精品解析：北京市石景山区2025—2026学年高二下学期期末考试生物试题

2025-2026学年第二学期高二期末试卷 生物学 本试卷满分为100分，考试时间为90分钟。其中Ⅰ卷共90分，共9页，Ⅱ卷共10分。 Ⅰ卷 第一部分 本部分共15题，每小题2分，共30分。在每题列出的四个选项中，选出最符合题目要求的一项。 1. 近年来，我国通过建立大熊猫国家公园、东北虎豹国家公园等自然保护地体系，有效保护了珍稀物种及其栖息地。这一做法主要体现了生物多样性保护策略中的（ ） A. 离体保存 B. 就地保护 C. 易地保护 D. 生态修复 【答案】B 【解析】 【详解】A、离体保存主要通过保存遗传材料（如种子库）实现，A错误； B、建立国家公园或自然保护区属于就地保护，即在物种原生境中对其进行保护，维持生态系统完整性，是生物多样性保护最有效的方式之一，B正确； C、易地保护指将物种迁出原生地，在异地（如动物园、植物园）进行专门保护，C错误； D、生态修复侧重于受损生态系统的恢复，不能有效保护珍稀物种及其栖息地，D错误。 2. 蜜蜂在找到蜜源后，通过跳圆圈舞或摆尾舞向同伴传递蜜源信息：圆圈舞表明蜜源较近，大约距蜂箱百米以内；摆尾舞则表明蜜源在百米之外的远处，且距离远近与摆尾的速度有关。下列有关叙述不正确的是（ ） A. 蜜蜂跳的圆圈舞或摆尾舞是典型的行为信息 B. 各种信息传递保证了蜜蜂生命活动的正常进行 C. 生态系统中的信息传递只发生在生物和生物之间 D. 果园中制造与蜜蜂跳舞相同频率的振动有助于提高果实产量 【答案】C 【解析】 【详解】A、动物的特殊行为可向同种或异种生物传递信息，属于行为信息，蜜蜂的圆圈舞、摆尾舞是典型的行为信息，A正确； B、信息传递是生态系统的重要功能之一，生命活动的正常进行离不开信息的作用，各类信息传递可保证蜜蜂生命活动正常开展，B正确； C、生态系统中的信息传递既可以发生在生物与生物之间，也可以发生在生物与无机环境之间，例如光照时长作为信息可调控植物开花，C错误； D、与蜜蜂跳舞相同频率的振动可传递类似蜜源存在的信息，吸引更多蜜蜂进入果园帮助果树传粉，提高结实率进而提升果实产量，D正确。 3. 某平台推出的一项公益行动中，用户通过低碳行为积攒的“绿色能量”，可用于在现实区域种树或保护栖息地。下列有关生态足迹的说法，不正确的是（ ） A. 生态足迹又称碳足迹，其值越大代表人类所需的资源越多 B. 在荒漠化地区植树造林，可增加当地的生态承载力 C. 用步行替代驾车出行，有助于降低个人的生态足迹 D. 若某地区生态足迹总量大于生态承载力总量，会形成生态赤字 【答案】A 【解析】 【详解】A、生态足迹是维持某一人口单位生存所需的生产资源和吸纳废物的土地及水域的总面积，碳足迹只是生态足迹的组成部分之一，二者不能等同，A错误； B、生态承载力是区域生态系统能持续提供资源、吸纳废物的能力，荒漠化地区植树造林可提升生态系统功能，增加当地生态承载力，B正确； C、步行替代驾车可减少碳排放、降低能源消耗，能减少个人生存所需的资源和吸纳废物的面积，有助于降低个人生态足迹，C正确； D、若某地区生态足迹总量大于生态承载力总量，说明区域资源供给、废物吸纳能力不足以支撑人类需求，会形成生态赤字，D正确。 4. 下图是某鱼塘生态系统能量流动过程中部分环节，图中数字表示能量数值（单位103kJ·m−2·a−1）。下列说法不正确的是（ ） A. 图中A代表的生理过程是呼吸作用 B. 该生态系统中生产者固定的总能量为9.6×104  kJ·m−2·a−1 C. 能量流动具有单向性的原因是捕食关系不可逆转 D. 肉食性动物从植食性动物同化的能量为2.5×103  kJ·m−2·a−1 【答案】B 【解析】 【详解】A、图中生产者、植食性动物、肉食性动物均有能量流向A，该部分能量是各营养级通过呼吸作用以热能形式散失的能量，因此A代表呼吸作用，A正确； B、先计算肉食性动物总同化量：（单位：），减去人工输入的能量5，可得肉食性动物从植食性动物获得的能量为；再计算植食性动物总同化量：，减去人工输入的能量2，可得植食性动物从生产者获得的能量为；生产者固定的总能量为呼吸散失、流向分解者、未利用、流向植食性动物的能量之和，即（单位：），也就是，B错误； C、能量流动沿食物链进行，捕食关系是长期自然选择的结果，不可逆转，因此能量只能从低营养级流向高营养级，这是能量流动单向性的核心原因之一，C正确； D、由B选项的计算过程可知，肉食性动物从植食性动物同化的能量为，D正确。 5. 下列关于传统发酵技术的叙述，不正确的是（ ） A. 醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸 B. 酵母菌在无氧条件下利用葡萄汁产生酒精 C. 泡菜腌制利用的乳酸菌是厌氧细菌 D. 腐乳制作利用毛霉等微生物将蛋白质分解 【答案】A 【解析】 【详解】A、醋酸菌是好氧细菌，代谢过程必须有氧气参与，仅能在有氧条件下利用乙醇产生醋酸，无氧条件下醋酸菌无法正常代谢甚至死亡，A错误； B、酵母菌是兼性厌氧菌，无氧条件下可通过无氧呼吸将葡萄汁中的葡萄糖分解为酒精和二氧化碳，B正确； C、泡菜腌制的核心菌种是乳酸菌，乳酸菌属于厌氧细菌，无氧条件下呼吸产生乳酸赋予泡菜特殊风味，C正确； D、腐乳制作的主要微生物是毛霉，毛霉等微生物分泌的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，提升腐乳营养价值和风味，D正确。 6. 瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊器官，其中生活着多种微生物。下图表示从牛的瘤胃中分离和鉴定纤维素分解菌。下列叙述正确的是（ ） A. 提取的牛瘤胃液不能使用干热灭菌，应使用湿热灭菌 B. 