2027届高考生物人教版一轮复习课件 第38讲 微生物的培养技术及应用

该高中生物学高考复习课件聚焦微生物的基本培养技术（培养基配制、无菌技术、纯培养）和选择培养与计数（选择培养基设计、微生物计数方法）两大核心考点，依据高考评价体系分析2023-2025年多省真题分布，明确高频考点权重，归纳选择、实验等常考题型，构建系统备考框架。 课件亮点在于高考真题实战训练与科学思维、探究实践素养培育，如结合2025黑吉辽蒙真题解析选择培养基设计原理，通过稀释涂布平板法计数公式应用培养科学思维，针对倒平板操作等易错点提供规范指导。助力学生掌握答题技巧，教师可据此精准教学，提升复习效率。

微生物的培养技术及应用 高中生物·一轮复习·第38讲 SW生老师 考情 分析 微生物的基本培养技术 ①2025江苏T11　　②2025河北T18　　③2024湖南T6　　④2024黑吉辽T19⑤2024广东T21⑥2023全国乙T37⑦2023河北T12⑧2023重庆T9 微生物的 选择培养 和计数 ①2025北京T17②2025湖南T5③2025四川T8④2025山东T15⑤2025黑吉辽蒙T4⑥2025云南T21⑦2024重庆T13 ⑧2024江西T17⑨2024浙江T14⑩2023山东T15⑪2023广东T10⑫2023北京T16⑬2023河北T3⑭2023辽宁T9 微生物的基本培养技术 PART 01 1.微生物的概念： 2.防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。 3.实验室培养微生物的条件： ①要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件； ②要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。 难以用肉眼观察的微小生物的统称。 包括细菌、真菌、病毒及一些原生生物等 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，即培养基。 1.培养基的概念、作用及类型 （1）概念： （2）作用： 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 一、培养基的配制 （3）类型： 液体培养基 固体培养基 菌落 不含凝固剂（如琼脂），呈液态状态 在液体培养基中加入琼脂后制成的琼脂固体培养基，是实验室中最常用的培养基之一 微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长形成肉眼可见的菌落 拓展：培养基的类型及用途 划分标准 培养基种类 特点 用途 物理性质 化学成分 用途 不加凝固剂 加凝固剂，如琼脂 工业生产 观察微生物的运动、 分类鉴定 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 培养基成分明确 分类、鉴定 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 培养、分离出特定微生物 在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同种类的微生物 鉴别不同种类微生物 天然培养基 合成培养基 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 选择培养基 鉴别培养基 2、培养基的营养构成 （1）基本成分： 水、碳源、氮源、无机盐。 碳源 无机碳源： 有机碳源： 氮源 NH4＋、NO3-、NH3等。 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。 CO2、CO32-、HCO3-。 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。 无机氮源： 有机氮源： 来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质 无机盐 Zn、Cu、Mn、Co、Mo等 大量元素： 微量元素： Ca、K 、Mg等 牛肉膏、蛋白胨： 自养微生物 异养微生物 为什么培养基需要氮源？ 是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 （2）特殊需求： 满足微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求 ④培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。 ①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素； ②培养霉菌时，需要将培养基调至酸性； ③培养细菌时，需要将培养基调至中性或弱碱性； 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000ml 水 例：某种细菌培养基的营养构成 1.概念： 防止杂菌污染的培养微生物的操作技术 2.手段： 主要包括消毒和灭菌。 （1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 （2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？ 还能有效避免操作者被微生物感染。 二、无菌技术 3.消毒 （1）概念： 指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物 （2）常用的消毒方法 ①煮沸消毒法： 100℃煮沸5～6min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。 ②巴氏消毒法： 63～65℃下消毒30 min或72~76℃处理15s或80~85℃处理10~15s 适合一些不耐高温的液体，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分。 用70%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。 ③化学药剂消毒法： ④紫外线消毒法： 接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min。可杀死物体表面和空气中的微生物。在照射前，适量喷苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。 4.灭菌 （1）概念： 指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 （2）常用的灭菌方法 ①湿热灭菌： 利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法。 高压蒸汽灭菌效果最好，100 kPa、121℃下维持15～30min，工具为高压蒸汽灭菌锅，常用于培养基、无菌水等的灭菌。 ②干热灭菌： 将灭菌物品放入密闭容器如干热灭菌箱，在160～170℃的热空气中维持2～3h。常用于耐高温的和需要保持干燥的物品（如玻璃器皿、金属用具等）。 ③灼烧灭菌： 适用于微生物的接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其它金属用具，试管口、瓶口等容易被污染的部位 1.概念： （1）培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。 （2）纯培养物： 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 （3）纯培养： 获得纯培养物的过程 （4）菌落： 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 将单个微生物分散在固体培养基上的方法 2.原理： 微生物群 分散或稀释 单个细胞 单个菌落 繁殖 （5）平板划线法和稀释涂布平板法： 三、微生物的纯培养 3.步骤： 微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤 （以酵母菌的纯培养为例） （1）制备培养基： ①配制培养基： 称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15～20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。 ②灭菌： 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15～30min。 培养基灭菌： 将5～8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160～170℃灭菌2h。 培养皿灭菌： ③倒平板 待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 ①拔出锥形瓶的棉塞 ②将瓶口迅速通过火焰 ③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖 倒平板的具体操作步骤 ④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置（既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染）。 （2）接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作(平板划线法)，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。 ①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红 ②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞 ③试管口通过火焰 ④在火焰附近 用接种环蘸取一环菌液 ⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞 ⑥将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线 平板划线法的具体划法 注意： ①接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次； ②划线首尾不能相接； ③每次划线前接种环进行灭菌； ④划线后，培养皿倒置培养。 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上原有微生物 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 思考 （3）培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24～48h。 4.结果分析与评价 （1）在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？ 在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染或灭菌不彻底。 （2）在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、形状和大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？ 在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点， 则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。 （3）你是如何记录实验结果的？ 可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等。 微生物的选择培养和计数 PART 02 1. 科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 筛选原因：因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，使耐热的Taq细菌保留下来。 PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 耐高温的酶 耐高温生物体 高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 那么，如何从众多的微生物中筛选出单一菌种？ 1966年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的Taq细菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）。 一、选择培养基 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 2.实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 3.选择培养基 不加氮源 自养微生物 酵母菌和霉菌(青霉素能杀死细菌、放线菌) 固氮微生物 加入青霉素 加高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物 不加碳源 思考·讨论 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。 这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。 讨论： 1.你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？ 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖。 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2)2 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基一 培养基二 ①从物理性质看两种培养基属于哪类？依据是什么？培养基的主要用途是什么？ 都属于固体培养基。依据是添加了凝固剂琼脂，且比例为1.5%-2%。培养基的主要用途是分离、鉴定、计数。 ②从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到何种细菌？ 培养基二属于选择培养基；其可获得能分解尿素的微生物。 ③两种培养基中共有哪些成分？ 碳源、氮源、无机盐、水 培养基一的碳源为__________________，氮源为_____________________； 培养基二的碳源为_______，氮源为_______； 牛肉膏、蛋白胨 牛肉膏、蛋白胨 葡萄糖 尿素 如果想知道1g 土壤中有多少能分解尿素的细菌，仅有选择培养基是不够的，还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法。由于土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物，必须要对土样进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上，也就是要采用稀释涂布平板法 二、微生物的选择培养 样品梯度稀释 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 1ml 107 稀释10倍菌液 101 ①在火焰旁称取土壤10g，加入90ml无菌水中，摇匀，制成稀释10倍的土壤菌液。 ③分别取1ml上清液，加入盛有9ml无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。 ②取6支试管，分别加入9ml无菌水。 取样涂布平板 滴 ③取0.1ml菌液（不超过），滴加到培养基表面 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中（尽量滴尽酒精后灼烧） 浸 灼 ⑤将涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，涂布器冷却后，再进行涂布。 涂 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养。 各梯度分别涂布至少3个平板和2个不涂布平板，不涂布的平板作空白对照 选择培养基 完全培养基 判断选择培养基是否具有筛选作用 一浸、二滴、三烧、四涂 设置两个空白对照：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。 以验证培养基中是否含有杂菌 原则：确保菌落数在30—300之间 接种：用稀释液涂布平板。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入 30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落 探究·实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （一）提出问题 土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如 何分离它们?每克土壤样品究竟含有多少这 样的细菌? （二）基础知识 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌，该选择培养基的配方见右栏。 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml （三）实验原理 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml 制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基 对照作用 思考1：为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ ①提供无机盐； ②调节pH。 （四）实验设计 细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3-8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。 操作完成后，一定要洗手。 （1）土壤取样 （2）样品的稀释 测细菌数：一般用104、105、106稀释液。 测放线菌：一般用103、104、105稀释液。 测真菌数：一般用102、103、104稀释液。 不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。 B A C 思考2： 在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？ 选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养 ①不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。 细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d。 ②每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录 作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 ③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。 注意：设置对照组一同培养 对照组的作用： ①未接种的选择培养基、未接种的牛肉膏蛋白胨培养基：验证是否有杂菌 ②接种的牛肉膏蛋白胨培养基：验证是否具有筛选作用 （3）微生物的培养与观察 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3 脲酶 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 进一步探究：土壤中分解尿素的细菌的鉴定 对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料，进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。 ①液体培养基可以直接看液体的变色情况； ②固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 选择30-300个菌落的平板进行计数； 每个稀释度至少取3个平板取其平均值； 注意： 统计的结果一般用菌落数而不是活菌数； 统计的菌落往往比活菌的实际数目低； 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 ②计数原则 因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落 1. 稀释涂布平板法 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。 三、微生物的数量测定 ③计算 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 主要方法 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 通过接种环在琼脂固体培养基的表面_________操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。（不能计数） 将菌液进行一系列的_________，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。（可计数） 连续划线 梯度稀释 主要步骤 _________操作 接种工具 _______ 平板示 意图 平板划线 涂布器 梯度稀释和涂布平板操作 接种环 平板划线法与稀释涂布平板法的比较 不能区分死菌与活菌； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 2.计数板计数法 ①原理：利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ②缺点： 拓展 是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红—美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法 其大致流程是：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到含有伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目，流程示意图如图所示。 能力提升 PART 03 1.培养基灭菌后，为什么需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板？可用什么办法来估计培养基的温度？ 琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固。倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不及时操作，琼脂会凝固。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.倒平板时，培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而且倒入后，立即盖上皿盖，目的是什么？ 防止杂菌污染培养基。 4.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 5.为什么不能将第一次划线与最后一次划线相连？ 最后一次的划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次的划线相连则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。 6.为什么第二次及其后的划线，要从上一次划线的末端开始？ 线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 7.培养酵母菌时为什么要同时放入未接种的平板？ 作对照，该培养皿无菌落说明培养基灭菌合格。 8.如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你认为是由什么原因造成的？ 培养基灭菌不彻底或接种过程中有杂菌污染。 9、能在选择培养基上生长的一定是目的菌吗？为什么？ 不一定。原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步的鉴定。 10、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中如何设置对照组，以及设置对照的目的是什么？ 本实验中有两组对照，一组是未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板和未接种的选择培养基平板，另一组是已接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板。前一组的平板上如果没有菌落生长，可以说明培养基在使用前未被杂菌污染；后一组使用的牛肉膏蛋白胨培养基适合几乎所有土壤微生物的生长和繁殖，如果该组平板上的菌落数显著多于同一稀释度的菌液涂布的选择培养基平板上的菌落数，可以说明选择培养基具有选择作用。 11.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40% ~ 60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。 （1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。 提示：可以参考本节“探究·实践”中的设计思路进行设计。 （3）有同学说可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。 人工设置适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。 （2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？ 纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。 真题练习 PART 04 1．(2025·黑吉辽蒙选择考)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22H23ClN2O8)能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是(　　) A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 D 2．(2025·江苏选择考)从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是(　　) A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 B 3．(2025·河北选择考改编)隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA(一种功能性脂肪酸)的藻类之一。从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述错误的是(　　) A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源 B．采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻 C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长 D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量 B 4．(2024·黑吉辽选择考改编)某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作错误的是(　　)   A．在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品 B．将采集的样品充分消毒后，用无菌水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测 C．将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落 D．判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小 A 5．(2025·四川选择考)微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X＋Y(X∶Y＝1∶1)分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率(残留率＝剩余量/添加量×100%)，结果如下图。下列叙述正确的是(　　)  A．用平板划线法能测定X菌组中的活菌数 B．Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高 C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种 D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 C $