1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（第二课时）课件-2025-2026学年高二下学期生物浙科版选择性必修3

该高中生物学课件聚焦微生物数量测定，核心涵盖稀释涂布平板法和显微镜计数法，通过“思考1-4”问题链导入，衔接目标微生物分离纯化知识，以计算示例、参数解析搭建学习支架。 其亮点在于以问题驱动和实例计算培养科学思维，借血细胞计数板结构说明与五点取样法强化探究实践。如稀释涂布平板法多组数据取平均值，显微镜计数法区分活菌与总菌，助学生掌握实验原理，教师可直接用于实验教学。

测定微生物数量的方法 1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（第二课时） 稀释涂布平板法 思考1：如何准确测定每mL菌液中的细菌数（默认平板上的都是单菌落）？ 稀释10倍 稀释102倍 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 稀释106倍 思考2：159可以表示每mL菌液中的细菌数吗？ 159表示0.1mL稀释了103倍菌液中的细菌数 159÷0.1×103=1.59×106 个/mL 思考3：每mL菌液中的细菌数是多少？ 159： 0.1： 103： 平板中的菌落数 加入到平板中的稀释液的体积 稀释倍数 思考4：如何使得到的数值更接近实际情况？ 141 150 (159+141+150)÷3÷0.1×103=1.5×106 个/mL 一是在保证能准确计数的前提下减小稀释度； 二是将相同稀释度下多组数值取平均值后再计算 (一般选择菌落数为30-300的平板进行计数） 2 ①某同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为 26.5，那么每毫升样品中的细菌数是 （涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）。 ②用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量 ，为什么？ 2.65×107 多 因为两个或多个细菌粘连在一起在平板上只能繁殖成一个菌落，计数为1个细菌。 例1：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ （80+90+100）÷3÷0.1 × 105 = 9×107个/g 例2：现取5mL陈泡菜汁用于测定其中的乳酸菌含量,可采取 方法进行操作:取泡菜汁逐级稀释至10-5,取10-5稀释液0.ImL,分别接种到固体培养基,置于特定环境培养48h后，菌落计数。若培养結果如下图所示，则5mL陈泡菜汁中乳酸菌约 个. 稀释涂布 平板法 7x107 4 P15 P16 思考：这3个平台一样吗？ 计数区 计数区 6 认识血细胞计数板 上下玻璃 间距0.1mm 计数区 计数区 P17 红细胞计数区一共有 个中方格， 个小方格； 红细胞计数区内的液体体积为 mm3。 400 0.1 25 红细胞计数区 第 4 天 第 6 天 红细胞计数区 (2)原则： ①随机取样原则 “五点取样” ②压线：数上不数下，数左不数右 ③3次计数后取平均值 一个中方格 ①大方格：_____个。长、宽各1 mm。1个大方格液体体积＝1 mm2×0.1 mm＝0.1 mm3(0.1×10-3mL)。计数区正中间的大方格为___________计数区。四角的四个大方格是_________计数区。 ②中方格：红细胞计数区又用双线分成______(或16)个中方格。 ③小方格：每个中方格再用单线划分为______(或25)个小方格。所以一个计数区共有 个小方格。 (4)计数时的几个注意点 ①先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入，滴加菌液要避免菌液滴到盖玻片上并防止 ，以免影响计数结果。 ②对有25个中方格的红细胞计数区可采用____________法对酵母细胞进行计数。 9 红细胞 白细胞 25 16 产生气泡 “五点取样” 400 血细胞计数板 9 M÷5×25×10000 若5个中方格中细菌共计M个，该培养液中细菌浓度是________个/mL Q：统计的菌数往往比活菌的实际数目要？ Q：用血细胞计数板对酵母菌计数时，吸取培养液前要轻轻振荡几次试管的目的是 。 使酵母菌分布均匀，计数准确 偏大,不能区分死菌和活菌 0.1mm3= mL 10-4 例：回答下列相关问题。 若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应先_______后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有________个。 稀释 2×108 总结： 一、如何实现对目标微生物的分离和纯化？ 二、如何测定微生物数量？ 1.平板划线法 2.稀释涂布平板法 1.稀释涂布平板法 2.显微镜计数法（需用到血细胞计数板） $