甲和乙应使用纤维素为唯一碳源的牛肉膏蛋白胨培养基 C. 乙和丁的接种方法均可分离纯化并进行计数 D. 以纤维素为唯一碳源的刚果红培养基中，会出现以目的菌为中心的透明圈 【答案】D 【解析】 【详解】A、瘤胃液是分离纤维素分解菌的原材料，若对其灭菌会杀死其中的目标微生物，因此瘤胃液不能进行灭菌处理，A错误； B、分离纤维素分解菌需要使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，牛肉膏蛋白胨培养基含有其他碳源，无法起到筛选纤维素分解菌的作用，B错误； C、乙的接种方法为平板划线法，该方法只能实现微生物的分离纯化，无法对微生物进行计数，C错误； D、刚果红可与纤维素结合形成红色复合物，当纤维素分解菌分解周围的纤维素后，红色复合物无法形成，就会出现以目的菌为中心的透明圈，可通过该特征筛选纤维素分解菌，D正确。 7. 鱼腥草代谢过程中产生的一种次生代谢物——月桂烯具有抗炎镇痛、抗菌抗病毒的作用。通过植物细胞工厂化生产可大量获取这种化合物。下列说法不正确的是（ ） A. 细胞工厂化生产是为了提高单个细胞中月桂烯的含量 B. 月桂烯不是鱼腥草生命活动必需的营养物质 C. 培养过程中需要脱分化形成愈伤组织，然后悬浮培养 D. 愈伤组织处于不断增殖的状态，更容易诱发突变 【答案】A 【解析】 【详解】A、植物细胞工厂化生产月桂烯的目的是通过大规模培养细胞群，增加细胞总数量进而提高月桂烯的总产量，并非提高单个细胞中月桂烯的含量，A错误； B、月桂烯属于植物次生代谢物，次生代谢物不是植物生命活动必需的营养物质，B正确； C、利用植物细胞培养生产次生代谢物时，首先需要对外植体进行脱分化获得愈伤组织，再将愈伤组织分散后进行悬浮培养，便于规模化生产和产物收集，C正确； D、愈伤组织细胞处于持续有丝分裂的增殖状态，分裂间期DNA复制时结构不稳定，更容易受外界因素诱导发生突变，D正确。 8. 制备人造皮肤的核心是通过细胞培养在生物材料支架上重建表皮真皮双层结构。此过程不涉及（ ） A. 制备细胞悬液 B. 放入CO2培养箱中培养 C. 用胰蛋白酶处理支架 D. 培养液中必须加入氨基酸 【答案】C 【解析】 【详解】A、制备人造皮肤需要进行动物细胞培养，动物细胞培养的第一步就是将相关组织分散为单个细胞，制备细胞悬液，该过程涉及，A不符合题意； B、动物细胞培养需要放入CO2培养箱中培养，其中CO2的作用是维持培养液的pH，该过程涉及，B不符合题意； C、胰蛋白酶的作用是分解细胞间的蛋白质，将组织块分散为单个细胞，或使贴壁细胞脱离附着位点，不需要用其处理生物材料支架，该过程不涉及，C符合题意； D、氨基酸是动物细胞合成蛋白质的必需原料，动物细胞培养液中必须添加氨基酸等营养物质，该过程涉及，D不符合题意。 9. 植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如下图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①的混合酶是指纤维素酶和果胶酶 B. 过程②可用灭活的仙台病毒诱导原生质体融合 C. 过程③再生细胞壁是诱导融合成功的标志 D. 过程⑤的生芽培养基中生长素少细胞分裂素多 【答案】B 【解析】 【详解】A、植物细胞壁主要成分是纤维素和果胶，过程①去除细胞壁用的混合酶就是纤维素酶和果胶酶，A正确； B、过程②为原生质体的融合，常用PEG诱导原生质体融合，灭活的病毒可诱导动物细胞融合，不能用于植物，B错误； C、原生质体融合后，再生出细胞壁，说明融合的原生质体已初步形成杂种细胞，是诱导融合成功的标志，C正确； D、生长素少、细胞分裂素多的培养基，有利于诱导芽的分化；生长素多、细胞分裂素少利于诱导根的分化。过程⑤是诱导愈伤组织分化出芽，所以生长素少，细胞分裂素多，D正确。 故选B。 10. 干眼症是由于泪液分泌减少导致的眼睛干涩病症。利用患者体细胞诱导形成多能干细胞（iPS细胞），进而培养得到眼结膜组织，可分泌泪液成分，有望治疗干眼症。下列说法不正确的是（ ） A. 利用iPS细胞获得眼结膜组织时应加入分化诱导因子 B. 用诱导产生的眼结膜组织治疗患者不会发生免疫排斥反应 C. iPS细胞的获取无须破坏胚胎，其应用前景优于胚胎干细胞 D. iPS细胞与其分化形成的眼结膜组织细胞的遗传物质不同 【答案】D 【解析】 【详解】A、iPS细胞属于多能干细胞，要使其定向分化为眼结膜组织，需要加入分化诱导因子引导细胞向特定方向分化，A正确； B、诱导所用的iPS细胞来自患者自身的体细胞，诱导产生的眼结膜组织细胞的抗原与患者自身抗原一致，移植后不会发生免疫排斥反应，B正确； C、胚胎干细胞的获取需要破坏早期胚胎，存在伦理争议，而iPS细胞由体细胞诱导获得，无需破坏胚胎，应用前景优于胚胎干细胞，C正确； D、细胞分化的实质是基因的选择性表达，分化过程中遗传物质不发生改变，因此iPS细胞与其分化形成的眼结膜组织细胞的遗传物质相同，D错误。 11. 基因工程中通常会用到限制酶、DNA连接酶等。下列有关说法不正确的是（ ） A. 限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的 B. 限制酶能识别特定DNA序列，而DNA连接酶不能 C. 天然质粒有一个至多个限制酶切位点，可直接用作载体 D. 限制酶和DNA连接酶均作用于磷酸二酯键 【答案】C 【解析】 【详解】A、限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，原核生物可通过限制酶切割外源DNA保护自身，A正确； B、限制酶具有特异性，能识别特定的DNA序列并在特定位点切割，而DNA连接酶仅负责连接两个DNA片段的磷酸二酯键，无特异性序列识别功能，B正确； C、天然质粒虽通常有一个至多个限制酶切割位点，但缺少标记基因、合适的复制原点等载体必备的结构，需要经过人工改造后才能作为载体使用，不可直接应用，C错误； D、限制酶通过断裂磷酸二酯键切割DNA，DNA连接酶通过催化形成磷酸二酯键连接DNA片段，二者的作用位点均为磷酸二酯键，D正确。 12. 下列关于DNA粗提取与鉴定实验的叙述，不正确的是（ ） A. 研磨洋葱或香蕉等实验材料时加入NaCl的作用是溶解DNA B. 将研磨液离心后，取上清液继续进行DNA提取 C. 在提取液中加入预冷的95%酒精溶液后，DNA会与蛋白质分离并析出 D. 用二苯胺试剂鉴定DNA时，沸水加热后蓝色越深说明DNA纯度越高 【答案】D 【解析】 【详解】A、DNA在2mol/L的NaCl溶液中溶解度较高，研磨实验材料时加入NaCl的作用是溶解DNA，A正确； B、研磨液离心后，细胞碎片等不溶杂质形成沉淀，溶解有DNA的组分分布在上清液中，因此需取上清液继续进行DNA提取，B正确； C、DNA不溶于酒精，而蛋白质等杂质可溶于预冷的95%酒精溶液，因此加入该酒精后DNA会与蛋白质分离并析出，C正确； D、用二苯胺试剂鉴定DNA时，沸水加热后蓝色的深浅与DNA的含量正相关，和DNA纯度无直接对应关系，D错误。 13. 人体正常基因A、致病基因a中限制酶Hind Ⅲ的切割位点如图所示。限制酶Alu Ⅰ的识别序列及切割位点为。下列说法错误的是（ ） A. 基因A突变为a过程发生了碱基对的替换 B. 用两种限制酶分别酶切A基因后，形成的末端类型不同 C. 用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片段大小相同 D. 产前诊断时，该致病基因可选用Hind Ⅲ进行酶切鉴定 【答案】C 【解析】 【详解】A、对比A基因和a基因的序列，A基因中“AAGCTT”变化为a基因中“AAGCTG”，发生了碱基替换（T→G），A正确； B、Hind Ⅲ切割产生黏性末端，Alu I切割后产生的是平末端，二者末端类型不相同，B正确； C、观察图中a基因，Hind Ⅲ有2个切割位点，切割后会产生3个片段，Alu I有3个切割位点，切割后会产生4个片段，所以用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片段大小不相同，C错误； D、因为正常基因A和致病基因a的Hind Ⅲ切割位点不同，所以产前诊断时，该致病基因可选用Hind Ⅲ限制酶开展酶切鉴定，D正确。 14. PCR仪实际上是一个温控设备，能在每次循环的3个步骤间进行温度切换，主要过程如图所示，图中a、b、c表示过程。下列叙述正确的是（ ） A. PCR是在体外进行的DNA复制，需要解旋酶和DNA聚合酶 B. 每次循环需要的引物Ⅰ的数量与引物Ⅱ的数量相同 C. 延伸的温度和时间与引物和待扩增片段的长度均有关 D. PCR循环过程控制的温度高低关系为a>b>c 【答案】B 【解析】 【详解】A、PCR通过高温使DNA双链氢键断裂实现解旋，不需要解旋酶，仅需要耐高温的DNA聚合酶，A错误； B、PCR扩增时，DNA的两条模板链分别结合引物Ⅰ和引物Ⅱ，每次循环合成两条子链时需要的引物Ⅰ和引物Ⅱ数量相等，B正确； C、延伸的温度主要由耐高温DNA聚合酶的最适温度决定，与引物无关；延伸时间仅和待扩增片段长度有关，片段越长所需延伸时间越长，C错误； D、PCR循环过程包括变性、复性和延伸三个步骤，其中变性温度（a）最高，超过90℃；复性温度（b）较低，一般为50℃左右，使引物与模板链结合；延伸温度（c）一般为72℃左右，因此温度高低关系为a＞c＞b，D错误。 15. 现代生物技术有着巨大的应用前景，但会涉及到生物安全问题。下列叙述错误的是（　　） A. 我国禁止一切与生殖性克隆和治疗性克隆有关的研究 B. 基因污染可能对生物多样性、生态环境和人体健康造成潜在威胁 C. 消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面 D. 为避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果 【答案】A 【解析】 【详解】A、我国明确禁止生殖性克隆的相关研究，但不反对治疗性克隆的研究，治疗性克隆可用于组织器官移植等疾病治疗场景，具有积极应用价值，并非禁止一切与生殖性克隆和治疗性克隆有关的研究，A错误； B、基因污染指外源基因通过转基因生物扩散进入其他野生生物中，可能改变原有物种的遗传特性，进而对生物多样性、生态环境和人体健康造成潜在威胁，B正确； C、生物武器致病性强、传播范围广、危害极大，消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面，C正确； D、基因检测结果包含个人的特有遗传信息，随意泄露可能引发基因歧视等伦理问题，因此基因检测机构不能随意泄露基因检测结果，D正确。 第二部分 本部分共5题，共60分。 16. 内蒙古某草原以放牧为主，牲畜养殖中广泛使用一种驱虫药——伊维菌素。其在粪便中的残留会显著影响一些粪甲虫的存活和后代孵化。 （1）粪甲虫是一类嗜粪昆虫的总称，主要包括金龟科和蜉金龟科昆虫。它们以粪便为食，能够快速分解草场中的粪便，促进土壤养分循环，这体现了生物多样性的_______价值。隐翅虫科昆虫主要捕食粪便中滋生的某些小型无脊椎动物。 （2）请在下图中用关键词、箭头等补充完善草原生态系统中的碳循环模型。 （3）对使用伊维菌素前后同一草场的粪甲虫进行调查，通常采用陷阱法取样，陷阱位置的选择应符合_______原则；陷阱中放置新鲜牛粪吸引粪甲虫，牛粪的气味属于_______信息。 （4）分类统计诱捕到的昆虫，结果见下表。由表可知，伊维菌素使用后发生的变化是_______，这种变化将会使草场牛粪的清除速度_______。 昆虫种类 伊维菌素使用前 伊维菌素使用后 平均数量/（只/陷阱） 个体占比 平均数量/（只/陷阱） 个体占比 蜉金龟科 121.7 62.3% 29.9 44.4% 金龟科 73.7 37.7% 0.8 1.2% 隐翅虫科 0 0 36.6 54.4% （5）为维持草场畜牧业的可持续发展，降低伊维菌素等兽药残留对当地粪甲虫的影响，可采用的方法包括_______。 A. 研发低残留、易降解的兽药 B. 制定严格用药指南，避免过量使用兽药 C. 引入新种类粪甲虫 D. 培育抗病力强的牲畜品种，减少兽药使用 【答案】（1）间接 （2） （3） ①. 随机取样 ②. 化学 （4） ①. 粪甲虫总体数量减少。隐翅虫科出现，且在数量上占优势 ②. 下降 （5）ABD 【解析】 【小问1详解】 金龟科和蜉金龟科粪甲虫能够快速分解草场中的粪便，促进土壤养分循环，这对生态系统的功能有积极作用，属于生物多样性的间接价值。 【小问2详解】 草原生态系统碳循环过程为：牧草通过光合作用吸收大气中的CO2库中的CO2转变为有机碳，食草动物通过摄食牧草获取有机碳，食草动物和牧草通过呼吸作用向大气中的CO2库释放CO2，分解者分解牧草和食草动物的遗体残骸等含碳有机物，将有机碳以CO2形式释放回大气中的CO2库，所以碳循环模型如图： 【小问3详解】 采用陷阱法取样调查粪甲虫时，陷阱位置的选择应符合随机取样原则，这样才能保证样本具有代表性，使调查结果更准确；陷阱中新鲜牛粪的气味吸引粪甲虫，牛粪的气味属于化学物质，是属于生态系统中的化学信息传递。 【小问4详解】 由表可知，伊维菌素使用后粪甲虫（金龟科和蜉金龟科）总体数量减少。隐翅虫科出现，且在数量上占优势，这种变化将会使草场牛粪的清除速度下降，影响草场的生态功能。 【小问5详解】 A、研发低残留、易降解兽药，可以减少兽药在粪便中的残留量，从而降低对粪甲虫的影响，A符合题意； B、制定严格用药指南，避免过量使用兽药，能减少进入环境中的兽药总量，降低对粪甲虫的危害，B符合题意； C、引入新的粪甲虫种类可能会破坏当地原有的生态平衡，带来新的生态问题，C不符合题意； D、培育抗病力强的牲畜品种减少兽药使用，从源头上减少了兽药进入环境，进而降低对粪甲虫的影响，D符合题意。 17. 淡水水域受到污染后，水中氮、磷等无机盐过多，导致蓝细菌和绿藻等大量繁殖，形成水华现象。 （1）水体受到轻微污染时，系统可通过物理沉降、化学分解等作用消除污染，反映了该生态系统具有_______稳定性。水华严重时会导致大量水生动物死亡和生态平衡被破坏，这说明生态系统的_______是有一定限度的。 （2）研究小组在实验室配制模拟生活污水的溶液，设计了4组实验：香菇草单独种植组（T₁）、石菖蒲单独种植组（T₂）、香菇草和石菖蒲混合种植组（T₃）、不栽植物组（CK）。实验结果如图1、2所示。（注：图2中的鲜重为植物全株的重量） ①研究小组选择水生植物而没有选择陆生植物修复污水，主要体现了生态工程的_______原理。 ②据图1可知，香菇草和石菖蒲混合种植时污水的净化效果比香菇草单独种植时的净化效果_______。结合图2分析，原因可能是_______。 （3）为进一步开发、利用香菇草，研究小组设计图3所示的方案。请从物质和能量角度评价该农业生产模式的优点。 【答案】（1） ①. 抵抗力 ②. 自我调节能力 （2） ①. 协调 ②. 差 ③. 石菖蒲和香菇草的竞争抑制了香菇草生长，使其污水净化能力下降 （3）充分利用了糖渣、猪粪等废弃物，实现物质的循环利用和能量的多级利用。 【解析】 【小问1详解】 轻微污染时，生态系统依靠物理沉降、微生物分解等自身作用消除污染，维持原有结构功能，属于抵抗力稳定性（抵抗干扰、保持原状）。 污染过重引发水华，动植物大量死亡、生态系统崩溃，说明生态系统自我调节能力有限，超出限度则稳态被破坏。 【小问2详解】 ①协调原理：生物与环境协调平衡，选择水生植物治理水体污染，适配水域环境，避免陆生植物无法适应水体、难以存活，体现协调原理。②图 1 曲线：同一时间点 T₃（混合种植）总氮浓度高于 T₁（香菇草单独种植），说明混合组净化效果差；结合图 2 鲜重：T₃组植物总鲜重远低于 T₁组，原因是香菇草、石菖蒲争夺光照、水体无机盐，种间竞争抑制香菇草生长，植物生物量低，吸收氮元素总量减少，净化能力下降。 【小问3详解】 物质角度：甘蔗制糖副产物糖渣、猪粪、鱼塘塘泥等废弃物循环回用，塘泥作甘蔗肥料、猪粪喂鱼、香菇草 + 糖渣制饲料，物质循环往复，减少外源化肥投入，降低废弃物污染。 能量角度：甘蔗固定的光能，依次流向猪、鱼，原本废弃糖渣、粪便中的化学能被二次利用，实现能量多级利用，大幅提升系统总能量利用率，减少能量浪费。 18. 大肠杆菌E能产生一种化合物——法尼烯，其在农业、医药等领域有广泛应用，但产量很低。科研人员用紫外线对大肠杆菌E的菌悬液进行诱变处理，筛选法尼烯高产的突变株。 （1）因基因突变频率低，诱变后的菌悬液中突变体占比很低；又因基因突变具有______性，法尼烯高产的突变体在全部突变体中的占比（正突变率）很低。需要进行大量的筛选工作。 （2）为解决筛选工作量大的问题，科研人员利用法尼烯合成途径中的前体物质P对E的突变菌株进行筛选。 ①用______将E的菌悬液稀释后，分别取0.1 ml涂布于含不同浓度P的固体培养基上，置于37℃培养箱中培养2天，菌株生长情况如下图，结果表明______。 ②根据图中的结果，将经诱变处理的E菌悬液涂布在含0.9 mg/L的P溶液的筛选平板上，37℃培养3天。该浓度既能_________，又能维持平板中一定的筛选压力，便于筛选。 ③挑取平板上长出的______，制成菌悬液后接种于液体培养基中，一段时间后测定法尼烯的含量，最终获得30个突变菌株，其中法尼烯产量明显高于E菌的有14株，正突变率高达43.30%。请解释这种方法能提高筛选效率的原因。 【答案】（1）不定向性 （2） ①. 无菌水 ②. P抑制E的生长，且抑制作用随P浓度的升高而增强 ③. 保证平板中菌株的存活率 ④. 单菌落 【解析】 【小问1详解】 基因突变具有不定向性，诱变后会产生多种不同类型的突变，符合需求的高产突变仅占全部突变体的极少比例，因此正突变率很低。 【小问2详解】 ① 对菌悬液进行稀释时，需要使用无菌水，避免杂菌污染；从图中结果可直观看出：随着P浓度升高，平板上的菌落数逐渐减少，说明P抑制E的生长，且抑制作用随P浓度的升高而增强。 ② 该浓度选择的逻辑是：浓度过高会杀死高产菌株，浓度过低无法淘汰低产菌株；0.9mg/L的P既能够保证平板中菌株的存活率，又能抑制大部分低产菌株、维持筛选压力。 ③ 平板上长出的每个单菌落都来自单个菌株，遗传特性一致，因此挑取单菌落进行后续产量检测；该方法利用选择培养基的筛选作用，提前淘汰了大量低产菌株，大幅减少了后续需要筛选的菌株数量，因此提高了筛选效率。 19. 学习以下材料，并回答问题。 肿瘤治疗新靶点 目前癌症治疗中广泛使用PD-1/PD-L1抑制剂，其原理是阻断T细胞表面的PD-1蛋白与肿瘤细胞表面的PD-L1蛋白之间的“握手”信号。这种“跨细胞”相互作用是T细胞被抑制的关键。然而，并非所有肿瘤都表达PD-L1，而且即使表达，部分患者随着治疗的进行仍会产生耐药性。因此，研究人员一直在寻找新的治疗靶点。 淋巴细胞活化信号分子6（S6）是T细胞表面存在的一种受体。研究团队发现，同一个T细胞表面的S6之间相互结合能抑制T细胞的活化。因此，S6是介导抗肿瘤免疫的又一个关键抑制因子。 T细胞表面负责识别抗原的关键受体接受刺激后，下游系列信号蛋白发生酪氨酸磷酸化，最终引起T细胞增殖、分泌细胞因子等免疫反应。鉴于SHP-1酶（由P6基因编码）、SHP-2酶（由P11基因编码）都能抑制蛋白酪氨酸磷酸化，研究人员向野生型及敲除S6（S6−/−）的T细胞中转染靶向P6、P11的siRNA以敲低P6、P11，得到的实验结果如图所示。据此确定了参与S6抑制T细胞活化信号通路的关键酶。 研究团队进一步开发了针对S6的单克隆抗体，在多种小鼠肿瘤模型中，部分单克隆抗体能够显著增强T细胞活化，降低耗竭T细胞的比例，并在体内抑制肿瘤生长，效果甚至优于PD-L1抑制剂。 （1）除肿瘤细胞外，正常细胞表面也存在PD-L1，一旦与活化T细胞表面的PD-1结合，就会抑制T细胞的增殖，不触发免疫反应。其意义是_______。 （2）依据文中信息，在野生型小鼠皮下注射肿瘤细胞，再将S6−/−型T细胞和野生型T细胞分别注射到小鼠体内。一段时间后，与对照组相比，实验组小鼠肿瘤体积_______，分泌细胞因子的T细胞比例_______。 （3）据图判断参与S6抑制T细胞活化信号通路的关键酶，并写出另一种酶不在此信号通路的理由。 （4）下图表示制备S6单抗的流程，①表示_______，②所用的选择方法是_______。推测部分S6单抗的抗肿瘤效果差的原因是_______。 【答案】（1）避免T细胞攻击正常细胞 （2） ①. 缩小 ②. 增加 （3）关键酶是SHP-1。SHP-2不在此通路的理由：在S6−/−型T细胞中，敲低P11显著抑制了T细胞增殖，表明SHP-2不是S6抑制通路的下游分子，并且S6敲除后，SHP-2在T细胞活化中反而起到了促进作用 （4） ①. 给小鼠注射S6（用S6对小鼠进行免疫） ②. 抗原-抗体杂交 ③. 这些抗体与S6的结合位点与S6自身的结合位点不同 【解析】 【小问1详解】 正常细胞表面存在的PD-L1，一旦与活化T细胞表面的PD-1结合，就会抑制T细胞的增殖，不触发免疫反应，其意义是避免T细胞攻击正常细胞。 【小问2详解】 S6是T细胞活化的抑制因子，S6基因敲除（S6−/−）后，S6对T细胞活化的抑制作用消失，T细胞抗肿瘤免疫能力更强，因此肿瘤体积缩小，活化后分泌细胞因子的T细胞比例增加。 【小问3详解】 敲低P6后，野生型T细胞增殖水平显著升高，S6敲除后，无论是否敲低P6，T细胞增殖水平都较高且相近，说明参与S6抑制T细胞活化信号通路的关键酶是SHP-1。SHP-2不在此通路的理由：在S6−/−型T细胞中，敲低P11显著抑制了T细胞增殖，表明SHP-2不是S6抑制通路的下游分子，并且S6敲除后，SHP-2在T细胞活化中反而起到了促进作用。 【小问4详解】 单克隆抗体制备中，首先需要用目标抗原免疫小鼠，获得能产生特异性抗体的B淋巴细胞，则①表示给小鼠注射S6（用S6对小鼠进行免疫）；获得杂交瘤细胞后，需要通过克隆化培养和抗体检测，②所用的选择方法是抗原-抗体杂交，得到能分泌目标抗体的杂交瘤细胞。部分S6单抗的抗肿瘤效果差的原因是这些抗体与S6的结合位点与S6自身的结合位点不同。 20. 固氮细菌将空气中的N2还原成氨的过程称为生物固氮。固氮酶由两种相互依赖的金属蛋白组成，其合成需要多种固氮基因。将生物固氮机制引入水稻，可减少对氮肥的依赖。 （1）从固氮细菌中获得多个关键的固氮基因如nifD、nifH等。以目的基因nifD为例，已知其内部有Pst Ⅰ限制酶切割位点，载体上的酶切位点如图1所示。构建nifD基因表达载体时应选择的限制酶为_______。该载体中潮霉素抗性基因的用途是_______。 （2）对转基因植株进行分子水平检测时，分别提取转基因和野生型植株的RNA，_______后以nifD基因的特定序列为引物进行PCR扩增，电泳结果为_______，表明nifD基因成功转入。 （3）检测发现，水稻细胞质中nifH蛋白的分子量比天然蛋白（分子量约39 kDa）降低了约2 kDa，研究者推测其在水稻细胞质中不稳定被裂解。