1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得-2025-2026学年高二生物下学期浙科版选择性必修3

**基本信息** 聚焦微生物分离纯化实验，通过基础概念→实验操作→综合应用的三阶分层设计，强化科学思维与探究实践，适配新授课知识巩固需求。 **分层设计** |层次|知识覆盖|设计特色| |----|----------|----------| |基础认知|选择培养基作用、灭菌方法等单一知识点|如第1题考查尿素筛选原理，夯实生命观念| |实验操作|稀释涂布、计数计算等实验流程|如第4题结合操作流程计算菌株数，培养科学思维| |综合应用|误差评估、拓展实验设计|如第3题重组菌荧光检测，提升探究实践能力|

1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（浙科版） 1．下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验，叙述错误的是(      ) A.以尿素为唯一氮源的培养基可筛选出尿素分解菌 B.常用液体培养基对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数 C.为减小实验误差，使用稀释涂布平板法计数时平板应涂布均匀 D.为了解培养基是否被污染，可用未接种的培养基相同培养条件培养检测 2．某实验小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，操作流程如图所示，下列相关叙述正确的是(      ) A.培养基应以尿素为唯一氮源，其上生长的都是能分解尿素的细菌 B.培养一段时间后，培养基中的营养成分会减少，pH会升高 C.使用后的培养基在丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 D.5号试管的结果表明土壤中的菌株数为1.7×109个/升 3．为高效检测抗菌剂的抗菌效果，研究人员构建了能够表达外源荧光素酶的重组菌Q，将其接种到有足量荧光素的液体培养基中，一段时间后添加待测抗菌剂，定时检测培养液的荧光强度。下列有关该实验的叙述，正确的是(      ) A.培养基中只需要添加水、碳源、氮源和无机盐 B.实验过程中所用的培养基是一种选择培养基 C.在重组菌Q胞内的荧光素酶可催化荧光素水解 D.培养液的荧光强度变化可作为抗菌效果的判断依据 4．某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验，具体操作流程如图所示。下列相关叙述正确的是(      ) A.加入90ml无菌水和振荡的目的是增加尿素分解菌的浓度 B.纯化培养阶段使用选择培养基，应以尿素为唯一氮源 C.稀释涂布平板法统计得到的结果常比实际活菌数目偏高 D.由图中数据可知1g土样中的菌株数约为1.6×107个 5．尿素是一种非蛋白氮饲料，常被用于反刍动物日粮配制，以降低日粮蛋白用量，节约饲养成本。反刍动物的瘤胃中尿素被分解成氨，氨则被用于合成优质微生物蛋白。某兴趣小组尝试从奶牛的瘤胃中分离出尿素分解菌。下列有关叙述正确的是(      ) A.需配制以尿素为唯一碳源的培养基，还需要加牛肉膏等营养物质 B.用灭菌后的涂布器蘸取0.1mL菌液在酒精灯火焰旁将菌液涂布均匀 C.以未接种的培养基为对照组，可判断选择培养基是否具有选择作用 D.尿素分解成氨后，培养基中的pH升高，可用酚红指示剂进行鉴定 6．土壤中的解磷细菌能够分泌磷酸酶溶解磷酸盐固体，提高土壤的肥力。科研工作者通过分离、培养解磷细菌制备菌肥，应用到农业生产中。下列关于解磷细菌的分离和培养的叙述正确的是(   ) A.解磷细菌合成和分泌磷酸酶时需要核糖体、内质网、高尔基体等细胞器的参与 B.分离解磷细菌时，需取少量土壤，在以磷酸盐固体为唯一磷源的培养基中培养 C.筛选解磷能力强的菌株时，需在特定固体培养基上挑选降解圈最大的菌落 D.测定解磷细菌活菌的数目时宜用平板划线法，而不宜用显微镜直接计数法 7．