高二生物下学期期末考试考前倒计时5天限时练（选必三3-4章）

**基本信息** 聚焦基因工程与蛋白质工程核心知识，通过填空与限时练结合，构建工具-操作-应用的完整逻辑链，强化结构与功能观及科学思维。 **专项设计** |模块|题量/典例|题型特征|知识逻辑| |----|-----------|----------|----------| |基础知识填空|7模块（含4章核心概念）|以关键词填空为主，强化限制酶/载体等工具特性及操作程序记忆|从分子工具（限制酶/连接酶）到操作流程（目的基因获取至检测鉴定），再延伸至蛋白质工程及伦理规范，形成递进式知识网络| |限时练|15选择+2填空|涵盖概念辨析（如PCR过程）、实验分析（如质粒构建）、伦理判断（如克隆态度）|通过具体案例（如乳腺生物反应器）体现理论应用，结合CRISPR-Cas9等技术考查科学探究能力，渗透技术伦理责任意识|

选必三3-4章基础知识填空+限时练 第1部分 基础知识填空 1、限制性内切核酸酶（简称限制酶）作用特点：能够识别双链DNA分子的 ，并且使每一条链中 部位的两个核苷酸之间的 键断开。 2、DNA连接酶作用：将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的 键，是基因工程的“缝合针”。 3、基因进入受体细胞的载体必备条件： (1) 能在受体细胞中 ，或整合到受体细胞的染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。 (2) 有一个或多个限制酶切割位点，以便 插入。 (3) 具有特殊的 ，便于 （如抗生素抗性基因、荧光蛋白基因等）。 (4) 对受体细胞 ，不会影响受体细胞的正常生命活动。 4、质粒：一种 的、结构 、独立于 之外，并具有 能力的双链 状DNA分子，是最常用的载体。 4、基因工程的基本操作程序 （1）目的基因的获取（教材P76） 1　 目的基因定义：编码 的结构基因，也可以是一些具有 作用的因子。 2　 常用方法：从 中获取、利用 技术扩增目的基因、化学方法人工合成。 3　 PCR（聚合酶链式反应）过程包括 （90-95℃，双链DNA解旋为单链）、 （55-60℃， 互补结合）、延伸（72℃， 聚合酶催化合成新的DNA链）。 （2）基因表达载体的构建（核心步骤）（教材P80） 1　 构建目的：使目的基因在受体细胞中 存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够 和发挥作用。 2　 组成结构：目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点。 3　 启动子：一段有特殊结构的 片段，位于基因的首端，是 酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出 ，最终获得所需要的蛋白质。 （3）将目的基因导入受体细胞（教材P81） 1　 转化的定义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持 和 的过程。 2　 常用导入方法： · 植物细胞：农杆菌转化法（利用农杆菌 质粒上的 可转移到受体细胞并整合到受体细胞 上的特点）、花粉管通道法（我国独创，简便经济）。 · 动物细胞： 技术（最常用，将重组DNA分子直接注入 的细胞核内）。 · 微生物细胞：用 处理微生物细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中 的生理状态。 （4）目的基因的检测与鉴定（教材P82） · 分子水平检测： · 检测目的基因是否插入受体细胞的染色体DNA上、检测目的基因是否转录出mRNA：采用 。 · 检测目的基因是否翻译成蛋白质：采用 杂交技术。 · 个体水平鉴定： · 植物：抗虫或抗病的接种实验，观察受体生物是否表现出相应的 特性；观察转基因植物的性状是否符合预期。 · 动物：观察转基因动物的性状是否符合预期，如转基因动物的生长速率、产奶量等。 5、基因工程的应用 1　 用转基因动物生产药物：将药用蛋白基因与 基因的 等调控组件重组在一起，导入哺乳动物的 中，培育出转基因动物，其进入泌乳期后，可通过分泌的乳汁生产所需要的药物，称为乳腺生物反应器（乳房生物反应器）。 2　 用转基因动物作器官移植的供体：将 或 决定基因的导入猪的基因组，培育出没有 反应的转基因猪，其器官可用于人类器官移植。 6、蛋白质工程的原理和应用（教材P93） （1）定义：指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因 或基因 ，对现有蛋白质进行 ，或制造一种新的 ，以满足人类的生产和生活的需求。 （2）基本原理 中心法则的逆推：从预期的 出发→设计预期的蛋白质 →推测应有的氨基酸 →找到相对应的 （基因），然后通过基因工程技术改造或合成基因，最终表达出符合要求的蛋白质。 （3）蛋白质工程与基因工程的区别：基因工程理论上只能生产自然界 的蛋白质，蛋白质工程：可以生产自然界 的新型蛋白质，是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。 7、我国对生殖性克隆的态度：我国政府一再重申四不原则： 、 、 、 任何生殖性克隆人实验。 第二部分 限时练 1．蛋白质工程中目前已成功的是（　　） A．对胰岛素进行改造，生产速效型药品 B．蛋白质工程应用于微电子方面 C．体外耐保存的干扰素 D．用蛋白质工程生产高产赖氨酸玉米 2．下列属于理性对待生物技术的是（    ） A．转基因技术按照人们的意愿对生物进行设计，不存在负面影响 B．转基因农作物对于解决粮食、能源等问题具有积极作用，但也存在一定风险 C．克隆技术如果被不当利用将给社会造成灾难，应禁止任何克隆研究 D．如果转基因技术被恐怖分子利用，将可能导致人类灭绝，应停止转基因研究 3．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验原理与方法的叙述，错误的是 A．