唐山一中2025-2026学年下学期5月份高二年级期中考试生物试卷

唐山一中2025一2026学年第二学期期中考试 高二年级 生物试卷 命题人：刘燕韩艳审核人：韩艳 刘燕 说明： 1.考试时间75分钟，满分100分。2.将卷I答案用2B铅笔涂在答题卡上，将卷Ⅱ答案用 黑色字迹的签字笔书写在答题卡上。 卷I(选择题共55分) 一、单项选择题（共20小题，每小题2分，计40分。在每小题给出的四个选项中，只有 1个选项符合题意) 1.“莫笑农家腊酒浑，丰年留客足鸡豚”，诗中的“腊酒”就是人们使用传统发酵技术在腊月 里酿造的米酒，其酿制过程为：选取优质糯米→洗米→用水浸米→蒸煮→摊凉→加入甜酒 曲→搭窝→发酵→米酒成品。下列叙述错误的是() A.甜酒曲中存在能分泌淀粉酶的微生物 B.糯米为酒曲中微生物的生长提供碳源、氮源等 C.米酒发酵过程中，微生物繁殖速度越快，酒精产量越高 D.发酵过程密封不严使酒变酸主要是因为醋酸含量增加 2.传统啤酒酿造过程中，发酵在敞开式发酵池中进行，麦芽汁中接入酿酒酵母后通入大 量无菌空气，之后会产生大量气体翻腾逸出，在麦芽汁表面形成2530cm厚的泡盖（气泡 层)，然后停止通气，进入静止发酵阶段，一段时间后可得啤酒。下列叙述正确的是() A.传统啤酒酿造过程中所需的菌种无需选育，也不需要对菌种扩大培养 B.泡盖的形成是由于酵母菌有氧呼吸产生大量CO2,能将麦芽汁与空气隔绝 C.焙烤大麦芽可杀死活细胞并使淀粉酶失去活性，有利于增加麦芽汁中麦芽糖的含量 D.静止发酵阶段相当于现代啤酒发酵工程的后发酵阶段 3.食用腐烂水果后，人出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产 生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物 的种类和数量以及烂果毒性，实验基本步骤如图所示。下列说法正确的是() 步骤二： 步骤三： 步骤一： 病健交界处 1 mL 1 mL 分离得到①⑤（其中 接种0②⑧ ①②③④⑤， ⑤为苹果剩余部分)共 →@@©· 051015 5处样品，研磨过滤后 编号①⑤ 刻度尺 培养基 病斑 得到5种菌液 菌液分别取样 9 mL (mm) 无菌水 腐烂的苹果 A.根据该实验的探究目的，步骤二采用的接种方法是平板划线法 B.在适宜环境下培养8小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量 C.若①~⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低 D.若⑤所在部位微生物的数量极少，则切掉①~④后的苹果便可放心食用 高三年级生物试卷第1页共10页 4.下列关于微生物纯培养的叙述，错误的是() A.倒平板操作应等培养基冷却至50°C左右时，在酒精灯火焰附近进行 B.微生物的纯培养操作顺序为：配制培养基→灭菌→调pH→接种→分离和培养等 C.用平板划线法和稀释涂布平板法都能在固体培养基上得到单菌落 D.接种后待菌液被吸收后，倒置培养以避免皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 5.哈尔滨特色饮料格瓦斯的工业化发酵流程为：面包干粉碎→加水浸泡→灭菌→冷却→ 接种酵母菌、嗜酸乳杆菌→分段发酵→过滤→调味→灌装。已知发酵过程中工业酵母菌可 产生淀粉酶，嗜酸乳杆菌不产生淀粉酶。下列关于该发酵工程的叙述错误的是() A.面包干浸泡液灭菌的目的是防止杂菌污染，避免其与菌种竞争营养和产生有害物质 B.酵母菌先通过有氧呼吸增殖，后续通过无氧呼吸产生酒精和CO? C.分段发酵需控制不同条件，酵母菌增殖期18~30C,且全程需控制pH为酸性 D.嗜酸乳杆菌能利用酵母菌分解淀粉产生的葡萄糖进行无氧呼吸，产生乳酸和少量 COz 6.硒是人体所必需的微量元素，无机硒因毒性较高只能用于医药而不能用于食品。东北 农业大学创新性采用富硒酵母替代无机硒与小麦胚芽协同发酵工艺，成功开发出兼具膳食 纤维、高硒含量(40-145gkg)和益生菌活菌数（≥109 cfu/mL)的羊乳饮料。下列是高活 性富硒发酵羊乳饮料及其制备方法与流程，相关叙述正确的是() A.除生羊乳和蔗糖外，培养 基中还需适当添加水、无机 小麦胚芽乳 富硒酵母粉 盐和琼脂等成分 B.发酵过程中常用的灭菌方 生羊乳 丬混合调配 均质→脱气→杀菌 冷却 法有紫外线灭菌法、湿热灭 菌法、灼烧灭菌法等 蔗糖 接种发酵 C.富硒酵母是图示接种发酵 过程中的主要发酵菌种，需 随时监测温度、pH值等发酵 装罐 冷却 高温灭菌卡 均质k混合冷却后熟 条件 富硒发酵 D.羊乳的高蛋白、小麦胚芽 乳化剂、稳定剂等 羊乳饮料 的膳食纤维与益生菌协同作 用，兼顾营养与保健，避免毒副反应与肠胃刺激 7.铁皮石槲是我国珍贵的中药材，其生物碱是重要次生代谢物。某科研小组设计了如图 的实验流程，以期提高生物碱的产量。下列有关叙述正确的是() 胡萝卜根①胡萝卜 培养 细胞 。原生质体②杂种③PLB(类似取样生物碱 铁皮石斛①，铁皮石斛一 ·细胞于愈伤组织)检测含量 细胞 原生质体 A.生物碱是铁皮石斛生长所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞 B.过程①需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 C.过程②可利用灭活病毒或高Ca+一高pH溶液诱导原生质体融合 D.过程③中生长素和细胞分裂素可以诱导基因的选择性表达 高三年级生物试卷第2页共10页 8.植物组织培养过程中，需要用到①诱导愈伤组织培养基、②诱导生根培养基和③诱导 生芽培养基。下列有关这三种培养基以及菊花组织培养的叙述正确的是() A.菊花的幼茎茎段在离体培养过程中，最后用到的培养基是③ B.若接种的外植体是花药，则离体培养得到的植株都是单倍体 C.培养基中含有营养物，故诱导愈伤组织、生根、生芽期间都不需要光照 D.单倍体育种、转基因植物培育、植物体细胞杂交都离不开植物组织培养 9.动物细胞培养时操作不当会造成黑胶虫”细菌的污染，该菌对氯霉素敏感。下列叙述 正确的是() A.在加入氯霉素防治“黑胶虫”污染过程中，需要考虑细胞和细菌生长双重因素 B.配制细胞培养基时，加血清（含细胞生长必需蛋白）和氯霉素后湿热灭菌 C.考察“黑胶虫”污染程度时，应取细胞培养液，直接涂布在平板上培养后计数 D.采用更换培养基、胰蛋白酶处理和分瓶培养等操作可清除“黑胶虫”污染 10.某城市花粉浓度爆表引起人群“集中暴发式”过敏，司普奇拜单抗（治疗过敏性鼻炎的 人源化单克隆抗体药物)由此走入大众视野。司普奇拜单抗特异性结合人体细胞的L-4(某 种受体)，通过阻断细胞内L-4和L-13的信号通路以抑制炎症反应。下列叙述正确的是 () A.制备该单克隆抗体时要向实验动物多次注射过敏原 B.司普奇拜单抗可治疗过敏，但不能被荧光标记，无法用于过敏的诊断 C.初次筛选得到的抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞即可在体外大规模培养 D.与鼠源单克隆抗体相比，司普奇拜单抗在使用中引起的免疫排斥反应更小 11.单峰骆驼在野外几乎灭绝，科学家欲通过胚胎工程的方法拯救野化单峰骆驼，进行了 下图所示研究。请据图分析，下列说法正确的是() A.为使A野化单峰骆驼超数排卵，需要在食物中添 A野化单峰骆驼♀ 加适量的促性腺激素 超数排卵 B.应用胚胎移植技术可以充分发挥C受体雌性的优 B野化单 峰骆驼d O 良遗传特性 88 →C受体雌性 C.对图示中的早期胚胎进行移植，出生后代之间可能 C.sCos. 差异很大 早期胚胎妊娠分娩 D.卵裂期，细胞数目增多，胚胎总体积不增加，有机 后代 物总量增加 12.女性受孕后的子宫内并不是“母慈子孝”的场景，而是一场精彩的斗争。孕早期母体的 一系列不适反应，都是这场斗争的表现。下列叙述错误的是() A.由内细胞团发育成的胎盘会向母体释放信号，从而使母体及时补充所需营养 B.胚胎发育的早期有一段时间是在透明带内进行的，有利于保护早期胚胎 C.防止多精入卵的屏障依次是透明带反应和卵细胞膜反应 D.自然条件下，受精是在输卵管里完成的 13.用洋葱进行DNA的粗提取与鉴定时，取洋葱进行研磨得到研磨液，研磨液离心后获 得上清液备用。下列有关叙述正确的是() A.因猪血获取方便，所以常用于提取DNA的材料也包括猪的成熟红细胞 B.为使蛋白质等杂质析出，可在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液 高三年级生物试卷第3页共10页 C.将粗提取的DNA溶于2mol/L的NaCl溶液中，为DNA的鉴定做准备 D.向含有DNA粗提取物的试管中加入二苯胺试剂，可直接观察颜色变化 14.外界因素或细胞自身因素均可引起DNA分子断裂。下图是断裂DNA的一种修复模式， 其中DNA同源序列是指具有相同或相似核苷酸序列的片段。相关叙述错误的是() 5- 断裂DNA ① 酶切 酶c⑤DNA修复 5 3 酶a 3 3 二5 ②单链侵入 ④脱离连接 5 39 5 ③ 、修复合成 含同源序列的DNA 酶b A.酶ā的作用是形成黏性末端，便于侵入同源序列 B.过程②中含同源序列的DNA会发生解旋 C.酶b是DNA聚合酶，以同源序列为模板、侵入单链为引物 D.修复DNA的核苷酸序列可能改变，这种变异属于基因重组 I5.通过琼脂糖凝胶电泳技术可将不同长度的DNA片段分开，下列相关叙述正确的是 () A.电泳时，分子质量越大的DNA片段，在凝胶中的迁移速率越大 B.琼脂糖凝胶电泳只能用于分离DNA分子，不能分离RNA分子 C.电泳结束后，无需借助其他工具可直接观察到DNA条带 D.为使DNA条带更清晰，可在电泳前将核酸染料加入样品中 16.某同学将质粒DNA进行限制酶酶切时，发现DNA完全没有被酶切，分析可能的原因 并提出解决方法。下列叙述错误的是() A.限制酶失活，更换新的限制酶 B.酶切条件不合适，调整反应条件如温度和酶的用量等 C.质粒DNA突变导致酶识别位点缺失，更换正常质粒DNA D.酶切位点被甲基化修饰，换用对DNA甲基化不敏感的限制酶 17.油菜是我国的重要油料作物，其生长受到核盘菌引起的菌核病威胁。科研人员试图培 育抗菌核病的转基因油菜新品种，其抗性机理如下图所示，相关叙述正确的是() 核盘菌侵染 产生mRNA 。启动防御 无核盘菌侵染 激活 ·网 小干扰RNA 转录因子B 转录 不转录 转录因子B ON启动子PBS防御基因~不 O0启动子pBSO0☑ 防御基因沧不 A.可将含防御基因的基因表达载体导入核盘菌后，侵染油菜获得转基因植株 B.转基因油菜中的启动子pB属于诱导型启动子，能够精确调控防御基因的表达 C.核盘菌侵染转基因油菜后，启动防御基因表达出相应蛋白质抵御核盘菌侵染 D.未受到核盘菌侵染时，油菜细胞不能合成转录因子B,不启动防御基因表达 高三年级生物试卷第4页共10页 18.荒漠植物的Z基因与其抗旱性强有关。 科学家利用Z基因和农杆菌的Ti质粒（如 Xba l EcoR I T-DNA 图，T-DNA为可转移的DNA)构建表达载 BamH HindⅢ 体，培育抗旱转基因小麦。下列说法错误的 Cla I HindⅢ Cla I 是() BamH' Sac】 、卡那霉素抗性基因 A.T-DNA能整合到小麦细胞染色体上 Z基因 B.可用限制酶ClaI和ScI处理Z基因 ori复制起点 Sac I C.可用卡那霉素筛选含重组Ti质粒的 农杆菌T质粒 农杆菌 D.可在个体水平检测小麦是否获得抗旱性状 19.螺旋藻是一种主要分布在热带、亚热带地区的蓝细菌门颤藻科螺旋状微藻，它含多种 人体所需的元素，如钙、镁、钠、钾、磷、碘、硒、铁、铜、锌等，被联合国粮农组织（FAO) 认为是一种未来食品。下列有关描述错误的是() A.螺旋藻是自养型生物，其叶绿体能把无机物转化成有机物 B.新鲜的螺旋藻细胞中含量最多的化合物是HO C.螺旋藻含有的元素中Fe、Mn、Zn属于微量元素 D.螺旋藻核糖体的形成与核仁无关 20.“茶园养鸡”是一种新型的生态养殖模式，为探究鸡粪对土壤肥力的影响，研究人员将 C、N、P作为计量土壤肥力的元素进行了调查， 结果如图所示。下列分析正确的是() A.氨元素可用于合成淀粉、蛋白质，缺氮可 能会影响茶叶产量 AN B.适当添加鸡粪可增加氮的相对含量从而提 高茶园土壤肥力 C.土壤中各元素的相对含量与鸡粪添加量均 一P 呈正相关 0 D.细胞与无机自然界元素种类相同，体现了 2507501500鸡粪添加量/(gm2) 二者具有统一性 二、多项选择题（本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题给出的四个选项中，有 多个选项正确，全部选对的得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分) 21.某野生型细菌能通过图1途径合成色氨酸，从而在不含色氨酸的培养基上正常生长繁 殖，而其突变株则不能。将突变株TpB、TpC、TpE(仅图1中的某一步受阻)分别划 线接种在图2培养基的I、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖，继 续培养后发现I区域的两端和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖，而Ⅲ区域菌株不再生长。 下列叙述不正确的是() 分支酸D,邻氨基苯甲酸②明哚⑧色氨酸 图1色氨酸合成途径 图2 高三年级生物试卷第5页共10页 A.配制图2培养基时加入了琼脂和少量色氨酸，pH通常呈酸性 B.使用涂布器接种3种突变菌株，涂布前需对涂布器进行灼烧灭菌 C.TpC菌株继续生长增殖的一端为靠近I区域的一端 D.TpB、TpC、TpE三种突变菌株分别对应图1中的①②③过程受阻 22.为探究提高“日照蓝莓”品质和产量的新途径，某生物兴趣小组以“日照蓝莓”的主要品 种一兔眼蓝莓为实验材料进行脱毒处理，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→ 出芽→生根→移栽”。下列有关叙述正确的是() A.用体积分数为70%的酒精和质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液对外植体进行消毒 时，要控制好时间以免对外植体造成伤害 B.取材时可选用兔眼蓝莓的芽尖等分生组织作为外植体 C.移栽前一般要将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长壮后移栽入土 D.脱毒后的兔眼蓝莓果实体积更大，产量更高，后代个体更不易被病毒感染 23.2018年3月，最后一头雄性北方白犀牛去世，至此世界上仅剩两头雌性个体。科研团 队拟采用提前保存的北方白犀牛冷冻精子借助核移植、体外受精等技术，以南方白犀牛作 为代孕母畜人工繁育北方白犀牛。下列相关叙述不正确的是() A.需注射免疫抑制剂以减弱代孕母牛对植入胚胎的免疫排斥反应 B.冷冻保存的精子需在体外进行成熟培养才能用于体外受精 C.用物理或化学方法（如电刺激、Ca+载体、乙醇等）激活重构胚 D.重构胚激活后可在体外培养至囊胚或原肠胚阶段再进行移植 24.流感病毒HA蛋白是研制疫苗的重要靶点。图甲表示以病毒RNA为模板获取HA蛋 白基因的过程，cDNA表示互补DNA。图乙是载体酶切后的部分结构示意图。下列说法错 误的是() 病毒RNA /5 逆转录酶① ww 引物11② 5'cDNA ③引物2 3HA蛋白基因 终止 转录模板链 分 乙 A.逆转录酶从病毒RNA的起始密码子开始合成cDNA到终止密码子结束 B.过程②以单链DNA为模板，在引物2和DNA聚合酶作用下合成双链DNA C.若要获得插入方向正确的重组载体，引物1的5端需添加的序列为5'-CGTACG-3 D.过程③中DNA复制n次后同时含有引物1、2的DNA分子数为2n-2 25.下列有关叙述，正确的是() A.要观察低倍镜下位于视野左下方的细胞，应换用高倍镜后将装片向左下方移动 B.黄曲霉菌与金黄色葡萄球菌在细胞结构上的主要区别是有无以核膜为界限的细胞核 C.施莱登和施旺认为“所有细胞都来源于先前存在的细胞”，这暗示着我们身体的每一 个细胞都凝聚着漫长的进化史 D.病毒不属于生命系统的结构层次，人体皮肤和迎春叶属于器官层次 高三年级生物试卷第6页共10页 卷Ⅱ（非选择题共45分） 三、填空题（共5小题） 26.(9分)有机农药苯磺隆是一种强效除草剂，长期使用会严重污染环境。研究发现， 苯磺隆能被土壤中某种微生物降解，分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程 如图甲、乙所示。请回答下列问题： 蛋白酶溶液 接种 取10mL加入 测定苯磺 隆降解率 土壤样品选择培养 划线纯化 菌种 上清液 苯磺隆溶液 甲 乙 (1)在主要营养物质的基础上，培养基还要满足微生物生长对pH、 以及氧 气的需求。该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一氨源的原因是 (2)若在3个细菌培养基平板上均接种稀释倍数为10的土塘样品0.1mL,培养一段时间， 平板上菌落数分别为35个、33个、34个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小， 原因是 (3)图甲中选择培养使用的是 (填“固体”或“液体”)培养基，选择培养的目 的是 ；划线纯化后的某个平板 中，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌 落，造成划线无菌落可能的操作失误是 。 (答出一点即可) (4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验， 该实验的假设是 该实验设计 (填“合理”或“不合理”)，因为 27.(8分)狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉，其生产的黄酮类化合物可入药。 狼爪瓦松野生资源有限，难以满足市场化需求。因此，目前一般通过植物细胞工程手段进 行培养，具体过程如图所示，其中的数字序号代表处理或生理过程。回答下列问题： 狼爪瓦松植株甲 ⑧芽、根 →植株乙 幼嫩的叶 ① ④突变体 →植株丙 ⑤原生质体PE©植株丁 诱导形成 黄酮类化合物 愈伤组织 (1)①过程选择幼嫩的叶用于接种的原因是 ④过程选用组培中的细胞进行诱变的原因是 高三年级生物试卷第7页共10页 (2)⑤过程需要使用的酶是 ， 形成植株丁的过程中PEG的作 用是 原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇，原因是 0 (3)黄酮类化合物在植物体内含量很少，可利用 技术进行细胞产物的 工厂化生产提高其产量。 28.(9分)为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上， 构建抗体药物偶联物(ADC),过程如下图所示。请回答下列问题： 注射特定的抗原多种B淋巴细胞 > 接头 培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 ADC (1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自 细胞。对小鼠多次注射该抗原的目 的是 (2)动物细胞培养过程中需要适宜的气体环境，其中提供5%C02的作用是 (3)杂交细胞必须经过步骤②③才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，其中步骤③表示 和抗体检测两个过程。杂交瘤细胞可在体外条件下大规模培养或注射 到小鼠 内增殖。 (4)步骤④是将获得的a 和b 通过接头结合在一起，从而获得ADC。 (5)研究发现，ADC在患者体内的作用如下图所示。 药物释放到 细胞质基质中 不识别识别并结合 细胞核⑧ 溶酶体 正常细胞 ADC 乳腺癌细胞 ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的 (填细胞器名称)可将其水解，释放 出的药物最终作用于细胞核，可导致癌细胞 (填凋亡或“坏死”)。 29.(9分)生物柴油作为新型能源已成为世界上应用广泛、发展迅猛的可再生能源之一。 研究发现，油料作物紫苏具有产油基因DGAT1,现利用基因工程的技术，获得产油微藻， 利用地热废水培养产油微藻不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。图1、图2是获得 产油微藻的基因工程操作程序，回答以下问题。 高三年级生物试卷第8页共10页 HindⅢ mRNA↓① Xba I BamH IBamH I Sal I EcoR I CDNA 质粒 酶切的cDNA片段」限制酶酶切I 2产例 ● 转录方向一 DGAT1 例/ 质粒 连接 酶切 EcoRI BamHI ○ Xba I HindⅢ 导入细菌中 启动子 终止子 DNA ○isolation8 pB1121 Sal I 图1 卡那霉素 复制原点 抗性基因 图2 (1)图1为构建DGAT1基因文库的过程，①代表 过程。 (2)现需将DGAT1基因通过PCR技术进行扩增，在扩增DGAT1基因时，需要根据 设计特异性引物序列。 (3)利用转基因技术获得产油微藻的核心步骤为： 据图2 分析，该过程需要选择 限制酶切割DGAT1基因。 (4)为了保证DGAT1基因能够在微藻细胞中表达，应该将pBI121质粒上的启动子替换 为 (5)用 方法检测微藻细胞中是否插入了DGAT1基因并转录 出了相应的mRNA;若要进一步判断DGAT1基因是否成功表达，需要加入 进行检测。 (6)为检测产油微藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如 下表所示。 检测指标 总氮/(mgL1) 总磷/(mgL1) 氟化物/(mgL1) 地热废水培养基 23.2 4.32 4.56 培养转基因产油微藻11d后 1.9 0.45 0.84 该实验不能说明产油微藻对地热废水有去污能力，请进一步完善实验 30.(I0分)CRISPR/Cas系统是目前最高效的基因组编辑工具之一。CRISPR-Cas9包含两 种核心组分：一是行使DNA双链切割功能的Cs9蛋白，二是具有导向功能的sgRNA。 sgRNA上的支架序列可结合Cs9蛋白，SgRNA5'端的20个碱基可与目标DNA碱基配对， 引导Cas9靶向切割DNA(图1)。 高三年级生物试卷第9页共10页 氨苄青霉素抗性基因 U6启动子 AmpR BsmB I Cas9 目标DNA序列 、PAM x00m NGG NCC 5 LentiCRISPRv2 BsmB I 复制原点O gRNA支架序列 sgRNA 5' 支架序列 Cas9 图1 图2 利用该技术敲除小鼠胚胎干细胞的目标DNA序列，操作步骤如下。请回答下列问题： 第一步：设计sgRNA5端序列 5.GUCACUCUCAUAUAGAGAUC-3'(20个碱基) (1)第二步：构建重组DNA 载体LentiCRISPRv2(图2)上含有限制酶BsBI的识别序列(N代表任意一种碱基)： 5-CGTCTCNJ-3 3-GCAGAGNNNNN↑-5' ①载体LentiCRISPRv2上的一段序列（包含两个B.snB I的识别序列）为： 5-ACACCG GAGACG GTTGTA......TTTGTA CGTCTC TGTTTT-3 3'-TGTGGC CTCTGC CAACAT......AAACAT GCAGAG ACAAAA-5 请在上述序列中用个”标出BsBI的酶切位点 ②根据sgRNA5'端序列，设计两端带有黏性末端的双链sgDNA,以便直接连接到限制酶 BsmBI酶切后的载体上。若其中一条链为5.CACCGTCACTCTCATATAGAGATC-3',则另 外一条链的序列为 9 A.5'-AAACGATCTCTATATGAGAGTGAC-3 B.5-CAGTGAGAGTATATCTCTAGCAAA-3' C.5-CACCGATCTCTATATGAGAGTGAC-3 （2)第三步：转化与筛选 重组DNA导入小鼠胚胎干细胞前，需先在大肠杆菌中进行扩增。将构建好的重组DNA转 入处于 的生理状态的大肠杆菌，用含 的培养基筛选含重组DNA的大肠杆 菌，再通过测序确定sgDNA是否正确连接到载体上。 (3)第四步：导入与编辑 将扩增后的重组DNA通过一定的技术导入小鼠胚胎干细胞。sgRNA5端的20个碱基序列 用来识别结合，载体LentiCRISPRv2上还含有」 序列，该序列的转录产物可 以与载体相应序列表达的Cas9蛋白组装成CRISPR/Cas系统，定点切割DNA双链。在功 能上，Cas9蛋白属于 酶。 (4)Cas9切割DNA后，基因编辑的完成依赖于细胞自身的修复机制，可不依赖任何模 板，直接将断裂的DNA末端连接起来。这一过程常会导致多个碱基的插入或缺失，造成 目标DNA序列发生 ,从而实现目标DNA序列敲除的效果。 高三年级生物试卷第10页共10页