某实验小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，操作流程如图所示，下列相关叙述正确的是(      ) A.培养基应以尿素为唯一氮源，其上生长的都是能分解尿素的细菌 B.培养一段时间后，培养基中的营养成分会减少，pH会降低 C.使用后的培养基在丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 D.若要对分离的菌种进行鉴定，可用酚红指示剂 8．研究人员发现某除草剂（含氮有机物）不易被降解，且长期使用会导致土壤污染。为修复被该除草剂污染的土壤，科研人员按图示程序选育能降解该除草剂的细菌，已知含该除草剂的培养基不透明。下列叙述正确的是(      ) A.操作Ⅱ应该将接种环灼烧灭菌5次 B.经过一段时间的培养，培养皿中应该只存在有透明圈的菌落 C.图中操作Ⅰ的接种方法为平板划线法，该方法可用于细菌计数 D.筛选能降解该除草剂的细菌的培养基中该除草剂是唯一的氮源 9．西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌(一种真菌)引起的。研究人员从西瓜枯萎病多发的土壤中分离出多种单菌落进行扩大培养，然后将扩大培养的发酵液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后再接种尖孢镰刀菌，培养并观察尖孢镰刀菌菌丝生长情况，以期筛选出尖孢镰刀菌的拮抗菌。下列叙述错误的是(   ) A.在西瓜枯萎病多发的土壤中取样更容易获得目的菌种 B.培养土壤多种菌的发酵液中可能含有拮抗菌的代谢产物 C.需要将尖孢镰刀菌接种在普通培养基上培养观察作为对照 D.尖孢镰刀菌菌丝生长最好的组别对应的微生物为最高效拮抗菌 10．下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验示意图。据图分析，下列相关叙述错误的是(      ) A.该培养基应以尿素为唯一碳源，属于选择培养基 B.在培养基中加入酚红，可对尿素分解菌进行鉴别 C.a培养基上的菌落连成一片，可能是由于涂布不均匀造成的 D.以乙组计数，1g土壤中尿素分解菌的估算数目是2.8×108个 11．用106倍稀释液以稀释涂布平板法（涂布量为0.1ml）测定某土壤样品中的细菌数，做如下操作，正确的是(      ) A.涂布1个平板，统计菌落数是230，计算出菌落总数为2.3×109个/ml B.涂布2个平板，统计菌落数是303和287，计算出菌落总数为2.95×109个/ml C.涂布3个平板，统计菌落数是21、212和256，计算出菌落总数为1.63×109个/ml D.涂布3个平板，统计菌落数是210、240和250，计算出菌落总数为2.33×109个/ml 12．黄葛树的叶子、果实（榕果）和枝干含有独特的次生代谢产物酚类化合物。为探究校内黄葛树下土壤中分解酚类化合物的细菌数量，进行了相关实验。下列分析正确的是(      ) A.甲组中a培养基上的菌落连成一片，可能是稀释度过低造成的 B.以乙组计数，5g土壤中尿素分解菌的估算数目是1.4×109个 C.实验所用的土壤、玻璃器皿和金属用具等都需要严格灭菌 D.以酚类为唯一碳源的培养基上生长的细菌都能合成酚类降解酶 13．现在大力提倡无纸化办公，但是仍然不可避免地每年要产生大量的废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。下图是工业上利用微生物通过纤维素生产乙醇的基本工艺流程，下列说法错误的是(      ) A.过程①以纤维素作为碳源 B.过程②中的酶是纤维素酶 C.纤维素糖化时会产生水 D.微生物X可能是酵母菌 14．研究人员从土壤中分离出分解纤维素的细菌，用含有刚果红的培养基培养纤维素分解菌时，筛选到了几株有透明降解圈的菌落，如图所示。下列说法正确的是(   ) A.筛选时要将灭菌后的土壤样液接种于以纤维素为唯一碳源的平板上 B.图示培养基应倒置培养以免水分蒸发形成的水滴污染培养基 C.菌落①②③都能分解纤维素且②的分解能力最强 D.可采用平板划线法或稀释涂布平板法对微生物进行纯化和计数 15．某研究小组欲从牛瘤胃中筛选出能够高效分解纤维素的菌株，取牛瘤胃中的胃液接种于培养基上，得到如图所示结果。下列叙述错误的是(   ) A.图示培养基中的接种方法是稀释涂布平板法 B.该培养基是以纤维素作为唯一碳源的选择培养基 C.制备培养基时先将pH调至中性或弱碱性，再进行高压蒸汽灭菌 D.图示中四种菌株分解纤维素效果最好的是菌株Ⅱ 16．果胶酶在果汁澄清方面具有重要的应用。科研人员从腐烂的水果中分离出能够分泌果胶酶的微生物，部分实验操作如图所示，I~V表示过程，①~③表示菌落。已知果胶能与培养基中的刚果红结合形成红色复合物，果胶被分解后会形成透明圈。下列有关叙述错误的是(      ) A.过程Ⅰ用稀释涂布平板法进行接种，该方法可用于统计样品中活菌的数目 B.菌落①和菌落②周围有透明圈，说明这两个菌株能分泌果胶酶 C.过程Ⅲ接种时，应优先选择菌落②进行纯培养，以获得单菌落 D.过程V的扩大培养收集果胶酶时，可根据目标菌的代谢特点配制培养基 17．在含有纤维素的培养基中加入刚果红。刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心降解圈的透明圈（如图所示，图中均为单菌落）。下列相关叙述错误的是(      ) A.可以在落叶较多的土壤中获取纤维素分解菌 B.菌落②最大，故其含有的纤维素分解菌数量最多 C.由实验结果可知，菌落①中的菌株分解纤维素的能力最强 D.由实验结果可知·菌落③中的菌株更适合在该培养基中生长 18．我国常用滤膜法测定饮用水中的大肠杆菌数目来检测水样是否符合饮用水标准，流程图如下，其中EMB培养基中的伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈紫黑色。某研究小组将10mL待测水样加入90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上紫黑色菌落数平均为33。以下说法正确的是(      ) A.从功能上看伊红美蓝培养基属于选择培养基 B.过滤装置和水样等均需高压蒸汽灭菌后使用 C.沾在滤杯杯壁上的部分微生物需用蒸馏水冲洗，并再次过滤 D.经推测1L待测水样中大肠杆菌数目约为3300个 19．某科研团队欲从火山泥中筛选出可高效降解纤维素的嗜热厌氧菌。下列叙述正确的是(      ) A.应从火山泥样品的表层进行取样 B.培养基应以纤维素作为唯一碳源 C.需设置一个未灭菌的平板作为对照 D.纯化菌种时只可用稀释涂布平板法 20．尿素是一种重要的农业肥料，尿素分解菌可合成脲酶，利用以尿素为唯一氮源的选择培养基可从土壤中分离尿素分解菌并进行计数，科研人员取0.1g土壤分别稀释103∼107倍，将0.1mL不同稀释倍数的土壤稀释液接种在固体培养基上，在相同的培养条件下得到如下数据。下列叙述正确的是(      ) 稀释倍数 103 104 105 106 107 菌落数/个 1号平板 478 367 270 26 5 2号平板 496 354 268 20 8 3号平板 509 332 272 29 3 A.利用稀释涂布平板法可将稀释液中的菌体完全分离，一个菌落对应一个菌体 B.该实验中稀释倍数为105的平板菌落数为30~300，最适合用来统计活菌数 C.每克土壤中尿素分解菌的数量是：2.7×108，该结果比实际活菌数多 D.若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，则统计结果一般比实际活菌数少 21．发酵原料的改变推动着发酵工业迅速发展，利用农作物秸秆等纤维废料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇，从而减少了对石油资源的依赖。如图是发酵工程生产燃料乙醇的简要流程，据图分析下列说法不正确的是(      ) A.微生物A能分解纤维素，选育菌种时最好从富含纤维素的土壤中进行筛选 B.图中②过程常用的微生物B是酵母菌，在接种前要进行扩大培养，缩短生产周期 C.微生物A和微生物B可利用的碳源不相同 D.可用发酵工程生产的纤维素酶制剂代替微生物B起作用 22．某种物质A（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将M中的菌液稀释一定倍数后，取0.1mL涂布到平板上，初步估测摇瓶M中1mL菌液中细菌数为2.4×108个。下列叙述错误的是(      ) A.实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌 B.③过程涂布时用涂布器蘸取0.1mL菌液均匀涂布于平板上 C.乙平板中大小不同的菌落是分解菌分解能力不同导致的 D.乙平板上菌落数平均为240个，菌液稀释倍数为105 23．某学习小组从富含纤维素分解菌土壤中获取纤维素分解菌并进行了下列操作：称取土样20g，加入装有30mL培养基的摇瓶中并完成稀释，在30℃下将摇瓶置于摇床上振荡培养；吸取一定的培养液，转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊时，吸取0.1ml培养液进行梯度稀释和涂布平板，以达到分离纯化培养的目的。下列叙述错误的是(      ) A.取样土壤须在无菌条件下，用蒸馏水稀释 B.为确定所用的固体培养基是否灭菌严格，应选择未接种的牛肉膏蛋白胨培养基进行空白培养 C.摇床上振荡培养的目的是保证纤维素分解菌所需要的有氧环境及提高营养物质的利用率 D.在所用的固体培养基中添加刚果红，若存在纤维素分解菌，则其菌落周围会呈现红色的透明圈 24．刚果红是一种染料，可以与纤维素形成红色复合物，当红色复合物中的纤维素被分解后红色消失。表中是筛选纤维素分解菌的培养基，利用此培养基可从土壤中筛选纤维素分解菌，结果如图。下列说法正确的是(      ) 培养基的成分： 纤维素 15g FeSO4 0.5g KH2PO4 1g ZnSO4 0.5g K2HPO4 1g CaCl2 0.5g 尿素 0.5g 刚果红 适量 MgSO4 0.5g 琼脂 20g         定容 1L A.培养基中纤维素和尿素分别提供碳源和氮源 B.KH2PO4和K2HPO4在提供无机盐的同时还能维持培养基的pH C.将土壤稀释液接种在平板上的方法为稀释涂布平板法 D.平板上5个菌落都有透明圈，说明5个菌落都能分解纤维素 参考答案 1．答案：B 解析：A、以尿素作为唯一氮源的选择培养基，不能利用尿素的微生物因缺少氮源无法增殖，只有分解尿素的细菌可利用尿素生长，实现筛选目的，A正确； B、微生物计数必须使用固体选择培养基（添加琼脂凝固剂），液体培养基无法形成单菌落，不能用于菌落计数，液体培养基仅用于菌种扩大培养，B错误； C、稀释涂布平板计数时均匀涂布菌液，能避免菌落局部过密重叠、局部空白，减小计数实验误差，提升数据准确性，C正确； D、空白对照（未接种培养基）同步培养，若空白培养基长出菌落说明培养基灭菌不彻底被杂菌污染，实验数据作废，是微生物实验常规质控手段，D正确。 故选B。 2．答案：B 解析：A、某些固氮菌不需要培养基提供氮源，所以能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长，所以培养基应以尿素为唯一氮源，其上生长的不一定都是能分解尿素的细菌，A错误； B、由于分解尿素的细菌是异养生物，所以培养基的营养成分会减少，分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH会升高，B正确； C、使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，C错误； D、5号试管的结果表明土壤中的菌株数为(168+175+167)÷3÷0.1×106×103=1.7×1012个/升，D错误。 故选B。 3．答案：D 解析：A、微生物培养基基本组分一般含水、碳源、氮源、无机盐，重组菌Q需合成荧光素酶，且利用外源荧光素反应，培养基还需添加荧光素（特殊底物），因此培养基组分不止四类基础营养，A错误； B、选择培养基是添加特定筛选物质、只允许特定微生物存活，本实验培养基仅为通用培养，用来观测荧光变化，无筛选作用，属于通用液体培养基，B错误； C、荧光素酶催化荧光素氧化发光，并非水解反应；酶促反应底物为荧光素，反应类型是氧化分解而非水解，C错误； D、抗菌剂抑制细菌存活繁殖，活菌数量越多，胞内荧光素酶总量越多，催化荧光素发光越强；活菌越少荧光强度越低，因此荧光强度变化可以直观反映抗菌剂抑制效果，D正确； 故选D。 4．答案：B 解析：A、加入90ml无菌水是稀释土壤样品，振荡是使土壤中微生物均匀分散在水中，目的是获得均匀的土壤悬浮液，并非增加尿素分解菌浓度，A错误； B、分离分解尿素的细菌需用选择培养基，以尿素为唯一氮源，只有分解尿素的细菌可生长，其他细菌因缺氮无法生长，纯化培养需继续使用该选择培养基，B正确； C、稀释涂布平板法统计时，两个或多个活菌连在一起只形成一个菌落，统计结果常比实际活菌数目偏低，并非偏高，C错误； D、土样处理：10g土样+90ml无菌水→100ml悬浮液（稀释101倍）；依次稀释、涂布后，菌落平均数161，稀释倍数为106，涂布0.1ml，计算：161÷0.1×106×100ml÷10g=1.61×109个/g，并非1.6×107个，D错误。 故选B。 5．答案：D 解析：A、尿素分解菌为异养型，需以尿素为唯一氮源（并非碳源），无需加牛肉膏（含氮源，会失去选择作用），A错误； B、涂布器灭菌后需冷却再蘸取菌液，高温会杀死尿素分解菌，直接蘸取会导致菌种死亡，B错误； C、未接种培养基为空白对照，可判断培养基是否被污染；判断选择培养基的选择作用，需设置全营养培养基对照，C错误； D、尿素分解菌可将培养基中尿素分解为氨，氨使培养基pH升高，酚红指示剂遇碱变红，可通过菌落周围红色圈鉴定尿素分解菌，D正确。 故选D。 6．答案：B 解析：解磷细菌属于原核生物,原核生物没有内质网、高尔基体等细胞器,A错误;分离解磷细菌时,需在以磷酸盐固体为唯一磷源的培养基中培养,通常只有能分解磷酸盐固体的菌株才能在此培养基上存活,B正确；筛选分解能力强的菌株时,不能直接以降解圈的大小为指标,因为菌体繁殖力不同,形成的菌落大小不同,故应挑选降解圈直径和菌落直径比值最大的菌落,C错误;测定活菌数目时,应用稀释涂布平板法,不宜用平板划线法(菌落分布不均匀)和显微镜直接计数法(统计的是活菌和死菌总数),D错误。 7．答案：D 解析：A、以尿素为唯一氮源的培养基，可筛选分解尿素的细菌，但少数能利用尿素的放线菌、真菌也可生长，并非只有分解尿素的细菌，A错误； B、分解尿素的细菌代谢产生氨，使培养基pH升高，而非降低，B错误； C、使用后的培养基丢弃前需灭菌（高压蒸汽灭菌），消毒无法彻底杀死微生物，易污染环境，C错误； D、分解尿素的细菌产生的脲酶，可将培养基中尿素分解为氨，使培养基pH升高，酚红指示剂变红，可用于菌种鉴定，D正确。 故选D。 8．答案：D 解析：接种环在接种前和每次划线后都要进行灼烧，因此操作Ⅱ应该将接种环灼烧灭菌6次，A错误。经过一段时间的培养，培养皿中应仍存在无透明圈的菌落，B错误。图中操作Ⅰ的接种方法为平板划线法，平板划线法可用于获取单菌落，但不能用于细菌计数，C错误。该除草剂为含氮有机物，含该除草剂的培养基不透明，除草剂被分解后培养基变透明，若要选育能降解该除草剂的细菌，培养基中应将该除草剂作为唯一氮源，D正确。 9．答案：D 解析：在西瓜枯萎病(由尖孢镰刀菌引起)多发的土壤中,与尖孢镰刀菌存在拮抗关系的菌种可能较多,故在西瓜枯萎病多发的土壤中取样更容易获得目的菌种, A正确。西瓜枯萎病多发的土壤中可能含有尖孢镰刀菌的拮抗菌,故培养土壤多种菌的发酵液中可能含有拮抗菌的代谢产物,B正确。将尖孢镰刀菌接种在普通培养基上培养作为对照,可更好地比较多种分离菌种对尖孢镰刀菌生长的抑制情况,C正确。尖孢镰刀菌菌丝生长最差的组别对应的微生物为最高效拮抗菌,D错误。 10．答案：A 解析：A、尿素分解菌的选择培养基，应以尿素为唯一氮源，而不是唯一碳源(可以选用葡萄糖作为碳源)，A错误； B、在培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌分解尿素产生的氨会使培养基pH升高，酚红指示剂变红，从而可以鉴别尿素分解菌，B正确； C、a培养基上的菌落连成一片，可能是涂布不均匀，也可能是菌液浓度过高，导致菌落无法分开，C正确； D、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，乙组中三个平板的菌落数分别为275、285、280，均在30-300之间，应以乙组计数。计算1g土壤中含分解尿素菌的估算数目时，应根据公式：每克样品中的菌株数=(C÷V)×M(其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数)。1g该土壤含分解尿素的细菌数是(275+285+280)÷3÷0.1×105=2.8×108，D正确。 11．答案：D 解析：在进行该实验时，一定要至少涂布3个平板，作为重复组，减少误差，且每个平板上菌落数量为30-300个才算有效，计算方法：每克样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数。 故选D。 12．答案：B 解析：A.在微生物计数的稀释涂布平板法中，若稀释度过低，培养基上的菌落会因数量过多而连成一片。甲组中a培养基上的菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的，菌液未分散开，A错误； B.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，乙组中三个平板的菌落数分别为275、285、280，均在30-300之间，应以乙组计数。计算5g土壤中含分解尿素菌的估算数目时，应根据公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M（其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数）。5g该土壤含分解尿素的细菌数是（275+285+280）÷3÷0.1×105×5=1.4×109，B正确； C.实验所用的玻璃器皿和金属用具等需要严格灭菌，土壤不能灭菌，否则会杀死目的菌，C错误； D.以酚类为唯一碳源的培养基上生长的细菌，可能通过分泌酚类降解酶分解酚类获取碳源，也可能通过共生、利用其他细菌代谢产物等方式生长，并非都能合成酚类降解酶，D错误。 13．答案：C 解析：A、过程①筛选纤维素分解菌时用纤维素作为唯一碳源的选择培养基，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长，A正确； B、根据酶的专一性，纤维素酶水解纤维素，因此过程②中的酶是纤维素酶，B正确； C、纤维素糖化是纤维素水解的过程，应消耗水，C错误； D、酵母菌无氧呼吸产生酒精，微生物X可能是酵母菌，D正确。 故选C。 14．答案：B 解析：土壤稀释液样品不能灭菌,灭菌会杀死土壤中的微生物,A错误；微生物培养时应将培养基倒置,以免水分蒸发形成的水珠滴落在培养基上造成杂菌污染,B正确；菌落①②③周围都有降解圈,说明都能分解纤维素,①的降解圈直径与菌落直径的比值最大,分解纤维素的能力最强,C错误;平板划线法无法用于对微生物进行计数,D错误。 15．答案：D 解析：根据图示中菌落分布情况分析，采用的接种方法是稀释涂布平板法，A正确；该培养基要筛选出能够高效分解纤维素的菌株，培养基应是以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，B正确；细菌通常在中性或弱碱性环境中生长，制备培养基时需先调pH后进行高压蒸汽灭菌，C正确；分解效果应该要看透明圈直径与菌落直径的比值，该比值越大，分解效果越好，四种菌株分解纤维素效果最好的是菌株Ⅲ,D错误。 16．答案：C 解析：A、过程Ⅱ培养后，平板上的菌落近似均匀分布，说明过程I为用稀释涂布平板法进行接种，该方法可用于统计样品中活菌的数目，A正确； B、果胶酶能分解果胶，因果胶被分解后不能与刚果红形成红色复合物，培养基上会出现透明圈，菌落①②周围出现透明圈，说明这两个菌株能分泌果胶酶，B正确； C、培养基上的菌落大小无明显差别，菌落①周围的透明圈最大，说明该菌分泌的果胶酶最多(或果胶酶活性最强)，应选择菌落①进行纯培养，C错误。 D、培养微生物时，需要根据目标菌的代谢特点配制适宜的培养基，满足目标菌的生长需求，D正确。 17．答案：D 解析：A.植物细胞壁由纤维素和果胶组成，在落叶丰富的土壤中易获得纤维素分解菌，A正确； B.菌落②最大，说明该菌落含有的纤维素分解菌数量最多，B正确； C.菌落①的菌落直径小（纤维素分解菌数目少），但透明圈大（分解的纤维素较多，说明纤维素酶活性较强），说明菌落①的菌株分解纤维素的能力最强，C正确； D.由实验结果可知，菌落②的菌落直径大，菌落②中的菌株更适合在该培养基中生长，D错误。 故选D。 18．答案：D 解析：A.含伊红美蓝的培养基从功能上看属于鉴定培养基，A错误； B.过滤装置需高压蒸汽灭菌，水样不能灭菌，B错误； C.沾在滤杯杯壁上的部分微生物需用无菌水冲洗，避免杂菌混入，C错误； D.10mL菌液中大肠杆菌数目为33个，则1L中的数目为100×33=3300，D正确。 故选D。 19．答案：B 解析：A、嗜热厌氧菌生活在无氧、高温的环境中，火山泥样品表层氧气含量高，无该菌，应从深层取样，A错误； B、筛选高效降解纤维素的微生物，需用纤维素作为唯一碳源，只有能分解纤维素的微生物才能生存，B正确； C、应设置未接种的灭菌平板作为空白对照，检测培养基是否被污染，未灭菌的平板会杂菌污染，无法作为对照，C错误； D、纯化菌种的方法有稀释涂布平板法和平板划线法，并非只能用稀释涂布平板法，D错误。 故选B。 20．答案：B 解析：A、利用稀释涂布平板法不可将稀释液中的菌体完全分离，可能会出现两个或多个菌体连在一起，A错误； B、为减小误差一般统计菌落数为30~300的平板，该实验中稀释倍数为105的平板菌落数为30~300，最适合用来统计活菌数，B正确； C、每克土壤中尿素分解菌的数量是(270+268+272)÷3÷0.1×105=2.7×108，稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C错误； D、若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，不能区分活菌和死菌，则统计结果一般比实际活菌数多，D错误。 故选B。 21．答案：D 解析：A、微生物A分解纤维素，富含纤维素的土壤中该类微生物数量多，便于筛选，A正确； B、微生物B为酵母菌，接种前扩大培养可增加菌种数量，缩短生产周期，B正确； C、微生物A利用纤维素（多糖），微生物B利用葡萄糖，碳源种类不同，C正确； D、纤维素酶可水解纤维素，但不能替代酵母菌进行酒精发酵，D错误。 故选D。 22．答案：ABC 解析：A、淤泥含目的菌，不能灭菌，A错误； B、涂布器需先冷却再蘸菌液，B错误； C、菌落大小反映分解能力，C正确； D、240×105×10=2.4×108，稀释倍数105，D正确。 故选ABC。 23．答案：ABD 解析：A.取样土壤需在无菌条件下，用无菌水稀释，这样可以避免杂菌污染，A错误； B.为检测所用的固体培养基是否灭菌严格，应选择未接种的上述培养基进行空白培养，若无菌落出现，则说明配制的固体培养基合格，B错误； C.摇床上振荡培养不仅能保证纤维素分解菌所需要的有氧环境，而且还可以使菌体和营养液充分接触，进而提高营养物质的利用率，C正确； D.在所用的固体培养基中添加刚果红，随着纤维素被分解利用，若存在纤维素分解菌，则其菌落出现透明圈，D错误。 故选ABD。 24．答案：ABC 解析：A.在此培养基中，纤维素为纤维素分解菌提供碳源，尿素为纤维素分解菌提供氮源，A正确； B.KH2PO4和K2HPO4具有缓冲作用，在提供无机盐的同时还能维持培养基的pH，B正确； C.从平板上纤维素分解菌的菌落分布可以看出（菌落较均匀），接种方法为稀释涂布平板法，C正确； D.菌落周围有透明圈不一定是细胞分解了纤维素，还有可能是分解了刚果红染料，D错误； 故选ABC。 学科网（北京）股份有限公司 $