四川省成都市石室中学2025-2026学年高二下学期生物考前练习2

**基本信息** 2026年生物零诊考前练习聚焦生物技术实践，涵盖发酵工程、细胞工程、基因工程等模块，通过真实科研情境（如乙醇梭菌固碳、CAR-T细胞疗法）考查科学思维与探究能力，适配期末复习需求。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|32题|发酵技术（乳酸菌发酵）、细胞培养（胚胎成纤维细胞）、基因工程（PCR扩增）|以“酸啤酒酿造流程”“单克隆抗体制备”等真实情境设题，考查操作原理与分析能力| |填空题|8题|谷氨酸发酵、抗生素降解菌株筛选、体细胞杂交|突出实验设计与数据处理，如“刚果红平板法鉴定高产纤维素酶菌株”“反向PCR确定基因插入位点”，体现探究实践素养|

2026年生物零诊考前练习2 一、选择题 1．关于“利用乳酸菌发酵制作酸奶或泡菜”的实验，下列叙述正确的是(　　) A．制作泡菜的菜料不宜完全淹没在煮沸后冷却的盐水中 B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌 C．发酵装置需加满菜料或牛奶并封装，以抑制乳酸菌的无氧呼吸 D．控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质 2．关于白酒、啤酒和果酒的生产，下列叙述错误的是(　　) A．在白酒、啤酒和果酒的发酵初期需要提供一定的氧气 B．白酒、啤酒和果酒酿制的过程也是微生物生长繁殖的过程 C．葡萄糖转化为乙醇所需的酶既存在于细胞质基质，也存在于线粒体 D．生产白酒、啤酒和果酒的原材料不同，但发酵过程中起主要作用的都是酵母菌 3．青岛有一种酸啤酒，该啤酒酿造方法简单易操作，酿造的酸啤酒香气丰富、酸度均衡，最终啤酒的整体风味与口感俱佳。具体流程如图，下列相关叙述正确的是(　　) A．麦芽汁能为酵母和乳酸菌的发酵提供碳源、氮源、水和无机盐 B．蒸煮可以使淀粉分解，形成糖浆，并对糖浆进行灭菌 C．发酵过程中要适时往外排气，发酵后期在低温、通气环境下进行 D．过滤消毒可杀死啤酒中的所有微生物，延长啤酒的保存期 4．某种含氮有机物的除草剂，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。其在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤，破坏生态环境。如图所示，为修复被破坏的生态环境，选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是(　　) A．有透明圈的菌落能够利用除草剂中的氮源，应扩大培养 B．图中培养基在各种成分溶化后先湿热灭菌再调节pH C．实验过程中需要将培养基调至中性或弱酸性 D．图中接种方法为平板划线法，可对细菌进行计数 5．青霉菌是一种好氧微生物，在青霉菌发酵时，在合成的开始阶段青霉素和头孢霉素有共同的前体，不久出现分支。生产抗生素的发酵罐如图所示，以下叙述正确的是(　　) A．由于青霉素的抗菌作用，通入发酵罐的空气不需要灭菌 B．搅拌能够使氧气与培养液快速混合，但不利于散热 C．将外源扩环酶基因导入青霉菌，可增加头孢霉素产量 D．青霉菌的发酵最终获得的青霉素是一种单细胞蛋白 6．我国科学家利用如图所示的液态厌氧发酵工艺，实现了利用乙醇梭菌高效产出乙醇和乙醇梭菌单细胞蛋白。下列叙述错误的是(　　) A．乙醇梭菌单细胞蛋白是通过发酵工程而生产的微生物次生代谢产物 B．乙醇梭菌以CO、CO2为主要的碳源，具有较强的固碳能力 C．乙醇梭菌是厌氧型细菌，其发酵的过程需要进行搅拌 D．通过该工艺高效生产清洁能源乙醇，可降低生态足迹 7．养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图示进行实验获得目的菌株，下列叙述正确的是(　　) A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 8．兰州百合栽培过程中易受病毒侵染，造成品质退化。某研究小组尝试通过组织培养技术获得脱毒苗，操作流程如图。下列叙述正确的是(　　) A．①为脱分化过程，1号培养基中的愈伤组织是排列规则的薄壁组织团块 B．②为再分化过程，愈伤组织细胞分化时可能会发生基因突变或基因重组 C．3号培养基用于诱导生根，其细胞分裂素浓度与生长素浓度的比值大于1 D．百合分生区附近的病毒极少，甚至无病毒，可以作为该研究中的外植体 9．石蒜碱是从石蒜等的鳞茎中提取的一种次生代谢物，用石蒜碱制成的内胺盐具有较强的抗肿瘤作用，常用于肿瘤的治疗。实验人员采用植物细胞悬浮培养技术生产石蒜碱的过程如图所示。下列相关叙述正确的是(　　) A．过程①为脱分化，通常用细胞分裂素和赤霉素进行诱导 B．过程②为了使细胞分散开，通常用胶原蛋白酶进行处理 C．过程③通过提取、分离和纯化的方法获取石蒜碱 D．图中生产石蒜碱的过程体现了植物细胞的全能性 10．植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如图所示。下列叙述错误的是(　　) A．过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两种亲本的细胞壁结构有差异 B．过程②中常采用灭活的仙台病毒或PEG诱导原生质体融合 C．过程④和⑤的培养基中均需要添加生长素和细胞分裂素 D．可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株 11．从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是(　　) A．传代培养时，培养皿需密封防止污染 B．选取①的细胞进行传代培养比②更合理 C．直接用离心法收集细胞进行传代培养 D．细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关 12．如图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是(　　) A．后代丁的遗传性状由甲和丙的遗传物质共同决定 B．过程①需要提供95%空气和5%CO2的混合气体 C．过程②常使用显微操作去核法对受精卵进行处理 D．过程③将激活后的重组细胞培养至原肠胚后移植 13．科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞(简称iPS细胞)，iPS细胞增殖分化后可形成多种组织细胞，用于多种疾病的治疗。如图为该技术的实验示意图，下列有关说法错误的是(　　) A．体外培养小鼠成纤维细胞和iPS细胞时，定期更换培养液可以清除细胞的代谢物 B．选取的小鼠成纤维组织需经胃蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液 C．iPS细胞用于疾病治疗时存在分化为肿瘤细胞的风险 D．若iPS细胞取自病人，经诱导并移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应 14．为了快速检测某病毒，以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，主要技术路线如图所示。下列叙述错误的是(　　) A．步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射的是抗原和杂交瘤细胞 B．步骤②所用的SP2/0细胞的生长特点是能在体外无限增殖 C．③④培养的目的是扩大杂交瘤细胞的数量 D．单克隆抗体可以运载药物，也可以用于治疗疾病 15．如图所示，核苷酸合成有两条途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。现用加入了H、A、T三种物质的HAT培养基来筛选杂交瘤细胞。下列相关说法错误的是(　　) A．已免疫的B淋巴细胞在HAT培养基中可大量增殖 B．用该培养基筛选出的能产抗体的杂交瘤细胞有多种 C．HAT培养基是选择培养基，可以满足部分细胞的生存 D．杂交瘤细胞中，“核苷酸→DNA”主要发生于分裂间期 16．在某药物研发过程中，需制备抗细胞膜蛋白N的抗体，流程如图所示。下列叙述错误的是(　　) A．取脾组织之前应用蛋白N对健康小鼠进行免疫 B．将培养B 淋巴细胞的培养瓶置于培养箱并通入无菌氧气 C．将杂交瘤细胞转入96孔板时，每个孔中尽量只接种一个细胞 D．将药物与抗蛋白N的单克隆抗体结合，可实现特异性治疗 17．乳腺癌化疗的药物在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，为降低药物对患者的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物(ADC)，过程如图所示。下列相关说法正确的是(　　) A．对过程①形成的融合细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可以获得能分泌所需抗体的细胞 B．ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，ADC起作用时会被细胞吞噬，并在溶酶体内被分解后释放药物 C．经步骤③筛选得到的杂交瘤细胞具有的特点是能准确识别抗原的细微差异并能大量制备 D．ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是药物能特异性地作用于乳腺癌细胞，避免其他细胞受损 18．甘加藏羊是甘肃高寒牧区的优良品种，是季节性发情动物，每年产羔一次，每胎一羔，繁殖率较低。为促进畜牧业发展，研究人员通过体外受精、胚胎移植等胚胎工程技术提高藏羊的繁殖率，流程如图。下列叙述错误的是(　　) A．藏羊甲需用促性腺激素处理使其卵巢卵泡发育和 超数排卵 B．藏羊乙的获能精子能与刚采集到的藏羊甲的卵母 细胞受精 C．受体藏羊丙需和藏羊甲进行同期发情处理 D．后代丁的遗传物质来源于藏羊甲和藏羊乙 19．我国科研团队利用体细胞核移植技术成功获得一批基因编辑克隆牛，实现了奶牛优良种质的高效扩繁。科研团队首先从高产奶牛耳部采集成纤维细胞进行培养，再将细胞核移植到去核卵母细胞中，从而构建重构胚，并移植到受体牛子宫内，最终获得克隆牛。下列相关叙述正确的是（　　） A．从高产奶牛耳部采集的成纤维细胞具有发育的全能性，可直接发育成完整个体 B．培养成纤维细胞时，若出现接触抑制现象，则常用胃蛋白酶处理后再进行传代培养 C．重构胚可以用电刺激或Ca2+载体等激活，使其完成细胞分裂和早期胚胎发育 D．克隆牛的核遗传物质与高产奶牛的完全一致，因此其性状与高产奶牛的完全相同 20．的基因A含有100对碱基，其中腺嘌呤占30%，现利用目的基因A片段两侧的特异性序列设计引物Ⅰ、引物Ⅱ，用PCR技术扩增该目的基因，结构如图所示。PCR扩增共循环50次。下列叙述错误的是(　) A．PCR仪实质上是一台温度自动调控仪器，循环50次理论上复制50代 B．含目的基因A的DNA片段经PCR循环50次，需要两种引物共250个 C．PCR过程与体内DNA复制的方式相同，但是只需要一种酶的参与 D．若只考虑目的基因A，经PCR循环50次需要鸟嘌呤(250－1)×40个 21．反向PCR是一种用于扩增已知序列两侧的未知序列的技术，需要先将目标DNA进行环化，再以环化的DNA为模板进行扩增。现利用反向PCR技术来确定目的基因的插入位点，部分过程如图所示，下列相关叙述正确的是(　　) A．过程②中根据目的基因两端的部分核苷酸序列设计引物2和3 B．过程③中复性是在72 ℃左右使两种引物与模板链结合 C．过程③所用的酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 D．PCR第二轮循环即可获得两条链等长的未知序列 22．某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。 下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是(　　) A．质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coli DNA连接酶连接 B．质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接 C．质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接 D．质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coli DNA连接酶连接 23．下列与DNA相关实验的叙述，错误的是（    ） A．DNA粗提取时，将洋葱研磨液过滤并冷藏静置后，再弃上清液 B．PCR扩增DNA时，可增设不加模板的对照组，检验PCR体系中是否有外源DNA的污染 C．具有相同碱基数量的环状DNA和链状DNA在同一电泳实验中的迁移速率不同 D．艾弗里的实验、赫尔希和蔡斯的实验均分别研究DNA和蛋白质各自的效应 24．下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是(　　) A．实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低 B．利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNA C．DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，该原理可用于纯化DNA粗提物 D．将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可检测溶液中是否含有蛋白质杂质 25．研究人员将目的基因插入质粒，构建重组质粒的过程如图所示，再将该重组质粒导入大肠杆菌中。由LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可分解X－gal产生蓝色物质，使菌落呈蓝色，否则菌落为白色。下列叙述错误的是(　　) A．将目的基因插入质粒中时，需要用到的酶有Xho Ⅰ、Nhe Ⅰ和DNA连接酶 B．