DNA在NaCl溶液中的溶解度随着溶液浓度的减小而减小 B．向鸡血细胞中加入蒸馏水的目的是使其吸水涨破，释放出其中的DNA C．向滤液中加入冷却的酒精的目的是除去DNA中的杂质，纯化DNA D．向初步纯化的DNA中加入二苯胺溶液，沸水浴后可观察到溶液显蓝色 4．某研究小组将纤维素酶基因N插入某种细菌B1的基因组中，构建高效降解纤维素的菌株B2。该小组在含有N基因的质粒中插入B1基因组的M1与M2片段，再经限制酶切割获得含N基因的片段甲。利用CRISPR - Cas9基因组编辑技术将片段甲插入B1的基因组，得到菌株B2。CRISPR - Cas9系统由Cas9蛋白和人工设计的向导RNA构成，在向导RNA引导下，Cas9蛋白与靶序列结合并将DNA双链切断，从而完成对目的基因的编辑。图1中I - Ⅳ是酶切位点，P1 - P4是引物的结合位置，图2是片段甲替换区，→表示引物5’→3’方向。下列叙述错误的是（　　） A．构建片段甲时，应将M1插入质粒的I和Ⅱ之间，M2插入质粒的Ⅲ和Ⅳ之间 B．CRISPR-Cas9技术切割细菌B1基因组中的DNA，可形成的碱基对有G-C、A-T、U-A、C-G C．以细菌B2的基因组为模板，采用引物P3和P4进行PCR，可以获得大量的PCR扩增产物 D．基因工程操作中，常先用Ca2+处理微生物细胞，再将重组基因的表达载体导入其中 5．ACC2是脂肪酸合成的一种关键酶。科学家敲除实验鼠的ACC2基因后，小鼠出现某些变化。下列相关叙述错误的是（    ） A．脂肪酸是脂肪的组成成分之一 B．敲除ACC2的小鼠体内脂肪含量可能上升 C．基因敲除的遗传学原理是基因重组 D．基因敲除时发生过磷酸二酯键的断裂和形成 6．枯草杆菌蛋白酶应用于洗涤剂、制革及丝绸工业。某研究小组利用蛋白质工程将该蛋白酶中第188位丙氨酸替换为脯氨酸、第239位谷氨酰胺替换为精氨酸、第262位缬氨酸替换为亮氨酸，结果发现该酶的催化活性大幅度提高。下列叙述不正确的是（　　） A．对枯草杆菌蛋白酶进行改造通过直接改造蛋白酶的分子结构来实现 B．通过基因工程和蛋白质工程生产的枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列不同 C．改造后的枯草杆菌蛋白酶空间结构可能发生改变导致其催化活性提高 D．对枯草杆菌蛋白酶进行分子设计必须从预期蛋白酶的功能特点入手 7．下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正确的是（    ） A．DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合 B．用限制性核酸内切酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4个水分子 C．限制酶能专一性破坏双链DNA分子中碱基之间的氢键来切割DNA分子 D．T4DNA连接酶只能连接双链DNA片段互补的黏性末端 8．下列有关生物技术的安全性与伦理问题描述正确的是（    ） A．生殖性克隆和治疗性克隆的本质是相同的，都会面临伦理问题 B．经济、文化和伦理道德观念的不同不会影响人们对转基因技术的看法 C．将目的基因导入叶绿体基因组可以有效地防止基因通过花粉转移到自然界中的其他植物 D．人体不会对转基因技术制造的具有超强的传染性和致病性的新型病原体产生免疫反应 9．自从1983年首次获得转基因植物后，至今已有35科120多种植物转基因获得成功。随着转基因技术的发展，“基因污染”应运而生，下列关于基因污染的叙述，错误的是（    ） A．转基因作物可通过花粉扩散到其近亲作物上，从而污染生物基因库 B．抗除草剂基因有可能通过花粉传播进入杂草，从而产生“超级杂草” C．杂草、害虫从其近亲获得抗性基因，可能破坏生态系统的稳定性 D．转基因生物的外源基因本身来源于自然界，故不存在“基因污染” 10．大肠杆菌的pBR322质粒常用于重组质粒的构建，该质粒上限制酶识别位点如图1所示。受体菌可能导入重组质粒或pBR322质粒，需要在培养基中添加抗生素进行初筛和复筛。将初筛培养基上的菌落原位影印（将菌落按原有位置影印到另一培养基上）到复筛培养上培养，1～6表示菌落，结果如图2所示。下列有关分析正确的是（　　） A．若目的基因和pBR322质粒用BamHⅠ、EcoRⅠ切割，则初筛培养基要添加四环素 B．若目的基因和pBR322质粒用BclⅠ、HindⅢ切割，则复筛培养基要添加氨苄青霉素 C．若目的基因和pBR322质粒用BamHⅠ、EcoRⅠ切割，则菌落3、4、6导入的是重组质粒 D．若目的基因和pBR322质粒用BclⅠ、HindⅢ切割，则菌落1、2、5导入的是pBR322质粒 11．“筛选”是生物技术与工程中重要的环节。下列相关叙述正确的是（　　） A．培育耐盐转基因植株时，用特异性探针进行分子杂交显示出杂交带即可筛选耐盐植株 B．制备动物乳腺生物反应器时，对滋养层细胞进行SRY基因鉴定阳性可筛选出雄性胚胎 C．诱导甘蓝根尖细胞与白菜叶肉细胞原生质体融合，观察到叶绿体即可筛选出异种融合细胞 D．制备单克隆抗体时，可利用选择培养基筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞 12．某DNA分子上有2个BamHI的酶切位点，如下图，用BamHI酶切该DNA分子可以生成3种不同长度的DNA片段。现有足够多的该DNA分子，若每个DNA分子至少有一处位点被该酶切断，那么经酶切后，最多能产生多少种长度不同的DNA片段（    ） A．3 B．4 C．5 D．6 13．科学家在某种农杆菌中找到了抗枯萎病的基因，并以质粒为运载体，采用转基因方法培育出了抗枯萎病的金花茶新品种。下列有关叙述错误的是（　　） A．质粒可以在受体细胞中存活并表达其上的基因 B．只能以金花茶的受精卵作为基因工程的受体细胞 C．抗枯萎病基因进入金花茶细胞后仍然遵循中心法则 D．抗枯萎病基因在不同生物的细胞中表达的产物相同 14．在干旱、高温条件下玉米（C4植物）由于含有磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC），其利用 CO2的能力远远高于水稻（C3植物），具有明显的生长及产量优势。育种专家从玉米的基因组中分离出 PEPC 基因，培育出高光合效率的转基因水稻。下列叙述正确的是（    ） A．鉴定时须测定并比较转基因水稻与非转基因水稻同化 CO2的速率 B．DNA聚合酶与 PEPC 基因上的启动子结合后能驱动该基因转录 C．可使用PCR技术检验 PEPC 基因是否在转基因水稻中成功表达 D．基于转基因水稻的科学研究，体现了生物多样性的间接价值 15．科研团队通过蛋白质工程改造某工业用酶时，将酶分子表面第128位的赖氨酸（亲水）替换为丙氨酸（疏水）。改造后的酶在高温下催化效率显著提升，且经X射线衍射分析显示其活性中心的三维结构未改变。下列叙述正确的是（　　） A．氨基酸替换直接改变了该酶的活性中心的结构 B．改造通过增强酶分子间肽键提升热稳定性 C．疏水基团暴露可能减少高温下水分子对结构的破坏 D．所有亲水氨基酸替换为疏水氨基酸均可提高酶热稳定性 二、填空题（除标注外每空2分，共30分） 16．某基因研究院培育出了转基因克隆绵羊，该绵羊能合成深海鱼体内富含的不饱和脂肪酸omega-3 (1)在培育转基因克隆绵羊过程中，运用_______（方法）除去卵母细胞的细胞核，通过化学试剂_______使该细胞与供体细胞融合，进而构建重组胚胎 (2)为保证胚胎移植利进行，需要在合适的季节对供、受体母羊进行_______处理，重组胚胎发育到_______阶段时，可将其移入受体母羊 (3)培育过程中，科研人员同时将omega-3合成酶的基因片段转移到了该羊基因组中，目的基因进入受体细胞并维持稳定和表达的过程，称为________ (4)目前，人们主要通过食用深海鱼肉摄取omega-3，这造成了人们过度捕杀深海鱼而严重破坏了海洋生态系统，使生态系统的________稳定性下降．建造海底人工鱼礁，其目的是改善海洋环境，是实现海洋渔业可持续发展的举措之一，这体现了生态工程所遵循的________（物种多样性）原理十九大提出“绿水青山就是金山银山”，要实现这一目标不仅需要对破坏的生态环境进行修复，还要考虑当地人的经济发展和生活需要，这主要遵循了生态工程的________原理 17．2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题： (1)获取目的基因时，首先提取新冠病毒的RNA，再通过逆转录过程获得cDNA，该过程需要的酶是_____。 (2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用1种限制酶；方案二：选用2种限制酶，最佳选择是________________________________ ；方案二优于方案一的原因是________________________________。 (3)需要用一定浓度的________处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组质粒导入其中。筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入_____________________，培养一段时间后，挑选出______色的菌落进一步培养获得大量目的菌。 (4)利用PCR技术获取目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、引物、___________、_________等。据下图分析，应选择甲、乙、丙、丁四种引物中的____________________。 学科网（北京）股份有限公司 $ 选必三3-4章基础知识填空+限时练 第1部分 基础知识填空 1、限制性内切核酸酶（简称限制酶）作用特点：能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 2、DNA连接酶作用：将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键，是基因工程的“缝合针”。 3、基因进入受体细胞的载体必备条件： (1) 能在受体细胞中自我复制，或整合到受体细胞的染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。 (2) 有一个或多个限制酶切割位点，以便外源DNA片段插入。 (3) 具有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选（如抗生素抗性基因、荧光蛋白基因等）。 (4) 对受体细胞无害，不会影响受体细胞的正常生命活动。 4、质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子，是最常用的载体。 4、基因工程的基本操作程序 （1）目的基因的获取（教材P76） 1　 目的基因定义：编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 2　 常用方法：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增目的基因、化学方法人工合成。 3　 PCR（聚合酶链式反应）过程包括变性（90-95℃，双链DNA解旋为单链）、复性（55-60℃，引物与单链DNA互补结合）、延伸（72℃，TaqDNA聚合酶催化合成新的DNA链）。 （2）基因表达载体的构建（核心步骤）（教材P80） 1　 构建目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 2　 组成结构：目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点。 3　 启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。 （3）将目的基因导入受体细胞（教材P81） 1　 转化的定义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2　 常用导入方法： · 植物细胞：农杆菌转化法（利用农杆菌Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上的特点）、花粉管通道法（我国独创，简便经济）。 · 动物细胞：显微注射技术（最常用，将重组DNA分子直接注入受精卵的细胞核内）。 · 微生物细胞：用Ca²⁺处理微生物细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 （4）目的基因的检测与鉴定（教材P82） · 分子水平检测： · 检测目的基因是否插入受体细胞的染色体DNA上、检测目的基因是否转录出mRNA：采用PCR等技术。 · 检测目的基因是否翻译成蛋白质：采用抗原-抗体杂交技术。 · 个体水平鉴定： · 植物：抗虫或抗病的接种实验，观察受体生物是否表现出相应的抗虫或抗病特性；观察转基因植物的性状是否符合预期。 · 动物：观察转基因动物的性状是否符合预期，如转基因动物的生长速率、产奶量等。 5、基因工程的应用 1　 用转基因动物生产药物：将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，导入哺乳动物的受精卵中，培育出转基因动物，其进入泌乳期后，可通过分泌的乳汁生产所需要的药物，称为乳腺生物反应器（乳房生物反应器）。 2　 用转基因动物作器官移植的供体：将抑制或除去抗原决定基因的导入猪的基因组，培育出没有免疫排斥反应的转基因猪，其器官可用于人类器官移植。 6、蛋白质工程的原理和应用（教材P93） （1）定义：指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 （2）基本原理 中心法则的逆推：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因），然后通过基因工程技术改造或合成基因，最终表达出符合要求的蛋白质。 （3）蛋白质工程与基因工程的区别：基因工程理论上只能生产自然界已存在的蛋白质，蛋白质工程：可以生产自然界不存在的新型蛋白质，是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。 7、我国对生殖性克隆的态度：我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验。 第二部分 限时练 一、选择题（每题2分，共30分） 1．蛋白质工程中目前已成功的是（　　） A．对胰岛素进行改造，生产速效型药品 B．蛋白质工程应用于微电子方面 C．体外耐保存的干扰素 D．用蛋白质工程生产高产赖氨酸玉米 【答案】A 【解析】蛋白质工程是一项难度很大的工程，目前成功的例子不多，主要是因为蛋白质发挥功能必须依赖正确的高级结构，这种高级结构十分复杂，目前科学家对大多数蛋白质的高级结构了解还不是很够，这就制约了其发展。 【详解】A、通过对胰岛素进行改造，已经使其成为速效性药品，A正确； B、通过蛋白质工程方法制造成电子元件正在探索中，还未成功，B错误； C、室温下可保存半年的干扰素目前还没实现，C错误； D、生产赖氨酸含量高的玉米尚未成功，D错误。 故选A。 2．下列属于理性对待生物技术的是（    ） A．转基因技术按照人们的意愿对生物进行设计，不存在负面影响 B．转基因农作物对于解决粮食、能源等问题具有积极作用，但也存在一定风险 C．克隆技术如果被不当利用将给社会造成灾难，应禁止任何克隆研究 D．如果转基因技术被恐怖分子利用，将可能导致人类灭绝，应停止转基因研究 【答案】B 【分析】转基因生物的安全性问题包括： （1）食物安全：滞后效应、出现过敏源、食物的营养成分改变等。 （2）生物安全：基因扩散导致对生物多样性的威胁。 （3）环境安全：对生态系统稳定性及环境的影响。 【详解】A、转基因技术是按照人们的意愿对生物进行设计的，但是也存在负面影响，A错误； B、转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用，同时也存在着一定风险，B正确； C、克隆技术如果被不当利用将给社会造成灾难，应禁止生殖性克隆，但是不反对治疗性克隆，如治疗性克隆可用于治疗白血病等，C错误； D、转基因技术有其优点和缺点，应正确判断，不能因噎废食，D错误。 故选B。 3．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验原理与方法的叙述，错误的是 A．DNA在NaCl溶液中的溶解度随着溶液浓度的减小而减小 B．向鸡血细胞中加入蒸馏水的目的是使其吸水涨破，释放出其中的DNA C．向滤液中加入冷却的酒精的目的是除去DNA中的杂质，纯化DNA D．向初步纯化的DNA中加入二苯胺溶液，沸水浴后可观察到溶液显蓝色 【答案】A 【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性．（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。 【详解】A、NaCl溶液的浓度低于在0.14mol/L时，随着NaCl溶液浓度的升高，DNA的溶解度逐渐降低，NaCl溶液的浓度低于在0.14mol/L时，随着NaCl溶液浓度的升高，DNA的溶解度逐渐升高，A错误； B、向鸡血细胞液中加入蒸馏水的目的是使其吸水涨破，释放出其中的DNA，B正确； C、DNA不溶于酒精，因此向滤液中加入冷却酒精的目的是除去DNA中的杂质，纯化DNA，C正确； D、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，向初步纯化的DNA中加入二苯胺溶液，沸水浴后可观察到溶液显蓝色，D正确。 故选A。 4．某研究小组将纤维素酶基因N插入某种细菌B1的基因组中，构建高效降解纤维素的菌株B2。该小组在含有N基因的质粒中插入B1基因组的M1与M2片段，再经限制酶切割获得含N基因的片段甲。利用CRISPR - Cas9基因组编辑技术将片段甲插入B1的基因组，得到菌株B2。CRISPR - Cas9系统由Cas9蛋白和人工设计的向导RNA构成，在向导RNA引导下，Cas9蛋白与靶序列结合并将DNA双链切断，从而完成对目的基因的编辑。图1中I - Ⅳ是酶切位点，P1 - P4是引物的结合位置，图2是片段甲替换区，→表示引物5’→3’方向。下列叙述错误的是（　　） A．构建片段甲时，应将M1插入质粒的I和Ⅱ之间，M2插入质粒的Ⅲ和Ⅳ之间 B．CRISPR-Cas9技术切割细菌B1基因组中的DNA，可形成的碱基对有G-C、A-T、U-A、C-G C．以细菌B2的基因组为模板，采用引物P3和P4进行PCR，可以获得大量的PCR扩增产物 D．基因工程操作中，常先用Ca2+处理微生物细胞，再将重组基因的表达载体导入其中 【答案】C 【详解】A、将M1和M2片段分别插入特定的酶切位点，可以避免破坏N基因的启动子、终止子和N基因，确保N基因能够在菌株B2中表达，A正确； B、向导RNA与DNA进行碱基互补配对，可形成的碱基对有G-C、C-G、A-T、U-A，B正确； C、以细菌B2基因组为模板，用引物P1和P2可以扩增出N基因，可以验证片段甲插入了细菌B1的基因组；用引物P3和P4进行PCR，因为片段甲（M1+启动子+N基因+终止子+M2）中没有P4的结合区域，故无法得到PCR扩增产物，C错误； D、基因工程操作中，常先用Ca2+处理微生物细胞，再将重组基因的表达载体导入其中，D正确。 故选C。 5．ACC2是脂肪酸合成的一种关键酶。科学家敲除实验鼠的ACC2基因后，小鼠出现某些变化。下列相关叙述错误的是（    ） A．脂肪酸是脂肪的组成成分之一 B．敲除ACC2的小鼠体内脂肪含量可能上升 C．基因敲除的遗传学原理是基因重组 D．基因敲除时发生过磷酸二酯键的断裂和形成 【答案】B 【分析】基因与性状的关系：（1）基因通过其表达产物——蛋白质来控制性状，细胞内的基因表达与否以及表达水平的高低都是受到调控的；（2）基因与性状的关系并不是简单的一一对应关系：①一个性状可以受多个基因的影响；②一个基因也可以影响多个性状；③生物体的性状也不完全是由基因决定的，环境对性状也有着重要影响。 【详解】A、脂肪由甘油和脂肪酸构成，A正确； B、敲除ACC2以后，脂肪酸无法合成，小鼠体内脂肪含量很可能减少，B错误； C、基因敲除技术的基本原理是通过设计同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的，这种变异属于基因重组，C正确； D、基因敲除时，限制酶切出缺口，磷酸二酯键断裂，然后目标基因与外源DNA片段相连，磷酸二酯键形成，D正确。 故选B。 6．枯草杆菌蛋白酶应用于洗涤剂、制革及丝绸工业。某研究小组利用蛋白质工程将该蛋白酶中第188位丙氨酸替换为脯氨酸、第239位谷氨酰胺替换为精氨酸、第262位缬氨酸替换为亮氨酸，结果发现该酶的催化活性大幅度提高。下列叙述不正确的是（　　） A．对枯草杆菌蛋白酶进行改造通过直接改造蛋白酶的分子结构来实现 B．通过基因工程和蛋白质工程生产的枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列不同 C．改造后的枯草杆菌蛋白酶空间结构可能发生改变导致其催化活性提高 D．对枯草杆菌蛋白酶进行分子设计必须从预期蛋白酶的功能特点入手 【答案】A 【分析】蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或者制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产生活需求。 【详解】A、对枯草杆菌蛋白酶进行改造通过基因来实现，A错误； B、基因工程生产的蛋白质是自然界已有的蛋白质，而蛋白质工程能生产出自然界中不存在的新型蛋白质分子，两者的氨基酸序列不同，B正确； C、该蛋白酶中第188位丙氨酸替换为脯氨酸、第239位谷氨酰胺替换为精氨酸、第262位缬氨酸替换为亮氨酸，结果发现该酶的催化活性大幅度提高，其原因可能是改变了蛋白酶的空间结构，提高了酶与底物的亲和力，C正确； D、对枯草杆菌蛋白酶进行分子设计应从预期的蛋白酶功能出发，对蛋白酶的结构进行设计，D正确。 故选A。 7．下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正确的是（    ） A．DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合 B．用限制性核酸内切酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4个水分子 C．限制酶能专一性破坏双链DNA分子中碱基之间的氢键来切割DNA分子 D．T4DNA连接酶只能连接双链DNA片段互补的黏性末端 【答案】B 【解析】生物工程中酶的作用： 1、DNA连接酶：主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键，起连接作用，在基因工程中起作用。 2、DNA聚合酶：主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA复制中起作用。 3、限制性核酸内切酶：从DNA链的内部进行切割，分为限制性内切酶和非限制性内切酶，主要从原核生物中分离纯化出来，这种酶的作用是识别DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 【详解】A、DNA连接酶能够将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间磷酸二酯键黏合，A错误； B、用限制性核酸内切酶从质粒上切下一个目的基因，要断裂4个磷酸二酯键，故需消耗4个水分子，B正确； C、限制酶切割DNA分子时，是破坏了同一条链上相邻脱氧核苷酸之间的化学键即磷酸二酯键，而不是两条链上互补配对的碱基之间的氢键，C错误； D、T4DNA连接酶既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端，也可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低，D错误。 故选B。 8．下列有关生物技术的安全性与伦理问题描述正确的是（    ） A．生殖性克隆和治疗性克隆的本质是相同的，都会面临伦理问题 B．经济、文化和伦理道德观念的不同不会影响人们对转基因技术的看法 C．将目的基因导入叶绿体基因组可以有效地防止基因通过花粉转移到自然界中的其他植物 D．人体不会对转基因技术制造的具有超强的传染性和致病性的新型病原体产生免疫反应 【答案】C 【分析】1、治疗性克隆，运用克隆技术获得人体早期胚胎，但目的不是将胚胎培育成人，而是为了提取全能性的胚胎干细胞，然后在合适的条件下，使其发育成为人体的任何一个器官，包括大脑、肌肉、血液和神经，这些器官组织将用于医疗。 2、生殖性克隆：是指出于生殖目的使用克隆技术在实验室制造人类胚胎，然后将胚胎置入人类子宫发育成胎儿或婴儿的过程。 【详解】A、生殖性克隆和治疗性克隆的结果本质是不相同的，生殖性克隆会面临伦理问题，A错误； B、经济、文化和伦理道德观念的不同会影响人们对转基因技术的看法，B错误； C、叶绿体在细胞质里，受精卵中的叶绿体来自卵细胞，精子里没有，植物传粉只传精子，卵子不离开母本，所以将目的基因导入叶绿体基因组可以有效地防止目的基因随花粉扩散到自然界，C正确； D、转基因技术制造的具有超强的传染性和致病性的新型病原体也会引起人体产生免疫反应，D错误。 故选C。 9．自从1983年首次获得转基因植物后，至今已有35科120多种植物转基因获得成功。随着转基因技术的发展，“基因污染”应运而生，下列关于基因污染的叙述，错误的是（    ） A．转基因作物可通过花粉扩散到其近亲作物上，从而污染生物基因库 B．抗除草剂基因有可能通过花粉传播进入杂草，从而产生“超级杂草” C．杂草、害虫从其近亲获得抗性基因，可能破坏生态系统的稳定性 D．转基因生物的外源基因本身来源于自然界，故不存在“基因污染” 【答案】D 【分析】转基因生物的安全性问题： 食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。 生物安全：①转基因植物扩散到种植区外变成野生种或杂草，②转基因植物竞争能力强，可能成为“入侵的外来物种”，③转基因植物的外源基因与细菌或病毒杂交，重组出有害的病原体，④可能使杂草成为有抗除草剂基因的“超级杂草”。 【详解】A、转基因作物的外源基因可以通过花粉扩散到它的近亲作物上，从而污染生物基因库，造成基因污染，A正确； B、转基因植物的抗除草剂基因可能会通过杂交传给其他杂草成为用除草剂除不掉的超级杂草，B正确； C、杂草、害虫从它的近亲中获得的抗性基因，成为超级杂草或超级害虫，这样可能破坏生态系统的稳定性，C正确； D、转基因植物会存在“基因污染”问题，D错误。 故选D。 10．大肠杆菌的pBR322质粒常用于重组质粒的构建，该质粒上限制酶识别位点如图1所示。受体菌可能导入重组质粒或pBR322质粒，需要在培养基中添加抗生素进行初筛和复筛。将初筛培养基上的菌落原位影印（将菌落按原有位置影印到另一培养基上）到复筛培养上培养，1～6表示菌落，结果如图2所示。下列有关分析正确的是（　　） A．若目的基因和pBR322质粒用BamHⅠ、EcoRⅠ切割，则初筛培养基要添加四环素 B．若目的基因和pBR322质粒用BclⅠ、HindⅢ切割，则复筛培养基要添加氨苄青霉素 C．若目的基因和pBR322质粒用BamHⅠ、EcoRⅠ切割，则菌落3、4、6导入的是重组质粒 D．若目的基因和pBR322质粒用BclⅠ、HindⅢ切割，则菌落1、2、5导入的是pBR322质粒 【答案】B 【详解】A、用BamHⅠ、EcoRⅠ切割，四环素抗性基因失去效应，初筛应添加氨苄青霉素，复筛应添加四环素，A错误； B、用BclⅠ、HindⅢ切割，氨苄青霉素抗性基因失去效应，四环素抗性基因正常，初筛应添加四环素，复筛应添加氨苄青霉素，B正确； C、用BamHⅠ、EcoRⅠ切割，复筛时四环素培养基上死亡的是重组质粒菌落，即菌落3、4、6导入的是pBR322质粒，而非重组质粒，C错误； D、用BclⅠ、HindⅢ切割，复筛时氨苄青霉素培养基上存活的菌落3、4、6是导入pBR322质粒菌落，菌落1、2、5是导入重组质粒菌落，D错误。 11．“筛选”是生物技术与工程中重要的环节。下列相关叙述正确的是（　　） A．培育耐盐转基因植株时，用特异性探针进行分子杂交显示出杂交带即可筛选耐盐植株 B．制备动物乳腺生物反应器时，对滋养层细胞进行SRY基因鉴定阳性可筛选出雄性胚胎 C．诱导甘蓝根尖细胞与白菜叶肉细胞原生质体融合，观察到叶绿体即可筛选出异种融合细胞 D．制备单克隆抗体时，可利用选择培养基筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞 【答案】B 【分析】单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，在经过三次筛选：①筛选能够产生单一抗体的B淋巴细胞②筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）③筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。两次抗体检测：专一抗体检验阳性，获得能产生特异性抗体、又能大量增殖杂交瘤细胞。最后从培养液或小鼠腹水中提取单克隆抗体。 【详解】A、培育耐盐转基因植株时，用特异性探针进行分子杂交显示出杂交带，表明植株含有目的基因，但不一定表达，所以不一定能筛选耐盐植株，A错误； B、SRY基因是哺乳动物Y染色体上具有决定雄性性别作用的基因片段，所以制备动物乳腺生物反应器时，对滋养层细胞进行SRY基因鉴定阳性可筛选出雄性胚胎 ，B正确； C、诱导甘蓝根尖细胞与白菜叶肉细胞原生质体融合，观察到叶绿体有可能是白菜原生质体之间相互融合，或者就是白菜叶肉细胞原生质体，没有发生融合，C错误； D、制备单克隆抗体时，可利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，再通过克隆化培养和抗体阳性检测才能筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，D错误。 故选B。 12．某DNA分子上有2个BamHI的酶切位点，如下图，用BamHI酶切该DNA分子可以生成3种不同长度的DNA片段。现有足够多的该DNA分子，若每个DNA分子至少有一处位点被该酶切断，那么经酶切后，最多能产生多少种长度不同的DNA片段（    ） A．3 B．4 C．5 D．6 【答案】C 【分析】根据题干信息和图形分析，该DNA分子上有2个BamHI的酶切位点，又因为每个DNA分子至少有一处位点被该酶切断，则可能性有：只有一个酶切位点被切开、有两个酶切位点被切开。 【详解】图中有2个限制酶切割位点，以这2个切割位点为分界线将DNA分为四段，假设从左向右依次为a、b、c，则有以下多种情况：（1）只切开一个位点，若切在a、bc间，则片段为a、bc两种；若切点在ab、c间，则片段为ab、c两种。（2）切开两个位点，即切点在a、b、c间，则片段为a、b、c三种。综合以上，不重复的片段共有5种。 故选C。 13．科学家在某种农杆菌中找到了抗枯萎病的基因，并以质粒为运载体，采用转基因方法培育出了抗枯萎病的金花茶新品种。下列有关叙述错误的是（　　） A．质粒可以在受体细胞中存活并表达其上的基因 B．只能以金花茶的受精卵作为基因工程的受体细胞 C．抗枯萎病基因进入金花茶细胞后仍然遵循中心法则 D．抗枯萎病基因在不同生物的细胞中表达的产物相同 【答案】B 【分析】基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程的基本操作程序为：提取目的基因 、目的基因与载体结合、将目的基因导入受体细胞 、目的基因的检测与鉴定。目的基因在受体细胞中成功表达标志着基因工程操作的成功。 【详解】A、质粒能在受体细胞中复制并稳定保存，并且表达其上的基因，A正确； B、金花茶的花粉也可以作为基因工程的受体细胞，然后再采用单倍体育种技术得到能稳定遗传的新品种，B错误； C、抗枯萎病基因进入金花茶细胞后要进行复制、转录、翻译，进而控制生物的性状，也要遵循中心法则，C正确； D、抗枯萎病基因表达的产物是相同的，所以才可用其进行新品种的培育，D正确。 故选B。 14．在干旱、高温条件下玉米（C4植物）由于含有磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC），其利用 CO2的能力远远高于水稻（C3植物），具有明显的生长及产量优势。育种专家从玉米的基因组中分离出 PEPC 基因，培育出高光合效率的转基因水稻。下列叙述正确的是（    ） A．鉴定时须测定并比较转基因水稻与非转基因水稻同化 CO2的速率 B．DNA聚合酶与 PEPC 基因上的启动子结合后能驱动该基因转录 C．可使用PCR技术检验 PEPC 基因是否在转基因水稻中成功表达 D．基于转基因水稻的科学研究，体现了生物多样性的间接价值 【答案】A 【分析】启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，紧挨转录的起始位点，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类需要的蛋白质。 【详解】A、对目的基因进行检测和鉴定需要在分子水平和个体水平进行检测，为了培育高光合效率的转基因水稻需要测定并比较转基因水稻与非转基因水稻同化 CO2的速率，A正确； B、启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位，驱动转录，DNA聚合酶是催化合成DNA的酶，B错误； C、PCR技术可检测目的基因及其转录出的RNA，但不能检测蛋白质，C错误； D、基于转基因水稻的科学研究，体现了生物多样性的直接价值，间接价值指的是生态价值，D错误。 故选A。 15．科研团队通过蛋白质工程改造某工业用酶时，将酶分子表面第128位的赖氨酸（亲水）替换为丙氨酸（疏水）。改造后的酶在高温下催化效率显著提升，且经X射线衍射分析显示其活性中心的三维结构未改变。下列叙述正确的是（　　） A．氨基酸替换直接改变了该酶的活性中心的结构 B．改造通过增强酶分子间肽键提升热稳定性 C．疏水基团暴露可能减少高温下水分子对结构的破坏 D．所有亲水氨基酸替换为疏水氨基酸均可提高酶热稳定性 【答案】C 【详解】A、X射线衍射分析显示改造后酶的活性中心三维结构未改变，因此氨基酸替换并未直接改变活性中心的结构，A错误； B、酶的热稳定性通常取决于疏水相互作用、氢键、二硫键等非共价作用或特定共价键，肽键本身是共价键，其强度在氨基酸替换中并不直接“增强”，且替换表面氨基酸一般不会直接影响肽键的稳定性，B错误； C、将表面亲水氨基酸替换为疏水氨基酸，可能使疏水基团暴露，增强疏水相互作用，从而在高温下减少水分子对蛋白质结构的破坏，提高热稳定性，C正确； D、蛋白质的热稳定性受整体结构、氨基酸序列及环境等多因素影响，并非所有亲水氨基酸替换为疏水氨基酸都能提高热稳定性，不当替换可能破坏蛋白质折叠或功能，D错误。 故选C。 二、填空题（除标注外每空2分，共30分） 16．某基因研究院培育出了转基因克隆绵羊，该绵羊能合成深海鱼体内富含的不饱和脂肪酸omega-3 (1)在培育转基因克隆绵羊过程中，运用_______（方法）除去卵母细胞的细胞核，通过化学试剂_______使该细胞与供体细胞融合，进而构建重组胚胎 (2)为保证胚胎移植利进行，需要在合适的季节对供、受体母羊进行_______处理，重组胚胎发育到_______阶段时，可将其移入受体母羊 (3)培育过程中，科研人员同时将omega-3合成酶的基因片段转移到了该羊基因组中，目的基因进入受体细胞并维持稳定和表达的过程，称为________ (4)目前，人们主要通过食用深海鱼肉摄取omega-3，这造成了人们过度捕杀深海鱼而严重破坏了海洋生态系统，使生态系统的________稳定性下降．建造海底人工鱼礁，其目的是改善海洋环境，是实现海洋渔业可持续发展的举措之一，这体现了生态工程所遵循的________（物种多样性）原理十九大提出“绿水青山就是金山银山”，要实现这一目标不仅需要对破坏的生态环境进行修复，还要考虑当地人的经济发展和生活需要，这主要遵循了生态工程的________原理 【答案】(1) 显微操作去核法 聚乙二醇 (2) 同期发情 桑葚胚或囊胚 (3)转化 (4) 抵抗力 协调与平衡 整体性 【分析】1、胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。 2、胚胎移植的生理学基础：①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。 【详解】（1）核移植技术的受体细胞为处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞，通过显微操作去除其核，使该细胞与供体细胞融合有物理或化学方法，化学方法一般用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂使两细胞融合，进而构建重组胚胎。 （2）为保证释胎移植顺利进行，需要在合适的季节对对受体母羊与供体母羊进行同期发情处理，以保证胚胎移植入相同的生理环境；进行胚胎移植时，一般胚胎要发育至桑椹胚或囊胚阶段。 （3）使目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 （4）过度捕杀深海鱼而严重破坏了海洋生态系统，使生态系统的营养结构变得更加简单，抵抗力稳定性变低；建造海底人工鱼礁目的是改善海洋环境，增大环境承载力，实现海洋渔业可持续发展，所以体现了生态工程建设要遵循的协调与平衡原理；十九大提出“绿水青山就是金山银山”，要实现这一目标不仅需要对破坏的生态环境进行恢复，更重要的是还要考虑当地人的经济发展和生活需要，这主要遵循了生态工程的整体性原理。 【点睛】本题考查胚胎移植、生态工程等知识，要求考生熟练掌握胚胎移植的基本程序、胚胎移植的生理学基础；识记生态工程的原理的相关内容。 17．2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题： (1)获取目的基因时，首先提取新冠病毒的RNA，再通过逆转录过程获得cDNA，该过程需要的酶是_____。 (2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用1种限制酶；方案二：选用2种限制酶，最佳选择是________________________________ ；方案二优于方案一的原因是________________________________。 (3)需要用一定浓度的________处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组质粒导入其中。筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入_____________________，培养一段时间后，挑选出______色的菌落进一步培养获得大量目的菌。 (4)利用PCR技术获取目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、引物、___________、_________等。据下图分析，应选择甲、乙、丙、丁四种引物中的____________________。 【答案】(1)逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶 (2) 方案二（1分） 既防止了目的基因和质粒的自身环化，又能保证目的基因和质粒的正向连接 (3) Ca2+（1分） 青霉素和X-gal 白 (4) 耐高温的DNA聚合酶（1分） 原料（1分） 乙、丙 【分析】基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。 【详解】（1）首先提取新冠病毒的RNA，再通过逆转录过程获得cDNA，PCR的原理是DNA半保留复制，其中逆转录需要的酶是逆转录酶，PCR需要耐高温的DNA聚合酶。 （2）如果用一种限制酶，可能切割后的目的基因会自身环化，同时会使目的基因反接在质粒上。为避免目的基因在质粒反向连接，可选用两种不同的限制酶切割，既防止了目的基因和质粒的自身环化，又能保证目的基因和质粒的正向连接。 （3）将重组质粒导入大肠杆菌之前，需要用一定浓度的Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，便于重组DNA导入。将重组质粒导入双子叶植物细胞和裸子植物，常用的方法是农杆菌转化法。目的基因拼接在质粒的lacZ基因上，打破了lacZ基因的序列，故筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入青霉素（检测抗性基因）和X-gal（检测是否导入目的基因）培养一段时间后，挑选出白色（若导入目的基因，lacZ基因被破坏，不能分解X-gal而呈白色）的菌落进一步培养获得大量目的菌。 （4）用PCR技术在体外扩增外源基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、耐高温的DNA聚合酶、原料、引物等。PCR时，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的，因此，据如图分析，利用PCR技术获取目的基因时，应选择乙、丙作为引物。 学科网（北京）股份有限公司 $