精品解析：青海省海南州高级中学2025-2026学年高二下学期6月月考生物试卷

高二第三次月考生物试卷 一、选择题（每题有一个正确选项，20题共60分） 1. 某同学在制作泡菜前，查阅资料得知，可以向泡菜坛中加入一些“陈泡菜水”。在制作泡菜时，他在不同时间测定了泡菜中的亚硝酸盐含量，结果如图所示。下列有关叙述错误的是（　　） A. 泡菜发酵过程中亚硝酸盐的含量会先升高后降低，可通过在第5天后检测亚硝酸盐含量确定泡菜取食时间 B. 该同学制作出的泡菜“咸而不酸”，可能的原因是食盐浓度过高、发酵温度过低等 C. 第3天亚硝酸盐含量较低，此时是泡菜的最佳取食时间 D. 泡菜制作过程中加入的“陈泡菜水”不需要进行灭菌处理 【答案】C 【解析】 【详解】A．由曲线图可知，泡菜发酵过程中亚硝酸盐含量先升高后降低，第5天达到峰值后逐渐下降，因此可在第5天后检测亚硝酸盐含量，待其降至安全范围时确定取食时间，A正确； B．若食盐浓度过高，乳酸菌会因渗透失水活性被抑制，发酵温度过低也会降低乳酸菌相关酶的活性，导致乳酸产生量少，就会出现泡菜“咸而不酸”的情况，B正确； C．第3天时泡菜发酵不充分，乳酸含量低、风味差，且后续亚硝酸盐含量会大幅升高，此时不是最佳取食时间，最佳取食时间应是亚硝酸盐含量降至较低且稳定、泡菜发酵成熟的阶段，C错误； D．加入“陈泡菜水”的目的是提供乳酸菌菌种，灭菌会杀死其中的乳酸菌，无法起到增加菌种量、加快发酵的作用，因此不需要灭菌处理，D正确。 2. 发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。下列叙述正确的是（　　） A. 腐乳味道鲜美，易于消化吸收，主要是因为酵母菌将豆腐中的蛋白质分解成小分子 B. 利用乳酸菌制作泡菜的过程中，先通气培养，后密封发酵 C. 缺乏氧气和糖源时，醋酸菌可将乙醇氧化成乙醛，再将乙醛氧化成乙酸 D. 发酵过程中发酵条件变化会影响微生物的生长繁殖和代谢途径 【答案】D 【解析】 【详解】A、腐乳制作的主要发酵菌种是毛霉，毛霉产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，A错误； B、乳酸菌是严格厌氧型微生物，制作泡菜过程中需要全程密封，B错误； C、醋酸菌是好氧型微生物，只有在氧气充足、缺少糖源的条件下，才能将乙醇氧化为乙醛，再进一步氧化为乙酸，C错误； D、发酵过程中温度、pH、氧气含量等发酵条件的变化会影响微生物体内酶的活性、呼吸类型等，进而影响微生物的生长繁殖和代谢途径，D正确。 3. 发酵工程就是利用微生物的特定功能，规模化生产对人类有用的产品。下列关于发酵工程及其应用的叙述中，正确的是（　　） A. 要提高酵母菌的酒精产量，只能采用基因工程育种 B. 通过发酵工程生产谷氨酸的培养基属于液体培养基 C. 现代化发酵工程的中心环节是产物的分离与提纯 D. 只有发酵工程的中心环节结束时才需要检测培养液中的微生物数量、产品浓度等 【答案】B 【解析】 【详解】A、提高酵母菌酒精产量的育种方式包括诱变育种、基因工程育种等，并非只能采用基因工程育种，A错误； B、发酵工程生产谷氨酸采用液体培养基，有利于微生物和营养物质充分接触，提升发酵效率，B正确； C、发酵工程的中心环节是发酵罐中的发酵，产物的分离与提纯是发酵完成后的后续环节，C错误； D、发酵全过程都需要实时检测培养液中的微生物数量、产品浓度等指标，便于及时调整发酵条件，D错误。 4. 下表是配制的两种培养基，某同学利用它们从土壤中分离出可以高效降解污染物M（一种含有C、H、O、N的有机物）的分解菌。下列关于培养基的描述，正确的是（　　） 无机盐 葡萄糖 M 琼脂 水 培养基甲 + + + - + 培养基乙 + + + + + A. 培养基甲：液体培养基，可用于目标菌的长期保存 B. 培养基乙：固体培养基，以污染物M为唯一碳源和氮源 C. 培养基甲：液体培养基，可直接获得目标菌的单菌落 D. 培养基乙：选择培养基，可用于分离能降解M的目的菌 【答案】D 【解析】 【详解】A、培养基甲不含琼脂属于液体培养基，液体培养基多用于微生物的扩大培养，无法用于目标菌的长期保存，长期保存菌种通常采用甘油管藏法或固体斜面培养基低温保藏，A错误； B、培养基乙含琼脂属于固体培养基，但培养基中含有葡萄糖，葡萄糖可作为碳源，因此M不是唯一碳源，B错误； C、培养基甲为液体培养基，单菌落是微生物在固体培养基表面生长形成的肉眼可见的子细胞群体，液体培养基无法直接获得单菌落，C错误； D、培养基乙中氮源仅为M，只有能降解利用M的微生物才能获取氮源正常生长，属于选择培养基，可用于分离能降解M的目的菌，D正确。 5. 为从土壤中分离并计数能降解石油的微生物，科研人员按照下图所示流程进行操作。将土壤样品加入选择培养基中振荡培养一段时间后，取培养液进行梯度稀释，再分别取适量稀释液在平板上进行涂布或划线接种。图中甲为涂布平板后培养获得的一个平板，乙和丙为两种不同的平板划线接种操作结果。下列叙述正确的是（　　） A. 选择培养可以增加石油降解菌的浓度，但不影响其他微生物的生长 B. 平板甲接种时需将涂布器进行灼烧灭菌，冷却后蘸取菌液再均匀涂布 C. 若统计到甲平板菌落数为180，则可直接得出每克样品中的活菌数为180个 D. 乙、丙培养均可能获得单菌落，和乙相比，丙种操作更适用于稀释度较低的样品 【答案】D 【解析】 【详解】A、选择培养使用以石油为唯一碳源的培养基，仅能降解石油的微生物可正常生长，其他无法利用石油的微生物生长会被抑制，A错误； B、涂布平板操作时，需先将适量菌液滴加在培养基表面，再用灼烧冷却后的涂布器将菌液均匀涂布，B错误； C、计算每克样品中的活菌数时，需要用平板菌落数乘以稀释倍数，再除以涂布的菌液体积，不能直接用平板菌落数代表每克样品的活菌数，C错误； D、乙为连续划线法，适合稀释度较高（菌浓度低）的样品，丙为分区划线法，通过多次划线逐步稀释菌种，更适合稀释度较低（菌浓度高）的样品，两种划线方法都可能获得单菌落，D正确。 6. 我国农业科研团队利用从盐碱地土壤中筛选出的高效脲酶产生菌，制备成新型尿素缓释菌剂，可将尿素利用率提升40%以上，显著减少盐碱地氮素流失。研究人员从盐碱地土壤样本中分离该类目的菌，下列操作与原理的叙述正确的是（　　） A. 配制选择培养基时，需以尿素为唯一氮源并将pH调至中性偏酸，同时加入酚红指示剂用于目的菌鉴别 B. 对土壤样液进行梯度稀释后，可采用平板划线法接种，通过统计单菌落数计算土壤中活菌的数量 C. 若培养基上长出的菌落周围红色环带宽度越宽，说明该菌株产脲酶能力越强，用于制备菌剂时尿素利用率提升效果越好 D. 