需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于一种易于吸收周围环境中DNA分子的状态 C．按图示构建的重组质粒导入大肠杆菌后，大肠杆菌可正常表达该目的基因 D．在含X－gal的培养基上培养导入了重组质粒的大肠杆菌，可出现蓝色菌落 26．如图所示，研究人员将雪花莲凝集素基因(GNA)和尾穗苋凝集素基因(ACA)与载体(pBI121)结合，然后导入棉花细胞。下列操作不符合实验目的是(　　) A．用PCR技术可检测GNA和ACA基因是否导入棉花细胞中 B．将棉花细胞接种在含氨苄青霉素的培养基上可筛选出转基因细胞 C．用限制酶BsaBⅠ和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA—ACA融合基因 D．与只用KpnⅠ相比，KpnⅠ和XhoⅠ处理融合基因和载体可保证基因转录方向正确 27． Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因，筛选Bt基因后可以利用PCR技术对其进行大量扩增，下图为抗虫棉的培育过程，下列相关叙述错误的是（    ） A．PCR扩增Bt基因需要知道Bt基因的全部核苷酸序列 B．以上导入目的基因的方法是农杆菌转化法，农杆菌中Ti质粒上的T-DNA可转移 C．如果把目的基因整合到线粒体DNA或叶绿体DNA上，可能导致后代目的基因丢失 D．检测目的基因是否成功表达所用的分子水平上的方法之一为抗原—抗体杂交 28．利用转基因山羊乳腺生物反应器生产丁酰胆碱酯酶，可治疗有机磷中毒。下列叙述错误的是(　) A．应该用山羊乳腺中特异表达的基因的启动子构建基因表达载体 B．通过体细胞克隆可将丁酰胆碱酯酶基因传递给子代 C．通过显微注射技术将基因表达载体导入山羊乳腺细胞 D．山羊乳腺细胞可将肽链加工成具有一定空间结构的丁酰胆碱酯酶 29．为实现1型糖尿病人血糖浓度的“智能”调节，科学家设计了一种带“插头”与“插座”的蛋白质类药物，其工作原理如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．该药物的设计和改造，需通过蛋白质工程来实现 B．该药物可以直接口服，从而避免注射带来的痛苦 C．葡萄糖与分子“插座”结合后会导致该蛋白质失活 D．该蛋白质处于激活状态时，发挥与胰高血糖素相同的作用 30．下列关于转基因生物安全性的叙述，正确的是(　　) A．转基因作物种植区应与传统农业种植区混合 B．转基因作物被动物食用后，目的基因会转入动物体细胞中 C．种植转基因作物有可能因基因扩散而影响野生植物的遗传多样性 D．以转基因大豆为原料制成的大豆油在销售时不需要标注“转基因大豆” 31．转基因作物的推广种植，大幅提高了粮食产量，取得了巨大的经济效益和生态效益；硕果累累的转基因作物相关研究在带给人们喜悦的同时，也促使人们关注转基因作物的安全性问题。下列有关转基因作物安全性的叙述，错误的是(　　) A．抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染 B．转入抗性基因的植物可能成为“入侵物种”，影响生态系统的稳定性 C．大面积种植转基因抗虫棉，有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增加 D．只要目的基因来自自然界，培育出的转基因植物就不会有安全性问题 32．下列关于生物武器的相关叙述，错误的是(　　) A．生物武器种类包括致病菌、病毒、生化毒剂以及经过基因重组的致病菌 B．生物武器可以直接或者通过食物、生活必需品等散布到其他地方 C．经过基因重组的生物武器可能使受害国居民感染而施放者不易感染 D．世界各国达成协议仅允许少数国家保存和使用生物武器 二、填空题 33．生物技术在迅猛发展，它与人类的生活关系越来越密切，请回答下列有关生物技术与工程的问题。 I．如图1是谷氨酸发酵装置示意图，工业上常用谷氨酸棒状杆菌在30℃下发酵获得谷氨酸；如图2是谷氨酸生产的机理，谷氨酸棒状杆菌以葡萄糖为底物进行了如下过程： (1)图1中1、2处是发酵罐夹层中冷凝水的进出口，水在发酵罐夹层流动的作用是 。图1中3为搅拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是 。 (2)改变菌体细胞膜的通透性，及时排出谷氨酸是提升产量的关键措施之一，原因是 。 (3)对谷氨酸棒状杆菌进行硫酸二乙酯和紫外线相结合的复合诱变，经选育得到高产突变株LG-01。将其接种在含葡萄糖的液体培养基中，于30℃下培养48h。摇匀并取培养液稀释107倍后，向四个培养基中分别涂布0.1mL，四个培养皿中生长的菌落数依次为31个、33个、35个、33个，则稀释前菌液的菌体密度为_____个/mL，计算得到的值比实际值偏小。 Ⅱ．利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有重大意义。科研人员开展选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如图3。 (4)从物理状态来看CMC平板属于固体培养基。富集培养后的菌种常采用稀释涂布平板法或_____法接种于CMC平板，培养一段时间后，可根据菌落的 （写出一项）等特征，初步鉴定并挑取产纤维素酶菌株XZ-33。 (5)鉴定高产纤维素酶菌株是否产生，可使用刚果红平板法。其原理是纤维素被分解，刚果红无法与纤维素的分解产物结合，培养基中的菌落周围会形成透明圈，如图4。下列叙述错误的是_____（多选）。 A．采集的黑土壤需经过高压蒸汽灭菌再进行富集培养 B．配制CMC平板培养基需加入纤维素为唯一碳源 C．紫外线和γ射线处理可使产纤维素酶菌株发生基因突变和染色体畸变 D．图2中两个透明圈内的微生物均能将分解纤维素的酶分泌到细胞外 34．(14分)近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星(OFL)(C18H20FN3O4)是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株X。筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题： (1)利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是__________________________ _____________________________________，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。 (2)筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入____________作为唯一碳源或氮源。用于培养菌株X的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株X提供碳源、氮源和 ____________。 (3)过程Ⅱ、Ⅲ所利用的接种方法是____________。过程Ⅱ中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24 h统计一次菌落的数目，选取__________________________________________时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、163、154，故推测A中细菌的数量为________个·mL－1。 (4)该实验小组欲进一步探究初始OFL浓度对菌株X降解OFL能力的影响，请补充实验思路：配制等量的含一系列浓度梯度的OFL的液体培养基，将培养基灭菌后，在培养基中接种____________________ _________________________________，计算出OFL去除率。 35．(14分)两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞的染色体在融合前由于某种原因断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，过程如图1所示。 请回答下列问题： (1)过程①需要使用____________酶去除细胞壁。③要用到的方法有__________________ ______________________________________________________(物理法和化学法各举一例)。 (2)过程②紫外线的作用是________________________________________________。 (3)过程④培养基中需添加__________、无机盐、蔗糖等物质才能诱导愈伤组织形成，其中蔗糖的作用是__________________________________________(至少答出一点)。 (4)以普通小麦、中间偃麦草及再生植株1～4 的基因组 DNA 为模板扩增出差异性条带，可用于杂种植株的鉴定，结果如图2所示。据图判断，再生植株1～4中一定是杂种植株的有____________，判断依据是__________________________________________________。 36．(16分)嵌合抗原受体-T细胞(CAR-T细胞)疗法在人类肿瘤治疗中取得了重要突破。CAR-T细胞疗法是将CAR基因导入T细胞成为CAR-T细胞，通过CAR蛋白上的scFv肽链(小肽不足以发挥抗原作用，但能发挥抗体识别作用)特异性识别肿瘤细胞膜上的抗原，并通过CAR蛋白上的其他肽链结构激活CAR-T细胞继而杀伤肿瘤细胞。回答下列问题： (1)获得含有scFv肽链的单克隆抗体，流程如图。 ①图中通过驱动细胞和测试细胞反复免疫小鼠产生抗体的过程属于________(填“细胞”或“体液”)免疫，参与该过程的免疫细胞来源于小鼠骨髓__________。实验小鼠机体产生免疫应答的过程中，辅助性T细胞的主要作用__________________________________。 该实验最适用于筛选________(填标号)。 A．大鼠肝细胞区别于兔肝细胞特殊抗原的抗体 B．正常细胞区别于感染HIV细胞内特殊抗原的抗体 C．衰老神经细胞区别于正常神经细胞抗原的抗体 ②取第二组小鼠分离脾细胞，加入______________诱导脾细胞和骨髓瘤细胞的融合。 (2)CAR基因的构建，流程如图。 在设计添加CAR基因两端限制酶识别序列并与表达载体正确连接的过程中，必须考虑的有______(填标号)。 A．PCR使用的上、下游引物需含限制酶识别序列 B．CAR基因内可以含有引物所含限制酶识别序列 C．限制酶识别序列需位于载体启动子、复制原点和标记基因内 D．上、下游引物所含限制酶识别序列不同 E．CAR基因插入载体位点需位于启动子下游 (3)从免疫学角度分析，如果用高特异性抗体DNA直接构建CAR基因，再通过载体导入T细胞并稳定表达，不但会使治疗效果大幅降低，同时还会________________________________。 37．(16分)近年来由于栖息地丧失和人为捕猎，亚洲黑熊数量骤减，近日动物学家在某林地发现了少量野生亚洲黑熊。他们期望通过体外受精、胚胎移植等方法拯救亚洲黑熊，其过程如图所示。请回答下列问题： (1)若过程①代表体外受精，黑熊a通过超数排卵获得的细胞必须培养到________期，从黑熊c采集到的精子需要进行________处理才具备受精能力。受精过程中防止多精入卵的两道屏障是__________________ _________________________________________________。 (2)d受体雌性在接受胚胎之前，需要进行____________处理。胚胎移植的优势是____________ ___________________________________ (答出一点即可)。 (3)过程②普遍使用的方法是通过____________得到无核的卵母细胞。最终f的遗传物质来自________________。 (4)为了获得更多的胚胎，可以对过程①得到的胚胎进行胚胎分割，对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将____________________________。 38．(16分)大豆是重要的粮油作物，提高大豆产量是我国农业领域的重要任务。我国研究人员发现，基因S在大豆品种DN(种子较大)中的表达量高于品种TL(种子较小)，然后克隆了该基因(两品种中基因S序列无差异)及其上游的启动子序列，并开展相关研究。 (1)基因S启动子的基本组成单位是____________。 (2)通过基因工程方法，将DN克隆的“启动子D＋基因S”序列导入无基因S的优质大豆品种YZ。根据题图所示信息(不考虑未标明序列)判断构建重组表达载体时，为保证目标序列的完整性，不宜使用的限制酶是____________；此外，不宜同时选用酶SpeⅠ和XbaⅠ，原因是_____________________________________ _________________________________。 (3)为验证“启动子D＋基因S”是否连接在表达载体上，可用限制酶对重组表达载体酶切后进行电泳。电泳时，对照样品除指示分子大小的标准参照物外，还应有_________________________________。 经验证的重组表达载体需转入农杆菌，检测转入是否成功的技术是______________。 (4)用检测后的农杆菌转化品种YZ所得再生植株YZ－1的种子变大。同时将从TL克隆的“启动子T＋基因S”序列成功导入YZ，所得再生植株YZ－2的种子也变大，但小于YZ－1。综合分析，大豆品种DN较TL种子大的原因是____________________________________________________________。 39．丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域，其生产过程有生物法、化学法、副产品回收法等。某兴趣小组采用生物法在已改造的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。 (1)扩增X基因时，PCR反应中需要使用TaqDNA聚合酶，原因是_______________________________ _____________________________。 (2)研究人员使用BamHⅠ和SalⅠ限制酶处理质粒和X基因，连接后转化大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上（如图）。同时使用BamHⅠ和SalⅠ限制酶处理质粒和X基因的优点____________________________________ _______________________________（答出两点即可）。 (3)影印法是微生物学中常用的一种培养方法，该方法通过比对各培养皿在相同位置出现的菌落，从而筛选出适当的菌株。该兴趣小组为筛选出含目的基因的菌株又进行了一系列操作： 步骤1：在平板中添加_________（填“氯霉素”或“四环素”），筛选出能在该平板上生长的大肠杆菌。 步骤2：利用影印法，让一块无菌丝绒布接触步骤1中含有大肠杆菌菌落的平板表面，使之定位沾上菌落印迹，然后平移并压在另一个含________（填“氯霉素”或“四环素”）的培养基中，培养至菌落显现。最终导入了含X基因的重组质粒的大肠杆菌菌落应该从含_______（填“氯霉素”或“四环素”）的培养基中获取，理由是_________________________________________________________________________________。 (4)将基因表达载体导入大肠杆菌前，一般先用______（填物质）处理大肠杆菌，然后在含有____________的培养基中筛选得到符合生产要求的大肠杆菌。 (5)为检测基因X（表达产物为蛋白质）的表达情况，可以采用_____________________方法检测从受体大肠杆菌提取的蛋白质。 40． RCA是一种核基因(rca)编码的叶绿体蛋白。为研究RCA对光合作用的影响及机理，科研人员构建反义rca基因表达载体(rca基因反向插入表达载体)，利用农杆菌转化法导入大豆细胞，成功获得rca基因沉默的转基因品种，如图所示，①～⑥表示相关过程。请分析回答： 注：Hygr：潮霉素抗性基因　　Kanr：卡那霉素抗性基因 限制酶：XhoⅠ：5′C↓TCGAG3′；BamHⅠ：5′G↓GATCC3′；SalⅠ：5′G↓TCGAC3′；BglⅡ：5′A↓GATCT3′ C4pdk启动子：受光诱导的强启动子，驱动基因在大豆叶肉细胞中特异表达 LB：TDNA左边界　　RB：TDNA右边界 (1)过程①一般从____________细胞中提取总RNA，参与该过程的酶有________________，其产物中________(填“含有”或“不含有”)启动子、终止子和内含子序列。 (2)已知①过程rca基因的a链和获取它的模板mRNA互补，反义rca基因的模板链为_______（填a链或b链），反义rca基因的_______端（填N或M）接在C4pdk启动子的后面。依据图1中给出的引物1设计区的碱基序列及限制酶的信息，写出引物1的碱基序列5′ 3′(只写出前8个碱基即可)。 (3)过程②用C4pdk启动子替换Ti质粒上原有启动子的目的是____________________________，⑤过程后可用含________的培养基筛选出转化成功的大豆细胞。分子水平上转基因大豆培育成功的标志是______________。 (4)科研人员将野生型大豆和转基因大豆在适宜的光照条件下进行培养，一段时间后分别测定相关指标，结果如图2。据图分析，RCA对大豆的光合作用具有________(填“促进”或“抑制”)作用，其机理主要是通过______________________________来影响光合作用强度。 2026年生物零诊考前练习2 1．答案　D 解析　为制造无氧环境制作泡菜的菜料要完全淹没在煮沸后冷却的盐水中，A错误；制作酸奶的牛奶不需要经过高压蒸汽灭菌，否则会破坏牛奶的营养成分，B错误；发酵装置中泡菜装至八成满，制作酸奶时倒入的奶液量不要超过奶瓶容积的2/3，制作酸奶或泡菜时需要促进乳酸菌的无氧呼吸，C错误；制作酸奶或泡菜时，控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质，D正确。 2．答案　C 解析　在白酒、啤酒和果酒的发酵初期需要提供一定的氧气，让酵母菌大量繁殖，再进行酒精发酵，A正确；白酒、啤酒和果酒酿制的过程也是微生物生长繁殖的过程，如发酵初期酵母菌大量繁殖，B正确；葡萄糖转化为乙醇的过程发生在细胞质基质中，所需的酶存在于细胞质基质中，不存在于线粒体，C错误；生产白酒一般使用高粱，啤酒一般使用麦芽，果酒则使用对应的水果，但在发酵过程中都主要依赖酵母菌产生酒精，D正确。 3．答案　A 解析　麦芽汁中含有丰富的糖类，还含有一些蛋白质、无机盐，可以为酵母和乳酸菌的发酵提供碳源、氮源、水和无机盐，A正确；蒸煮不是使淀粉分解，形成糖浆，B错误；发酵过程中由于酵母菌无氧呼吸会产生CO2，所以要适时往外排气，主发酵结束后，发酵液还要在低温、密闭的环境中储存一段时间进行后发酵，C错误；过滤消毒只能杀死啤酒中大部分的微生物，D错误。 4．答案　A 解析　含该除草剂的培养基是不透明的。如果某个菌落周围出现透明圈，说明该菌落能够利用除草剂，从而使培养基中的除草剂被降解，形成透明圈，这表明这些细菌能够利用除草剂中的氮源进行生长。因此，这些菌落是目标菌株，应该被扩大培养，A正确；在微生物实验中，培养基的灭菌通常是在调pH后进行的，调pH前灭菌可能导致培养基再次被污染，B错误；实验筛选的是细菌，需要将培养基调至中性或弱碱性，C错误；平板划线法的主要目的是分离单个菌落，而不是计数。细菌计数通常采用稀释涂布平板法。因此，平板划线法不能用于计数，D错误。 5．答案　C 解析　青霉素本身具有杀菌作用，但不能杀灭所有的微生物，因此，发酵罐需要严格灭菌，通入发酵罐的空气也需灭菌，A错误；搅拌能够使氧气与培养液快速混合，同时有利于散热，B错误；在青霉菌发酵时，在合成的开始阶段青霉素和头孢霉素有共同的前体，将外源扩环酶基因导入青霉菌，可增加头孢霉素产量，C正确；微生物菌体本身属于单细胞蛋白，青霉素不是单细胞蛋白，D错误。 6．答案　A 解析　单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量微生物菌体，不是微生物的次生代谢产物，A错误；据图可知，乙醇梭菌发酵时，培养基中仅含无机盐，可以以工业尾气中的CO、CO2为碳源合成乙醇及蛋白质，具有较强的固碳能力，B正确；据图可知，乙醇梭菌发酵为厌氧发酵，说明乙醇梭菌为厌氧菌，发酵过程同样需要进行搅拌，C正确；通过该工艺，可利用乙醇梭菌将工业尾气中的CO、CO2为碳源合成乙醇及蛋白质，既实现高效生产清洁能源乙醇，又能够有效净化工业尾气，减轻环境污染，降低生态足迹，D正确。 7．答案　C 解析　平板划线法不需要稀释，A错误；由图可知，②筛选不能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误；所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或能分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙，C正确；由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株，粪便中添加菌株乙能抑制其他菌株产生的脲酶活性，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。 8．答案　D 解析　观察题图可知，分生组织经过程①获得愈伤组织，因此①为脱分化，1号培养基中的愈伤组织是不定形(排列不规则)的薄壁组织团块，A错误；愈伤组织经过程②长出芽，因此②为再分化，愈伤组织细胞分化时可能会发生基因突变，但基因重组发生在减数分裂过程中，而愈伤组织细胞的分化是有丝分裂过程，所以不会发生基因重组，B错误；3号培养基用于诱导生根，其细胞分裂素浓度与生长素浓度的比值应该小于1，C错误。 9．答案　C 解析　愈伤组织的诱导(过程①)通常需外源生长素和细胞分裂素配合使用，并非细胞分裂素和赤霉素，A错误；将愈伤组织分散成单个悬浮细胞(过程②)时常用纤维素酶和果胶酶处理，胶原蛋白酶主要用于动物细胞消化，B错误；石蒜碱是从石蒜等的鳞茎中提取的一种次生代谢物，可以从悬浮培养的细胞中经提取、分离和纯化获得石蒜碱，实现细胞产物的工厂化生产，C正确；图中仅体现了外植体脱分化并利用细胞生产次生代谢物，并未形成完整个体或分化为其他各种细胞，不能体现植物细胞的全能性，D错误。 10．答案　B 解析　酶解是为了去除植物细胞的细胞壁，过程①中酶处理的时间不同，说明两种亲本的细胞壁结构有差异，A正确；过程②为原生质体的融合，常用化学试剂如PEG诱导原生质体融合，灭活的仙台病毒可诱导动物细胞融合，不能用于植物原生质体融合，B错误；过程④脱分化和⑤再分化的培养基中均需要添加生长素和细胞分裂素，但二者在两过程中的比例不同，C正确；植物丙是植物甲和植物乙体细胞杂交形成的个体，应具备两者的遗传物质，因此可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株，D正确。 11．答案　D 解析　传代培养时需要营造无菌、无毒以及95%空气＋5%CO2的气体环境，而非密封，A错误；①的细胞还未快速增长，此时进行传代培养没有意义，应选②的细胞进行传代培养，B错误；对于贴壁生长的细胞进行传代培养时，先需要用胰蛋白酶等处理，使之分散为单个细胞，然后再用离心法收集，之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养，C错误。 12．答案　B 解析　后代丁的细胞核的遗传物质来自甲，细胞质的遗传物质来自乙，则丁的遗传性状由甲和乙的遗传物质共同决定，A错误；动物细胞培养中需要提供95%空气(保证细胞的有氧呼吸)和5%CO2(维持培养液的pH)的混合气体，B正确；过程②常使用显微操作去核法对卵母细胞进行处理，C错误；过程③将激活后的重组细胞培养至囊胚或桑葚胚后移植，D错误。 13．答案　B 解析　选取的小鼠成纤维组织需经胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液，由于动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，B错误。 14．答案　C 解析　步骤①是向小鼠注射抗原(病毒外壳蛋白A)，刺激小鼠产生能分泌特异性抗体的B淋巴细胞；步骤⑤是将筛选出的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔中，最终可在腹水中收集到大量单克隆抗体，A正确。步骤②所用的 SP2/0 细胞是骨髓瘤细胞，其生长特点是能在体外无限增殖，B正确。步骤③用特定的选择培养基进行筛选，在该选择培养基上，只有融合的杂交瘤细胞才能够生长，没有融合的细胞及同种核融合的细胞不能生长，因此步骤③培养的目的是获得杂交瘤细胞；步骤④是将杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞，C错误。单克隆抗体特异性强、灵敏度高，可运载药物制成“生物导弹”，也可直接用于治疗疾病，D正确。 15．答案　A 解析　免疫的B淋巴细胞因高度分化而不能大量增殖，A错误；用该培养基筛选出的能产抗体的杂交瘤细胞有多种，所以需进一步筛选后才能获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，B正确；HAT培养基是选择培养基，可以满足部分细胞的生存，如杂交瘤细胞，C正确；杂交瘤细胞中，“核苷酸→DNA”即DNA复制过程，主要发生于分裂间期，D正确。 16．答案　B 解析　将培养B 淋巴细胞的培养瓶置于二氧化碳培养箱中进行培养，其中存在氧气，不需要专门通入无菌氧气，B错误。 17．答案　B 解析　经过程①形成的融合细胞有同种核两两融合和不同核融合细胞，需要经过特定的选择性培养基筛选，A错误；步骤③是抗体检测，得到的杂交瘤细胞既能大量增殖又能产生专一性抗体，C错误；ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是抗体能特异性地作用于乳腺癌(靶)细胞，避免其他细胞受损，D错误。 18．答案　B 解析　胚胎移植过程中，需对供体(母藏羊甲)用外源促性腺激素处理，促使其卵巢卵泡发育和超数排卵，A正确；从卵巢中刚采集的卵母细胞需培养成熟(减数分裂Ⅱ中期)后才可与获能的精子进行体外受精，B错误；在胚胎移植前要对接受胚胎的受体和供体进行同期发情处理，使受体的生理状况与供体相同，因此受体藏羊丙需和藏羊甲进行同期发情处理，C正确；后代丁是由藏羊甲的卵细胞和藏羊乙的精子结合形成的受精卵发育而来，因此后代丁的遗传物质来源于藏羊甲和藏羊乙，D正确。 19．【答案】C 【详解】A、高度分化的动物体细胞的全能性受到限制，只有细胞核具有全能性，成纤维细胞是高度分化的体细胞，无法直接发育为完整个体，A错误； B、动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4，胃蛋白酶在该pH条件下会失活，出现接触抑制时需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理后再传代培养，B错误； C、构建的重构胚需要通过物理法（如电刺激）或化学法（如Ca²⁺载体等）进行激活，才能诱导其完成细胞分裂和早期胚胎发育，C正确； D、克隆牛的核遗传物质来自高产奶牛，但细胞质遗传物质来自提供去核卵母细胞的个体，同时性状还受环境因素影响，因此其性状不会和高产奶牛完全相同，D错误。 20．答案　B 解析　PCR的实质是DNA的半保留复制，该过程需经过高温变性、低温复性、中温延伸，PCR仪实质上是一台温度自动调控仪器，循环50次理论上复制50代，A正确；含目的基因A的DNA片段经PCR循环50次，产生250个子代DNA，每个DNA分子需要2个引物，亲本DNA除外，故需要两种引物共(251－2)个，B错误；PCR过程与体内DNA复制的方式相同，都是半保留复制，但是只需要耐高温的DNA聚合酶的参与，C正确；由题意可知，目的基因A含有100对碱基，其中腺嘌呤占30%，则G占20%，为40个，若只考虑目的基因A，经PCR循环50次需要鸟嘌呤(250－1)×40(个)，D正确。 21．答案　C 解析　反向PCR是扩增已知序列两侧的未知序列，过程②设计引物时，应根据已知序列(目的基因两侧的部分核苷酸序列)来设计引物1和4，而不是引物2和3，A错误；PCR过程中，复性的温度一般在50 ℃左右，而72 ℃左右是延伸的温度，B错误；DNA聚合酶只能从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸，过程③PCR所用的酶也是从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸，C正确；PCR至少要到第三轮循环才可获得两条链等长的DNA片段，所以PCR第二轮循环不能获得两条链等长的未知序列，D错误。 22．答案　C 解析　酶3切割后得到的是平末端，应该用T4 DNA连接酶连接，A不符合题意；质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到黏性末端，二者不能连接，B不符合题意；质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4 DNA连接酶连接后，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此重组表达载体的构建方案最合理且高效，C符合题意；若用酶2和酶4切割质粒和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少标记基因，无法进行后续的筛选，D不符合题意。 23．【答案】A 【详解】A、DNA粗提取时，洋葱研磨液过滤后冷藏静置的目的是使不溶性杂质沉淀，DNA溶解于上清液中，实验中需取上清液进行后续操作，而非弃上清液，A错误； B、PCR扩增DNA时，若不加模板的对照组也得到了扩增产物，说明PCR体系存在外源DNA污染，增设该对照组可检验体系的污染情况，B正确； C、碱基数量相同的环状DNA和链状DNA的空间构象不同，电泳过程中受到的阻力不同，因此迁移速率不同，C正确； D、艾弗里的实验将S型细菌的DNA、蛋白质、多糖等物质分开，单独研究各类物质的转化效应；赫尔希和蔡斯的实验用同位素标记法分别标记DNA和蛋白质，单独观察二者在噬菌体侵染细菌过程中的作用，两个实验均分别研究了DNA和蛋白质各自的效应，D正确。 24．答案　D 解析　研磨液中含有NaCl，有利于DNA的溶解，若换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低，A正确；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，因此利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNA，B正确；DNA在NaCl溶液中的溶解度随着NaCl浓度的变化而改变，因此可用不同浓度的NaCl溶液对DNA进行粗提取，C正确；在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺试剂可用于鉴定DNA，不能检测溶液中是否含有蛋白质杂质，D错误。 25．答案　C 解析　按图示构建的重组质粒导入大肠杆菌后，由于目的基因的转录方向和启动子的方向相反，大肠杆菌不能正常表达该目的基因，C错误；重组质粒含有LacZ基因，其编码产生的β-半乳糖苷酶可分解X－gal产生蓝色物质，故在含X－gal的培养基上培养导入了重组质粒的大肠杆菌，可使菌落呈蓝色，D正确。 26．答案　B 解析　根据GNA－ACA融合基因的两端序列设计合适的引物，可以利用PCR技术检测GNA和ACA基因是否导入棉花细胞的染色体DNA上，A正确；由于重组质粒含有卡那霉素抗性基因，故将棉花细胞接种在含卡那霉素的培养基上可筛选出转基因细胞，B错误；GNA和ACA基因均有BsaB Ⅰ酶切位点，所以用限制酶 BsaB Ⅰ和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA－ACA融合基因，C正确；图中质粒与GNA－ACA融合基因上都含有KpnⅠ和XhoⅠ的酶切位点，与只用KpnⅠ相比，Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ处理融合基因和载体可保证基因转录方向正确，D正确。 27． 【答案】A 【详解】A、PCR扩增目的基因时，只需要知道目的基因两端的核苷酸序列来合成引物，不需要知道目的基因的全部核苷酸序列，A错误； B、图示导入目的基因的方法是农杆菌转化法，农杆菌Ti质粒上的T-DNA是可转移DNA，能携带目的基因转移并整合到受体细胞的染色体DNA上，B正确； C、线粒体/叶绿体DNA属于细胞质DNA，减数分裂产生配子时细胞质DNA随机分配，因此将目的基因整合到细胞质DNA上，后代可能发生目的基因丢失，C正确； D、目的基因表达的最终产物是蛋白质，分子水平检测目的基因是否成功翻译出蛋白质，常用方法是抗原—抗体杂交，D正确。 28．答案　C 解析　要得到转基因山羊乳腺生物反应器，在构建基因表达载体时需要山羊乳腺中特异表达的基因的启动子，使目的基因只在乳腺细胞中表达，A正确；通过显微注射技术将基因表达载体导入山羊的受精卵中，C错误；山羊乳腺细胞中含有内质网和高尔基体，可将肽链加工成具有一定空间结构的丁酰胆碱酯酶，D正确。 29．【答案】A 【详解】A、该药物是一种带“插头”与“插座”的蛋白质类药物，其设计和改造需要通过蛋白质工程来实现，A正确； B、蛋白质类药物口服会被消化道内的蛋白酶分解，从而失去活性，不能发挥作用，所以不能直接口服，B错误； C、由图可知，葡萄糖与分子“插座”结合后会使该蛋白质处于激活状态，而不是失活，C错误； D、在高血糖时，该蛋白质分子处于激活状态，会降低血糖浓度，而胰高血糖素的作用是升血糖，两者作用相反，D错误。 30．答案　C 解析　科学家在培育转基因植物时，常通过农杆菌的转化作用使目的基因进入受体细胞，若转基因作物种植区与传统农业种植区混合，就容易经农杆菌的作用将相关基因转入传统作物，导致基因扩散，也可能会影响到野生植物的基因库，从而改变野生植物的遗传多样性，A错误，C正确；转基因作物被动物食用后，相关基因会被分解成核苷酸，因此不会转入动物体细胞中，B错误；我国为加强对农业转基因生物的标识管理，实行了相应标识制度，如以转基因大豆为原料制成的大豆油，需要标注为“转基因大豆加工品(制成品)”或者“加工原料为转基因大豆”，D错误。 31．答案　D 解析　即使目的基因来自自然界，培育出的转基因植物仍然可能会有安全性问题，D错误。 32．答案　D 二、填空题 33．【答案】(1) 使温度控制在30℃（利于谷氨酸棒状杆菌发酵） 谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物（或搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵） (2)若谷氨酸积累过量，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性（从而导致该合成途径中断） (3) 3.3×109 (4) 平板划线 颜色（或形状、隆起程度） (5) AC 34．答案　(1)抗生素会抑制细菌的生长繁殖　 (2)OFL　维生素　 (3)稀释涂布平板法　菌落数目稳定　1.54×1011　 (4)等量的菌株X，检测OFL的降解程度 35．答案　(1)纤维素酶和果胶　离心法、电融合法、PEG融合法、高Ca2＋－高pH融合法　 (2)使中间偃麦草的染色体断裂　 (3)植物激素　提供营养物质和调节渗透压　 (4)1、2、4　它们同时具有普通小麦和中间偃麦草的DNA片段 36．答案　(1)①体液　造血干细胞　分泌细胞因子，促进B细胞增殖分化，同时其受刺激后细胞表面的分子发生特异性变化后与B细胞接触，参与B细胞的激活　AB　②聚乙二醇　 (2)ADE　 (3)导致CAR蛋白攻击其他正常细胞，使机体受损 37．答案　(1)MⅡ　获能　透明带反应；卵细胞膜反应　 (2)同期发情　可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力；大大缩短了供体本身的繁殖周期；使供体的后代数是自然繁殖的十几倍到几十倍　 (3)显微操作　黑熊a和黑熊b　(4)内细胞团均等分割 38．答案　(1)脱氧核糖核苷酸(脱氧核苷酸)　 (2)EcoR Ⅰ　酶切后形成的片段黏性末端相同，易自我环化；不能保证目标片段与载体定向链接(反向链接)　 (3)酶切后的空载体片段，启动子D＋基因S片段　PCR　 (4)品种DN的基因S上游启动子效应比TL强，使得基因S表达量更高，种子更大 解析　(1)启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，用于驱动基因转录，是一段有特殊序列结构的DNA片段，其基本组成单位是四种脱氧核糖核苷酸。(2)根据图示信息可知，“启动子D＋基因S”的DNA序列上存在EcoR Ⅰ的识别序列，若使用限制酶EcoR Ⅰ，会使目的基因序列被破坏；根据图中限制酶的识别序列可知，酶Spe Ⅰ和Xba Ⅰ切割产生的黏性末端相同，若用这两种限制酶切割，形成的DNA片段在构建基因表达载体时，容易出现自我环化，以及无法保证目的基因片段与载体片段单向连接，影响目的基因在受体细胞中的表达。(3)DNA电泳可以分离不同大小的DNA片段，用限制酶对重组表达载体酶切后的产物不仅有“启动子D＋基因S”片段，还有酶切后的空载体片段，因此电泳时，对照样品除指示分子大小的标准参照物外，还应有酶切后的空载体片段和“启动子D＋基因S”片段；在分子水平上检测目的基因是否转入成功可通过PCR等技术检测受体细胞的染色体DNA上是否插入目的基因或目的基因是否转录出mRNA。(4)根据(4)题目信息可知，再生植株YZ－1导入的目的基因为取自品种DN的“启动子D＋基因S”序列，再生植株YZ－2导入的目的基因为取自品种TL的“启动子T＋基因S”序列，结合题干信息“两品种中基因S序列无差异”可推测：品种DN的基因S上游的启动子D的效应强于品种TL的启动子T，启动子D使基因S表达量更高，因而种子更大。 39．【答案】(1)在PCR反应温度较高，TaqDNA聚合酶热稳定性高（在高温条件下依然具有活性） (2)防止X基因自身环化、防止X基因反向接入质粒中（防止X基因反向连接） (3) 氯霉素 四环素 氯霉素 由于限制酶 BamHI和SalI破坏了质粒上的四环素抗性基因，因此含外源DNA的重组质粒不能在添加了四环素的培养基中生长 (4) Ca2+ 氯霉素 (5) 抗原-抗体杂交 【详解】（1）在PCR中，需要90℃以上的高温使DNA双链解旋，普通的DNA聚合酶在高温下会变性失活，而TaqDNA聚合酶能够耐高温，因此PCR反应中需要使用TaqDNA聚合酶。 （2）同时使用BamHI和SalI限制酶处理质粒和X基因，可以使质粒和X基因都具有两个不同的黏性末端，从而可以防止X基因自身环化，防止X基因反向接入质粒中（防止X基因反向连接）。 （3）使用BamHI和SalI限制酶处理质粒和X基因，四环素抗性基因被破坏，氯霉素抗性基因保留，因此含目的基因的菌株能在氯霉素培养基上生存，不能在四环素培养基上生存的大肠杆菌。实验思路是：在平板中添加氯霉素，筛选出能在该平板上生长的大肠杆菌，利用影印法，让一块无菌丝绒布接触步骤1中含有大肠杆菌菌落的平板表面，使之定位沾上菌落印迹，然后平移并压在另一个含四环素的培养基中，培养至菌落显现，由于限制酶 BamHI和SalI破坏了质粒上的四环素抗性基因，因此含外源DNA的重组质粒不能在添加了四环素的培养基中生长，故最终导入了含X基因的重组质粒的大肠杆菌菌落应该从含氯霉素的培养基中获取。 （4）基因表达载体导入大肠杆菌前，一般先用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后在含有氯霉素的培养基中筛选得到符合生产要求的大肠杆菌。 （5）为检测基因（表达产物为蛋白质）的表达情况，可采用抗原-抗体杂交方法检测从受体大肠杆菌中提取的蛋白质。 40．【答案】(1)大豆叶肉 反(逆)转录酶、TaqDNA聚合酶 不含有 (2) b N 5´­­AGATCTGT-3´ (3) 驱动目的基因在光诱导下在叶肉细胞中特异性表达 潮霉素 RCA表达量减少 (4) 促进 RCA可提高Rubisco活力(促进暗反应)，进而提高光合速率 【详解】（1）RCA 是叶绿体蛋白，其基因在叶肉(含叶绿体的)细胞中表达，故从大豆叶肉细胞提取总RNA；过程①是反转录PCR，反(逆)转录酶、TaqDNA聚合酶；cDNA 由mRNA反转录而来，不含有启动子、终止子和内含子序列。 （2）①过程rca基因的a链和获取它的模板mRNA互补，则a链是模板链，反义 rca 基因需要转录出和 rca mRNA 互补的 RNA，所以它的模板链要和原 rca 的模板链相反，也就是用b链作为反义基因的模板链（这样转录出的 RNA 才会和原 mRNA 互补）。启动子驱动基因从 5' 到 3' 转录。原 rca 基因的 N 端是转录的起始端（靠近启动子的一端），要构建反义基因，需要把N 端接在 C4pdk 启动子后面，这样转录出的 RNA 才能和原 rca 的 mRNA 反向互补，发挥沉默作用。质粒上用BamH I和Sal I切割，rca基因用Bgl Ⅱ（与BamH I属于同尾酶）和Xho I（与Sal I产生相同的黏性末端）切割，由于目的基因是反向接入，所以目的基因M端连接Xho I识别序列，N端连接Bgl Ⅱ识别序列。引物1需与模板链互补，且要引入限制酶识别位点，结合图中引物1的设计区域碱基序列和Bgl Ⅱ的识别序列可知，引物1的碱基序列应该是5´­­­­-AGATCTGT-3´。 （3）C4pdk启动子是光诱导的叶肉细胞特异启动子，替换后可驱动目的基因在光诱导下在叶肉细胞中特异性表达；表达载体含潮霉素抗性基因，故用含潮霉素的培养基筛选；分子水平上，转基因成功的标志是rca基因沉默，即RCA表达量减少。 （4）转基因大豆（rca 基因沉默）的光合速率、Rubisco活力均低于野生型，说明RCA能促进光合作用，主要通过提高Rubisco活力实现。 ( 2 )原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！ 学科网（北京）股份有限公司 $