第1章 第2节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得-【新课程学案】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程配套课件PPT（浙科版）

第二节　纯净的目标微生物可通 过分离和纯化获得 |学|习|目|标| 1.概述微生物的分离和纯化的方法。 2.概述微生物数量的测定方法。 3.举例说明通过调整培养基的配方，可以有目的地培养某种微生物。 [四层]学习内容1 落实必备知识 [四层]学习内容2 融通关键能力 课时跟踪检测 目录 [四层]学习内容3·4 浸润学科素养和核心价值 [四层]学习内容1 落实必备知识 一、微生物的分离和纯化 1.单菌落 在_______培养基上采用________________的方法接种，通过培养能获得由____个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定__________的子细胞集团，这样的细胞集团称为单菌落。  主干知识梳理 固体 划线或稀释涂布 一 形态构造 2.平板划线法 类型 操作方法 连续 平行划线 从培养基上的一点出发，向______连续划平行线至覆盖整个培养基表面 扇形划线 从培养基的一点出发，向多方向多次划线。每划一条线，要将接种环在_______________上灭菌，然后再次从______起点变换方向划线 多次连续 平行划线 划线可分_____次进行，将培养皿旋转一定角度后，不需再次蘸取菌种，只需在上一次划线的______区域直接开始划线即可 左右 酒精灯的火焰 同一 3~4 末端 3.稀释涂布平板法 (1)步骤：菌液的___________→各取不同稀释度的菌液0.1 mL加在固体培养基表面→用________将菌液均匀涂布→培养。 (2)目标微生物的选择：根据_______的形状、大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征选取目标微生物。 梯度稀释 涂布器 菌落 二、测定微生物的数量的方法 1.稀释涂布平板法 (1)减小随机误差：一是在保证能__________的前提下减小稀释度；二是将相同稀释度下的多组数值取_________后再进行计算。 (2)计算方法：每毫升菌液中微生物细胞的数量=某一稀释倍数下至少_____个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。 准确计数 平均值 3 2.显微镜计数法 (1)血细胞计数板 ①一个血细胞计数板含有____个计数区，每个计数区由___个大方格组成，以1 mm×1 mm×0.1 mm大方格为例，其液体体积为_________。  ②计数区正中间的大方格为________计数区，四角的四个大方格是________计数区。 2 9 0.1 mm3 红细胞 白细胞 (2)酵母细胞计数 盖玻片 计数区 气泡 随机取样 上方 左侧 80个小方格细胞总数/ 80×400×10 000×稀释倍数 三、有目的地培养某种微生物 1.依据和方法 依据 (1)不同自然环境中生活着的微生物_______类型不尽相同 (2)许多微生物的代谢方式并不唯一 方法 (1)调整培养基中营养物质的______及比例 (2)有针对性地为目标微生物提供所需的__________ 代谢 浓度 生长条件 概念 在培养基中添加(或减去)某种________成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，______________均不能生长的培养基 举例 添加青霉素——筛选对________有抗性的细菌；不添加氮源——筛选______微生物 2.选择培养基 化学 其他微生物 青霉素 固氮 3.能分解尿素的微生物的分离与计数 (1)实验原理 ①在以尿素为唯一______的选择培养基上生存的微生物能以尿素为______。 ②细菌合成的______能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂______。 (2)培养基的对照：制备100 mL ________________和100 mL尿素固体培养基，分别培养土壤中的微生物，对菌落观察并计数。 氮源 氮源 脲酶 变红 LB固体培养基 (3)实验步骤 G6玻璃 砂漏斗 涂布器 37 [预习效果自评] 1.判断下列说法的正误 (1)多次连续平行划线接种时，将培养皿旋转一定角度后，再次蘸取菌种，并沿上一次划线区域的末端开始划线。 ( ) × 提示：多次连续平行划线接种时，将培养皿旋转一定角度后，不需再次蘸取菌种，只需在上一次划线的末端区域直接开始划线即可。 (2)对酵母菌计数时，用滴管吸取静置的培养液滴满血细胞计数板的方格区。 ( ) × 提示：吸取培养液之前需要将培养液振荡以使酵母菌分布均匀，用滴管在盖玻片边缘滴加，让菌液渗满计数区。 (3)平板划线法简单并且可以用来计数，稀释涂布平板法使单菌落更易分开，但操作复杂些。 ( ) 提示：平板划线法只能用来分离细菌，不能用来计数。 × (4)在培养基中加入酚红指示剂就可以筛选分解尿素的微生物。 ( ) 提示：能否实现筛选，与培养基中是否添加或控制特定物质有关，酚红为指示剂，只是用于鉴别分解尿素的微生物利用尿素的能力。 (5)用稀释涂布平板法接种时，应先在火焰上使涂布器上的酒精燃尽，此时手持涂布器的部位应低于火焰。 ( ) 提示：手持涂布器的部位应高于火焰，以免酒精沿器具流下，烧伤手指。 × × 2.微生物接种的方法很多，平板划线法是常用的 一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③ ④。下列相关叙述错误的是 (　　) A.划线操作时，将蘸有菌液的接种环插入培养基 B.平板划线后培养微生物时要倒置培养 C.不能将第④次的划线与第①次的划线相连 D.在第②~④次划线前都要对接种环进行灭菌 √ 解析：划线时不能将接种环插入培养基，而是在培养基表面划线，A错误；用平板培养基培养微生物时，为防止水蒸气凝集滴入培养基造成干扰或污染，应将平板倒置培养，B正确；划线时要避免最后一次的划线与第一次的划线相连，否则有可能影响单个菌落的分离效果，C正确；在第②~④次划线前都要对接种环进行灼烧灭菌，保证每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，D正确。 3.图1甲、乙、丙、丁四幅图是倒平板操作过程图，图2是两种接种方法接种后培养的效果图，请回答下列问题： (1)请用图1文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：________________。  丙→乙→甲→丁 (2)甲、乙、丙中的灭菌方法是_____________。 (3)丁中的操作需要等待_______________才能进行。  灼烧灭菌法 平板冷却凝固 (4)获得图2中图A效果和图B效果的接种方法分别是________________和_____________。  稀释涂布平板法 平板划线法 (5)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么?应当怎样操作才可避免此种现象?　 _________________________________________________________________________________________________________________________________ 最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌。应采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌 [精要内容把握] 一、知识体系建一建 二、核心语句背一背 1.在固体培养基上采用划线或稀释涂布的方法接种，通过培养能获得由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。 2.稀释涂布平板法接种时，通常需要先将菌液进行梯度稀释，并在培养皿侧面或底面做好标记。 3.稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量。 [四层]学习内容2 融通关键能力 任务驱动 提能点(一)　微生物的分离和纯化 某男性患者，发热伴寒战，入院进行B超及CT检查，疑似肝脓肿。其中细菌性肝脓肿的主要病原菌是大肠埃希菌、克雷伯杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌及一些厌氧菌等。为确定致病原因需要进行细菌的培养及药敏实验检查病原体种类。如图是医院进行的两种不同的微生物纯化操作。 (1)图A采用的何种分离方法，该方法利用的接种工具是什么? 提示：平板划线法，接种工具为接种环。 (2)图B采用的何种分离方法，该方法的操作难度是什么? 提示：稀释涂布平板法，该方法需要对菌液进行梯度稀释。 (3)医院采用图A所示方法分离患者体内的细菌时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是什么? 提示：将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。 生成认知 一、平板划线法 1.平板划线操作流程 2.平板划线操作的注意事项 (1)蘸取菌液及每次划线之前都需要灼烧接种环，划线操作结束后仍需灼烧接种环，三种灼烧的目的不同。 项目 目的 蘸取菌液前灼烧 避免接种环上可能存在的微生物污染菌种 每次划线 前灼烧 杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端 划线操作 结束后灼烧 及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者 (2)在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免温度过高杀死菌种。 (3)除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 (4)划线时用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 二、稀释涂布平板法 1.稀释涂布平板法的操作步骤 操作图示 相关说明 ①将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按10-1~10-6的顺序编号；②用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入10-1倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀；③从10-1倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入10-2倍稀释的试管中，重复②步的混匀操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释 2.稀释涂布平板法的操作细节 (1)样品稀释的问题 稀释 原因 样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键 稀释 标准 选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数处于30~300，便于计数 (2)与涂布有关的问题 ①防止培养基外溅：在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 ②涂布器的灭菌：涂布器用75%酒精消毒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，蘸有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。 ③设置对照：可排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 三、培养酵母菌的分析 1.将未接种的培养基(或接种等量无菌水的培养基)放入25 ℃左右恒温箱中培养的目的：作为空白对照，若有菌落生长，说明培养基被污染或灭菌不彻底。 2.接种成功的标准：若培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小等基本一致，并符合酵母菌菌落的特点(表面光滑湿润、黏稠、多为乳白色的圆形菌落)，则说明接种操作是符合无菌要求的；若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，重新实验。 3.培养24 h与48 h后的酵母菌菌落的大小会有明显不同，培养48 h后的菌落明显较大，菌落颜色加深，光泽度增强。 4.如果在培养基上观察到了不同形态的菌落，原因可能是菌种不纯、培养基灭菌不彻底或在实验操作过程中被杂菌污染。 [典例]　下图甲、乙是微生物接种常用的两种方式，回答相关问题： (1)图甲是利用__________法进行微生物接种的，图乙是利用_______________法进行微生物接种的。这两种方法所用的接种工具分别是________和_________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是__________和酒精消毒。 平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器 灼烧灭菌 [解析]　分析题图可知，图甲和图乙分别是利用平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种的，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧灭菌和酒精消毒。 (2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从______________________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线___________________________。 上一次划线的末端区域 相连(或相接、相交、交叉等) [解析]　平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末端区域开始，最后一次的划线不能与第一次的划线相连。 (3)接种操作为什么一定要在酒精灯火焰附近进行? ______________________________。  酒精灯火焰附近存在着无菌区域 [解析] 在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在酒精灯火焰附近进行。 (4)如图是接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)所示方法。  图乙 [解析]　分析题图可知，培养基上的菌落分布均匀，则其接种方法为稀释涂布平板法。 (5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是________________________________。  稀释倍数不够，菌液的浓度太高 [解析]　采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会导致微生物不能分散成单个细胞。 1.(2025·杭州第二中学月考)平板划线法接种酵母菌时，下列操作正确的是 (　　) A.每次划线时，接种环都需要蘸取菌液一次 B.划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种 C.在超净工作台上接种时要在酒精灯火焰旁进行 D.划线分离后将培养皿正放在恒温培养箱中培养 跟踪训练 √ 解析：划线分离时，菌液只需蘸取一次，A错误；划线分离时，接种环在培养基表面进行划线操作，B错误；微生物培养的关键是无菌操作，在超净工作台上接种时，需要在酒精灯火焰旁进行，以防止空气中微生物的污染，C正确；划线分离结束后，培养皿应倒置于恒温培养箱中培养，D错误。 2.(2023·浙江1月选考)某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是 (　　) A.培养基pH需偏碱性 B.泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C.需在无氧条件下培养 D.分离得到的微生物均为乳酸菌 √ 解析：培养乳酸菌的培养基应偏酸性，A项错误；划线接种时，泡菜汁无需进行多次稀释，B项错误；乳酸菌是厌氧菌，需在无氧条件下培养，C项正确；泡菜汁中还有酵母菌等，因此分离得到的微生物不只有乳酸菌，D项错误。 3.如图是两种不同接种方法所得的结果，下列叙述正确的是 (　　) A.Ⅰ、Ⅱ两种接种方法使用的接种工具在接种前都要在酒精灯火焰上灼烧，且处理方法完全相同 B.进行接种之前都要对操作者双手和培养基进行灭菌处理 C.Ⅰ方法划线时，是沿方向①②③进行，且在③区域看到有单个菌落，可直接计数 D.Ⅰ、Ⅱ所使用的培养基可以相同，且制作时要先调pH再灭菌最后倒平板 √ 解析：图Ⅰ使用的工具是接种环，接种前需在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后再进行划线操作；图Ⅱ使用的接种工具是涂布器，涂布器的处理方法是将蘸有少量酒精的涂布器在酒精灯上引燃，燃尽且冷却后即可涂布，A错误。操作者的双手应进行酒精消毒处理，B错误。平板划线法不能对细菌计数，C错误。Ⅰ、Ⅱ所使用的培养基可以相同，且制作时要先调pH再灭菌最后倒平板，D正确。 酵母菌是一种应用很早的单细胞真菌。据史料记载我国四千年前的殷商时代，劳动人民就用酵母菌酿酒。酵母菌的用途广泛，与人类关系十分密切，在酿造、食品、医药工业等方面占有重要地位。可广泛用于食品发酵、酿造啤酒和制造酒精等。某科研小组使用显微镜计数法对一个批次培养液的酵母菌数量进行检测计数。 任务驱动 提能点(二)　微生物数量的测定 (1)计数前，该科研小组用注射器反复抽取部分培养液冲击剩下的培养液，这样做的目的是什么? 提示：促使培养液中的酵母菌均匀分布，减少误差。 (2)若用血细胞计数板计数细胞时，按下图所示的操作进行，统计出来的数据相比实际值有怎么样的变化?应该如何操作? 提示：统计出来的数值比实际值偏大。正确的操作应该是先盖上盖玻片，然后在盖玻片一侧滴细胞悬液。 (3)如图a为血细胞计数板计数区，图b 为一个中方格中酵母菌数。请思考：统计 图b中的酵母菌数量时，遵循什么原则? 图b中可统计到几个酵母菌?在图a中用方框标出抽样计数区域。 提示：遵循原则：数上不数下，数左不数右。图b中可计数10个酵母菌。图a的抽样计数区如下： 生成认知 一、血细胞计数板及其使用 1.血细胞计数板：通常有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。但无论哪种规格的计数板，每个大方格都有16×25=400(个)小方格。一个大方格长和宽各为1 mm，深度为0.1 mm，容积为0.1 mm3。 2.计数方法：对于16×25的计数板而言，计四角的4个中方格共计100个小方格中的个体数量；而对于25×16的计数板而言，计四角和正中间的(共5个)中方格共计80个小方格中的个体数量。(如下图所示) 3.计算方法 (1)16×25型的计数板：酵母细胞个数/mL=(100个小方格细胞总数/100)×400×10 000×稀释倍数。 (2)25×16型的计数板：酵母细胞个数/mL=(80个小方格细胞总数/80)×400×10 000×稀释倍数。 二、微生物计数的方法 微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，但是一般使用计数法，计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如表所示： 项目 直接计数法 间接计数法 原理 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察计数，再计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 续表 主要用具 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板 培养基 计数数据 菌体本身 培养基上的菌落数 优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌 缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂，有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌数=每小格平均菌体数×400×10 000×稀释倍数 每毫升原液含菌数=培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积 [例1]　(2025·浙江省名校协作体)血细胞计数板是酵母菌计数的常用工具，如图表示一个计数室及显微镜下一个中方格菌体分布情况。下列有关叙述错误的是 (　　) A.每次选取计数室四个角和中央的五个中格计数，目的是减小误差 B.需要先盖盖玻片再滴加样液，等酵母菌全部沉降后方可计数 C.每天的取样时间可任意选择，但取样前要摇匀培养液，目的是使酵母菌均匀分布，减小误差 D.若五个中格酵母菌平均数为上图所示，稀释104倍，则估算培养液中酵母菌的密度为6×1010个/mL √ [解析]　每次选取计数室四个角和中央的五个中格计数，目的是取样计数并求平均值，以减小误差，A正确；制片时，应先将盖玻片盖上，再将培养液滴在计数板的一侧，等酵母菌全部沉降后方可计数，B正确；每天计数酵母菌数量的时间要固定，防止由于取样时间不同造成实验误差，C错误；酵母菌在计数时，计数原则为“计上不计下，计左不计右”，因此计数相邻两边，如果计数的中格酵母菌平均数为题图右侧所示的24个，则培养液中酵母菌的密度=24÷16×400×104×104=6×1010 个/mL，D正确。 [例2]　下图为土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中样品稀释示意图。据图分析，下列叙述正确的是 (　　) A.3号试管的稀释倍数为103倍 B.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰好为5号试管的10倍 C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个 D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要多 √ [解析]　分析题图可知，3号试管的稀释倍数为104倍，A错误；4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数不一定恰好为5号试管的10倍，B错误；5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为(168+175+167)÷3÷0.1×106=1.7×109(个)，C正确；在固体培养基上可能存在两个或多个菌体形成一个菌落的情况，因此用稀释涂布平板法得到的结果往往会比实际活菌数目少，D错误。 [归纳拓展] 用稀释涂布平板法计数微生物的方法 (1)稀释涂布平板操作要求：按照平行重复原则，同一稀释度下的菌液应涂布3个或3个以上的平板。 (2)计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。 (3)选择可用于计数的平板：选择菌落数在30~300的平板(相同稀释度的平板均符合该特点)进行计数，然后取平均值。 (4)每克样品中的菌株数=某一稀释度下平板上生长的平均菌落数÷涂布平板时所用的稀释液的体积×稀释倍数。 跟踪训练 1.(2025·宁波十校适应性考)用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，对该实验有关叙述正确的是 (　　) A.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233 B.涂布了一个平板，统计的菌落数是230 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中测试因素和非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数估计值 √ 解析：用稀释涂布平板法测定同一样品中的细菌数时，为了保证结果准确，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，进行计数，求其平均值，再通过计算得出土壤中的细菌总数，A正确，B、D错误；设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度，C错误。 2.稀释涂布平板法是微生物培养的一种常用的纯化方法。下列相关叙述错误的是 (　　) A.操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释 B.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 C.需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面 D.操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 √ 解析：稀释涂布平板法的操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，当稀释度足够高时，可在培养基表面形成单个的菌落，若稀释度不够高，细胞聚集在一起，得不到单个的菌落，A正确，B错误；需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，C正确；操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防杂菌污染，D正确。 3.某兴趣小组按如图方法对没有加工的鲜奶进行细菌检测。有关叙述正确的是 (　　) A.进行检测之前需要对鲜奶进行高压蒸汽灭菌处理 B.若培养基需要调节pH，应该在灭菌后进行 C.对鲜奶中细菌计数，常采用稀释涂布平板法，统计的结果往往比实际值偏高 D.若3个培养皿中菌落数为35、33、34，则鲜奶中细菌数为3.4×106个/mL √ 解析：实验的目的是检测鲜奶中的细菌数，若使用高压蒸汽灭菌处理鲜奶，则鲜奶就不含有细菌了，A错误；若培养基需要调节pH，应该在灭菌前进行，B错误；使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细胞连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，C错误；从图中可以看出涂布时添加的0.1 mL的鲜奶共稀释了10×10×10×100=105(倍)，所以鲜奶中细菌数为(35+33+34)÷3×105=3.4×106(个/mL)，D正确。 某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。 任务驱动 提能点(三)　有目的地培养某种微生物 (1)培养基中加入化合物A的目的是什么?该培养基属于哪种类型的培养基? 提示：加入化合物A的目的是筛选能降解有机化合物A的菌种，这种培养基属于选择培养基。 (2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的何种物质? 提示：根据培养基成分可知，“化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素”，其中磷酸盐、镁盐以及微量元素均属于无机盐，因此有机化合物A为目的菌提供了生长所需的氮源和碳源。 (3)若实验需要振荡培养，请推测“目的菌”的代谢类型。 提示：异养需氧型。 生成认知 一、选择培养基及其使用方法 1.利用选择培养基筛选菌株的原理 根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。 2.利用不同方法筛选目标微生物 方法一：加入某种特定物质 原理 依据微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以“促进”所需要微生物的生长，“抑制”不需要的微生物的生长 举例 ①培养基中加入高浓度的食盐，可抑制多种细菌生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可达到将该菌分离出来的目的；②在培养基中加入青霉素，可抑制细菌、放线菌生长，从而分离出酵母菌和霉菌等真菌 方法二：改变培养基的营养成分 培养基中缺乏碳源 异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物 培养基中缺乏氮源 可分离出自生固氮微生物 方法三：利用“特定”成分分离 以尿素为唯一 氮源的培养基 可抑制不能利用尿素的微生物的生长，使能利用尿素的微生物生长，从而分离出分解尿素的微生物 以石油为唯一 碳源的培养基 可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生长，从而分离出能消除石油污染的微生物 方法四：通过某些“特殊环境” 高盐环境 可分离出耐盐菌，其他微生物在高浓度环境中易失水而死亡 高温环境 可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而不能生存 二、土壤中分解尿素的微生物的分离实验整体思路 1.筛选过程 先将土壤样品稀释液接种在以尿素为唯一氮源的选择培养基上进行培养，再挑取选择培养基上形成的单菌落接种到加入酚红指示剂的鉴别培养基上培养，鉴别该菌株是否能产生脲酶。 2.过程分析 理论上，以尿素为唯一氮源的选择培养基能够筛选出分解尿素的微生物；但实际上固氮微生物、以尿素分解产物(氨)为氮源的微生物也可以在该培养基上生存；因此选择培养基上的菌落不一定是分解尿素的微生物，挑取单菌落后仍需进一步鉴别。 三、常见实验现象分析 内容 实验现象 结论分析 有无杂菌污 染的判断 用于对照的空白培养基中无菌落生长 培养基制备过程中未被杂菌污染 接种过的培养基中菌落数偏高，菌种的菌落形态多样 接种操作等过程中被杂菌污染 续表 选择培养基 的筛选作用 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显大于选择培养基上的数目 选择培养基具有筛选作用 样品的 稀释操作 某稀释度下得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板 操作成功 重复组 的结果 若选取同一种土样，统计结果应接近。若结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因 [例1]　(2024·浙江6月选考)脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是 (　　) A.镍是组成脲酶的重要元素 B.镍能提高尿素水解反应的活化能 C.产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D.以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 √ [解析]　根据题意，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组成脲酶的重要元素，A正确；脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降低尿素水解反应的活化能有关，B错误；产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖，C正确；产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素水解产生的氨作为氮源，不能产脲酶的细菌则无法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D正确。 [例2]　从自然菌样中筛选较理想的生产菌种的一般步骤：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。请回答下列问题： (1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从_______ (填“高盐”或“低盐”)环境中采集，培养厌氧菌的菌样应从________ (填“有氧”或“无氧”)环境中采集。  高盐 无氧 [解析]　在长期自然选择的作用下，生物与其生活环境相适应，培养嗜盐菌的菌样应从高盐环境中采集，培养厌氧菌的菌样应从无氧环境中采集。 [解析] 对嗜盐菌富集培养的培养基应是加盐培养基，对含耐高温淀粉酶的微生物富集培养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基且在高温条件下培养。 (2)富集培养指创设仅适应于该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物目的的培养方法。对嗜盐菌富集培养的培养基应是______培养基；对含耐高温淀粉酶的微生物富集培养应选择____________________的培养基，并在_______条件下培养。  加盐 以淀粉为唯一碳源 高温 [解析] 高温能使蛋白质和核酸发生不可逆转的变性，高压蒸汽灭菌法是应用较广、效果较好的湿热灭菌法。 (3)实验室最常用的灭菌方法是高温处理。高温灭菌的原理是高温使微生物的蛋白质和核酸等物质发生_______。__________灭菌法是微生物研究和教学中应用较广、效果较好的湿热灭菌法。  变性 高压蒸汽 [解析] 纯化微生物的两种接种方法分别是稀释涂布平板法和平板划线法。 (4)纯化微生物培养的两种接种方法分别是__________________、_____________。  稀释涂布平板法 平板划线法 跟踪训练 1.(2025·杭州九校期中联考)下列对微生物进行选择培养或鉴定的叙述，不合理的是 (　　) A.在热电厂排污口周围的水体中容易筛选到耐热菌 B.筛选土壤中的真菌时需要在培养基中加入抗生素 C.向选择培养基中加入特定指示剂可以对筛选的菌落进行鉴定 D.从土壤中筛选尿素分解菌所用的培养基中只有尿素一种碳源 √ 解析：筛选耐热菌时需要在温度较高的环境中取样，故热电厂排污口周围的水体中容易筛选到耐热菌，A合理；抗生素可以杀灭或抑制细菌的生长，因此筛选土壤中的真菌时需要在培养基中加入抗生素，B合理；对筛选的菌落进行鉴定时可以向选择培养基中加入特定指示剂，比如对筛选的尿素分解菌进行鉴定时可以向选择培养基中加入酚红指示剂，C合理；从土壤中筛选尿素分解菌所用的培养基只有尿素一种氮源，D不合理。 2.(2025·浙考联盟改编)为提高一种石油降解菌净化能力，将其涂布于以石油为唯一碳源的固体培养基上，以致死率为90%的辐照剂量诱变处理，下列叙述不合理的是 (　　) A.将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率 B.用于对照的空白培养基中无菌落生长，说明培养基未被杂菌污染 C.需通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间 D.挑取培养基上长出的较大单菌落，纯化后进行降解效率分析 √ 解析：培养基应该先灭菌，再在超净工作台上分装到培养皿中，A错误；用于对照的空白培养基中无菌落生长，说明培养基未被杂菌污染，B正确；可通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间，C正确；结合题干信息分析可知，石油降解菌能分解石油获得碳源，维持生长，形成菌落，菌落越大说明降解能力越强，故挑取培养基上长出的较大单菌落，纯化后进行降解效率分析，以获得能高效降解石油的菌种，D正确。 A.硝化细菌与乳酸菌　　 B.乳酸菌与根瘤菌 C.根瘤菌与衣藻 　　 　　 D.硝化细菌与衣藻 3.(2025·9+1联盟高三测评)下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源的来源和新陈代谢类型的描述，其中正确的一组是 (　　) √ 项目 硝化细菌 乳酸菌 根瘤菌 衣藻 能源 NH3 乳酸 N2 光能 碳源 CO2 糖类 糖类 CO2 氮源 NH3 N2 N2 N 代谢类型 自养需氧型 异养厌氧型 自养需氧型 自养需氧型 解析：硝化细菌能将NH3氧化成亚硝酸和硝酸，并利用该过程释放的化学能，将CO2和水合成有机物，属于自养需氧型生物，其氮源和能源都是NH3，碳源是CO2；乳酸菌是异养厌氧型生物，不能直接利用N2，氮源是N等，碳源和能源为糖类；根瘤菌是能固氮的异养需氧型生物，进行生命活动所需要的能量来自糖类等有机物的氧化分解，氮源是N2，碳源和能源是糖类；衣藻是低等植物，能利用光能进行光合作用制造有机物，属于自养需氧型生物，其能源是光能，碳源是CO2，氮源是N等。 [四层]学习内容3·4 浸润学科素养和核心价值 科学思维——运用归纳法比较平板划线法和稀释涂布平板法 比较项目 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散 将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以形成单细胞菌落(标准菌落) 接种工具 接种环 涂布器 单细胞菌 落的获得 单细胞菌落从最后划线的区域挑取 只有合适的稀释度，才能得到单细胞菌落 续表 用途 分离纯化菌种，获得单细胞菌落 ①分离纯化菌种，获得单细胞菌落；②用于计数 操作难 易程度 操作较简便，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，细菌逐步分散开 操作比较复杂，需将菌液进行一系列的梯度稀释和涂布培养，需涂布多个平板 共同点 ①都能分离纯化菌种； ②都是在固体培养基上进行的； ③都需要在酒精灯火焰旁进行接种 类别 平板划线法 稀释涂布平板法 ① 需要接种环(灼烧灭菌) 需要涂布器(只需酒精消毒) ② 无需对菌液梯度稀释 对菌液系列梯度稀释 ③ 能纯化微生物，不可计数 既能纯化微生物，又能计数 ④ 最后的划线区域一定出现单菌落 稀释倍数足够大的菌液，涂布的平板才会出现单菌落 素养评价 1.(2025·宁波效实中学月考)微生物的接种方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。下列关于两者区别的说法，正确的是 (　　) A.②④　 B.③④ C.①④ D.②③ √ 解析：稀释涂布平板法中，用到的涂布器进行酒精浸泡消毒后要在涂布平板前进行灼烧去除表面残留少量酒精且有利于灭菌，①错误；平板划线法不需要对菌液梯度稀释，稀释涂布平板法需要对菌液进行系列梯度稀释，②正确；平板划线法不能计算菌液中的活菌数，稀释涂布平板法可计算菌液中的活菌数，③正确；如果划线操作不规范，平板划线的最后划线区域也不一定出现单菌落，④错误。 2.为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题： (1)通常培养基采用___________法灭菌；待平板冷却至_______左右时进行倒平板操作，待平板冷却凝固后，应将平板倒过来放置，这样做的目的是_________________________________________。  高压灭菌 60 ℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 解析：微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压灭菌；倒平板操作的适宜温度为培养基冷却至60 ℃左右，将平板倒置的作用是防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (2)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为_____________。  检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×107 解析：为了检测培养基灭菌是否彻底，应该取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间。根据题意分析，3个平板的菌落数分别是39、38和37，且水样稀释了100倍，体积为0.1 mL，因此每升水样中的活菌数为(39+38+37)÷3÷0.1×100×1 000=3.8×107(个)。 (3)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过______灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_______________________________________。  灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 解析：在采用平板划线法分离菌种的过程中，对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，目的是将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的单菌落。 (4)示意图A和B中，_______表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。  B 解析：据图分析可知，图A表示的是用平板划线法接种培养后得到的结果，图B表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (5)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因：振荡培养能提高培养液中_________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高___________的利用率。  溶解氧 营养物质 解析：根据题意分析，振荡培养不仅提高了培养液中溶解氧的含量，还可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，使细菌生长速度加快。 Ⅰ.活动“接种、培养并分离酵母菌”讨论题参考答案(教材P13) 1.提示：与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。 2.提示：与用酵母菌纯种在固体培养基表面接种的结果相比，用样品稀释液接种的固体培养基表面出现特征相同的菌落即认为可能是分离出了酵母菌单菌落。 教材活动与课后习题参考答案 3.提示：若出现，可能是在接种过程中有杂菌污染(根据菌种来源不同，可能有多种合理答案)。 4.提示：否。方法一：挑取单菌落接入糖水中，培养一段时间检查是否能产生酒味；或接入面团中观察能否发面；方法二：挑取菌落样品，制作临时装片，在显微镜下观察、识别。 Ⅱ.活动“能分解尿素的微生物的分离与计数”讨论题参考答案(教材P19) 1.提示：会影响实验结果。如果先取用稀释度小的菌液，微生物浓度大，再用同一移液器吸取稀释度大的菌液，就会提高后者的细菌数目，从而导致较大的统计误差。 2.提示：应统计稀释度为1的3个培养皿中的菌落数后取平均值。因为这个浓度的培养皿中菌落数比较适中，计数的结果误差较小。 3.提示：因为培养基中加入了酚红指示剂，当培养基pH升高指示剂会变红。提示这些微生物能够合成脲酶而将尿素分解成氨。氨可使培养基的碱性增强，从而使颜色发生改变。 4.提示：答案合理即可。 意见一：合理，因为自生固氮微生物能在固氮酶的作用下，将N2转化为可利用的氮源，故可在没有氮源的培养基上生长。 意见二：不合理，因为F培养皿中微生物总数相对少于E培养皿，所以如果延长培养时间，培养基仍有可能改变颜色。 意见三：不合理，应挑取培养基未变色区域的菌落，清洗除去细胞表面的培养基后接种在无氮源的培养基上，观察其生长情况，才能证明其是否为能固氮的微生物。 Ⅲ.课后思考与练习参考答案(教材P22) 一、选择题 1.D　2.D　3.B　4.D 二、简答题 1.提示：根据微生物的代谢特征调整培养基的配方，可以抑制不具有某种代谢特征的微生物生长，只有具备相应代谢特征的微生物才能生长，从而实现分离微生物的目的。 2.提示：从自然界中分离能产生某种特定水解酶的微生物的主要过程： (1)在含有特定化合物的环境中取样并制成菌悬液。 (2)配制含特定化合物的液体培养基，将菌悬液接种其中培养。一段时间后，若检测到特定化合物含量下降，即认为采集到了所需菌种。 (3)配制含该特定化合物的培养基平板，将以不同梯度稀释的菌悬液在平板上涂布或划线接种。 (4)挑取单菌落接种于含一定量特定化合物的培养液中培养24~48 h后，检测特定化合物的含量变化以确认选取的微生物菌种是否为所需菌种。 课时跟踪检测 一、选择题 1.平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　) A.不含氮源的平板不能用于微生物培养 B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 √ 解析：不含氮源的平板可用于固氮微生物的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 2.(2025·湖南高考)采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是 (　　) A.稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B.完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C.土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分解成乙酸 D.用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 1 2 4 5 6 7 8 9 3 √ 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A错误；平板划线法操作后需设置未接种的平板作为空白对照，以验证是否有杂菌污染，B正确；醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误；筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨(含其他氮源)，则无法筛选目标菌，D错误。 A.固体平板培养使用的培养基属于鉴别培养基 B.图2中划线的顺序依次是①③② C.两个固体平板培养基中均需加入抗生素 D.过程Ⅲ得到的结核杆菌均具有耐药性 3.为探究结核杆菌的耐药性，研究人员提取患者体内病原菌进行培养，如图1，过程Ⅰ接种纯化结果如图2，下列说法错误的是 (　　) √ 1 2 4 5 6 7 8 9 3 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：分析题图可知，过程Ⅰ是接种纯化，使用的培养基应属于选择培养基，A错误；根据图2中菌落分布的特点，划线次数越多，细菌数量越少，可以推导出划线的顺序依次是①③②，B正确；为了防止杂菌污染，确保分离到耐药性的结核杆菌，两个固体平板培养基中均需加入抗生素，C正确；经选择培养基筛选，得到的结核杆菌均具有耐药性，D正确。 4.(2025·温州新力联盟联考)如图为“能分解尿素的微生物的分离与计数”的实验结果，下列叙述正确的是 (　　) 1 2 4 5 6 7 8 9 3 A.图中采用平板划线法接种 B.图中①和②表示尿素培养基长出的菌落 C.图中③④培养基中菌落生长代谢时，会释放CO2 D.实验结果表明，自然界中能合成脲酶的微生物比例较高 √ 解析：根据实验结果可知，图中采用的接种方法为稀释涂布平板法，A错误；图中①和②(稀释度较大)的菌落数明显多于③(稀释度较小)的菌落数，说明①和②中的培养基很可能是LB固体培养基，B错误；③④已经分离出单个细菌繁殖而来的尿素分解菌的菌落，尿素分解菌分泌脲酶，能够催化尿素分解成氨、CO2和水，C正确；根据实验结果判断自然界中能合成脲酶的微生物比例较低，D错误。 1 2 4 5 6 7 8 9 3 5.(2025·黑吉辽蒙高考)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22H23ClN2O8)能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是 (　　) A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C.配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 √ 1 2 4 5 6 7 8 9 3 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：该研究的目的是筛选出高耐受且降解金霉素能力强的菌株，可以以金霉素为唯一碳源制备选择培养基进行筛选，且逐步提高培养基中金霉素的浓度，有助于获得高耐受的菌株，A、B正确；微生物培养需要适宜的pH等，C正确；稀释涂布平板法不需要接种环，而是需要涂布器，D错误。 6.金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性，可引起人肠炎等疾病，在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。某研究小组要测定某地自来水中金黄色葡萄球菌的浓度，将自来水依次稀释成10-1、10-2、10-3、10-4四种稀释液。下列说法错误的是 (　　) A.配制培养基时应先调pH到中性偏碱后灭菌 B.该培养基能起到鉴别金黄色葡萄球菌菌落的作用 C.培养基中加入高浓度NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选 D.若在10-3稀释液的3个血平板上(每个接种0.1 mL)，金黄色葡萄球菌菌落数分别为35、36和37，则每升自来水中的活菌数约为3.6×105个 √ 1 2 4 5 6 7 8 9 3 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：金黄色葡萄球菌(细菌)适宜pH为中性偏碱，配制培养基时应先调pH再灭菌，防止调pH时造成杂菌污染，A正确；金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，由此可见该培养基能起到鉴别金黄色葡萄球菌菌落的作用，B正确；由于金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性，高浓度NaCl不影响金黄色葡萄球菌生长的同时能抑制其他菌的生长，因此，金黄色葡萄球菌的培养基中加入高浓度NaCl，有利于金黄色葡萄球菌的筛选，C正确；若在10-3稀释液的3个血平板上(每个接种0.1 mL)，金黄色葡萄球菌菌落数分别为35、36和37，则每升自来水中的活菌数约为(35+36+37)÷3÷0.1×103×1 000=3.6×108(个)，D错误。 7.莠去津是一种含氮的有机化合物，是一种广泛使用的除草剂，且在土壤中不易降解。为修复被其污染的土壤，某研究小组按下图选育能降解莠去津的细菌(目的菌)。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。下列说法错误的是 (　　) 1 2 4 5 6 7 8 9 3 1 2 4 5 6 7 8 9 3 A.图中A~C均为以莠去津为唯一氮源的选择培养基 B.A~C培养的目的是增加目的菌的数量 C.本实验用到的固体培养基在接种前是不透明的 D.周围无透明圈的菌落即为目的菌落 √ 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：据题图分析可知，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为选择培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)，并提高其密度，故为获取目的菌，图中A~C均为以莠去津为唯一氮源的选择培养基，A~C培养的目的是选择并扩大培养目的菌，A、B正确；据题干信息“已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明”可知，固体培养基在接种前是不透明的，原因是培养基中含过量莠去津，当莠去津被降解后，培养基会变透明，所以培养基中有透明圈的菌落即为目的菌落，C正确，D错误。 8.(2025·浙江超级全能生联考)如图为某同学取1 mL培养液稀释100倍后，用血细胞计数板(1 mm×1 mm×0.1 mm)通过显微镜观察到的培养液中的酵母菌在血细胞计数板中的分布情况。下列相关叙述错误的是 (　　) 1 2 4 5 6 7 8 9 3 1 2 4 5 6 7 8 9 3 A.该培养液中酵母菌的数量为6×108个/mL B.选择图示乙规格的计数室，含25个中方格、400个小方格 C.一个血细胞计数板中央仅含有一个计数室 D.取样时滴管从静置的培养液底部吸取，会导致数据偏大 √ 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：由乙图可知，该血细胞计数板的规格为25个中方格×16个小方格，即一个大方格中含有400个小方格，乙中一个中方格含24个酵母菌，则一个大方格中含24×25=600(个)酵母菌，因大方格体积为0.1 mm3，又稀释了100倍，所以酵母菌为600÷0.1×100×1 000=6×108(个/mL)，A、B正确；一个血细胞计数板中央含有两个计数室，C错误；静置的培养液中酵母菌细胞沉到底部，直接从底部吸取会导致细胞数目偏多，数据偏大，D正确。 二、非选择题 9.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请回答有关问题。 1 2 4 5 6 7 8 9 3 1 2 4 5 6 7 8 9 3 (1)为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用_____________________的培养基进行分离，这种培养基属于_______培养基(按功能分类)。可在培养基中加入_______指示剂对该类微生物鉴别。  尿素作为唯一的氮源 选择 酚红 解析：用尿素作为唯一氮源的培养基能够选择出分解尿素的微生物，这种培养基属于选择培养基。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。 1 2 4 5 6 7 8 9 3 (2)若取土样6 g，应加入______mL的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成101~107不同浓度的土壤溶液。将103~107倍的稀释液分别吸取0.2 mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平，每个稀释度下至少涂布3个平板，这种接种方法称为_________________。 54 稀释涂布平板法 1 2 4 5 6 7 8 9 3 将接种的培养皿放置在37 ℃恒温培养箱中培养24 h~48 h，观察并统计菌落数，结果如表，其中______倍的稀释倍数比较合适，由此计算出每克土壤中的细菌数为___________。这种方法测定的菌落数往往比活菌的实际数目_____ (填“低”或“高”)。  稀释倍数 103 104 105 106 107 菌落数 /个 1号平板 478 367 277 26 5 2号平板 496 354 261 20 8 3号平板 509 332 254 29 3 105 1.32×108 低 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：若取土样6 g，应加入54 mL的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成101~107不同浓度的土壤溶液。将103~107倍的稀释液分别吸取0.2 mL加入固体培养基上，用涂布器将菌液铺平，每个稀释度下至少涂布3个平板，这种接种方法称为稀释涂布平板法。在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30~300的进行计数，求其平均值，由题表可知，105倍的稀释倍数比较适合计数，再通过计算得出土壤中细菌总数。由此计算出每克土壤中的细菌数≈(277+261+254)÷3÷0.2×105=1.32×108。由于一个菌落可能是由一个或多个细菌繁殖而来，因此这种方法测定的细菌数往往比活菌的实际数目低。 1 2 4 5 6 7 8 9 3 (3)若研究尿素分解菌的群体生长规律，可采用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_______________________________________________。将分离纯化后的单个菌落进行液体培养，可采用定期取样的方法进行显微计数。若以一个大方格(体积为0.1 mm3)有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为45，菌液稀释倍数为102，那么原菌液的菌群密度为____________个/mL。  将聚集的菌体逐步稀释以便获得(不连续的)单个菌落 2.25×108 1 2 4 5 6 7 8 9 3 解析：平板划线法分离土壤中的尿素分解菌时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线区域的末端开始划线，这样做是将聚集的菌体逐步稀释以便获得(不连续的)单个菌落。将分离纯化后的单个菌落进行液体培养，可采用定期取样的方法进行计数。若以一个大方格(体积为0.1 mm3)有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为45，菌液稀释倍数为102，那么原菌液的菌群密度为45÷5×25÷0.1×103×102=2.25×108(个/mL)。 本课结束 更多精彩内容请登录：www.zghkt.cn $