考查食品保存的方法等知识，意在考查考生的 识记能力。千制能降低食品中的含水量，使微生物不 易生长和繁殖，进而延长食品保存时间，A叙述正确； 腌制通过添加食盐、糖等制造高渗环境，使微生物失水 过多，进而抑制微生物的生长和繁殖，B叙述正确；低温 保存可以抑制微生物的生命活动，但不是温度越低越 好，一般食品保存温度为零上低温，C叙述错误；高温处 理可杀死食品中绝大部分微生物，并通过破坏食品中 的酶类，降低酶类对食品有机物的分解，有利于食品保 存，D叙述正确。 232 12.D筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜 热菌，要用角蛋白氯源培养基。研究目的是筛选能高 效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既 要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样， 并且用角蛋白氯源培养基进行选择培养，所以D正确， ABC错误。 l3.解析：(1)用CaCL2溶液处理农杆菌，目的是制备感受态 细胞（可导入外源DNA分子的农杆菌）。感受态细胞 是指处于能吸收周围环境中DNA分子状态的细胞，这 种处理会使农杆菌细胞膜通透性增加，便于外源表达 载体的导入。从图1可知，质粒上有两个HidⅢ酶切位 点和两个EoRI酶切位点。用这两种酶同时酶切，会将 质粒切成4个大小不同的片段，电泳后就会出现4条 DNA条带，以此证明农杆菌成功导入了重组质粒。 (2)为了营造一个无菌环境，避免杂菌污染实验材料 微生物接种应在超净工作台（或无菌实验室或灭菌的 操作台)的酒精灯火焰旁进行。平板划线法和稀释涂 布平板法是常用的微生物接种方法，这两种方法都可 以将菌种分散，最终获得单菌落。单菌落是由单个细 胞繁殖而来的，能保证后续培养的菌株遗传背景一致。 质粒的T-DNA区域带有腐草霉素抗性基因(ZeoR)。 当农杆菌将T-DNA整合到假丝酵母基因组后，只有成 功导入该基因的重组酵母才能在含有腐草霉素的选择 培养基上存活，从而筛选出重组菌株。 (3)从图2的曲线对比可以看出：重组菌株的发酵液中 甘油峰值明显高于野生型菌株；重组菌株的甘油含量 上升速度更快，能在更短时间内达到产量高峰。若重 组菌株甘油含量显著低于野生型，除了基因突变外，还 可能是T-DNA插入导致重组菌株发生了变异，破坏了 假丝酵母自身甘油合成关键基因的功能」 答案：(1)感受态细胞/可导人外源DNA分子的农杆菌 EcoR I和HindⅢ (2)超净工作台/无菌实验室/灭菌的操作台（平板） 划线法/稀释涂布平板法单菌落腐草霉素 (3)提高发酵液中甘油的含量：缩短发酵时间T-DNA 的插入导致重组菌株发生了变异 14.解析：围绕微生物的培养和酒精发酵展开，同时强调社 会责任感，解决实际问题。 (1)菌T能够将纤维素变成酵母菌发酵所需的葡萄糖， 利用的是具有高效性的酶。 (2)氯元素是构成体内一些物质的必需元素，氨源就是 给微生物提供合成该物质的原材料。高压蒸汽灭菌的 注意事项包括①待灭菌的物品放置不宜过紧；②必须 将冷空气充分排除再开始加压：③装入的等灭菌物品 不要过多；④锥形瓶与试管口不要与桶壁接触…，合 理即可。 (3)密闭环境一方面不接触空气杂菌，另一方面保证无 氧环境用以酒精发酵。酵母菌无氧呼吸产生乙醇的同 时还会产生二氧化碳，拧松瓶盖可以释放二氧化碳，防 止容器压力过大爆炸，酸性条件下重铬酸钾溶液可以 用来鉴定酒精。 (4)纤维素分解产生的是葡萄糖可以用来作为发酵原 材料，从社会责任感角度和实际生产角度出发分析即 可，如减少粮食消耗，生产成本低，能同时处理秸秆，保 护环境等。 答案：(1)菌T能够产生分解纤维素的酶，能够高效催 化纤维素分解 (2)用于合成氨基酸、核苷酸等含氮物质 ①待灭菌的物品放置不宜过紧；②必须将冷空气充分 排除再开始加压 (3)保证密闭环境，防止杂菌进入，同时营造无氧条件 释放酵母菌无氧呼吸产生的二氧化碳，防止瓶内压 力过大酸性条件下重铬酸钾 (4)葡萄糖减少粮食消耗，生产成本低，能同时处理 秸秆，保护环境 15.解析：(1)在微生物学中将接种于培养基内，在合适条 件下形成的含特定种类微生物的群体称为纯培养物。 由单一个体繁殖所获得的微生物群体，对于本实验来 说就是根瘤菌繁殖得到的单菌落。 答案：(1)由根瘤菌繁殖形成的单菌落 16.解析：本题考查微生物的筛选、动物细胞培养等知识， 意在考查考生的实验探究能力与分析能力。(1)由题 意可知，根际促生菌具有固氯作用，因此用于筛选能分 解淀粉的根际促生菌的培养基的主要营养物质包括 水、无机盐和淀粉。(2)由题表可知，在抗菌肽浓度为 3.45~55.20mg·mL1范围内，金黄色葡萄球菌和枯 草芽孢杆菌均不能生长，表明该抗菌肽对它们的抑菌 效果较好。因为抗菌肽的浓度为1.73mg·mL1时， 它们均能生长，所以要确定抗菌肽抑菌效果的最低浓 度，应在1.73~3.454g·mL1的浓度区间进一步 实验。 (3)在利用A菌株发酵生产淀粉酶M过程中，传代多 次后，生产条件未变，但某子代菌株不再产生淀粉酶 M,可能的原因是淀粉酶编码基因M发生突变；或者是 能产生淀粉酶M的个体在产生后代时发生性状分离。 (4)肺类装配体培养需要满足适宜的营养、温度、渗透 压、pH以及无菌、无毒环境，含95%空气和5%C) 的气体环境等基本条件；由图示可知，肺类装配体形成 的过程中没有运用动物细胞融合技术，只涉及了细胞 的分裂和分化等内容。(5)科研人员拟用MRSA感柒 肺类装配体建立感染模型，来探究解淀粉芽孢杆菌H 抗菌肽是否对MRSA引起的肺炎有治疗潜力，必备实 验材料为：②MRSA感染的肺类装配体、③解淀粉芽孢 杆菌H抗菌肽、④生理盐水（设置对照实验使用）、⑥万 古霉素（抗MRSA的药物），故选②③④⑥。 答案：(1)无机盐、淀粉(2)金黄色葡萄球菌和枯草芽 孢杆菌1.73~3.45(3)淀粉酶编码基因M发生突 变：能产生淀粉酶M的个体产生后代时发生性状分离 (4)无菌、无毒环境，含95%空气和5%CO,的气体环境 否 (5)②③④⑥ 17.解析：第(1)问，培养基的成分有碳源、氯源、无机盐和 水，从组成培养基的物质所含化学元素可知，作为碳源 的成分是石油。生物大分子DNA、RNA、蛋白质都含 有N元素，故氯源在菌体内可以参与合成这些物质。 第(2)问，由题意“资源和空间不受限制”可知，细菌的 增殖呈“J”型曲线增长，由于DNA的半保留复制，细菌 每繁殖一代就是上一代的2倍，根据公式N,=N。·入， λ=2，繁殖n代后细菌的数量是N。·2”。第(3)问，分 析表格数据可知，实验的结果是：在平板I上，A菌株 降解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然 能降解石油，而B菌株不能降解，根据实验的单一变量 和对照原则，推测该同学的思路是：在无菌条件下，将 等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板I的甲 和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜 条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明 圈大小并作记录。第(4)问，由表格数据可知，在平板 Ⅱ（无氯源的培养基）上，A菌株仍然能降解石油，而B 菌株不能降解，所以要治理贫氯且被石油污染的土壤， 应该选用A菌株，因为A菌株降解石油的能力高于B 菌株，并且不需要在培养基中添加氨源也能生长。 答案：(1)石油DNA、RNA、蛋白质 (2)N。·2m (3)在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分 别接种到平板I的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样 23: 详解详析 的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个 平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大 降解能力强、透明圈小降解能力弱来比较A、B降解石 油的能力 (4)AA菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没 有添加氮源的培养基中也能生长 18.解析：第(1)问，通常在实验室培养微生物时，为防止实 验用的玻璃器皿等物品中原有的微生物污染培养物， 需要使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的 细胞、芽孢和孢子，即对所需的玻璃器皿进行灭菌，玻 璃器皿常用的灭菌的方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌 等。第(2)问，由实验结果可知，与以制糖废液为碳源 相比，以葡萄糖为碳源时菌株C的细胞干重最大，说明 最适于菌株C生长的碳源是葡萄糖；而以制糖废液为 碳源时，菌株C生产S的产量高于以葡萄糖为碳源时 的产量，说明最适于生产S的碳源是制糖废液。微生 物的生长一般都需要水、碳源、氯源和无机盐，还需要 满足微生物生长对H、氧气以及特殊营养物质的要 求，故菌株C的生长除需要碳源外，还需要氯源、无机 盐、生长因子等营养物质。第(3)问，分析题图表格可 以看出在以淀粉为碳源的培养基中，菌株C不能生长， 原因可能是菌株C中缺少分解淀粉的酶，不能利用淀 粉。第(4)问，要测定生产S的最适制糖废液为碳源的 浓度，实验自变量为制糖废液的浓度，可分别配制一系 列不同浓度梯度的制糖废液，再制备以制糖废液为唯 一碳源的培养基培养菌株C,其他条件相同且适宜， 段时间后，测定并比较不同浓度制糖废液中的S的产 量，S产量最高时对应的制糖废液浓度，即为生产S的 最适碳源浓度。第(5)问，利用制糖废液生产S可以实 现废物利用，既有利于减少污染、节省原料，又能降低 生产成本。 答案：(1)高压蒸汽灭菌、干热灭菌 (2)葡萄糖制糖废液氮源、无机盐、生长因子 (3)缺少淀粉酶 (4)分别配制一系列不同浓度梯度的制糖废液，再制备 以制糖废液为唯一碳源的培养基培养菌株C,其他条件 相同且适宜，一段时间后，测定并比较不同浓度制糖废 液中的S的产量，S产量最高时对应的制糖废液浓度即 为生产S的最适碳源浓度 (5)减少污染、节省原料、降低生产成本 第十九章细胞工程 第一节植物细胞工程 1,D扩增培养是芽的增殖培养阶段，属于再分化过程，需 要光照以利于叶绿素合成和光合作用进行，A错误；接 种时应将芽的形态学下端插入培养基，便于吸收营养物 质，同时符合生长素极性运输的特点，利于生长，B错误； 诱导出的芽是无菌环境下培养获得的，转入增殖培养基 时仅需无菌操作即可，再次消毒会杀伤芽细胞，C错误； 当前仅诱导获得了芽，要得到完整试管苗，还需要将芽 转接到生长素比例相对较高的生根培养基中，诱导根的 分化，D正确。 2.A甲对应获取代谢物的生产目标，植物细胞培养可通 过体外培养植物细胞提取次生代谢产物；乙对应优良性 状仅来自单株的植株获取需求，快速繁殖属于无性繁 殖，可保持单株优良性状，短时间获得大量遗传特性 致的植株；丙对应优良性状来自亲缘关系近的不同植 株，可先通过杂交集中优良性状，再结合单倍体育种快 速获得纯合可稳定遗传的品种：丁对应亲本亲缘关系远 的情况，体细胞杂交可克服远缘杂交不亲和的障碍，获 得整合两个亲本优良性状的杂种植株，B、C、D错误， A正确。