为研究裂解位置发生在N端还是C端（肽链的-NH2或-COOH一侧），在nifH基因编码序列的N端或C端加一个Flag标签蛋白的编码序列，分别构建“Flag-N-nifH”和“Flag-C-nifH”表达载体，导入烟草细胞，一段时间后检测Flag蛋白，结果如图2。结果表明_______。 （4）研究发现，将固氮细菌的nifH蛋白特定位置的丝氨酸替换为丙氨酸后，在细胞质中能抗降解，且不影响固氮酶的生物活性。请从蛋白质工程的角度，用文字或流程图的形式表示对nifH蛋白进行改造的过程。 【答案】（1） ①. BamH Ⅰ和Xba Ⅰ ②. 初步筛选成功转入目的基因的植株 （2） ①. 逆转录 ②. 转基因植株出现nifD基因条带，野生型不出现 （3）nifH蛋白的裂解发生在N端 （4）根据丝氨酸和丙氨酸的密码子，确定nifH基因对应丝氨酸的特定位置应发生的碱基替换类型→对nifH基因进行定点突变或合成新的基因→将突变后的基因（或新基因）转入植株并表达，获得抗降解的nifH蛋白 【解析】 【小问1详解】 构建基因表达载体一般采用双酶切法，要保证目的基因不被破坏且能正确插入启动子和终止子之间，并且不能破坏载体上其他必需结构（例如启动子、终止子、标记基因等）。由图可知，T-DNA片段上的潮霉素抗性基因是唯一的标记基因，因此不能使用Nde Ⅰ进行酶切，否则会破坏潮霉素抗性基因；已知nifD基因内部有Pst Ⅰ酶切位点，因此不能用Pst Ⅰ进行酶切，否则会破坏目的基因；载体上的终止子两侧都有Sph Ⅰ限制酶切割位点，因此不能用Sph Ⅰ进行酶切，否则会切除终止子，因此构建nifD基因表达载体时应选择BamH Ⅰ和Xba Ⅰ。潮霉素抗性基因是标记基因，用于筛选成功导入目的基因的受体细胞。 【小问2详解】 提取RNA后需要先经逆转录得到cDNA，才能以cDNA为模板进行PCR扩增。转基因植株存在nifD基因的mRNA，逆转录后能扩增出目的条带；野生型没有nifD基因，不存在相应的mRNA，PCR结果中不存在目的条带，因此电泳结果为转基因植株出现nifD基因条带，野生型不出现nifD基因条带，表明nifD基因成功转入。 【小问3详解】 分析图2，利用Flag抗体检测，Flag标签添加在nifH基因编码序列的C端时有相应的条带，Flag标签添加在nifH基因编码序列的N端时无相应的条带，说明nifH基因的N端的Flag标签会随nifH蛋白的裂解而被切除，而C端的Flag标签被保留，因此nifH蛋白的裂解发生在N端。 【小问4详解】 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物 功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求，其基本思路是：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因） 或合成新的基因→获得所需要的蛋白质。因此利用蛋白质工程对nifH蛋白进行改造的过程为：根据丝氨酸和丙氨酸的密码子，确定nifH基因对应丝氨酸的特定位置应发生的碱基替换类型→对nifH基因进行定点突变或合成新的基因→将突变后的基因（或新基因）转入植株并表达，获得抗降解的nifH蛋白。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年第二学期高二期末试卷 生物学 本试卷满分为100分，考试时间为90分钟。其中Ⅰ卷共90分，共9页，Ⅱ卷共10分。 Ⅰ卷 第一部分 本部分共15题，每小题2分，共30分。在每题列出的四个选项中，选出最符合题目要求的一项。 1. 近年来，我国通过建立大熊猫国家公园、东北虎豹国家公园等自然保护地体系，有效保护了珍稀物种及其栖息地。这一做法主要体现了生物多样性保护策略中的（ ） A. 离体保存 B. 就地保护 C. 易地保护 D. 生态修复 2. 蜜蜂在找到蜜源后，通过跳圆圈舞或摆尾舞向同伴传递蜜源信息：圆圈舞表明蜜源较近，大约距蜂箱百米以内；摆尾舞则表明蜜源在百米之外的远处，且距离远近与摆尾的速度有关。下列有关叙述不正确的是（ ） A. 蜜蜂跳的圆圈舞或摆尾舞是典型的行为信息 B. 各种信息传递保证了蜜蜂生命活动的正常进行 C. 生态系统中的信息传递只发生在生物和生物之间 D. 果园中制造与蜜蜂跳舞相同频率的振动有助于提高果实产量 3. 某平台推出的一项公益行动中，用户通过低碳行为积攒的“绿色能量”，可用于在现实区域种树或保护栖息地。下列有关生态足迹的说法，不正确的是（ ） A. 生态足迹又称碳足迹，其值越大代表人类所需的资源越多 B. 在荒漠化地区植树造林，可增加当地的生态承载力 C. 用步行替代驾车出行，有助于降低个人的生态足迹 D. 若某地区生态足迹总量大于生态承载力总量，会形成生态赤字 4. 下图是某鱼塘生态系统能量流动过程中部分环节，图中数字表示能量数值（单位103kJ·m−2·a−1）。下列说法不正确的是（ ） A. 图中A代表的生理过程是呼吸作用 B. 该生态系统中生产者固定的总能量为9.6×104  kJ·m−2·a−1 C. 能量流动具有单向性的原因是捕食关系不可逆转 D. 肉食性动物从植食性动物同化的能量为2.5×103  kJ·m−2·a−1 5. 下列关于传统发酵技术的叙述，不正确的是（ ） A. 醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸 B. 酵母菌在无氧条件下利用葡萄汁产生酒精 C. 泡菜腌制利用的乳酸菌是厌氧细菌 D. 腐乳制作利用毛霉等微生物将蛋白质分解 6. 瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊器官，其中生活着多种微生物。下图表示从牛的瘤胃中分离和鉴定纤维素分解菌。下列叙述正确的是（ ） A. 提取的牛瘤胃液不能使用干热灭菌，应使用湿热灭菌 B. 甲和乙应使用纤维素为唯一碳源的牛肉膏蛋白胨培养基 C. 乙和丁的接种方法均可分离纯化并进行计数 D. 以纤维素为唯一碳源的刚果红培养基中，会出现以目的菌为中心的透明圈 7. 鱼腥草代谢过程中产生的一种次生代谢物——月桂烯具有抗炎镇痛、抗菌抗病毒的作用。通过植物细胞工厂化生产可大量获取这种化合物。下列说法不正确的是（ ） A. 细胞工厂化生产是为了提高单个细胞中月桂烯的含量 B. 月桂烯不是鱼腥草生命活动必需的营养物质 C. 培养过程中需要脱分化形成愈伤组织，然后悬浮培养 D. 愈伤组织处于不断增殖的状态，更容易诱发突变 8. 制备人造皮肤的核心是通过细胞培养在生物材料支架上重建表皮真皮双层结构。此过程不涉及（ ） A. 制备细胞悬液 B. 放入CO2培养箱中培养 C. 用胰蛋白酶处理支架 D. 培养液中必须加入氨基酸 9. 植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如下图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①的混合酶是指纤维素酶和果胶酶 B. 过程②可用灭活的仙台病毒诱导原生质体融合 C. 过程③再生细胞壁是诱导融合成功的标志 D. 过程⑤的生芽培养基中生长素少细胞分裂素多 10. 干眼症是由于泪液分泌减少导致的眼睛干涩病症。利用患者体细胞诱导形成多能干细胞（iPS细胞），进而培养得到眼结膜组织，可分泌泪液成分，有望治疗干眼症。下列说法不正确的是（ ） A. 利用iPS细胞获得眼结膜组织时应加入分化诱导因子 B. 用诱导产生的眼结膜组织治疗患者不会发生免疫排斥反应 C. iPS细胞的获取无须破坏胚胎，其应用前景优于胚胎干细胞 D. iPS细胞与其分化形成的眼结膜组织细胞的遗传物质不同 11. 基因工程中通常会用到限制酶、DNA连接酶等。下列有关说法不正确的是（ ） A. 限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的 B. 限制酶能识别特定DNA序列，而DNA连接酶不能 C. 天然质粒有一个至多个限制酶切位点，可直接用作载体 D. 限制酶和DNA连接酶均作用于磷酸二酯键 12. 下列关于DNA粗提取与鉴定实验的叙述，不正确的是（ ） A. 研磨洋葱或香蕉等实验材料时加入NaCl的作用是溶解DNA B. 将研磨液离心后，取上清液继续进行DNA提取 C. 在提取液中加入预冷的95%酒精溶液后，DNA会与蛋白质分离并析出 D. 用二苯胺试剂鉴定DNA时，沸水加热后蓝色越深说明DNA纯度越高 13. 人体正常基因A、致病基因a中限制酶Hind Ⅲ的切割位点如图所示。限制酶Alu Ⅰ的识别序列及切割位点为。下列说法错误的是（ ） A. 基因A突变为a过程发生了碱基对的替换 B. 用两种限制酶分别酶切A基因后，形成的末端类型不同 C. 用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片段大小相同 D. 产前诊断时，该致病基因可选用Hind Ⅲ进行酶切鉴定 14. PCR仪实际上是一个温控设备，能在每次循环的3个步骤间进行温度切换，主要过程如图所示，图中a、b、c表示过程。下列叙述正确的是（ ） A. PCR是在体外进行的DNA复制，需要解旋酶和DNA聚合酶 B. 每次循环需要的引物Ⅰ的数量与引物Ⅱ的数量相同 C. 延伸的温度和时间与引物和待扩增片段的长度均有关 D. PCR循环过程控制的温度高低关系为a>b>c 15. 现代生物技术有着巨大的应用前景，但会涉及到生物安全问题。下列叙述错误的是（　　） A. 我国禁止一切与生殖性克隆和治疗性克隆有关的研究 B. 基因污染可能对生物多样性、生态环境和人体健康造成潜在威胁 C. 消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面 D. 为避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果 第二部分 本部分共5题，共60分。 16. 内蒙古某草原以放牧为主，牲畜养殖中广泛使用一种驱虫药——伊维菌素。其在粪便中的残留会显著影响一些粪甲虫的存活和后代孵化。 （1）粪甲虫是一类嗜粪昆虫的总称，主要包括金龟科和蜉金龟科昆虫。它们以粪便为食，能够快速分解草场中的粪便，促进土壤养分循环，这体现了生物多样性的_______价值。隐翅虫科昆虫主要捕食粪便中滋生的某些小型无脊椎动物。 （2）请在下图中用关键词、箭头等补充完善草原生态系统中的碳循环模型。 （3）对使用伊维菌素前后同一草场的粪甲虫进行调查，通常采用陷阱法取样，陷阱位置的选择应符合_______原则；陷阱中放置新鲜牛粪吸引粪甲虫，牛粪的气味属于_______信息。 （4）分类统计诱捕到的昆虫，结果见下表。由表可知，伊维菌素使用后发生的变化是_______，这种变化将会使草场牛粪的清除速度_______。 昆虫种类 伊维菌素使用前 伊维菌素使用后 平均数量/（只/陷阱） 个体占比 平均数量/（只/陷阱） 个体占比 蜉金龟科 121.7 62.3% 29.9 44.4% 金龟科 73.7 37.7% 0.8 1.2% 隐翅虫科 0 0 36.6 54.4% （5）为维持草场畜牧业的可持续发展，降低伊维菌素等兽药残留对当地粪甲虫的影响，可采用的方法包括_______。 A. 研发低残留、易降解的兽药 B. 制定严格用药指南，避免过量使用兽药 C. 引入新种类粪甲虫 D. 培育抗病力强的牲畜品种，减少兽药使用 17. 淡水水域受到污染后，水中氮、磷等无机盐过多，导致蓝细菌和绿藻等大量繁殖，形成水华现象。 （1）水体受到轻微污染时，系统可通过物理沉降、化学分解等作用消除污染，反映了该生态系统具有_______稳定性。水华严重时会导致大量水生动物死亡和生态平衡被破坏，这说明生态系统的_______是有一定限度的。 （2）研究小组在实验室配制模拟生活污水的溶液，设计了4组实验：香菇草单独种植组（T₁）、石菖蒲单独种植组（T₂）、香菇草和石菖蒲混合种植组（T₃）、不栽植物组（CK）。实验结果如图1、2所示。（注：图2中的鲜重为植物全株的重量） ①研究小组选择水生植物而没有选择陆生植物修复污水，主要体现了生态工程的_______原理。 ②据图1可知，香菇草和石菖蒲混合种植时污水的净化效果比香菇草单独种植时的净化效果_______。结合图2分析，原因可能是_______。 （3）为进一步开发、利用香菇草，研究小组设计图3所示的方案。请从物质和能量角度评价该农业生产模式的优点。 18. 大肠杆菌E能产生一种化合物——法尼烯，其在农业、医药等领域有广泛应用，但产量很低。科研人员用紫外线对大肠杆菌E的菌悬液进行诱变处理，筛选法尼烯高产的突变株。 （1）因基因突变频率低，诱变后的菌悬液中突变体占比很低；又因基因突变具有______性，法尼烯高产的突变体在全部突变体中的占比（正突变率）很低。需要进行大量的筛选工作。 （2）为解决筛选工作量大的问题，科研人员利用法尼烯合成途径中的前体物质P对E的突变菌株进行筛选。 ①用______将E的菌悬液稀释后，分别取0.1 ml涂布于含不同浓度P的固体培养基上，置于37℃培养箱中培养2天，菌株生长情况如下图，结果表明______。 ②根据图中的结果，将经诱变处理的E菌悬液涂布在含0.9 mg/L的P溶液的筛选平板上，37℃培养3天。该浓度既能_________，又能维持平板中一定的筛选压力，便于筛选。 ③挑取平板上长出的______，制成菌悬液后接种于液体培养基中，一段时间后测定法尼烯的含量，最终获得30个突变菌株，其中法尼烯产量明显高于E菌的有14株，正突变率高达43.30%。请解释这种方法能提高筛选效率的原因。 19. 学习以下材料，并回答问题。 肿瘤治疗新靶点 目前癌症治疗中广泛使用PD-1/PD-L1抑制剂，其原理是阻断T细胞表面的PD-1蛋白与肿瘤细胞表面的PD-L1蛋白之间的“握手”信号。这种“跨细胞”相互作用是T细胞被抑制的关键。然而，并非所有肿瘤都表达PD-L1，而且即使表达，部分患者随着治疗的进行仍会产生耐药性。因此，研究人员一直在寻找新的治疗靶点。 淋巴细胞活化信号分子6（S6）是T细胞表面存在的一种受体。研究团队发现，同一个T细胞表面的S6之间相互结合能抑制T细胞的活化。因此，S6是介导抗肿瘤免疫的又一个关键抑制因子。 T细胞表面负责识别抗原的关键受体接受刺激后，下游系列信号蛋白发生酪氨酸磷酸化，最终引起T细胞增殖、分泌细胞因子等免疫反应。鉴于SHP-1酶（由P6基因编码）、SHP-2酶（由P11基因编码）都能抑制蛋白酪氨酸磷酸化，研究人员向野生型及敲除S6（S6−/−）的T细胞中转染靶向P6、P11的siRNA以敲低P6、P11，得到的实验结果如图所示。据此确定了参与S6抑制T细胞活化信号通路的关键酶。 研究团队进一步开发了针对S6的单克隆抗体，在多种小鼠肿瘤模型中，部分单克隆抗体能够显著增强T细胞活化，降低耗竭T细胞的比例，并在体内抑制肿瘤生长，效果甚至优于PD-L1抑制剂。 （1）除肿瘤细胞外，正常细胞表面也存在PD-L1，一旦与活化T细胞表面的PD-1结合，就会抑制T细胞的增殖，不触发免疫反应。其意义是_______。 （2）依据文中信息，在野生型小鼠皮下注射肿瘤细胞，再将S6−/−型T细胞和野生型T细胞分别注射到小鼠体内。一段时间后，与对照组相比，实验组小鼠肿瘤体积_______，分泌细胞因子的T细胞比例_______。 （3）据图判断参与S6抑制T细胞活化信号通路的关键酶，并写出另一种酶不在此信号通路的理由。 （4）下图表示制备S6单抗的流程，①表示_______，②所用的选择方法是_______。推测部分S6单抗的抗肿瘤效果差的原因是_______。 20. 固氮细菌将空气中的N2还原成氨的过程称为生物固氮。固氮酶由两种相互依赖的金属蛋白组成，其合成需要多种固氮基因。将生物固氮机制引入水稻，可减少对氮肥的依赖。 （1）从固氮细菌中获得多个关键的固氮基因如nifD、nifH等。以目的基因nifD为例，已知其内部有Pst Ⅰ限制酶切割位点，载体上的酶切位点如图1所示。构建nifD基因表达载体时应选择的限制酶为_______。该载体中潮霉素抗性基因的用途是_______。 （2）对转基因植株进行分子水平检测时，分别提取转基因和野生型植株的RNA，_______后以nifD基因的特定序列为引物进行PCR扩增，电泳结果为_______，表明nifD基因成功转入。 （3）检测发现，水稻细胞质中nifH蛋白的分子量比天然蛋白（分子量约39 kDa）降低了约2 kDa，研究者推测其在水稻细胞质中不稳定被裂解。为研究裂解位置发生在N端还是C端（肽链的-NH2或-COOH一侧），在nifH基因编码序列的N端或C端加一个Flag标签蛋白的编码序列，分别构建“Flag-N-nifH”和“Flag-C-nifH”表达载体，导入烟草细胞，一段时间后检测Flag蛋白，结果如图2。结果表明_______。 （4）研究发现，将固氮细菌的nifH蛋白特定位置的丝氨酸替换为丙氨酸后，在细胞质中能抗降解，且不影响固氮酶的生物活性。请从蛋白质工程的角度，用文字或流程图的形式表示对nifH蛋白进行改造的过程。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $