专题十三 考点一 发醉工程-【创新教程】2022-2026五年高考生物真题分类特训试卷

最新真题 专题十三 生物技术与工程 分类特训 考点一发酵工程 一、选择题 1.(2026·山东卷，15)某酱厂制作甜面酱的流程为：选料→蒸料→接种→制曲→恒温发酵→蒸煮 →灌装。除米曲霉外，酵母菌、乳酸菌等多种微生物也参与发酵过程。下列说法错误的是 整 ( A.制曲应在有氧条件下进行，以便于发酵过程所用微生物均迅速增殖 B.恒温发酵过程中，pH和溶解氧的改变会影响微生物代谢物的形成 斯 C.蒸煮具有终止发酵和延长产品保存期的作用 D.酵母菌和乳酸菌在参与发酵的过程中存在竞争 2.(不定项)(2026·山东卷，16)在充入了适量空气的恒温密闭发酵罐中， 酵母菌以充足的葡萄糖为原料进行呼吸作用，随着时间的延长，呼吸作 用中O,的消耗速率与CO2的产生速率比如图所示。下列说法正确 34 的是 ( 留 A.从a到b时，有氧呼吸速率不变 B.从b到d时，无氧呼吸速率增大 杯 C.c时，有氧呼吸与无氧呼吸消耗葡萄糖的速率相等 D.d时以后，无氧呼吸速率始终不变 3.(不定项)(2026·山东卷，20)刚果红与纤维素可形成红色复合物。在含刚果红和纤维素的培 养基中培养细菌时，细菌产生的纤维素酶将纤维素分解，使菌落周围形成透明圈。为获得分解 纤维素能力强的菌株，将筛选到的菌株a进行诱变处理得到菌株b、c、d。在相同且适宜的条件 下培养，选取大小相近的菌落进行统计，相关数据如表所示。下列说法正确的是 () 拟 菌株 b d 阳 菌落直径与透明圈直径的比值0.5 0.3 0.50.7 A.筛选菌株a所用培养基应以纤维素为唯一碳源 B.将菌液接种到培养基进行菌株筛选时必须使用平板划线法 C.从表中数据可得出，菌株c的纤维素酶合成基因未发生突变 D.在4种菌株中，菌株b分解纤维素的能力最强 4.(2026·安徽卷，15)某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组 氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组 氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落)，再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养 一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是 含低浓度M的滤纸片 含高浓度M的滤纸片 菌落a 基本培养基 完全培养基 141 A.固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B.牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C.物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D.物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 5.（2026·河南卷，16)自然界存在着甲、乙两种降解PET塑料（含碳有机物）的细菌。为筛选这 两种细菌，并探究两种细菌的协同降解效果，研究人员进行了相关实验。下列叙述错误的是 () A.为筛选出目的菌，培养基应以PET塑料为唯一碳源 B.细菌纯培养时，需用涂布器蘸取单个菌落进行涂布 C.利用显微镜直接计数，可估算出菌悬液中细菌的总数 D.探究甲、乙降解效果的协同性，至少需设三个实验组 6.(2026·云南卷，14)肉类在低温下可经过高盐腌制、晾挂、发酵（乳酸菌、酵母菌为主）后延长保 存期。下列说法错误的是 () A.高盐腌制提高了细胞外渗透压使细胞脱水 B.其中微生物大多数属于耐盐或嗜盐微生物 C.发酵产生的乳酸可抑制杂菌生长强化防腐 D.乳酸菌、酵母菌发酵过程中均可产生CO) 7.（不定项)(2026·黑吉辽蒙卷，18)某奶酒以牛奶为主要原料，经微生物发酵酿制而成。为提高发 酵效率，需筛选具有乳糖利用率高、乙醇产量高等特性的酵母菌菌株。下列叙述正确的是() A.选择培养基应以葡萄糖为唯一碳源 B.选择培养基中可添加抗生素抑制细菌生长 C.制备固体培养基需先高压蒸汽灭菌再倒平板 D.接种后的平板应在37℃恒温培养 8.(不定项)(2026·河北卷，18)窖泥中的微生物是影响白酒风味的因素之一。现从某酒厂窖泥 中分离筛选与白酒风味物质形成相关的己酸菌，下列分析错误的是 () A.分离培养己酸菌时，需对培养基、培养皿和窖泥进行灭菌 B.通过稀释涂布平板法统计的菌落数一般比活菌的实际数偏多 C.依据己酸菌的特异基因序列设计引物，可通过PCR对目的菌株进行鉴定 D.获得的己酸菌优良菌种需扩大培养后再用于白酒的规模化生产 9.(2026·浙江1月卷，5)现代发酵工程已广泛应用于食品、医药等领域。下列叙述错误的是 () A.发酵原料无需灭菌处理 B.标准化工艺可控制药品质量 C.常用经选育的优良菌种 D.调控发酵条件可改善食品风味 10.(2025·云南卷，15)黄酒是我国古老的发酵酒之一，传统酿制中，先用蒸煮过的小麦或麸皮为 原料，对之前发酵留存的少量酒曲（曲种）进行扩大制曲；再将酒曲和蒸煮后的糯米、大米混合 处理一段时间后，添加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨成品。下列说法错误的是() A.小麦、麸皮等原料为酒曲中微生物的生长繁殖提供了碳源和氮源等营养物质 B.为避免制曲过程被杂菌污染影响黄酒品质，扩大制曲前需对留存的酒曲灭菌 C.糯米、大米蒸煮后立即与酒曲混合会导致酶空间结构改变而降低其催化效率 D.将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，是为了获得酒母发酵时的底物葡萄糖 11.(2025·甘肃卷，15)我国葡萄酒酿造历史悠久、传统发酵技术延续至今。发酵工程通过选育 菌种和控制发酵条件等措施可优化传统发酵工艺，改善葡萄酒品质。下列叙述错误的是 ( A.传统发酵时，葡萄果皮上的多种微生物参与了葡萄酒的发酵过程 B.工业化生产时，酵母菌需在无氧条件下进行扩大培养和酒精发酵 C.通过诱变育种或基因工程育种能够改良葡萄酒发酵菌种的性状 D.大规模发酵时，需要监测发酵温度、pH值、罐压及溶解氧等参数 142 12.(2025·河南卷，6)食醋和黄酒是我国传统的日常调味品，均通过发酵技术生产。下列叙述错 误的是 () A.醋酸的发酵是好氧发酵，而酒精的发酵是厌氧发酵 B.以谷物为原料酿造食醋和黄酒时，伴有pH下降和气体产生 C.食醋和黄酒发酵过程中，微生物繁殖越快发酵产物产率越高 D.使用天然混合菌种发酵往往会造成传统发酵食品的品质不一 13.(不定项)(2025·河北卷，18)隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶 片上生长繁殖，是工业生产DHA(一种功能性脂肪酸)的藻类之一。从海洋中筛选获得的高 产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述正确的是 () A.隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源 B.采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻 C.选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长 D.适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量 14.(2025·陕晋青宁卷，3)我国是世界上最大的柠檬酸生产国。利用黑曲霉通过深层通气液体 发酵技术生产柠檬酸，流程如图。下列叙述错误的是 () 淀粉水解糖→灭菌 选育菌种→扩大培养→接种→发酵罐内发酵→分离、提纯产物 无菌空气 A.淀粉水解糖为发酵提供碳源和能源 B.扩大培养可提供足量的黑曲霉菌种 C.培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同 D.通气、搅拌有利于溶解氧增加和柠檬酸积累 15.(2025·1月浙江卷，8)传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误 的是 () A.泡菜的风味由乳酸菌的种类决定 B.用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌 C.家庭酿制米酒的过程既有需氧呼吸又有厌氧呼吸 D.传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵 16.(2025·江苏卷，6)某同学利用红叶李果实制作果醋，图示其操作的简易流程。下列相关叙述 正确的是 () 果实①果汁⊙果酒⑨，果醋 A.果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同 B.过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率 C.过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌 D.过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气 17.(2025·江苏卷，11)从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯 化、鉴定。下列相关叙述正确的是 () A.制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B.将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C.连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D.鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 18.(2025·黑吉辽蒙卷，4)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22HCN2O3) 能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是() A,以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C.配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 143 19.(不定项)(2024·河北卷，18)中国传统白酒多以泥窖为发酵基础，素有“千年老窖万年糟”“以 窖养糟，以糟养泥”之说。多年反复利用的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物。 下列叙述正确的是 () A.传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的 B.窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，使酿造过程不易污染杂菌 C.从窖泥中分离的酿酒酵母扩大培养时，需在CO2或N2环境中进行 D.从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物 20.(2024·山东卷，14)在发酵过程中，多个黑曲霉菌体常聚集成团形成菌球体，菌球体大小仅由 菌体数量决定。黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧。菌体内铵离子浓度升高 时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制。下列说法错误的是 ) A.相同菌体密度下，菌球体越大柠檬酸产生速率越慢 B.发酵中期添加一定量的硫酸铵可提高柠檬酸产量 C.发酵过程中pH下降可抑制大部分细菌的生长 D.发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行干燥即可获得柠檬酸产品 好 二、非选择题 21.(2026·浙江1月卷，24)农杆菌能侵染真菌，介导真菌细胞的转基因。3-磷酸甘油脱氢酶是 假丝酵母中甘油合成代谢途径的关键酶，将3-磷酸甘油脱氢酶基因(Gp)构建到表达载体 上，如图1所示。通过农杆菌介导法，转化假丝酵母野生型菌株，获得转G的重组菌株。 野生型菌株与某重组菌株分别进行发酵实验，生产甘油的结果如图2所示。 HindⅢ 重组菌株 Gpd ◇一 野生型菌株 HindⅢ ■ BamH ◆ EcoR I Zeo a0-0-0000-9 ◆ EcoR I 也do Kan 时间一 图1 图2 注：ZeoR是腐草霉素抗性基因，KanR是卡那霉素抗性基因 回答下列问题： (I)表达载体导入农杆菌细胞：用CaCL,溶液处理农杆菌，制备 再用电击法将表达载体导入农杆菌细胞，经筛选获得阳性克隆。为验证阳性克隆是否为转化 成功的农杆菌，从繁殖后的菌株细胞中提取质粒，经 限制酶酶切后电泳，若出现4条 DNA条带，则表明转化成功。 (2)假丝酵母重组菌株的获得：在 中的酒精灯火焰旁，取野生型假丝酵母菌种，采用 方法接种在固体培养基上培养，适时挑选 再接种到液体培养基进行培养。 取适量的假丝酵母与农杆菌进行共培养一段时间后，杀灭农杆菌，然后在含有 的选 择培养基中筛选，最终获得重组菌株。 (3)重组菌株生产甘油能力的分析：根据图2可知，与野生型菌株相比，该重组菌株用于发酵 生产甘油的2个优点是 。若某生长正常的重组菌株发酵液中甘 油的含量显著低于野生型菌株，从引起变异的因素分析，可能的原因有：在培养过程中重组菌 株发生了突变，或 ,导致甘油合成代谢受阻。 144专题十三生物技术与工程 考点一发酵工程 1.A参与发酵的微生物包含乳酸菌，乳酸菌为厌氧型微 生物，有氧条件下其增殖会受到抑制，因此有氧条件无 法让所有发酵所用微生物均迅速增殖，A错误；pH、溶解 氧会影响微生物酶的活性，进而改变微生物代谢途径， 最终影响代谢物的种类与产量，B正确；高温蒸煮可以杀 灭发酵过程中的活性微生物，起到终止发酵的作用，同 时可杀灭杂菌，减少杂菌污染以延长产品的保存期，C正 确；酵母菌和乳酸菌共同利用发酵体系中的营养物质， 且生存空间重叠，因此二者在发酵过程中存在竞争关 系，D正确。 2.BC从a到b时，O2消耗速率与CO2产生速率的比值 为1，仅能说明酵母菌只进行有氧呼吸，但无法判断有氧 呼吸速率是否不变（如酵母菌繁殖时种群数量增加，有 氧呼吸总速率会上升，只要仅进行有氧呼吸，比值就始 终为1)，A错误；从b到d时，速率比逐渐减小至0，说明 O2消耗逐渐减少至0，有氧呼吸逐渐减弱，总CO2产生 中来自无氧呼吸的比例不断升高，因此无氧呼吸速率增 大，B正确；C点时速率比为3/4，设O2消耗速率为3x, 则有氧呼吸产生CO2速率为3x,总C02产生速率为4x, 可得无氧呼吸产生CO,速率为X。有氧呼吸每消耗 1mol葡萄糖产生6 molCO,,消耗葡萄糖速率为3x/6= x/2;无氧呼吸每消耗1mol葡萄糖产生2 molCO2,消耗 葡萄糖速率为x/2,二者相等，C正确；d时以后，虽然O2 消耗为0，酵母菌只进行无氧呼吸，但随着酒精等代谢废 物积累、培养液pH下降，酵母菌活性会被抑制，无氧呼吸 速率会逐渐下降，并非始终不变，D错误。 3.AD筛选可分解纤雏素的菌株a时，需使用以纤雏素为 唯一碳源的选择培养基，只有能分解利用纤维素的微生 物可在该培养基上存活繁殖，A正确；将菌液接种到培 养基进行菌株筛选时应使用稀释涂布平板法，B错误；菌 株c的比值和菌株a相同仅说明二者分解纤维素的能力 相近，若发生同义突变、突变未影响纤维素酶的活性或 表达量，也会出现该结果，不能判定其纤维素酶合成基 因未发生突变，C错误；菌落直径与透明圈直径的比值越 小，说明同等大小的菌落分解纤维素的范围越大，分解 能力越强，菌株b的比值最小，故其分解纤维素的能力 最强，D正确。 4.B固体培养基配制后需采用高压蒸汽灭菌法灭菌，干 热灭菌法适用于玻璃器皿等耐高温、需干燥的物品， A错误；牛肉膏蛋白胨培养基含有碳源、氮源、维生素等 营养物质，可用于培养该营养缺陷型细菌，B正确；物质 M有诱变作用，菌落a能在基本培养基上生长，说明其 合成组氨酸的能力恢复，并非合成蛋白质时不需要组氨 酸，C错误：物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落对M 有一定抗性，但仍为营养缺陷型，不能在基本培养基上 生长，D错误。 5.B以PET为唯一碳源的选择培养基中，只有能分解利 用PET的目的菌可以获取碳源存活繁殖，其他微生物无 法生长，能实现目的菌的筛选，A正确；细菌纯培养时， 涂布器的作用是将梯度稀释后的菌悬液均匀涂布在培 养基表面；若要利用单个菌落进行纯培养，应使用接种 环挑取单个菌落，进行平板划线或接种到液体培养基 中，不能用涂布器蘸取单个菌落涂布，B错误；使用血细 胞计数板可在显微镜下直接统计单位体积菌悬液中的 细菌数量（含活菌和死菌），能够估算菌悬液的细菌总 数，C正确；探究甲、乙的协同降解效果，需要设置单独接 种甲、单独接种乙、同时接种甲和乙三个实验组，对比三 组的降解效果才可判断是否存在协同作用，因此至少设 三个实验组，D正确。 21 6.D高盐腌制时细胞外的盐溶液浓度远高于细胞内液浓 度，细胞外渗透压更高，会导致细胞渗透失水，A正确； 高盐环境会抑制绝大多数不耐盐微生物的生长，能在该 环境中存活并参与发酵的微生物大多是耐盐或嗜盐微 生物，B正确；发酵产生的乳酸会降低环境的pH,多数杂 菌不适宜在酸性环境中生长，因此乳酸可抑制杂菌生 长，强化防腐效果，C正确；乳酸菌是厌氧微生物，无氧呼 吸的产物只有乳酸，不产生C○2，仅酵母菌发酵过程可产 生CO2,D错误。 7.BC本实验目的是筛选乳糖利用率高的酵母菌，选择培 养基应以乳糖为唯一碳源，才能保证仅能利用乳糖的菌 株存活，以葡萄糖为唯一碳源无法达到筛选目的，A错 误；抗生素可抑制细菌生长繁殖，酵母菌属于真菌，对抗 生素不敏感，因此添加抗生素可抑制细菌的生长，B正 确；制备固体培养基的流程为计算→称量→溶化→调 pH高压蒸汽灭菌倒平板，先灭菌再倒平板可避免杂 菌污染，C正确；酵母菌的最适培养温度约为28℃，37℃ 是细菌培养的常用温度，不符合酵母菌的培养要求， D错误。 8.AB对窖泥灭菌会杀死窖泥中的微生物，无法从中分离 出己酸菌，A错误；稀释涂布平板法计数时，当两个或多 个细胞连在一起时，观察到的只是一个菌落，从而使计 数结果通常比实际数偏少，B错误；基因的特异性是指基 因的碱基排列顺序是特定的，依据己酸菌的特异基因序 列设计引物，可通过PCR等技术检测样本中是否有己酸 菌的特异基因序列，从而对目的菌林进行鉴定，C正确； 优良菌种需扩大培养后再用于规模化生产，D正确。 9.A发酵原料需彻底灭菌（如高压蒸汽灭菌），以消灭杂 菌，避免干扰目标菌种代谢或产生有害物质。若原料不 灭菌，杂菌繁殖会导致发酵失败，A错误；标准化工艺通 过控制温度、PH、溶氧量等参数，确保微生物代谢稳定， 使药品有效成分含量一致，B正确；优良菌种（如高产青 霉素的青霉菌)经诱变育种或基因工程改造，可提升产 物产量和纯度，是发酵工程的核心要素，C正确；调控发 酵条件（如乳酸菌发酵的温度、时间）直接影响代谢产物 种类（如有机酸、酯类），从而改善酸奶、奶酪等食品的风 味和质地，D正确。 10.B小麦、麸皮等原料含有蛋白质、糖类等多种营养成 分，蛋白质可以为微生物提供氨源，糖类可以为微生物 提供碳源，所以能为酒曲中微生物的生长繁殖提供碳 源和氨源等营养物质，A正确；扩大制曲前对留存的酒 曲不能灭菌，因为酒曲本身含有发酵所需的菌种，若灭 菌会杀死这些菌种，导致无法进行正常的发酵过程， B错误；糯米、大米蒸煮后温度较高，立即与酒曲混合， 高温会使酶的空间结构改变，导致酶活性降低，从而降 低其催化效率，C正确；酒曲中含有淀粉酶等酶类，将酒 曲混合糯米、大米处理一段时间，淀粉酶可将糯米、大 米中的淀粉分解为葡萄糖，从而为后续酒母（含酵母 菌)发酵提供底物葡萄糖，D正确。 11.B在传统发酵制作葡萄酒时，葡萄果皮上附着有多种 微生物，如酵母菌等，这些微生物参与了葡萄酒的发酵 过程，A正确；工业化生产时，酵母菌在有氧条件下进 行有氧呼吸，能大量繁殖，进行扩大培养，在无氧条件 下进行酒精发酵产生酒精，B错误；通过诱变育种（利用 物理、化学等因素诱导基因突变)或基因工程育种（定 向改造生物的基因)能够改良葡萄酒发酵菌种（如酵母 菌)的性状，比如提高发酵效率等，C正确；大规模发酵 时，发酵温度、H值、罐压及溶解氧等参数会影响微生 物的生长和代谢，进而影响发酵过程和产品质量，所以 需要监测这些参数，D正确。 12.C醋酸的发酵的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是 异养需氧型，故醋酸的发酵是好氧发酵，而酒精的发 酵，参与的微生物是酵母菌，需要无氧呼吸产生酒精， 故是厌氧发酵，A正确；以谷物为原料酿造食醋和黄酒 时，产物中的醋酸、二氧化碳等会使pH下降，B正确； 黄酒发酵过程中，酵母菌繁殖在有氧条件下，产酒精要 在无氧条件下，繁殖越快则发酵产物酒精产率越低， C错误；传统发酵食品所用的是自然菌种，没有进行严 格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主， 往往会造成传统发酵食品的品质不一，D正确。 13.ACD根据题目信息“隐甲藻是一种好氧的异养真核 微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖”可知， 隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确； 采集海水中腐烂的叶片进行湿热灭菌后，会杀死所有 的微生物，此时接种到固体培养基上无法获得隐甲藻， B错误；根据题目信息可知，隐甲藻为真核生物，抗生素 可通过抑制细菌细胞壁合成或影响代谢过程来抑制细 菌生长，不会影响真核生物的生命活动，因此在筛选或 培养隐甲莱时，加入抗生素可有效抑制细菌杂菌，提高 隐甲藻的纯度和生长效率，C正确；根据题目信息可知， 隐甲藻为好氧生物，因此利用隐甲藻进行DHA发酵生 产时，适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加 溶氧量，以提高DHA产量，D正确。 14.C淀粉水解形成的糖类可以作为黑曲霉生存所需的 碳源，氧化分解可以为黑曲霉提供能源，A正确；通过 液体培养基的扩大培养，可以为后续的发酵罐内发酵 提供足量的黑曲霉菌种，B正确；空气一般用过滤除菌 的方式，培养基一般用高压蒸汽灭菌的方式，发酵罐可 以用高温灭菌的方式等，因此它们的灭菌方法不相同， C错误；已知利用黑曲霉通过深层通气液体发酵技术生 产柠檬酸，说明通气、搅拌有利于溶解氧增加，有利于 发酵产物柠檬酸的积累，D正确。 15.A泡菜的风味由原料、发酵菌种类、发酵环境等因素 共同决定的，A错误；用果酒发酵制作果醋的主要菌种 是醋酸菌，醋酸菌是好氧型微生物，B正确；家庭酿制米 酒主要用的是酵母菌，在酿制米酒的过程中，首先让酵 母菌在有氧的环境进行增殖，然后在无氧的环境中进 行发酵，C正确；传统发酵食品所用的是自然菌种，没有 进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发 酵为主，D正确。 16.B果酒发酵的菌种是酵母菌，是真核生物，果醋发酵 的菌种是酷酸菌，是原核生物，两者的细胞结构不同， A错误；过程①为榨汁，果胶酶能分解细胞壁中的果 胶，添加适量果胶酶，有利于提高出汁率，B正确：过程 ②为果酒发酵，酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵，若 多次开盖会引入氧气抑制无氧呼吸并增加杂菌污染风 险，C错误；过程③为果醋发酵，酷酸菌利用酒精产醋过 程中不产生气体，不会产生大量气泡，也无需放气， D错误。 17.B制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅 用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误；将土样加入 无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布 于培养基表面，分离并计数，B正确；连续划线时，每次 应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始 端开始无法有效分离单菌落，C错误：斜面培养基保存 菌种需置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法 (一20℃)，室温下无法长期保存，D错误。 18.D以金露素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用 金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物 被抑制)，符合选择培养基的设计原理，A正确；逐步提 220 高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的 菌株（类似“驯化”过程），B正确；培养基的pH需根据 目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真 菌偏酸性)，是配制培养基的基本要求，C正确；稀释涂 布平板法需用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面， 而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂 布无法保证菌液均匀，D错误。 19.ABD酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下能进 行酒精发酵，可用于酿酒、制作馒头和面包等，传统白 酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用 下完成的，A正确；发酵池是泥质老窖，多年反复利用 的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物， 窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，使酿造过 程不易污染杂菌，B正确；从窖泥中分离的酿酒酵母扩 大培养时，需在有氧环境中进行，因为酵母菌在有氧条 件下可大量繁殖，C错误；谷物中含有大量淀粉，用谷物 原料发酵形成酒糟的过程中，有淀粉分解形成糖浆的 过程，因此，从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出 产淀粉酶的微生物，D正确。 20.D黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧， 相同菌体密度下，菌球体越大越不利于菌体与氧气接 触，柠檬酸产生速率越慢，A正确；菌体内铵离子浓度 升高时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制，发酵 中期添加一定量的硫酸铵，提高铵离子浓度，菌体内可 提高柠檬酸产量，B正确；发酵过程中pH下降导致细 菌生命活动所必须的酶失活，可抑制大部分细菌的生 长，C正确；发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行分 离、纯化、浓缩、干操等一系列操作后才能获得柠檬酸 产品，D错误。 21.解析：(1)用CaCL2溶液处理农杆菌，目的是制备感受态 细胞（可导入外源DNA分子的农杆菌）。感受态细胞 是指处于能吸收周围环境中DNA分子状态的细胞，这 种处理会使农杆菌细胞膜通透性增加，便于外源表达 载体的导入。从图1可知，质粒上有两个HidⅢ酶切 位点和两个Ec0RI酶切位点。用这两种酶同时酶切， 会将质粒切成4个大小不同的片段，电泳后就会出现4 条DNA条带，以此证明农杆菌成功导入了重组质粒。 (2)为了营造一个无菌环境，避免杂菌污染实验材料， 微生物接种应在超净工作台（或无菌实验室或灭菌的 操作台)的酒精灯火焰旁进行。平板划线法和稀释涂 布平板法是常用的微生物接种方法，这两种方法都可 以将菌种分散，最终获得单菌落。单菌落是由单个细 胞繁殖而来的，能保证后续培养的菌林遗传背景一致。 质粒的T-DNA区域带有腐草霉素抗性基因(ZoR)。 当农杆菌将T-DNA整合到假丝酵母基因组后，只有成 功导入该基因的重组酵母才能在含有腐草霉素的选择 培养基上存活，从而筛选出重组菌株。 (3)从图2的曲线对比可以看出：重组菌株的发酵液中 甘油峰值明显高于野生型菌株；重组菌株的甘油含量 上升速度更快，能在更短时间内达到产量高峰。若重 组菌株甘油含量显著低于野生型，除了基因突变外，还 可能是T-DNA插入导致重组菌株发生了变异，破坏了 假丝酵母自身甘油合成关键基因的功能。 答案：(1)感受态细胞/可导人外源DNA分子的农杆菌 EcoR I和HindⅢ (2)超净工作台/无菌实验室/灭菌的操作台（平板） 划线法/稀释涂布平板法单菌落腐草霉素 (3)提高发酵液中甘油的含量；缩短发酵时间T-DNA 的插入导致重组菌株发生了变异