将纯化得到的目的菌接种至液体培养基中，置于摇床振荡培养的主要目的是促进尿素的分解 【答案】C 【解析】 【详解】A、该目的菌分离自盐碱地，需将培养基pH调至中性偏碱才能适应其生存环境，而非中性偏酸，A错误； B、平板划线法的作用是分离纯化微生物，无法用于统计活菌数量，统计活菌数需采用稀释涂布平板法，B错误； C、脲酶可分解尿素产生氨，使菌落周围pH升高，酚红指示剂变红，红色环带越宽说明菌株产脲酶能力越强，分解尿素效率越高，制备菌剂时提升尿素利用率的效果越好，C正确； D、摇床振荡培养的主要目的是增加培养液溶氧量，同时使菌体与营养物质充分接触，促进目的菌的繁殖，而非直接促进尿素分解，D错误。 7. 如图是利用甲、乙两种植物通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐杂种植株的流程图。下列说法错误的是（　　） A. 除PEG诱导甲、乙原生质体融合外，还可采用高Ca2+-高pH融合法 B. c过程中杂种细胞再生出细胞壁，标志着细胞融合完成 C. 愈伤组织经脱分化和再分化获得c，一般不需要光照 D. 进行d过程时将植株种植在高盐的环境中，筛选出耐盐植株 【答案】C 【解析】 【详解】A、诱导植物原生质体融合的方法包括PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法、电融合法等，A正确； B、植物原生质体融合完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁，B正确； C、愈伤组织是细胞经脱分化形成的产物，由愈伤组织获得c（再生植株）只需经过再分化过程，且再分化阶段需要光照以利于叶绿素合成，C错误； D、d过程的目的是筛选耐盐的目的植株，将植株种植在高盐环境中可筛选出具备耐盐性状的植株，D正确。 8. 近年来，三维（3D）细胞培养技术在骨组织再生和骨肿瘤等领域均有广泛应用。3D细胞培养技术是一种仿生的细胞培养技术，其核心在于体外模拟体内复杂的细胞微环境，3D培养的干细胞为骨组织的修复和替代提供了新策略，患者来源的细胞可以整合到3D培养系统中，为精准诊疗的开发和提供了体外模型。下列说法错误的是（　　） A. 3D细胞培养应置于95%的空气和5%的CO2的气体环境中进行培养 B. 在体外培养3D细胞时，必须保证无菌、无毒的环境 C. 利用患者细胞培养出干细胞分化出的骨组织细胞移植后会发生免疫排斥 D. 运用3D细胞培养技术培育动物器官或组织，开创人类疾病治疗的新方法 【答案】C 【解析】 【详解】A、动物细胞培养的标准气体环境是95%的空气（为细胞有氧呼吸提供O2）和5%的CO2（维持培养液pH稳定），3D细胞培养属于动物细胞培养技术，需满足该条件，A正确； B、所有动物细胞培养体系都必须保证无菌、无毒的环境，避免杂菌污染、有毒物质损伤细胞，B正确； C、利用患者自身细胞培养得到的干细胞分化出的骨组织细胞，细胞表面抗原和患者自身完全匹配，移植后不会发生免疫排斥，C错误； D、3D细胞培养技术可体外培育人体需要的组织、器官，能解决器官移植供体不足、免疫排斥等问题，是人类疾病治疗的新方法，D正确。 9. 世界首例克隆牦牛在西藏诞生，突破高原动物克隆技术瓶颈。目前利用现代生物技术救助牦牛较为常见的方法主要有两种，如图所示，其中①、②代表过程，a～f代表个体。下列叙述正确的是（　　） A. 过程②常用显微操作去核 B. 使用性激素诱发牦牛a进行超数排卵 C. 重构胚通常培养至原肠胚等早期胚胎阶段，再进行胚胎移植 D. 牦牛e的遗传物质来自牦牛a和牦牛b，牦牛f的遗传物质只来自牦牛c 【答案】A 【解析】 【详解】A、过程②为卵母细胞的去核操作，动物核移植过程中常用显微操作法去除卵母细胞的细胞核，A正确； B、对雌性个体进行超数排卵处理时，应使用促性腺激素，性激素无法达到超数排卵的效果，B错误； C、早期胚胎进行移植前，通常培养至桑椹胚或囊胚阶段，原肠胚细胞分化程度高，移植成功率低，不适用于胚胎移植，C错误； D、牦牛e为体外受精得到的有性生殖后代，遗传物质来自亲本a和b；牦牛f为核移植得到的克隆个体，其核遗传物质来自供核个体c，细胞质遗传物质来自提供卵母细胞的a，D错误。 10. 单纯疱疹病毒1型（HSV-1）可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。某科研机构利用二倍体小鼠为实验材料，获得了抗HSV-1的单克隆抗体。下列说法不正确的是（　　） A. 制备前，先给小鼠注射纯化的HSV-1蛋白，目的是刺激小鼠产生能够分泌相应抗HSV-1抗体的B淋巴细胞 B. 用灭活病毒或PEG可诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 C. 筛选产生抗HSV-1抗体的杂交瘤细胞时，培养液中常需添加动物血清、琼脂、抗生素等物质 D. 获得的杂交瘤细胞不是二倍体细胞，但具有既能无限增殖，又能产生抗HSV-1抗体的特点 【答案】C 【解析】 【详解】A、注射纯化的HSV-1蛋白作为抗原，可刺激小鼠发生体液免疫，分化出能分泌抗HSV-1抗体的B淋巴细胞，为后续细胞融合提供所需的B淋巴细胞，A正确； B、聚乙二醇（PEG）（化学法）、灭活病毒（生物法）都是诱导动物细胞融合的常用方法，可用于B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合，B正确； C、筛选杂交瘤细胞属于动物细胞培养操作，所用培养基为液体培养基，琼脂是固体培养基的凝固剂，不需要添加到动物细胞培养液中，培养液中需添加动物血清补充天然营养、添加抗生素防止杂菌污染，C错误； D、杂交瘤细胞是二倍体B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的，染色体数目为两种细胞染色体数之和，不属于二倍体细胞，同时兼具骨髓瘤细胞无限增殖、B淋巴细胞分泌特异性抗HSV-1抗体的特点，D正确。 11. 某生物实验室常用4种限制酶，这些限制酶的识别序列和切割位点如下。下列相关叙述正确的是（　　） A. DNA 片段被PstⅠ 切割一次，会形成 1 个游离的 5'末端 B. 用限制酶SmaⅠ和EcoRⅠ切割后产生的均为平末端 C. EcoRⅠ和 PstⅠ切割后形成的黏性末端可通过 DNA 连接酶连接 D. 含有1个EcoRⅠ识别位点的环状DNA，被EcoRⅠ切割后可形成1个DNA片段 【答案】D 【解析】 【详解】A、DNA为双链结构，PstⅠ切割一次会断裂2个磷酸二酯键，形成2个游离的5'末端，A错误； B、SmaⅠ切割后产生平末端，EcoRⅠ为错位切割，产生的是黏性末端，B错误； C、DNA连接酶只能连接碱基互补配对的黏性末端，EcoRⅠ和PstⅠ切割产生的黏性末端序列不互补，无法相互连接，C错误； D、含有1个EcoRⅠ识别位点的环状DNA，被切割后环状结构打开变为线性DNA，仍为1个DNA片段，D正确。 12. 某质粒上含有两种抗性基因，如图所示。将目的基因插入不同位点（a、b、c）会获得不同的重组质粒。若将不同的重组质粒分别导入细菌（该细菌自身不含图中的两种抗性基因）中，则细菌在不同培养基上的生长情况对应不合理的是（　　） 选项 目的基因插入位点 添加氨苄青霉素的培养基 添加四环素的培养基 A 质粒没有导入目的基因 √ √ B 目的基因插入a位点 × √ C 目的基因插入b位点 √ × D 目的基因插入c位点 × × 注：“√”表示存活，“×”表示不能存活。 A. A B. B C. C D. D 【答案】D 【解析】 【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂；（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键；（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。 【详解】A、质粒没有导入基因，仍含有抗氨苄青霉素基因、抗四环素基因，因此在添加氨苄青霉素或四环素的培养基中均能生长，A正确； B、目的基因插入a位点，会破坏抗氨苄青霉素基因，因此在添加氨苄青霉素的培养基中不能生长，B正确； C、目的基因插入b位点，会破坏抗四环素基因，因此在添加四环素的培养基中不能生长，B正确； D、目的基因插入c位点，没有破坏两种标记基因，因此在添加氨苄青霉素或四环素的培养基中均能生长，D错误。 故选D。 13. 基因工程常用的载体是质粒，关键原因在于其具备特定的结构特点。下列说法错误的是（　　） A. 质粒有一个至多个限制酶切割位点 B. 质粒含有RNA复制起点，可在宿主细胞中自我复制 C. 质粒携带的抗生素抗性基因便于重组DNA分子的筛选 D. 基因工程的载体也可选用噬菌体和动植物病毒 【答案】B 【解析】 【详解】A、质粒作为载体通常含有一个或多个限制酶切割位点，便于插入目的基因，A正确； B、质粒的复制依赖于DNA复制起点，而非RNA复制起点。宿主细胞（如细菌）通过DNA复制机制复制质粒，B错误； C、质粒携带的抗生素抗性基因属于标记基因，用于筛选含有重组质粒的宿主细胞，C正确； D、除质粒外，噬菌体、动植物病毒（如λ噬菌体、腺病毒）也可作为基因工程的载体，D正确。 故选B。 14. 在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，下列关于操作流程的叙述错误的是（　　） A. DNA溶于酒精，某些蛋白质不溶于酒精，可利用这一原理初步分离DNA与蛋白质 B. 通常不选用哺乳动物血液作为实验材料，因为哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核 C. 将洋葱切碎、研磨、过滤，滤液静置于4℃冰箱中几分钟后，DNA存在于上清液中 D. 可利用二苯胺试剂鉴定丝状物的主要成分——DNA，沸水浴后观察是否出现蓝色 【答案】A 【解析】 【详解】A、DNA不溶于体积分数为95%的冷酒精，而某些蛋白质可溶于酒精，因此加入酒精后DNA析出，而部分蛋白质溶解，从而实现初步分离，A错误； B、哺乳动物成熟红细胞无细胞核和各种细胞器，没有DNA，难以提取足够量，因此通常不选用，B正确； C、在DNA粗提取实验中，通常首先通过研磨和加入适量的洗涤剂与食盐溶液来释放细胞中的DNA，并破坏细胞膜和其他细胞结构，然后在此混合液中DNA会溶解在溶液中，并随同蛋白质、多糖等其他物质一起存在，DNA在一定浓度的NaCl溶液中溶解度较高，所以初步处理后的滤液经过离心或静置后，DNA不会形成沉淀，而是在上清液中，C正确； D、在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，所以将丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液后，滴加二苯胺试剂，沸水浴观察是否出现蓝色，可鉴定其是否为DNA，D正确。 故选A。 15. 培育转基因抗虫棉时，需要将Bt抗虫基因进行“切割”、改造和“拼接”；将重组DNA导入棉花细胞内并表达。下列有关基因工程叙述正确的是（　　） A. 限制酶、RNA聚合酶可作用于DNA上的磷酸二酯键 B. T4DNA连接酶只能连接具有互补黏性末端的DNA片段 C. 构建基因表达载体时只能用一种限制酶切割目的基因和质粒 D. 构建的基因表达载体上应具备启动子、终止子等调控元件 【答案】D 【解析】 【详解】A、限制酶可切割DNA上的磷酸二酯键，但RNA聚合酶的作用是催化核糖核苷酸聚合形成RNA，作用于核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，不作用于DNA上的磷酸二酯键，A错误； B、T4DNA连接酶既可以连接具有互补黏性末端的DNA片段，也可以连接平末端的DNA片段，并非只能连接黏性末端，B错误； C、构建基因表达载体时，可使用两种不同的限制酶分别切割目的基因和质粒，避免目的基因、质粒自身环化以及目的基因反向连接，并非只能用一种限制酶，C错误； D、构建的基因表达载体上应具备启动子、终止子等调控元件，其中启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录，终止子可终止转录，二者是目的基因表达的必需调控元件，D正确。 16. COR47基因是拟南芥中的一种冷响应基因。实验小组为探究COR47基因的调控机制，将COR47基因进行PCR扩增。下图表示COR47基因的部分序列。下列相关叙述错误的是（　　） A. PCR扩增COR47基因的部分序列时，应当选用的引物组合是引物b和引物c B. PCR所用的酶是一种耐高温的DNA聚合酶，其激活需要Mg2+ C. 当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 D. COR47基因扩增时至少循环4次的产物中会出现双链等长的DNA片段 【答案】D 【解析】 【详解】A、DNA子链的延伸方向为5'→3'，引物需要结合在目的片段两端，且延伸方向朝向目的片段内部，因此选择引物b和引物c可以扩增目标片段，A正确； B、PCR使用的酶是耐高温的Taq DNA聚合酶，该酶的激活确实需要Mg2+，B正确； C、PCR的三步流程中：变性后温度下降到50℃左右（复性阶段），引物才会通过碱基互补配对与单链DNA结合，C正确； D、双链等长的目的DNA片段最早在第3次循环后才会出现，D错误。 17. 光敏色素在调节作物生长发育中具有重要作用。为研究拟南芥中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在小麦种质资源创制中的利用价值，科研人员将A基因转入到小麦中，对小麦受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列说法正确的是（　　） A. 构建基因表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅢ这两种限制酶 B. PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温 C. 表达载体导入受体细胞后，可用含卡那霉素的培养基进行初步筛选 D. 由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因小麦均培育成功 【答案】B 【解析】 【详解】A、限制酶的选择要确保目的基因和质粒相应结构的完整性，BamHⅠ会将质粒的四环素抗性基因和卡那霉素抗性基因全部破坏，基因表达载体将没有标记基因，后续无法进行筛选，A错误； B、PCR的过程包括（90°C~95°C）变性、（50°C~65°C）退火、（72°C）延伸等三个过程，B正确； C、目的基因正确插入会导致卡那霉素抗性基因被破坏，而四环素抗性基因完整，所以初步筛选使用含四环素的培养基，C错误； D、如图丙所示结果只能说明转基因小麦中含有光敏色素基因A，但不能说明基因A是否表达，无法确定转基因小麦是否培育成功，D错误。 故选B。 18. 琼脂糖凝胶电泳常用于核酸样品的分析，样品1～4的电泳结果如图所示。已知样品1和2中的DNA分子分别是甲和乙，甲具有限制酶R的一个酶切位点，样品3和4中有一个样品是甲的酶切产物。下列叙述错误的是（ ） A. 图中的DNA条带是经染色后在300nm紫外灯下检测出来的 B. 同一个凝胶中，DNA分子越大，迁移的速率越慢 C. 甲、乙两种DNA分子所含碱基序列可能不同 D. 据图推测样品3可能是甲被酶R切割后的产物 【答案】D 【解析】 【详解】A、DNA经染色后，可以在300nm紫外灯下激发荧光显示出条带，A正确； B、同一凝胶中，DNA分子越大，迁移阻力越大，速率越慢，符合电泳原理，B正确； C、电泳中，DNA分子的迁移速率与分子大小、电荷的多少等多种因素有关。甲、乙电泳条带位置虽然相同，但影响DNA分子的迁移速率的因素很多，所以两种DNA分子所含碱基序列可能不同，C正确； D、甲只有限制酶R的一个酶切位点，若被酶R完全酶切，只会得到2种DNA片段（2个条带），这两个条带的碱基数量比甲要少，电泳跑的距离要比甲更远，所以据图推测样品4才是甲被酶R完全酶切后的产物，D错误。 19. 用Xho I和Sal I两种限制酶分别处理同一DNA片段（限制酶在对应切点均能切开）。酶切位点及酶切产物电泳结果分别如图1和图2所示。下列叙述错误的是（　　） A. 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 B. 解旋酶与图1中的两种限制酶均能催化氢键断裂 C. 图2泳道②中可能是用Xho Ⅰ处理得到的酶切产物 D. 用两种限制酶同时处理该DNA电泳后可得到6种条带 【答案】B 【解析】 【详解】A、大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少数为4个、5个或8个核苷酸，A正确； B、限制酶的作用是切割DNA双链中的磷酸二酯键，不涉及氢键断裂；解旋酶的作用是断裂DNA双链间的氢键，使DNA解旋，B错误； C、分析图1，限制酶Xho I有两处切割位点，切割后产生3个DNA片段，图2泳道②有3个DNA片段，C正确； D、分析图1，限制酶Xho I有两处切割位点，限制酶Sal I有三处切割位点，且两种酶的切割位点无重叠，根据酶切位点分布推断，两种酶同时处理可产生6种不同大小的片段，电泳后呈现6种条带，D正确。 故选B。 20. 获取目的基因的方法有多种，科学家从已分化的细胞中提取mRNA进行逆转录获得cDNA（互补DNA）后，再对cDNA进行PCR扩增，可利用此技术获取大量目的基因，具体过程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 将该技术获得的cDNA直接导入原来的细胞可增加相应蛋白质的含量 B. 引物序列越短，越有利于其与目的基因的模板链结合以获得目标DNA C. 过程②需要加入缓冲液、原料、DNA模板、耐高温的DNA聚合酶和引物A、引物B等 D. 过程②需要加入解旋酶，使mRNA-cDNA杂交链分散开形成单链结构 【答案】C 【解析】 【详解】A、逆转录得到的cDNA不包含启动子、终止子等基因表达必需的调控元件，直接导入细胞无法完成正常的转录和翻译过程，不能增加相应蛋白质的含量，A错误； B、引物序列越短，与模板结合的特异性越低，越容易结合到非目标序列上，扩增出非目的DNA片段，不利于获得目标DNA，B错误； C、过程②为PCR扩增过程，反应体系需要加入缓冲液、4种脱氧核糖核苷酸（原料）、DNA模板、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）以及引物A、引物B，满足PCR扩增的条件，C正确； D、PCR利用高温使双链的氢键断裂实现解旋，不需要加入解旋酶，D错误。 二、非选择题（3道题，共42分） 21. 聚乙烯醇（PVA）是一种只含C、H、O的难降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶降解PVA。PVA可与碘形成蓝绿色复合物，复合物被降解后蓝绿色消失，形成透明圈。下图为PVA分解菌的筛选过程，①～⑤表示过程，Ⅰ～Ⅲ表示菌落。请回答以下问题： （1）实验室中微生物筛选的原理：人为提供_____。甲培养基加入PVA作为_____，再加入硝酸盐等其他营养物质和碘，以及_____使培养基凝固。图中①所示的接种方法是_____，过程②将平板_____放入恒温培养箱中培养适宜时间，过程③应选_____的菌种进行接种，该菌种分解PVA的能力最强。 （2）③所用的接种工具是_____，该接种工具常用的灭菌方法是_____。可利用_____（填“固体”或“液体”）培养基对已筛选出的PVA分解菌进行扩大培养。 （3）判断培养基是否有杂菌污染，需将_____同时进行培养；判断某培养基是否具有筛选作用，需设置_____进行接种后培养，观察菌落数目，得出结论。 【答案】（1） ①. 有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时阻止或抑制其他微生物的生长 ②. 唯一碳源 ③. 琼脂/凝固剂 ④. 稀释涂布平板法 ⑤. 倒置 ⑥. Ⅱ （2） ①. 接种环 ②. 灼烧灭菌 ③. 液体 （3） ①. 未接种的培养基/空白培养基 ②. 牛肉膏蛋白胨培养基/完全培养基 【解析】 【小问1详解】 微生物的筛选需要促进该微生物生长同时抑制其他微生物生长，所以有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时阻止或抑制其他微生物的生长。本实验目的是筛选PVA分解菌，因此培养基中PVA作为唯一碳源，只有能分解利用PVA的微生物才能生长；固体培养基需要加入琼脂作为凝固剂；图中①接种后得到分散的单个菌落，接种方法为稀释涂布平板法；接种培养时需将平板倒置，防止冷凝水污染培养基；PVA分解后蓝绿色消失产生透明圈，透明圈越大说明分解PVA能力越强，菌落Ⅱ的透明圈最大，因此选择菌落Ⅱ的菌种接种。 【小问2详解】 过程③为划线接种，接种工具是接种环，接种环常用灼烧灭菌法灭菌；扩大培养时使用液体培养基，可以增大菌体与营养物质的接触面积，更利于菌体增殖。 【小问3详解】 判断培养基是否被杂菌污染，需将未接种的空白培养基和接种后的培养基共同培养，若空白培养基长出菌落说明培养基被污染；判断选择培养基的筛选作用，需要设置能支持所有微生物生长的普通全营养培养基作为对照，接种相同菌液后对比菌落数目，即可得出结论。 22. 肿瘤细胞表面有受体EGFR，CD3是T细胞表面的标志性抗原。科研人员制备双特异性抗体EGFR/CD3，可招募T细胞定向移至肿瘤细胞，增强其对肿瘤细胞的杀伤力，过程如下图所示。 （1）动物细胞培养：培养动物细胞的培养基中通常会添加_____等天然成分，需要提供的气体条件中有CO2，其中CO2的作用是_____。注射EGFR进入小鼠体内后，可从小鼠脾脏中获取能产生特异性抗体的细胞B，并用_____酶进行处理分离制备成细胞悬液，细胞B与细胞A融合前，_____（填“需要”或“不需要”）通过原代培养扩大细胞B数量。 （2）诱导融合：细胞融合过程中可添加某种物质_____诱导细胞融合。④过程特有的诱导动物细胞融合的方法是_____。 （3）第一次筛选：常使用特定的选择培养基（如HAT 培养基），该培养基对未融合的细胞和_____细胞生长具有抑制作用。 （4）第二次筛选：筛选出杂交瘤细胞后，先进行_____培养，再利用_____法来筛选出获得能产生特定抗体的单克隆杂交瘤细胞。单克隆抗体的优点是_____（答出两点）。 （5）据图分析，抗体是由两条H链和两条L链组成的4条肽链的对称结构，双杂交瘤细胞会产生多种抗体，推测其可能的原因是_____。 【答案】（1） ①. 动物血清 ②. 维持培养液的pH ③. 胰蛋白酶##胶原蛋白 ④. 不需要 （2） ①. PEG（或聚乙二醇） ②. 灭活病毒诱导法 （3）同种融合（或融合的具有同种核） （4） ①. 克隆化 ②. 抗原一抗体杂交（或抗体阳性检测） ③. 特异性强、灵敏度高、能大量生产 （5）双杂交瘤细胞会表达产生两种H链和两种L链，H链和L链的结合又是随机的，因而产生多种抗体 【解析】 【小问1详解】 动物细胞培养时，天然成分常用动物血清，血清含有多种未知的生长因子、营养物质，满足细胞增殖需求。动物细胞培养需95%空气和5%CO2的混合气体。5%CO2能维持培养液的pH稳定。EGFR作为抗原注射小鼠后，小鼠免疫系统会产生特异性抗体，从脾脏中获取细胞B，脾脏组织中的细胞相互黏连，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分解细胞间的蛋白质，使细胞分散形成细胞悬液。由于细胞B是高度分化的细胞，不能增殖，故其与骨髓瘤细胞（细胞A）融合前不需要原代培养扩大数量。 【小问2详解】 诱导动物细胞融合的脂溶性物质是PEG（聚乙二醇），PEG能改变细胞膜的通透性，使两个细胞的细胞膜融合，进而实现细胞质和细胞核的融合。灭活病毒诱导法是动物细胞融合特有的方法，植物细胞融合不能使用该方法。 【小问3详解】 HAT培养基是筛选杂交瘤细胞的常用选择培养基，它能抑制未融合的亲本细胞（细胞A、细胞B）和同种融合细胞（如细胞A与细胞A融合、细胞B与细胞B融合）的生长，仅允许异种融合的杂交瘤细胞存活。 【小问4详解】 第一次筛选得到的杂交瘤细胞可能存在多种，需先进行克隆化培养，获得单一细胞来源的克隆群，保证细胞的纯度。通过抗原-抗体杂交法等抗体阳性检测方法，筛选出能产生特定抗体（抗EGFR抗体或抗CD3抗体）的单克隆杂交瘤细胞，排除产生无关抗体的细胞。单克隆抗体的优点是特异性强：只针对单一抗原决定簇，不与其他物质发生交叉反应；灵敏度高：可检测极低浓度的抗原；可大量制备：杂交瘤细胞可在体外或小鼠腹腔内无限增殖，持续分泌抗体。 【小问5详解】 体外培养杂交瘤细胞时，合成培养基需添加动物血清等天然成分，血清中含多种未知营养物质，能满足细胞生长和增殖的需求。双杂交瘤细胞由单克隆杂交瘤细胞与细胞C融合形成，会表达两种不同的H链和两种不同的L链。由于H链和L链的结合是随机的，会形成多种组合，因此理论上会产生多种抗体。 23. 胶原蛋白在维持器官、组织、细胞形态和功能等方面发挥着关键性作用，传统提取方法得到的胶原蛋白成分复杂，还可能携带动物病毒等。科学家将合成胶原蛋白的基因kit导入大肠杆菌构建基因工程菌，过程如图所示。回答下列问题： （1）图中①过程需要使用_____酶，需要提供的原料是_____，该过程得到的DNA片段_____（填“含有”或“不含有”）启动子序列。 （2）研究人员利用PCR技术获取了大量目的基因kit，PCR反应体系加入_____种引物，在复性过程中引物会结合到互补DNA链的_____端上，使_____酶能够从引物的______端开始连接脱氧核苷酸，扩增n-2次，需要_____个引物。 （3）图中过程②是基因工程的核心步骤即_____，选用_____（填限制酶）切割质粒比只选一种限制酶切割更合理，原因是_____；为了实现目的基因与运载体的连接，需要对PCR的引物进行改造，具体的做法是_____。 （4）过程②获得的重组DNA分子除启动子外，还应含有_____等，启动子的作用是_____。为了初步筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，培养基甲中需要加入的物质是_____。 （5）双酶切kit基因与质粒pET-28a（+）长度为170bp的片段进行置换，构建重组质粒pET—28a（+）—kit，上述两种质粒经HindⅢ切割后片段长度如表所示（每种片段各1个）。由此判定kit基因长度为_____，该基因上有_____个HindⅢ切割位点。经添加有硫链丝菌素的培养基初步筛选后的大肠杆菌中不一定含有目的基因，原因是_____。 pET-28a（+） pET-28a（+）-kit 1000bp、2550bp 1050bp、2500bp、150bp 【答案】（1） ①. 逆转录 ②. 4种脱氧核苷酸 ③. 不含有 （2） ①. 2 ②. 3’ ③. DNA聚合酶 ④. 3’ ⑤. 2n-1-2 （3） ①. 基因表达载体的构建 ②. BamHI和EcoRI ③. 既可以避免目的基因、质粒自身环化，也能防止目的基因反向插入质粒，保证基因表达载体构建的正确性 ④. 在两种引物的5'端添加限制酶BamHI或EcoRI的识别序列 （4） ①. 目的基因、终止子、复制原点、标记基因 ②. RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 ③. 硫链丝菌素 （5） ①. 320bp ②. 2 ③. 导入不含目的基因的空质粒的大肠杆菌也可以在该培养基上存活 【解析】 【小问1详解】 由题图可知，过程①由mRNA生成基因 kit（即DNA），因此代表逆转录过程，需要用到逆转录酶，该过程利用4种脱氧核苷酸获得DNA片段，启动子不参与转录形成mRNA，以mRNA为模板逆转录得到的DNA片段仅对应基因的编码序列，不含有启动子序列。 【小问2详解】 PCR反应体系中加入2种引物，才能保证目的基因双链的扩增，在复性过程中引物会结合到互补DNA链的3'端上，DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，扩增n - 2次，DNA分子数为2n−2 ，新合成的DNA单链数为 2n−2×2−2（减去原来的两条母链），由于合成一条DNA单链需要一个引物，所以需要2n−1 −2个引物。 【小问3详解】 图中过程②是基因工程的核心步骤即基因表达载体的构建，选用BamH I和EcoR I两种限制酶切割质粒比只选一种限制酶切割更合理，因为用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒，可产生不同的黏性末端，既可以避免目的基因、质粒自身环化，也能防止目的基因反向插入质粒，保证基因表达载体构建的正确性，为了实现目的基因与运载体的连接，需要在两种引物的5'端分别添加限制酶BamH I和EcoR I的识别序列，使扩增后的目的基因两端带有对应酶切位点，实现与质粒的定向连接。 【小问4详解】 重组DNA分子除启动子外，还应含有终止子、目的基因、标记基因等，启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA，因为质粒上含有硫链丝菌素抗性基因（tsr），为了初步筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，培养基中需要加入硫链丝菌素，导入重组质粒或空质粒的大肠杆菌能在该培养基上存活，未导入的则不能存活。 【小问5详解】 观察质粒pET-28a(+) 图可知，在该质粒上有2个HindⅢ的识别序列，一个在启动子和终止子之间，一个在复制原点ori中，因此用HindⅢ切割质粒 pET-28a(+)后，可得到两个片段，通过表格可知，这两个片段长度分别为1000bp和2550bp，说明质粒pET-28a(+) 总长度是1000bp+2550bp=3550bp；利用双酶切法将kit基因与质粒pET-28a(+) 长度为170bp片段进行置换后，形成的重组质粒pET-28a（+）-kit 能被HindⅢ切割成三个片段，长度分别是1050bp、2500bp、150bp，说明置换后的kit 基因上含有两个HindⅢ的识别序列，再加上复制原点ori中的一个HindⅢ的识别序列，共三个HindⅢ的识别序列，经HindⅢ酶切后才能将重组质粒pET-28a（+）-kit 切成3段。利用这三段的长度可计算出重组质粒 pET-28a（+）-kit 的总长度为1050bp+2500bp+150bp=3700bp，由于kit 基因与长度为170bp片段进行置换，设kit 基因长度为n，可列出等式：3550+n-170=3700bp，故可计算出kit 基因长度为n=320bp。培养基中添加的硫链丝菌素是筛选标记，不含目的基因的空质粒仍含该抗性基因，导入空质粒的大肠杆菌可在培养基上存活，因此初步筛选后的大肠杆菌不一定含目的基因。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二第三次月考生物试卷 一、选择题（每题有一个正确选项，20题共60分） 1. 某同学在制作泡菜前，查阅资料得知，可以向泡菜坛中加入一些“陈泡菜水”。在制作泡菜时，他在不同时间测定了泡菜中的亚硝酸盐含量，结果如图所示。下列有关叙述错误的是（　　） A. 泡菜发酵过程中亚硝酸盐的含量会先升高后降低，可通过在第5天后检测亚硝酸盐含量确定泡菜取食时间 B. 该同学制作出的泡菜“咸而不酸”，可能的原因是食盐浓度过高、发酵温度过低等 C. 第3天亚硝酸盐含量较低，此时是泡菜的最佳取食时间 D. 泡菜制作过程中加入的“陈泡菜水”不需要进行灭菌处理 2. 发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。下列叙述正确的是（　　） A. 腐乳味道鲜美，易于消化吸收，主要是因为酵母菌将豆腐中的蛋白质分解成小分子 B. 利用乳酸菌制作泡菜的过程中，先通气培养，后密封发酵 C. 缺乏氧气和糖源时，醋酸菌可将乙醇氧化成乙醛，再将乙醛氧化成乙酸 D. 发酵过程中发酵条件变化会影响微生物的生长繁殖和代谢途径 3. 发酵工程就是利用微生物的特定功能，规模化生产对人类有用的产品。下列关于发酵工程及其应用的叙述中，正确的是（　　） A. 要提高酵母菌的酒精产量，只能采用基因工程育种 B. 通过发酵工程生产谷氨酸的培养基属于液体培养基 C. 现代化发酵工程的中心环节是产物的分离与提纯 D. 只有发酵工程的中心环节结束时才需要检测培养液中的微生物数量、产品浓度等 4. 下表是配制的两种培养基，某同学利用它们从土壤中分离出可以高效降解污染物M（一种含有C、H、O、N的有机物）的分解菌。下列关于培养基的描述，正确的是（　　） 无机盐 葡萄糖 M 琼脂 水 培养基甲 + + + - + 培养基乙 + + + + + A. 培养基甲：液体培养基，可用于目标菌的长期保存 B. 培养基乙：固体培养基，以污染物M为唯一碳源和氮源 C. 培养基甲：液体培养基，可直接获得目标菌的单菌落 D. 培养基乙：选择培养基，可用于分离能降解M的目的菌 5. 为从土壤中分离并计数能降解石油的微生物，科研人员按照下图所示流程进行操作。将土壤样品加入选择培养基中振荡培养一段时间后，取培养液进行梯度稀释，再分别取适量稀释液在平板上进行涂布或划线接种。图中甲为涂布平板后培养获得的一个平板，乙和丙为两种不同的平板划线接种操作结果。下列叙述正确的是（　　） A. 选择培养可以增加石油降解菌的浓度，但不影响其他微生物的生长 B. 平板甲接种时需将涂布器进行灼烧灭菌，冷却后蘸取菌液再均匀涂布 C. 若统计到甲平板菌落数为180，则可直接得出每克样品中的活菌数为180个 D. 乙、丙培养均可能获得单菌落，和乙相比，丙种操作更适用于稀释度较低的样品 6. 我国农业科研团队利用从盐碱地土壤中筛选出的高效脲酶产生菌，制备成新型尿素缓释菌剂，可将尿素利用率提升40%以上，显著减少盐碱地氮素流失。研究人员从盐碱地土壤样本中分离该类目的菌，下列操作与原理的叙述正确的是（　　） A. 配制选择培养基时，需以尿素为唯一氮源并将pH调至中性偏酸，同时加入酚红指示剂用于目的菌鉴别 B. 对土壤样液进行梯度稀释后，可采用平板划线法接种，通过统计单菌落数计算土壤中活菌的数量 C. 若培养基上长出的菌落周围红色环带宽度越宽，说明该菌株产脲酶能力越强，用于制备菌剂时尿素利用率提升效果越好 D. 将纯化得到的目的菌接种至液体培养基中，置于摇床振荡培养的主要目的是促进尿素的分解 7. 如图是利用甲、乙两种植物通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐杂种植株的流程图。下列说法错误的是（　　） A. 除PEG诱导甲、乙原生质体融合外，还可采用高Ca2+-高pH融合法 B. c过程中杂种细胞再生出细胞壁，标志着细胞融合完成 C. 愈伤组织经脱分化和再分化获得c，一般不需要光照 D. 进行d过程时将植株种植在高盐的环境中，筛选出耐盐植株 8. 近年来，三维（3D）细胞培养技术在骨组织再生和骨肿瘤等领域均有广泛应用。3D细胞培养技术是一种仿生的细胞培养技术，其核心在于体外模拟体内复杂的细胞微环境，3D培养的干细胞为骨组织的修复和替代提供了新策略，患者来源的细胞可以整合到3D培养系统中，为精准诊疗的开发和提供了体外模型。下列说法错误的是（　　） A. 3D细胞培养应置于95%的空气和5%的CO2的气体环境中进行培养 B. 在体外培养3D细胞时，必须保证无菌、无毒的环境 C. 利用患者细胞培养出干细胞分化出的骨组织细胞移植后会发生免疫排斥 D. 运用3D细胞培养技术培育动物器官或组织，开创人类疾病治疗的新方法 9. 世界首例克隆牦牛在西藏诞生，突破高原动物克隆技术瓶颈。目前利用现代生物技术救助牦牛较为常见的方法主要有两种，如图所示，其中①、②代表过程，a～f代表个体。下列叙述正确的是（　　） A. 过程②常用显微操作去核 B. 使用性激素诱发牦牛a进行超数排卵 C. 重构胚通常培养至原肠胚等早期胚胎阶段，再进行胚胎移植 D. 牦牛e的遗传物质来自牦牛a和牦牛b，牦牛f的遗传物质只来自牦牛c 10. 单纯疱疹病毒1型（HSV-1）可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。某科研机构利用二倍体小鼠为实验材料，获得了抗HSV-1的单克隆抗体。下列说法不正确的是（　　） A. 制备前，先给小鼠注射纯化的HSV-1蛋白，目的是刺激小鼠产生能够分泌相应抗HSV-1抗体的B淋巴细胞 B. 用灭活病毒或PEG可诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 C. 筛选产生抗HSV-1抗体的杂交瘤细胞时，培养液中常需添加动物血清、琼脂、抗生素等物质 D. 获得的杂交瘤细胞不是二倍体细胞，但具有既能无限增殖，又能产生抗HSV-1抗体的特点 11. 某生物实验室常用4种限制酶，这些限制酶的识别序列和切割位点如下。下列相关叙述正确的是（　　） A. DNA 片段被PstⅠ 切割一次，会形成 1 个游离的 5'末端 B. 用限制酶SmaⅠ和EcoRⅠ切割后产生的均为平末端 C. EcoRⅠ和 PstⅠ切割后形成的黏性末端可通过 DNA 连接酶连接 D. 含有1个EcoRⅠ识别位点的环状DNA，被EcoRⅠ切割后可形成1个DNA片段 12. 某质粒上含有两种抗性基因，如图所示。将目的基因插入不同位点（a、b、c）会获得不同的重组质粒。若将不同的重组质粒分别导入细菌（该细菌自身不含图中的两种抗性基因）中，则细菌在不同培养基上的生长情况对应不合理的是（　　） 选项 目的基因插入位点 添加氨苄青霉素的培养基 添加四环素的培养基 A 质粒没有导入目的基因 √ √ B 目的基因插入a位点 × √ C 目的基因插入b位点 √ × D 目的基因插入c位点 × × 注：“√”表示存活，“×”表示不能存活。 A. A B. B C. C D. D 13. 基因工程常用的载体是质粒，关键原因在于其具备特定的结构特点。下列说法错误的是（　　） A. 质粒有一个至多个限制酶切割位点 B. 质粒含有RNA复制起点，可在宿主细胞中自我复制 C. 质粒携带的抗生素抗性基因便于重组DNA分子的筛选 D. 基因工程的载体也可选用噬菌体和动植物病毒 14. 在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，下列关于操作流程的叙述错误的是（　　） A. DNA溶于酒精，某些蛋白质不溶于酒精，可利用这一原理初步分离DNA与蛋白质 B. 通常不选用哺乳动物血液作为实验材料，因为哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核 C. 将洋葱切碎、研磨、过滤，滤液静置于4℃冰箱中几分钟后，DNA存在于上清液中 D. 可利用二苯胺试剂鉴定丝状物的主要成分——DNA，沸水浴后观察是否出现蓝色 15. 培育转基因抗虫棉时，需要将Bt抗虫基因进行“切割”、改造和“拼接”；将重组DNA导入棉花细胞内并表达。下列有关基因工程叙述正确的是（　　） A. 限制酶、RNA聚合酶可作用于DNA上的磷酸二酯键 B. T4DNA连接酶只能连接具有互补黏性末端的DNA片段 C. 构建基因表达载体时只能用一种限制酶切割目的基因和质粒 D. 构建的基因表达载体上应具备启动子、终止子等调控元件 16. COR47基因是拟南芥中的一种冷响应基因。实验小组为探究COR47基因的调控机制，将COR47基因进行PCR扩增。下图表示COR47基因的部分序列。下列相关叙述错误的是（　　） A. PCR扩增COR47基因的部分序列时，应当选用的引物组合是引物b和引物c B. PCR所用的酶是一种耐高温的DNA聚合酶，其激活需要Mg2+ C. 当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 D. COR47基因扩增时至少循环4次的产物中会出现双链等长的DNA片段 17. 光敏色素在调节作物生长发育中具有重要作用。为研究拟南芥中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在小麦种质资源创制中的利用价值，科研人员将A基因转入到小麦中，对小麦受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列说法正确的是（　　） A. 构建基因表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅢ这两种限制酶 B. PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温 C. 表达载体导入受体细胞后，可用含卡那霉素的培养基进行初步筛选 D. 由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因小麦均培育成功 18. 琼脂糖凝胶电泳常用于核酸样品的分析，样品1～4的电泳结果如图所示。已知样品1和2中的DNA分子分别是甲和乙，甲具有限制酶R的一个酶切位点，样品3和4中有一个样品是甲的酶切产物。下列叙述错误的是（ ） A. 图中的DNA条带是经染色后在300nm紫外灯下检测出来的 B. 同一个凝胶中，DNA分子越大，迁移的速率越慢 C. 甲、乙两种DNA分子所含碱基序列可能不同 D. 据图推测样品3可能是甲被酶R切割后的产物 19. 用Xho I和Sal I两种限制酶分别处理同一DNA片段（限制酶在对应切点均能切开）。酶切位点及酶切产物电泳结果分别如图1和图2所示。下列叙述错误的是（　　） A. 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 B. 解旋酶与图1中的两种限制酶均能催化氢键断裂 C. 图2泳道②中可能是用Xho Ⅰ处理得到的酶切产物 D. 用两种限制酶同时处理该DNA电泳后可得到6种条带 20. 获取目的基因的方法有多种，科学家从已分化的细胞中提取mRNA进行逆转录获得cDNA（互补DNA）后，再对cDNA进行PCR扩增，可利用此技术获取大量目的基因，具体过程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 将该技术获得的cDNA直接导入原来的细胞可增加相应蛋白质的含量 B. 引物序列越短，越有利于其与目的基因的模板链结合以获得目标DNA C. 过程②需要加入缓冲液、原料、DNA模板、耐高温的DNA聚合酶和引物A、引物B等 D. 过程②需要加入解旋酶，使mRNA-cDNA杂交链分散开形成单链结构 二、非选择题（3道题，共42分） 21. 聚乙烯醇（PVA）是一种只含C、H、O的难降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶降解PVA。PVA可与碘形成蓝绿色复合物，复合物被降解后蓝绿色消失，形成透明圈。下图为PVA分解菌的筛选过程，①～⑤表示过程，Ⅰ～Ⅲ表示菌落。请回答以下问题： （1）实验室中微生物筛选的原理：人为提供_____。甲培养基加入PVA作为_____，再加入硝酸盐等其他营养物质和碘，以及_____使培养基凝固。图中①所示的接种方法是_____，过程②将平板_____放入恒温培养箱中培养适宜时间，过程③应选_____的菌种进行接种，该菌种分解PVA的能力最强。 （2）③所用的接种工具是_____，该接种工具常用的灭菌方法是_____。可利用_____（填“固体”或“液体”）培养基对已筛选出的PVA分解菌进行扩大培养。 （3）判断培养基是否有杂菌污染，需将_____同时进行培养；判断某培养基是否具有筛选作用，需设置_____进行接种后培养，观察菌落数目，得出结论。 22. 肿瘤细胞表面有受体EGFR，CD3是T细胞表面的标志性抗原。科研人员制备双特异性抗体EGFR/CD3，可招募T细胞定向移至肿瘤细胞，增强其对肿瘤细胞的杀伤力，过程如下图所示。 （1）动物细胞培养：培养动物细胞的培养基中通常会添加_____等天然成分，需要提供的气体条件中有CO2，其中CO2的作用是_____。注射EGFR进入小鼠体内后，可从小鼠脾脏中获取能产生特异性抗体的细胞B，并用_____酶进行处理分离制备成细胞悬液，细胞B与细胞A融合前，_____（填“需要”或“不需要”）通过原代培养扩大细胞B数量。 （2）诱导融合：细胞融合过程中可添加某种物质_____诱导细胞融合。④过程特有的诱导动物细胞融合的方法是_____。 （3）第一次筛选：常使用特定的选择培养基（如HAT 培养基），该培养基对未融合的细胞和_____细胞生长具有抑制作用。 （4）第二次筛选：筛选出杂交瘤细胞后，先进行_____培养，再利用_____法来筛选出获得能产生特定抗体的单克隆杂交瘤细胞。单克隆抗体的优点是_____（答出两点）。 （5）据图分析，抗体是由两条H链和两条L链组成的4条肽链的对称结构，双杂交瘤细胞会产生多种抗体，推测其可能的原因是_____。 23. 胶原蛋白在维持器官、组织、细胞形态和功能等方面发挥着关键性作用，传统提取方法得到的胶原蛋白成分复杂，还可能携带动物病毒等。科学家将合成胶原蛋白的基因kit导入大肠杆菌构建基因工程菌，过程如图所示。回答下列问题： （1）图中①过程需要使用_____酶，需要提供的原料是_____，该过程得到的DNA片段_____（填“含有”或“不含有”）启动子序列。 （2）研究人员利用PCR技术获取了大量目的基因kit，PCR反应体系加入_____种引物，在复性过程中引物会结合到互补DNA链的_____端上，使_____酶能够从引物的______端开始连接脱氧核苷酸，扩增n-2次，需要_____个引物。 （3）图中过程②是基因工程的核心步骤即_____，选用_____（填限制酶）切割质粒比只选一种限制酶切割更合理，原因是_____；为了实现目的基因与运载体的连接，需要对PCR的引物进行改造，具体的做法是_____。 （4）过程②获得的重组DNA分子除启动子外，还应含有_____等，启动子的作用是_____。为了初步筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，培养基甲中需要加入的物质是_____。 （5）双酶切kit基因与质粒pET-28a（+）长度为170bp的片段进行置换，构建重组质粒pET—28a（+）—kit，上述两种质粒经HindⅢ切割后片段长度如表所示（每种片段各1个）。由此判定kit基因长度为_____，该基因上有_____个HindⅢ切割位点。经添加有硫链丝菌素的培养基初步筛选后的大肠杆菌中不一定含有目的基因，原因是_____。 pET-28a（+） pET-28a（+）-kit 1000bp、2550bp 1050bp、2500bp、150bp 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $