1.2.2 微生物的选择培养和计数课件-2025-2026学年高二下学期生物人教版选择性必修3

该高中生物学课件聚焦微生物的选择培养和计数，涵盖显微镜直接计数、稀释涂布平板法及土壤中分解尿素细菌的分离与计数实验，通过方法原理解析、操作步骤演示和实验设计引导，构建从理论到实践的学习支架。 其亮点在于以探究实践为核心，融合科学思维（如方法对比、误差分析）与生命观念（选择培养基的结构与功能观），例如详细的梯度稀释操作、无菌技术要点及菌落计数公式推导，助力学生掌握实验技能，教师可借此高效开展实验教学，提升学生科学探究和数据分析能力。

微生物的选择培养和计数 发酵工程 1 显微镜直接计数 （1）原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。 ①细菌计数板：较薄，对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 ②血细胞计数板：较厚，用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。 02 微生物的数量测定 （2）优点：快速、直观、设备简单；能观察微生物的形态特征。 （3）缺点：不能区分死菌和活菌。 显微镜直接计数: 02 微生物的数量测定 可以染色（如使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色）后再进行显微镜计数。 稀释涂布平板法 将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单菌落。 1mL菌液+9mL无菌水 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。 01 稀释涂布平板法 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 1×102 9mL无菌水 ②将10 g土样加到盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 90 mL的无菌水 10g土样 01 稀释涂布平板法 ④将涂布器浸入再盛有酒精的烧杯中。 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 01 01 01 稀释涂布平板法 微量移液器 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 01 稀释涂布平板法 恒温培养箱 01 稀释涂布平板法 01 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落 01 稀释涂布平板法 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落 10 注意事项 （1）各操作细节要保证“无菌”。如移液管要经过灭菌；菌液的稀释、滴加到培养皿、涂布等操作在酒精灯火焰附近进行；涂布器要经过灼烧灭菌等。 （2）将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧。 （3）灼烧涂布器，要待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 （4）操作中要注意防火。不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。 （5）涂布结束后，应将一个未接种的培养基和已接种的培养基放在一起培养？ 检测培养基是否灭菌彻底 1. 稀释涂布平板法计数（活菌计数） （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测除样品中大约含有多少活菌。 （2）原则：一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后取其平均值。 减少实验误差，保证实验结果更准确。 02 微生物的数量测定 （3）缺点：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 （4）统计结果：一般用菌落数而不用活菌数来表示。 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 02 微生物的数量测定 因为当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落 03 微生物的数量测定 实验设计 1.土壤取样 ①要求：富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤 取样时一般要铲去表层土 城市：公园里、街道旁、花盆中 农村：农田里、菜园里 ②取样土层：距地表3~8cm的土壤层 2.配置培养基 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 14 03 微生物的数量测定 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素为，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 资料补充 CO(NH2)2 + H2O CO2 + 2NH3 脲酶 转化 NH4+ NO3- 1. 将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 15 03 微生物的数量测定 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 利用尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL 16 03 微生物的数量测定 实验设计 1.土壤取样 ①要求：富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤 取样时一般要铲去表层土 城市：公园里、街道旁、花盆中 农村：农田里、菜园里 ②取样土层：距地表3~8cm的土壤层 2.配置培养基 以尿素为唯一氮源的培养基 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 17 03 微生物的数量测定 实验设计 4.涂布平板 3.样品的稀释 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 细菌： 104、105、106 放线菌：103、104 、105 真菌：102、103、104 稀释倍数 18 03 微生物的数量测定 5.培养观察 平板倒置于30~37℃下培养1~2d，每隔24h观察统计一次 1×106 1×107 1×104 1×105 无菌水 选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 实验设计 19 03 微生物的数量测定 实验设计 4.涂布平板 稀释倍数 1×106 1×107 1×104 1×105 无菌水 选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 对照 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 对照 20 03 微生物的数量测定 实验设计 6.菌落计数 稀释度 1×104 1×105 1×106 1×107 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 每个平板的菌落数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行技术，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据对应的稀释度进行计算！ 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 若其中有平板上的菌落数量与其他平板差别很大？ 舍弃或重新实验 21 03 微生物的数量测定 实验设计 6.菌落计数 =（C÷V）×M 每克样品中的菌株数 =菌落平均数÷涂布的体积×稀释倍数 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数; V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL); M:稀释倍数 22 问题2：你是否获得了某一稀释度下菌落数为30~300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？ 如果得到了两个或多个菌落数为30~300的平板，说明稀释度合格，操作比较成功，能够进行菌落的计数。 结果分析与评价 问题3：你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异大，可能是什么原因引起的？ 如果用同一土样进行操作，数据应该比较接近。 比较 平板划线法 稀释涂布平板法 工具 接种环 涂布器 原理 通过接种环在琼脂固体培养基的表面___________操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。 将菌液进行一系列的 ，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。 特点 方法简单，但不适宜计数 单菌落更易分开，可以计数，但操作复杂 平板 示图 共同点 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得 ， 达到分离微生物的目的，也可以观察菌落特征。 连续划线 梯度稀释 归纳总结：平板划线法与稀释涂布平板法的比较 单菌落 课堂小结 $