精品解析：山东菏泽市牡丹区2025-2026学年高二下学期4月期中生物试题（B）

高二生物试题（B） 2026.4 注意事项： 1．本试卷分选择题和非选择题两部分。满分100分，考试时间90分钟。 2．答题前，考生务必将姓名、班级等个人信息填写在答题卡指定位置。 3．考生作答时，请将答案答在答题卡上。选择题每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑；非选择题请用直径0.5毫米黑色墨水签字笔在答题卡上各题的答题区域内作答。超出答题区域书写的答案无效，在试题卷、草稿纸上作答无效。 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的。 1. 利用传统发酵技术制作的食品是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列说法正确的是（　　） A. 使用酵母制作馒头属于传统发酵技术 B. 腐乳制作过程中起主要作用的是青霉 C. 果酒发酵所需的温度应高于果醋发酵 D. 制醋和制酒过程的发酵液pH均会降低 2. 酸甜香脆的酸豆角、酸黄瓜是餐桌上令人喜爱的调味食品。下列说法错误的是（　　） A. 制作酸豆角、酸黄瓜的菜坛盖边沿水槽中应注满水 B. 沸水短时间处理菜料或菜坛中加入陈酸汤均能缩短腌制时间 C. 盐水浸没全部菜料的主要目的是杀死菜料表面的杂菌 D. 酸豆角、酸黄瓜腌制的初期常常会有气泡冒出 3. 科研人员将野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210r/min、230r/min和250r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。下列说法错误的是（　　） A. 本实验的自变量是摇床转速和培养时间 B. 可采用湿热灭菌技术对上述培养基灭菌 C. 可采用平板划线法接种上述酵母菌 D. 实验表明培养液中O2含量越高，酵母菌种群密度越大 4. 野生型菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长。获得和纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图如下，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列说法正确的是（　　） A. 步骤B的操作是用涂布器把1mL菌液均匀地涂布在②表面 B. 步骤C操作时应先将无菌绒布转运至④培养基上 C. 图中③为基本培养基，①②④为完全培养基 D. 经C原位影印及培养后，应从培养基④中挑取E进行纯化培养 5. 发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。下列说法错误的是（　　） A. 高产青霉菌株通常通过基因工程育种获得 B. 菌种在发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节 C. 环境条件会影响微生物的生长繁殖和代谢物的形成 D. 发酵工程的产物专一且废弃物对环境的污染小 6. “手指植物”是利用植物组织培养技术培育的“工艺品”，其通常培育在装有彩色固体培养基的小玻璃瓶中。下列说法错误的是（　　） A. 对外植体消毒时，可用酒精洗去外植体上的次氯酸钠溶液 B. 脱分化期间一般不需要光照，再分化时需要适当光照诱导叶绿素产生 C. “手指植物”培育过程需要改变培养基中植物激素的比例 D. “手指植物”培育成功后短时间内不需要额外补充营养物质 7. 某团队将白菜（2n=20）和甘蓝（2n=18）借助植物体细胞杂交技术获得新品种植株。下列说法错误的是（　　） A. 细胞融合前应使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 B. 离心法可促进白菜和甘蓝原生质体的融合 C. 原生质体融合成功的标志是再生出细胞壁 D. 融合后的原生质体均含有38条染色体 8. 我国科学家在细胞培养肉研发方面取得突破性成果，建立了猪胚胎干细胞向肌肉无血清定向诱导分化的技术体系，该过程依赖胚胎干细胞体外的长期稳定培养。下列说法正确的是（　　） A. 胚胎干细胞培养环境中需要O2但不需要CO2 B. 胚胎干细胞培养液需要定期更换以保证无菌环境 C. 细胞密度过大时会因分裂受阻而出现接触抑制现象 D. 胚胎干细胞具有形成机体的所有组织、器官甚至个体的潜能 9. 胞质内单精子注射技术（ICSI）是一种通过将单个精子直接注入体外培养成熟的卵母细胞而获得受精卵的高精度显微操作技术，下列关于ICSI、核移植技术、动物细胞融合技术的说法，错误的是（　　） A. 核移植技术中通过显微操作去核，与ICSI技术的操作相似 B. 核移植技术和ICSI中，卵母细胞分别为体细胞核和精子提供发育所需的营养 C. ICSI与动物细胞融合技术都需要使用灭活的病毒诱导细胞融合 D. 三者均涉及细胞水平的操作，都需要在体外培养环境中完成关键步骤 10. 为降低猪器官移植到人体后的超急性免疫排斥，科学家利用CRISPR-Cas9基因编辑技术对猪细胞进行改造，目前接受基因编辑猪肾移植的患者存活时间已超6个月。下列说法错误的是（　　） A. 利用动物细胞培养在体外大量培养猪细胞，可为基因编辑提供材料 B. 单克隆抗体可抑制人体免疫系统对猪器官的攻击，降低免疫排斥反应 C. 基因编辑过程可敲除猪细胞中编码能被人体免疫系统识别的抗原基因 D. 与灵长类动物相比，猪的器官更适合作为人类器官移植的来源 11. 关于实验一“DNA粗提取与鉴定”和实验二“琼脂糖凝胶电泳”的描述，正确的是（　　） A. 新鲜的洋葱、香蕉、菠菜、猪血、猪肝都是实验一的理想材料 B. 实验一的研磨液需经过4℃静置后才可离心获取上清液 C. 电泳时加入的核酸染料在紫外光照射下可发出荧光 D. 电泳缓冲液中的指示剂可用于指示DNA样品可能位置 12. 某科研团队将CRISPR/Cas12a系统与常规PCR技术结合，建立了CRISPR-PCR融合检测技术。其基本思路为：先通过PCR对靶序列进行指数扩增，再利用Cas12a-crRNA复合物特异性识别扩增产物，激活Cas12a的切割活性，进而切割荧光标记的单链DNA报告分子，产生可检测的荧光信号。下列说法错误的是（　　） A. 与常规PCR相比，CRISPR-PCR融合技术能显著降低假阳性 B. crRNA能通过碱基互补配对特异性识别靶核酸序列 C. 若无靶序列，荧光报告分子不会被大量切割，无明显荧光 D. 该技术与常规PCR相比，灵敏度更低，但特异性更强 13. 研究人员利用大肠杆菌生产人胰岛素，该过程中使用的质粒及目的基因的部分结构如下图。下列说法正确的是（　　） A. 质粒上ori序列的碱基中G和C所占比例通常较高 B. 图中胰岛素基因的B链为转录的模板链 C. 提取胰岛素基因的mRNA后逆转录得到的DNA在大肠杆菌中可以正常表达 D. 设计PCR引物时，最好在引物的5'端添加限制酶MunⅠ和XhoⅠ的识别序列 14. T4溶菌酶是一种重要的工业用酶，但是它在温度较高时容易失去活性。科学家通过基因改造，使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，T4溶菌酶的耐热性得到了提高。下列说法错误的是（　　） A. 通过改造基因获得耐热T4溶菌酶，属于蛋白质工程 B. 改造T4溶菌酶基因可用基因的定点突变技术来进行碱基替换 C. 通过此项研究改造后获得的性状不能遗传给后代 D. 通过分析T4溶菌酶的氨基酸序列，人工合成编码T4溶菌酶的脱氧核苷酸序列不是唯一的 15. 科学家用电融合的方法诱导母羊的乳腺上皮细胞与另一只羊的去核卵母细胞融合，然后将重构胚移植到代孕母羊的体内，最终培育出了克隆羊多莉。下表是科学家获得的部分实验数据，下列说法错误的是（　　） 实验组 核供体细胞 融合成功细胞数 早期发育成功胚胎数 移植后成功怀孕母羊数/代孕母羊数 出生并成活羔羊数 1 6岁母羊的乳腺上皮细胞 277 29 1/13 1（多莉） 2 发育到第26天的胚胎成纤维细胞 172 34 4/10 2 3 发育到第9天的早期胚胎细胞 385 90 14/27 4 A. 综合评价来看，第2组和第3组实验的成功率相近 B. 第2组和第3组可以证明操作技术的可行性 C. 该数据说明，目前克隆技术还不成熟，成功率相当低 D. 基于该数据分析，我国坚决禁止生殖性克隆人 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 16. 某兴趣小组欲从树林中多年落叶形成的腐殖土中寻找纤维素分解菌，进行如下操作：制备土壤浸出液→在培养基a中培养→稀释涂布平板→挑菌落在培养基b中扩大化培养→检测与鉴定。下列说法正确的是（　　） A. 可用平板划线法或稀释涂布平板法对纤维素分解菌进行分离和计数 B. 为筛选纤维素分解菌，培养基a应以纤维素为唯一碳源 C. 可利用刚果红染料进一步鉴定培养基b中菌落 D. 稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 17. 利用植物细胞培养技术生产药用代谢产物的过程如下。下列说法错误的是（　　） 高产药用植物（外植体）→细胞悬浮培养→提取、纯化→药用产物 A. 植物细胞培养获得药用产物体现了细胞的全能性 B. 细胞悬浮培养通常采用液体培养基 C. 利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物 D. 该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量 18. 杜泊羊是一种生长速度快、肉质好的绵羊品种。科研人员通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图。下列说法正确的是（　　） A. 图中的a、b分别代表体外胚胎培养、胚胎移植 B. 给雌性杜泊羊A饲喂性激素可使其超数排卵 C. 羊的胚胎移植效率一般比奶牛的高 D. 在上述操作中，常以观察到两个极体或雌雄原核作为受精的标志 19. 某科研团队构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5。已知J基因转录的模板链位于b链。下列说法正确的是（　　） A. 若导入受体细胞的启动子发生甲基化修饰，可以抑制DNA聚合酶对启动子的识别和结合 B. 为了确定基因连接到质粒中且插入方向正确，选择的引物组合只能为F2和R1 C. 引物F1与图甲中J基因的a链相应部分的序列相同 D. 图乙中条带2所检出的蛋白是由重组质粒上的J基因表达的 20. 基因工程和发酵工程在农牧业、医药卫生和食品工业等方面展示出广阔的前景。下列说法正确的是（　　） A. 可以利用基因工程菌生产凝乳酶、淀粉酶、氨基酸和维生素等 B. 与天然酶相比，基因工程技术获得的工业用酶的纯度更高、成本更低 C. 柠檬酸是一种食品酸度调节剂，可通过谷氨酸棒状杆菌发酵生产 D. 发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白制成微生物饲料 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 21. 为了处理排出污水中的一种有害的、难以降解的有机化合物X，某研究团队用化合物X、磷酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基，从污水池中的污泥样品中成功地筛选出能高效降解化合物X的细菌（目的菌N）。 （1）在培养基中加入化合物X的目的是______，这种培养基属于______培养基。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之______（填“前”或“后”）调节。 （2）研究人员在接种前，随机选取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，目的是______。 （3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物X含量______的培养液。若要研究目的菌的生长规律，可挑取单个菌落进行液体培养，再采用______方法进行计数，该过程可以每隔24小时统计一次菌落数目，并选取______时的记录作为结果。 （4）科研团队进一步用基因工程的方法获得能够降解化合物X的细菌M，为比较细菌M与目的菌N降解化合物X的能力大小，用含有一定浓度化合物X的固体培养基进行实验，请写出简要实验思路：______。 22. 某园艺基地计划利用植物微型繁殖技术大量培育优质月季苗。 （1）利用植物组织培养可以快速繁殖优良月季苗，该技术属于______生殖，其优点是______。 （2）该基地在培养过程中，将月季的茎尖作为外植体，选择该部位的原因是______。 （3）科研人员进一步探究“影响植物微型繁殖效率的因素”，以月季茎尖为外植体设计了两组实验，实验分组及结果如下表。 实验组别 外植体处理方式 培养基核心成分差异 培养环境条件 实验结果（30天观测） 甲组 消毒后选取0.1-0.5mm茎尖 生长素与细胞分裂素比例=1:1 温度25℃、光照12h/d、无菌 愈伤组织形成率90%，再分化芽数5-6个/外植体 乙组 消毒后选取1-1.5mm茎尖 生长素与细胞分裂素比例=1:1 温度25℃、光照12h/d、无菌 愈伤组织形成率85%，再分化芽数2-3个/外植体 ①对比甲组和乙组的实验结果，说明茎尖体积越小，微型繁殖效率_____，原因可能是_____（至少答出2点）。 ②若要让甲组外植体进一步分化形成完整的试管苗，需调整培养基中生长素和细胞分裂素的比例，请写出调整思路_____。 23. 靶向药物是指能特异性识别并结合病变细胞表面抗原，进而杀伤病变细胞、对正常细胞损伤较小的药物。人正常乳腺细胞与人乳腺癌细胞表面有部分相同的膜蛋白，某研究团队生产抗乳腺癌靶向药物的过程如下图。 （1）用C对小鼠进行免疫后从该小鼠的______中得到能产生______细胞，该细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合时可用灭活病毒诱导，原理是______。 （2）诱导融合后获得的细胞有多种，需要用特定的______进行筛选。然后对获得的杂交瘤细胞进行______（过程②），该过程首先需将杂交瘤细胞逐步稀释后滴入96孔板，要求是使多孔培养板每个孔中______，一段时间后，用______检测各孔上清液中细胞分泌的抗体。经多次筛选，获得的特定的杂交瘤细胞的特点是______。 （3）ADC中的单克隆抗体的作用是______，在治疗乳腺癌的过程中，还可以用______标记单克隆抗体进行靶向放疗。 （4）若仅用人乳腺癌细胞多次免疫也可以制备人乳腺癌细胞的单克隆抗体（方法2），结合图示分析，图示方法（方法1）的优点是______。 24. 获取目的基因的方法有多种。可以从基因文库中获取，利用化学方法人工合成，目前常用的是PCR特异性地快速扩增目的基因。 （1）PCR是______（填名称）的缩写，通过PCR技术可专一性扩增出某目的基因，其原因是______。用于扩增目的基因的引物需满足的条件是______。 （2）PCR反应需要在一定的______中才能进行，在反应体系中加入相应物质和原料后，将PCR仪的温度设定为变性95℃（30s）、复性50℃（30s）、延伸72℃（40s）。复性温度须根据______来设定，延伸的温度设定为72℃，是因为该温度下______。 （3）利用PCR技术从cDNA文库中获取序列未知的A基因，需根据A蛋白氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是______。在PCR体系中需加入其中的______引物（填“全部”或“任意1种”或“其中2种”）。 25. 为研究基因A与某昆虫的耐药性（DDT处理获得）是否有关，科研小组提取耐药个体的DNA，选用合适的引物，先后进行PCR，最终获得A基因失活突变的该昆虫。A基因结构如下图。 （1）选用引物______组合扩增A1片段时，在第______轮循环产物中开始出现两条单链等长的目的片段，最终得到的绝大部分DNA片段是______。 （2）将大量B基因片段与扩增得到的A1片段、A3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是______（用A1、A3、B和横线表示）。PCR仪中获得的PCR扩增后的产物通常用______技术鉴定。若实验结果发现实验组没有任何条带，从PCR的操作和引物设计角度解释可能的原因有______（答出2点）。 （3）将（2）中获得的PCR产物构建重组质粒导入昆虫最常用的方法是______。最终将获得的转基因昆虫用加入______的培养液筛选，若其在高浓度DDT处理下生长速率明显下降，表明A基因______（填“是”或“不是”）耐药基因。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二生物试题（B） 2026.4 注意事项： 1．本试卷分选择题和非选择题两部分。满分100分，考试时间90分钟。 2．答题前，考生务必将姓名、班级等个人信息填写在答题卡指定位置。 3．考生作答时，请将答案答在答题卡上。选择题每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑；非选择题请用直径0.5毫米黑色墨水签字笔在答题卡上各题的答题区域内作答。超出答题区域书写的答案无效，在试题卷、草稿纸上作答无效。 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的。 1. 利用传统发酵技术制作的食品是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列说法正确的是（　　） A. 使用酵母制作馒头属于传统发酵技术 B. 腐乳制作过程中起主要作用的是青霉 C. 果酒发酵所需的温度应高于果醋发酵 D. 制醋和制酒过程的发酵液pH均会降低 【答案】D 【解析】 【详解】A、传统发酵技术是指利用原材料中天然存在的微生物，或传统接种物（如老面、曲种）进行发酵的技术，使用人工纯化的商业酵母制作馒头不属于传统发酵技术范畴，A错误； B、腐乳制作过程中起主要作用的微生物是毛霉，不是青霉，B错误； C、果酒发酵的适宜温度为18~25℃，果醋发酵的适宜温度为30~35℃，因此果酒发酵所需温度低于果醋发酵，C错误； D、制酒过程中酵母菌呼吸产生的CO2溶于发酵液形成碳酸，会使pH降低；制醋过程中醋酸菌代谢产生醋酸，也会使发酵液pH降低，D正确。 2. 酸甜香脆的酸豆角、酸黄瓜是餐桌上令人喜爱的调味食品。下列说法错误的是（　　） A. 制作酸豆角、酸黄瓜的菜坛盖边沿水槽中应注满水 B. 沸水短时间处理菜料或菜坛中加入陈酸汤均能缩短腌制时间 C. 盐水浸没全部菜料的主要目的是杀死菜料表面的杂菌 D. 酸豆角、酸黄瓜腌制的初期常常会有气泡冒出 【答案】C 【解析】 【详解】A、制作酸豆角、酸黄瓜的原理是乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，乳酸菌为厌氧菌，菜坛盖边沿水槽注满水可实现水封，隔绝外界空气，营造坛内无氧环境，满足乳酸菌发酵的条件，A正确； B、沸水短时间处理菜料可杀死菜料表面部分杂菌，减少杂菌对营养物质的消耗，加入陈酸汤相当于接种了已扩增的乳酸菌菌种，二者均可加快发酵速率，缩短腌制时间，B正确； C、盐水浸没全部菜料的主要目的是让菜料完全处于无氧环境中，保证乳酸菌的无氧呼吸，同时高渗盐水可抑制好氧杂菌繁殖，并非以杀死菜料表面杂菌为主要目的，C错误； D、腌制初期，坛内残留的好氧杂菌（如酵母菌等）呼吸作用会产生CO2，同时坛内残存的空气受热膨胀，因此常常会有气泡冒出，D正确。 3. 科研人员将野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210r/min、230r/min和250r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。下列说法错误的是（　　） A. 本实验的自变量是摇床转速和培养时间 B. 可采用湿热灭菌技术对上述培养基灭菌 C. 可采用平板划线法接种上述酵母菌 D. 实验表明培养液中O2含量越高，酵母菌种群密度越大 【答案】C 【解析】 【详解】A、本实验探究不同条件下酵母菌种群密度的变化，实验中人为改变的变量是摇床转速和培养时间，二者均为自变量，A正确； B、培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌，高压蒸汽灭菌属于湿热灭菌技术，B正确； C、平板划线法的作用是分离纯化微生物，无法用于酵母菌种群密度的测定；且本实验是将酵母菌接种到液体培养基中培养，平板划线法适用于固体培养基接种，C错误； D、摇床转速越高，培养液溶解的氧气越多，题图中转速越高（溶氧量越高），酵母菌种群密度越大，可得出结论：培养液中O2含量越高，酵母菌种群密度越大，D正确。 4. 野生型菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长。获得和纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图如下，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列说法正确的是（　　） A. 步骤B的操作是用涂布器把1mL菌液均匀地涂布在②表面 B. 步骤C操作时应先将无菌绒布转运至④培养基上 C. 图中③为基本培养基，①②④为完全培养基 D. 经C原位影印及培养后，应从培养基④中挑取E进行纯化培养 【答案】C 【解析】 【详解】A、B操作是将0.1ml菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，A错误； B、原位影印时，应先将无菌绒布转印至基本培养基③，再转印至完全培养基④，若先转印④，绒布可能携带有④中的营养成分进入③导致结果不准确，B错误； C、①是诱变后扩大培养、②是培养获得单菌落、④是保存所有菌落方便后续挑取，这三种培养基都需要野生型和缺陷型都能生长，因此都为完全培养基；③是筛选培养基，仅野生型能生长，缺陷型不能生长，因此③为基本培养基，C正确； D、从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明D是氨基酸缺陷型菌落，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D错误。 5. 发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。下列说法错误的是（　　） A. 高产青霉菌株通常通过基因工程育种获得 B. 菌种在发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节 C. 环境条件会影响微生物的生长繁殖和代谢物的形成 D. 发酵工程的产物专一且废弃物对环境的污染小 【答案】A 【解析】 【详解】A、高产青霉菌株是通过诱变育种（利用物理或化学因素诱导基因突变）筛选得到的，并非通过基因工程育种获得，A错误； B、发酵工程的诸多环节中，菌种在发酵罐内的发酵过程是控制条件获得目标产物的核心步骤，属于发酵工程的中心环节，B正确； C、温度、pH、溶解氧等环境条件会影响微生物的酶活性，进而影响微生物的生长繁殖，同时也会改变微生物的代谢路径，影响代谢物的形成，C正确； D、发酵工程依赖特定菌种的特定代谢过程生产目标产物，因此产物专一，且产生的废弃物多为易降解的有机物，对环境的污染较小，D正确。 6. “手指植物”是利用植物组织培养技术培育的“工艺品”，其通常培育在装有彩色固体培养基的小玻璃瓶中。下列说法错误的是（　　） A. 对外植体消毒时，可用酒精洗去外植体上的次氯酸钠溶液 B. 脱分化期间一般不需要光照，再分化时需要适当光照诱导叶绿素产生 C. “手指植物”培育过程需要改变培养基中植物激素的比例 D. “手指植物”培育成功后短时间内不需要额外补充营养物质 【答案】A 【解析】 【详解】A、对外植体消毒时，次氯酸钠属于消毒液，处理后需用无菌水冲洗去除残留的次氯酸钠，酒精是用于外植体初步消毒的试剂，不能用来清洗次氯酸钠，A错误； B、脱分化阶段主要形成愈伤组织，光照会抑制愈伤组织形成，一般不需要光照；再分化阶段需要诱导形成茎叶等器官，光照可促进叶绿素合成，因此需要适当光照，B正确； C、植物组织培养的脱分化、再分化阶段，所需生长素和细胞分裂素的比例不同，因此培育过程需要调整培养基中植物激素的比例，C正确； D、“手指植物”生长的固体培养基中含有充足的营养物质，且植株自身可通过光合作用合成有机物，因此培育成功后短时间内不需要额外补充营养物质，D正确。 7. 某团队将白菜（2n=20）和甘蓝（2n=18）借助植物体细胞杂交技术获得新品种植株。下列说法错误的是（　　） A. 细胞融合前应使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 B. 离心法可促进白菜和甘蓝原生质体的融合 C. 原生质体融合成功的标志是再生出细胞壁 D. 融合后的原生质体均含有38条染色体 【答案】D 【解析】 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此细胞融合前需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁获得原生质体，A正确； B、促进原生质体融合的物理方法包括离心、振动、电激等，因此离心法可促进白菜和甘蓝原生质体的融合，B正确； C、原生质体融合成功的标志是杂种细胞再生出细胞壁，C正确； D、原生质体融合时会出现同种细胞融合、异种细胞融合多种情况，仅白菜和甘蓝的原生质体融合得到的杂种细胞才含38条染色体，白菜与白菜融合的细胞含40条染色体、甘蓝与甘蓝融合的细胞含36条染色体，因此并非所有融合后的原生质体都含有38条染色体，D错误。 8. 我国科学家在细胞培养肉研发方面取得突破性成果，建立了猪胚胎干细胞向肌肉无血清定向诱导分化的技术体系，该过程依赖胚胎干细胞体外的长期稳定培养。下列说法正确的是（　　） A. 胚胎干细胞培养环境中需要O2但不需要CO2 B. 胚胎干细胞培养液需要定期更换以保证无菌环境 C. 细胞密度过大时会因分裂受阻而出现接触抑制现象 D. 胚胎干细胞具有形成机体的所有组织、器官甚至个体的潜能 【答案】D 【解析】 【详解】A、动物细胞培养的气体环境为95%空气（提供O2）和5%CO2（维持培养液的pH），因此胚胎干细胞培养环境既需要O2也需要CO2，A错误； B、胚胎干细胞培养液定期更换的目的是补充营养、清除代谢废物，避免代谢产物积累对细胞产生毒害，无菌环境依靠消毒灭菌、无菌操作、添加抗生素等措施保障，B错误； C、接触抑制是正常贴壁生长的动物细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，就会停止分裂增殖的现象，是接触抑制导致细胞分裂受阻，选项因果关系颠倒，C错误； D、胚胎干细胞具有发育的全能性，具备分化形成机体所有组织、器官，甚至发育为完整个体的潜能，D正确。 9. 胞质内单精子注射技术（ICSI）是一种通过将单个精子直接注入体外培养成熟的卵母细胞而获得受精卵的高精度显微操作技术，下列关于ICSI、核移植技术、动物细胞融合技术的说法，错误的是（　　） A. 核移植技术中通过显微操作去核，与ICSI技术的操作相似 B. 核移植技术和ICSI中，卵母细胞分别为体细胞核和精子提供发育所需的营养 C. ICSI与动物细胞融合技术都需要使用灭活的病毒诱导细胞融合 D. 三者均涉及细胞水平的操作，都需要在体外培养环境中完成关键步骤 【答案】C 【解析】 【详解】A、核移植技术通过显微操作去除卵母细胞的细胞核，ICSI技术通过显微操作将精子注入卵母细胞，二者都使用显微操作技术，操作流程相似，A正确； B、核移植技术中去核卵母细胞的细胞质可为体细胞核的全能性表达提供营养，ICSI中卵母细胞的细胞质可为精子后续参与胚胎发育提供所需营养，B正确； C、ICSI是直接通过显微注射的方法将单个精子注入卵母细胞，无需灭活病毒诱导融合，动物细胞融合技术可使用灭活的病毒诱导细胞融合，C错误； D、三者都属于细胞工程技术，均在细胞水平进行操作，核移植的去核注核、ICSI的精子注射、动物细胞融合的诱导及培养等关键步骤都需要在体外环境中完成，D正确。 10. 为降低猪器官移植到人体后的超急性免疫排斥，科学家利用CRISPR-Cas9基因编辑技术对猪细胞进行改造，目前接受基因编辑猪肾移植的患者存活时间已超6个月。下列说法错误的是（　　） A. 利用动物细胞培养在体外大量培养猪细胞，可为基因编辑提供材料 B. 单克隆抗体可抑制人体免疫系统对猪器官的攻击，降低免疫排斥反应 C. 基因编辑过程可敲除猪细胞中编码能被人体免疫系统识别的抗原基因 D. 与灵长类动物相比，猪的器官更适合作为人类器官移植的来源 【答案】B 【解析】 【详解】A、动物细胞培养技术可在体外对猪细胞进行扩增，获得大量的基因编辑操作的受体材料，A正确； B、针对性制备的单克隆抗体可通过结合猪器官表面的抗原，或结合人体免疫细胞的识别受体，阻断免疫系统对猪器官的免疫攻击，并不是直接抑制免疫系统的功能，B错误； C、敲除猪细胞中编码能被人体免疫系统识别的抗原的相关基因，可使猪细胞表面不存在相应抗原，从而降低人体的免疫排斥，C正确； D、灵长类动物与人类亲缘关系更近，组织相容性更高，器官适配性更好，因伦理争议、繁殖效率低、共患病风险高等问题限制了其应用，猪器官是异种移植的优良替代来源，D正确。 11. 关于实验一“DNA粗提取与鉴定”和实验二“琼脂糖凝胶电泳”的描述，正确的是（　　） A. 新鲜的洋葱、香蕉、菠菜、猪血、猪肝都是实验一的理想材料 B. 实验一的研磨液需经过4℃静置后才可离心获取上清液 C. 电泳时加入的核酸染料在紫外光照射下可发出荧光 D. 电泳缓冲液中的指示剂可用于指示DNA样品可能位置 【答案】C 【解析】 【详解】A、新鲜的洋葱、香蕉、菠菜属于植物材料，含有DNA，可以作为实验材料；但猪血中的红细胞没有细胞核，几乎不含DNA，猪肝虽然含有DNA，但动物材料中的蛋白质、脂肪等杂质较多，不是理想的实验材料，A错误； B、研磨液研磨后只需先过滤除去固体残渣，可无需4℃静置而直接离心研磨液，B错误； C、电泳时加入的核酸染料可嵌入核酸的碱基对之间，在紫外光照射下可发出荧光，用于显示核酸条带的位置，C正确； D、电泳缓冲液中的指示剂(如溴酚蓝)可指示电泳进程(如判断电泳是否完成)，但不能指示DNA样品的具体位置；DNA样品的位置需通过核酸染料与DNA结合后的荧光或染色观察，D错误。 12. 某科研团队将CRISPR/Cas12a系统与常规PCR技术结合，建立了CRISPR-PCR融合检测技术。其基本思路为：先通过PCR对靶序列进行指数扩增，再利用Cas12a-crRNA复合物特异性识别扩增产物，激活Cas12a的切割活性，进而切割荧光标记的单链DNA报告分子，产生可检测的荧光信号。下列说法错误的是（　　） A. 与常规PCR相比，CRISPR-PCR融合技术能显著降低假阳性 B. crRNA能通过碱基互补配对特异性识别靶核酸序列 C. 若无靶序列，荧光报告分子不会被大量切割，无明显荧光 D. 该技术与常规PCR相比，灵敏度更低，但特异性更强 【答案】D 【解析】 【详解】A、常规PCR仅通过引物扩增靶序列，若出现非特异性扩增也会得到产物，易出现假阳性；CRISPR-PCR在PCR扩增后增加了Cas12a-crRNA特异性识别靶序列的步骤，只有存在靶序列才会产生荧光信号，因此能显著降低假阳性，A正确； B、crRNA是向导RNA，其序列可与靶核酸序列发生碱基互补配对，实现对靶序列的特异性识别，B正确； C、只有存在靶序列时，Cas12a-crRNA复合物识别靶序列后才能激活Cas12a的切割活性；若无靶序列，Cas12a无切割活性，荧光报告分子不会被大量切割，无明显荧光，C正确； D、该技术先通过PCR对靶序列进行指数扩增，即使初始靶序列含量极低也能被扩增后检测到，相比常规PCR灵敏度更高，同时增加了crRNA特异性识别步骤，特异性也更强，D错误。 13. 研究人员利用大肠杆菌生产人胰岛素，该过程中使用的质粒及目的基因的部分结构如下图。下列说法正确的是（　　） A. 质粒上ori序列的碱基中G和C所占比例通常较高 B. 图中胰岛素基因的B链为转录的模板链 C. 提取胰岛素基因的mRNA后逆转录得到的DNA在大肠杆菌中可以正常表达 D. 设计PCR引物时，最好在引物的5'端添加限制酶MunⅠ和XhoⅠ的识别序列 【答案】C 【解析】 【详解】A、ori是质粒的复制原点，DNA复制起始需要解开双链，A-T之间为2个氢键，G-C之间为3个氢键，G-C比例越高DNA越稳定，越难解旋，因此复制原点区域A、T所占比例通常更高，方便解旋起始复制，A错误； B、DNA链中，磷酸基团端（图中Ⓟ标记端）为5'端，羟基端（图中OH标记端）为3'端；转录时mRNA沿5'→3'方向延伸，模板链需要与mRNA反向互补，因此沿转录方向模板链的方向应为3'→5'。 题图中转录方向向右，A链沿转录方向为3'（左OH）→5'（右Ⓟ），符合模板链的方向要求，因此A链才是转录的模板链，B链为非模板的编码链，B错误； C、人胰岛素核基因是真核基因，天然基因组中的胰岛素基因含有内含子，大肠杆菌是原核生物，没有剪切真核内含子的加工系统，基因组来源的胰岛素基因无法在大肠杆菌中正常表达；但提取的胰岛素mRNA已经在人体细胞中加工剪切，逆转录得到的cDNA不含内含子，连接原核表达元件后，可以在大肠杆菌中正常表达，C正确； D、目的基因与质粒连接时，需要将目的基因连接到质粒的启动子和终止子之间，它们之间含有XhoI、MunI、SalI、NheI、EcoRI识别序列，但SalI、NheI、在目的基因中也含有识别序列，若用它们切割，会破坏目的基因，若选择MunI则会破坏质粒上的标记基因，所以为使PCR产物与质粒正确连接，设计引物时可将限制酶EcoRI和XhoI的识别序列添加在对应引物的末端，D错误。 14. T4溶菌酶是一种重要的工业用酶，但是它在温度较高时容易失去活性。科学家通过基因改造，使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，T4溶菌酶的耐热性得到了提高。下列说法错误的是（　　） A. 通过改造基因获得耐热T4溶菌酶，属于蛋白质工程 B. 改造T4溶菌酶基因可用基因的定点突变技术来进行碱基替换 C. 通过此项研究改造后获得的性状不能遗传给后代 D. 通过分析T4溶菌酶的氨基酸序列，人工合成编码T4溶菌酶的脱氧核苷酸序列不是唯一的 【答案】C 【解析】 【详解】A、蛋白质工程是通过改造或合成基因，对现有蛋白质进行改造或制造新蛋白质的技术，改造基因获得耐热性提升的T4溶菌酶属于蛋白质工程范畴，A正确； B、要使T4溶菌酶特定位点的氨基酸发生替换，需对基因对应位置的碱基进行定向替换，可通过基因的定点突变技术实现，B正确； C、该改造过程改变了T4溶菌酶基因的碱基序列，属于可遗传的变异，改造后获得的性状可随基因传递给后代，C错误； D、密码子具有简并性，即绝大多数氨基酸对应多种密码子，因此根据氨基酸序列反向推导得到的编码T4溶菌酶的脱氧核苷酸序列不是唯一的，D正确。 15. 科学家用电融合的方法诱导母羊的乳腺上皮细胞与另一只羊的去核卵母细胞融合，然后将重构胚移植到代孕母羊的体内，最终培育出了克隆羊多莉。下表是科学家获得的部分实验数据，下列说法错误的是（　　） 实验组 核供体细胞 融合成功细胞数 早期发育成功胚胎数 移植后成功怀孕母羊数/代孕母羊数 出生并成活羔羊数 1 6岁母羊的乳腺上皮细胞 277 29 1/13 1（多莉） 2 发育到第26天的胚胎成纤维细胞 172 34 4/10 2 3 发育到第9天的早期胚胎细胞 385 90 14/27 4 A. 综合评价来看，第2组和第3组实验的成功率相近 B. 第2组和第3组可以证明操作技术的可行性 C. 该数据说明，目前克隆技术还不成熟，成功率相当低 D. 基于该数据分析，我国坚决禁止生殖性克隆人 【答案】D 【解析】 【详解】A、计算两组各阶段成功率：早期胚胎发育成功率2组约为19.8%、3组约为23.4%，代孕母羊怀孕率2组为40%、3组约为51.9%，最终成活率2组约为1.16%、3组约为1.04%，综合各阶段数据来看两组成功率相近，A正确； B、第2组和第3组都成功培育出出生并成活的羔羊，说明该克隆操作技术可以实现预期目标，能够证明操作技术的可行性，B正确； C、三组实验最终成活率最高仅约1.16%，第一组成活率仅约0.36%，整体成功率极低，说明目前克隆技术还不成熟，成功率相当低，C正确； D、我国坚决禁止生殖性克隆人的核心原因是生殖性克隆人违反人类伦理道德，存在严重的伦理、社会等问题，并非仅由克隆技术成功率低这一技术层面问题决定，不能基于该实验数据得出该结论，D错误。 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 16. 某兴趣小组欲从树林中多年落叶形成的腐殖土中寻找纤维素分解菌，进行如下操作：制备土壤浸出液→在培养基a中培养→稀释涂布平板→挑菌落在培养基b中扩大化培养→检测与鉴定。下列说法正确的是（　　） A. 可用平板划线法或稀释涂布平板法对纤维素分解菌进行分离和计数 B. 为筛选纤维素分解菌，培养基a应以纤维素为唯一碳源 C. 可利用刚果红染料进一步鉴定培养基b中菌落 D. 稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 【答案】BD 【解析】 【详解】A、平板划线法仅能用于微生物的分离纯化，无法进行计数，只有稀释涂布平板法可对微生物进行计数，A错误； B、筛选纤维素分解菌需要使用选择培养基，将纤维素作为培养基a的唯一碳源，只有能够分解利用纤维素的目的菌可以正常生长，从而筛选出纤维素分解菌，B正确； C、刚果红鉴定需要固体平板培养基（观察透明圈）；培养基b是扩大化培养，一般为液体培养基，无法直接用刚果红鉴定菌落，C错误； D、稀释涂布平板法统计活菌时，若两个或多个活菌粘连在一起，平板上只会形成一个菌落，因此统计得到的菌落数往往比活菌的实际数目少，D正确。 17. 利用植物细胞培养技术生产药用代谢产物的过程如下。下列说法错误的是（　　） 高产药用植物（外植体）→细胞悬浮培养→提取、纯化→药用产物 A. 植物细胞培养获得药用产物体现了细胞的全能性 B. 细胞悬浮培养通常采用液体培养基 C. 利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物 D. 该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量 【答案】AD 【解析】 【详解】A、细胞全能性是指已经分化的细胞仍具有发育成完整个体的潜能，只有最终发育得到完整个体才能体现全能性。该过程仅培养植物细胞获取代谢产物，没有形成完整植株，因此不能体现细胞全能性，A错误； B、细胞悬浮培养需要细胞分散、充分吸收营养，通常采用液体培养基，B正确； C、有些产物不能或难以通过化学合成途径得到，故可利用植物细胞培养技术获得某些无法通过化学合成途径得到的产物，C正确； D、细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞分裂的培养条件，提高了多个细胞中次生代谢物的含量，不能提高单个细胞中次生代谢物的含量，D错误。 18. 杜泊羊是一种生长速度快、肉质好的绵羊品种。科研人员通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图。下列说法正确的是（　　） A. 图中的a、b分别代表体外胚胎培养、胚胎移植 B. 给雌性杜泊羊A饲喂性激素可使其超数排卵 C. 羊的胚胎移植效率一般比奶牛的高 D. 在上述操作中，常以观察到两个极体或雌雄原核作为受精的标志 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、体外受精得到的受精卵经体外培养发育成早期胚胎，再进行移植产生新个体，图中的a、b分别代表体外胚胎培养、胚胎移植，A正确； B、以注射促性腺激素的方式对雌性杜泊羊进行处理，可达到超数排卵的目的，B错误； C、羊的胚胎移植效率一般比奶牛还要高，C正确； D、受精的标志是在透明带和卵细胞膜之间可观察到两个极体或看到雌、雄原核形成，D正确。 19. 某科研团队构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5。已知J基因转录的模板链位于b链。下列说法正确的是（　　） A. 若导入受体细胞的启动子发生甲基化修饰，可以抑制DNA聚合酶对启动子的识别和结合 B. 为了确定基因连接到质粒中且插入方向正确，选择的引物组合只能为F2和R1 C. 引物F1与图甲中J基因的a链相应部分的序列相同 D. 图乙中条带2所检出的蛋白是由重组质粒上的J基因表达的 【答案】C 【解析】 【详解】A、启动子是RNA聚合酶识别结合的位点，启动子甲基化会抑制RNA聚合酶的结合，进而抑制转录，A错误； B、若J基因插入方向正确，除了F2和R1可以扩增出目的片段，F1和R2也可以扩增出对应片段，验证插入方向正确，B错误； C、已知J基因转录的模板链是b链，由于转录沿模板链的3’向5’进行，所以b链的左侧靠近启动子为3’端，引物F1的延伸方向向右，需要与模板链b链互补配对，且b链与a链互补，因此引物F1与图甲中J基因的a链相应部分的序列相同，C正确； D、重组质粒表达的是J-V5融合蛋白，既含有J蛋白序列也含有标签短肽V5，因此既能被抗J抗体检测，也能被抗V5抗体检测。结合图乙，只有条带1能同时被抗J抗体和抗V5抗体检出，说明条带1才是重组质粒表达的融合蛋白，D错误。 20. 基因工程和发酵工程在农牧业、医药卫生和食品工业等方面展示出广阔的前景。下列说法正确的是（　　） A. 可以利用基因工程菌生产凝乳酶、淀粉酶、氨基酸和维生素等 B. 与天然酶相比，基因工程技术获得的工业用酶的纯度更高、成本更低 C. 柠檬酸是一种食品酸度调节剂，可通过谷氨酸棒状杆菌发酵生产 D. 发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白制成微生物饲料 【答案】AB 【解析】 【详解】A、基因工程可将控制目标产物合成的目的基因导入工程菌，构建得到功能基因工程菌，再通过发酵工程就能规模化生产凝乳酶、淀粉酶、氨基酸、维生素等各类产品，A正确； B、传统天然酶多从动植物天然组织中提取，产量低、提取成本高、杂质多；通过基因工程构建工程菌发酵生产工业用酶，产量大、更容易提纯，因此纯度更高、成本更低，B正确 C、谷氨酸棒状杆菌发酵用于生产谷氨酸，柠檬酸是通过黑曲霉发酵生产的，C错误； D、单细胞蛋白本身就是发酵工程培养获得的微生物菌体，不需要从微生物细胞中提取，可直接加工制成微生物饲料，D错误。 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 21. 为了处理排出污水中的一种有害的、难以降解的有机化合物X，某研究团队用化合物X、磷酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基，从污水池中的污泥样品中成功地筛选出能高效降解化合物X的细菌（目的菌N）。 （1）在培养基中加入化合物X的目的是______，这种培养基属于______培养基。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之______（填“前”或“后”）调节。 （2）研究人员在接种前，随机选取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，目的是______。 （3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物X含量______的培养液。若要研究目的菌的生长规律，可挑取单个菌落进行液体培养，再采用______方法进行计数，该过程可以每隔24小时统计一次菌落数目，并选取______时的记录作为结果。 （4）科研团队进一步用基因工程的方法获得能够降解化合物X的细菌M，为比较细菌M与目的菌N降解化合物X的能力大小，用含有一定浓度化合物X的固体培养基进行实验，请写出简要实验思路：______。 【答案】（1） ①. 筛选出可以降解化合物X的微生物 ②. 选择 ③. 前 （2）检测培养基灭菌是否合格 （3） ①. 显著降低 ②. 细菌计数板计数 ③. 菌落数目稳定 （4）在含有一定浓度化合物X的固体培养基上，A处接种细菌M培养液，B处接种等量等浓度的目的菌N培养液，一段时间后检测透明圈的直径 【解析】 【小问1详解】 在培养基中加入化合物X的目的是筛选出可以降解化合物X的微生物，这种培养基属于选择培养基，其中只有降解化合物X的微生物能生长。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之前调节，这样可以避免调节pH过程中对培养基造成污染。 【小问2详解】 研究人员在接种前，随机选取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，目的是检测培养基灭菌是否合格，进而可以指导实验结果是否可靠。 【小问3详解】 培养若干天后，应选择培养瓶中化合物X含量显著降低的培养液，因为在该培养液中物质X得到了高效降解。若要研究目的菌的生长规律，可挑取单个菌落进行液体培养，再采用显微直接计数法进行计数，显微计数法操作过程中需要用细菌计数板计数，该过程可以每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时计数，这样可以避免统计过程中菌落的遗漏。 【小问4详解】 为比较细菌M与目的菌N降解化合物X的能力大小，用含有一定浓度化合物X的固体培养基进行实验，即在含有一定浓度化合物X的固体培养基上，A处接种细菌M培养液，B处接种等量等浓度的目的菌N培养液，一段时间后检测透明圈的直径，透明圈大的降解X能力强。 22. 某园艺基地计划利用植物微型繁殖技术大量培育优质月季苗。 （1）利用植物组织培养可以快速繁殖优良月季苗，该技术属于______生殖，其优点是______。 （2）该基地在培养过程中，将月季的茎尖作为外植体，选择该部位的原因是______。 （3）科研人员进一步探究“影响植物微型繁殖效率的因素”，以月季茎尖为外植体设计了两组实验，实验分组及结果如下表。 实验组别 外植体处理方式 培养基核心成分差异 培养环境条件 实验结果（30天观测） 甲组 消毒后选取0.1-0.5mm茎尖 生长素与细胞分裂素比例=1:1 温度25℃、光照12h/d、无菌 愈伤组织形成率90%，再分化芽数5-6个/外植体 乙组 消毒后选取1-1.5mm茎尖 生长素与细胞分裂素比例=1:1 温度25℃、光照12h/d、无菌 愈伤组织形成率85%，再分化芽数2-3个/外植体 ①对比甲组和乙组的实验结果，说明茎尖体积越小，微型繁殖效率_____，原因可能是_____（至少答出2点）。 ②若要让甲组外植体进一步分化形成完整的试管苗，需调整培养基中生长素和细胞分裂素的比例，请写出调整思路_____。 【答案】（1） ①. 无性 ②. 高效、快速地实现种苗的大量繁殖，还可以保持优良品种的遗传特性 （2）茎尖细胞分裂旺盛、病毒极少（甚至无病毒），可培育出无病毒苗，保证月季苗的品质和产量 （3） ①. 越高 ②. 茎尖体积越小，自身含有的病毒、细菌等微生物越少，且细胞分裂活性越强，代谢更旺盛，更易启动脱分化和再分化过程 ③. 先提高细胞分裂素与生长素的比例，再降低该比例 【解析】 【小问1详解】 植物组织培养过程没有两性生殖细胞的结合，属于无性生殖，因此可以高效、快速地实现种苗的大量繁殖，还可以保持优良品种的遗传特性，符合微型繁殖的需求。 【小问2详解】 植物茎尖属于新生分生组织，细胞分裂旺盛，病毒极少（甚至无病毒），用其作为外植体可以培养获得无病毒的健壮月季苗，保证月季苗的品质和产量。 【小问3详解】 ①对比表格数据，体积更小的茎尖愈伤组织形成率更高、再分化得到的芽更多，因此繁殖效率更高；因为茎尖体积越小，自身含有的病毒、细菌等微生物越少，且细胞分裂活性越强，代谢更旺盛，更易启动脱分化和再分化过程。 ②植物组织培养中，生长素和细胞分裂素的比例调控分化方向：比例为1:1时主要诱导形成愈伤组织；细胞分裂素比例更高（比例<1）促进芽的分化；生长素比例更高（比例>1）促进根的分化，因此要获得完整试管苗，先提高细胞分裂素与生长素的比例，再降低该比例，诱导先生芽再生根，最终得到完整植株。. 23. 靶向药物是指能特异性识别并结合病变细胞表面抗原，进而杀伤病变细胞、对正常细胞损伤较小的药物。人正常乳腺细胞与人乳腺癌细胞表面有部分相同的膜蛋白，某研究团队生产抗乳腺癌靶向药物的过程如下图。 （1）用C对小鼠进行免疫后从该小鼠的______中得到能产生______细胞，该细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合时可用灭活病毒诱导，原理是______。 （2）诱导融合后获得的细胞有多种，需要用特定的______进行筛选。然后对获得的杂交瘤细胞进行______（过程②），该过程首先需将杂交瘤细胞逐步稀释后滴入96孔板，要求是使多孔培养板每个孔中______，一段时间后，用______检测各孔上清液中细胞分泌的抗体。经多次筛选，获得的特定的杂交瘤细胞的特点是______。 （3）ADC中的单克隆抗体的作用是______，在治疗乳腺癌的过程中，还可以用______标记单克隆抗体进行靶向放疗。 （4）若仅用人乳腺癌细胞多次免疫也可以制备人乳腺癌细胞的单克隆抗体（方法2），结合图示分析，图示方法（方法1）的优点是______。 【答案】（1） ①. 脾 ②. 特定抗体的B淋巴 ③. 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 （2） ①. 选择培养基 ②. 克隆化培养和抗体检测 ③. 尽量只接种一个杂交瘤细胞 ④. 标记的抗原 ⑤. 既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体 （3） ①. 特异性识别并结合乳腺癌细胞，将抗癌药物定向运送到癌细胞处 ②. 放射性同位素 （4）获得的单克隆抗体特异性更强，仅识别结合乳腺癌细胞，不结合正常乳腺细胞，对正常细胞损伤更小，靶向性更高 【解析】 【小问1详解】 单克隆抗体制备流程：先对小鼠注射特定抗原免疫，从小鼠脾脏获取能产生特异性抗体的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞融合；灭活病毒诱导融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 【小问2详解】 融合后细胞进行两次筛选：第一次用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞；第二次对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，稀释时保证96孔板，每孔尽量只接种一个杂交瘤细胞，保证后续得到单克隆，再通过抗原-抗体杂交的方法用标记的抗原检测阳性孔，经多次筛选后，符合要求的杂交瘤细胞特点是既能无限增殖，又能产生特异性抗体。 【小问3详解】 靶向药物中，单克隆抗体的作用是特异性识别并结合乳腺癌细胞，将抗癌药物定向运送到癌细胞处，在治疗乳腺癌的过程中，放射性同位素标记的单克隆抗体还可用于靶向放疗。 【小问4详解】 用人正常乳腺细胞和人乳腺癌细胞进行两次免疫，去除了人正常乳腺细胞与乳腺癌细胞表面相同的膜蛋白引起的干扰，获得的单克隆抗体特异性更强，仅识别结合乳腺癌细胞，不结合正常乳腺细胞，对正常细胞损伤更小，靶向性更高 24. 获取目的基因的方法有多种。可以从基因文库中获取，利用化学方法人工合成，目前常用的是PCR特异性地快速扩增目的基因。 （1）PCR是______（填名称）的缩写，通过PCR技术可专一性扩增出某目的基因，其原因是______。用于扩增目的基因的引物需满足的条件是______。 （2）PCR反应需要在一定的______中才能进行，在反应体系中加入相应物质和原料后，将PCR仪的温度设定为变性95℃（30s）、复性50℃（30s）、延伸72℃（40s）。复性温度须根据______来设定，延伸的温度设定为72℃，是因为该温度下______。 （3）利用PCR技术从cDNA文库中获取序列未知的A基因，需根据A蛋白氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是______。在PCR体系中需加入其中的______引物（填“全部”或“任意1种”或“其中2种”）。 【答案】（1） ①. 聚合酶链式反应 ②. PCR的特异性由引物决定，引物是根据目的基因的已知序列设计合成的，能与模板链特异性结合 ③. 能与目的基因母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸 （2） ①. 缓冲溶液 ②. 引物的碱基数量和种类 ③. 耐高温的DNA聚合酶活性较高，同时防止子链DNA与母链DNA解聚 （3） ①. 一个氨基酸通常有多个密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种 ②. 全部 【解析】 【小问1详解】 PCR是聚合酶链式反应的缩写，扩增的特异性依赖引物的特异性，引物是根据目的基因的已知序列设计合成的，能与模板链特异性结合，因此只会特异性扩增两个引物之间的目的基因片段；引物需要满足的核心条件就是能与目的基因母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。 【小问2详解】 PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，缓冲液维持稳定pH，保证酶的活性；复性是引物与模板DNA结合的过程，复性温度需要根据引物的碱基数量和种类来设定（如GC含量越高，引物需要的结合温度越高）；延伸的温度设定为72℃，是因为该温度下热稳定的DNA聚合酶活性较高，有利于子链的延伸，同时防止子链DNA与母链DNA解聚。 【小问3详解】 利用PCR技术从cDNA文库中获取序列未知的A基因，需根据A蛋白氨基酸序列设计引物，由于一种氨基酸可能有多种密码子，对应的DNA碱基序列有多种，所以根据A蛋白氨基酸序列设计引物时，引物的序列可以有多种，在PCR体系中需加入其中的全部引物。 25. 为研究基因A与某昆虫的耐药性（DDT处理获得）是否有关，科研小组提取耐药个体的DNA，选用合适的引物，先后进行PCR，最终获得A基因失活突变的该昆虫。A基因结构如下图。 （1）选用引物______组合扩增A1片段时，在第______轮循环产物中开始出现两条单链等长的目的片段，最终得到的绝大部分DNA片段是______。 （2）将大量B基因片段与扩增得到的A1片段、A3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是______（用A1、A3、B和横线表示）。PCR仪中获得的PCR扩增后的产物通常用______技术鉴定。若实验结果发现实验组没有任何条带，从PCR的操作和引物设计角度解释可能的原因有______（答出2点）。 （3）将（2）中获得的PCR产物构建重组质粒导入昆虫最常用的方法是______。最终将获得的转基因昆虫用加入______的培养液筛选，若其在高浓度DDT处理下生长速率明显下降，表明A基因______（填“是”或“不是”）耐药基因。 【答案】（1） ①. Ⅰ、Ⅱ ②. 2##二 ③. d （2） ①. A1-B-A3 ②. 琼脂糖凝胶电泳 ③. 复性温度偏高、引物自连或互连 （3） ①. 显微注射法 ②. 四环素 ③. 是 【解析】 【小问1详解】 根据题图分析，PCR扩增时，DNA子链延伸方向为5′→3′，引物需结合在目的片段两端，延伸方向朝向目的片段内部；扩增A1​片段需要A1​两端的引物I和引物Ⅱ。用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增A1片段时，由于引物Ⅱ上包含有X片段，第一次扩增时，只是引物Ⅱ与模板链互补后开始扩增，获得的子代DNA分子中会多出X片段，第二次扩增时，则可以以该DNA分子含X片段的链为模板，继续扩增，所获得的DNA分子两条单链等长，即为目的片段，故在第2轮循环产物中开始出现两条单链等长的目的片段。该DNA分子在后续的扩增过程中会作为模板连续扩增，因此得到的绝大部分DNA片段是图3中的d。 【小问2详解】 由于引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段分别能与B基因两端的碱基进行互补配对，因此将大量B基因片段与扩增得到的A1片段、A3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是A1-B-A3；PCR产物一般用琼脂糖凝胶电泳（凝胶电泳）技术分离鉴定。若实验结果发现实验组没有任何条带，从PCR的操作和引物设计角度解释可能的原因有：①复性时的温度偏高，致使引物不能与模板DNA的相应部位结合；②同种引物的碱基序列可以互补配对，或者2种引物的碱基序列可以互补配对，使引物自连或互连，导致引物不能与模板DNA的相应部位结合。 【小问3详解】 将重组DNA导入动物（昆虫）细胞最常用的方法是显微注射法；B基因为四环素抗性基因，因此可用加入四环素的培养液筛选成功导入重组质粒的昆虫；若A基因失活后，昆虫在高浓度DDT下生长速率明显下降，说明A基因与耐药性相关，即A基因是耐药基因。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $