第1章 第2节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得-【学霸黑白题】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程（浙科版）

正本参 第一章 第一节微生物的培养需要适宜条件 白题基础过关练 1.C解析：由分析可知，培养基中含有微生物生长所需的营养物质，能 满足微生物生长对环境的要求，A正确：配制培养基时，需要满足微 生物生长对pH、特殊营养物质等的需要，B正确；培养基是根据不同 微生物的生长繁殖需求进行配制的，不能满足各种微生物生长繁殖 的需求，C错误：培养基中一般含有水、碳源、氮源、无机盐及生长因 子等特殊营养物质，D正确。故选C。 2.B解析：液体培养基中不含凝固剂，可以增大微生物与营养物质的 接触面积，故可用于大规模繁殖某种微生物，A正确：由于细胞与固 体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质的交换速度相对较慢， 因此微生物在固体培养基表面的生长速度比在液体培养基中的慢， B错误；合成培养基是用化学成分已知的化学物质配制而成，其化学 成分完全清楚，一般用于实验室的研究工作，C正确：天然培养基营 养成分丰富且复杂，一般不需要添加额外的物质，且成本较低，通常 用于发酵工业，D正确。故选B。 四解题指导 根据培养基的化学成分可以把培养基分成合成培养基和天然培 养基等。天然培养基与合成培养基相比成本较低，除了在实验室 常用外，更多地被用于大规模的生物发酵工业。 3.C解析：醋化醋杆菌培养基中甘露醇的主要作用是提供碳源，而且 也可以调节培养基的渗透压，A正确：在LB培养基中加入较高浓度 氯化钠，只有耐受高氯化钠浓度的微生物才能够在上面生长，从而可 筛选嗜盐细菌，B正确；培养霉菌pH要调至酸性，C错误；尿素是常 见的提供氮源的物质，可为目标微生物提供氮源，D正确。故选C。 4.B解析：培养基、玻璃器皿一般用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，A正 确；有些不能加热的化合物如尿素，只能用G6玻璃砂漏斗过滤除菌， 其他成分需用高压灭菌，冷却至约60℃后将两者混合，B错误：如果 培养基中有葡萄糖，为了防止葡萄糖分解碳化，要在500g/cm2压力 下灭菌30min,C正确：灼烧灭菌常用于接种环、接种针、试管口、瓶 口等，D正确。故选B。 5.C解析：接种过程中，防止其他微生物进入培养基造成污染是获得 纯培养物的关键环节，A正确：接种所使用的涂布器（稀释涂布平板 法)或接种环（平板划线法）等工具均需灭菌后再使用，B正确：瓶口 或试管口是非目标微生物进入培养基造成污染的通道，所以在接种 过程中，打开塞子后和塞上塞子前都要将瓶口或试管口在酒精灯火 焰上进行灼烧灭菌，C错误：接种时，需要在酒精灯火焰旁进行操作， 以防止杂菌污染，D正确。故选C。 6.D解析：链霉素能抑制细菌的生长，因此在培养基中加入链霉素后 可以筛选真菌，A正确：各种培养基中一般都含有水、碳源、氨源、无 机盐，因此培养基中的马铃薯浸汁除了为微生物生长提供碳源外，还 可提供的营养物质有氮源和无机盐，B正确；磷脂和核苷酸中都含有 氨元素，因此氮源进入细胞后，可参与合成磷脂、核苷酸等物质， C正确：淀粉過碘-碘化钾溶液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被 水解，所以形成透明圈，D错误。故选D。 正本参考答案 考答案 发酵工程 黑题应用提优练 1.A解析：培养乳酸杆菌时，由于乳酸杆菌自身不能合成所需的维生 素，故需要在培养基中添加维生素，以维持其正常生长，A正确；从微 生物中分离硝化细菌时，由于硝化细菌是自养型微生物，能够利用二 氧化碳作为碳源，故培养基中可以不加碳源，但需要加氨源，B错误： 病毒没有细胞结构，不能用牛肉膏蛋白胨培养基进行培养，需要寄生 在宿主活细胞中才能进行生命活动，C错误：琼脂是一种多糖，能够 作为凝固剂加人培养基中制作固体培养基，但不能为微生物生长提 供碳源，D错误。 2.C解析：培养基中一般含有水、碳源、氨源和无机盐，题图中黄豆粉 和葡萄糖能够作为氨源和碳源，故除题图成分外，培养基中还应添加 水和无机盐等，此外还可添加维生素，A正确：微生物培养的关键是 无菌技术，培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，B正确：培养细菌 时需将pH调至中性或弱碱性，C错误；观察微生物是观察其形成的 菌落，形成菌落需要使用固体培养基，该培养基中含有琼脂，属于固 体培养基，故可作为实验室常用的观察微生物的载体，D正确。 3.A解析：大豆中的蛋白质含有碳元素和氨元素，可以为菌种生长提 供碳源、氮源，A正确：培养霉菌时一般需要将培养基调制酸性，B错 误：各种微生物的营养物质可直接来源于发酵原料，也可能直接来源 于其他微生物的代谢产物，C错误；酱油的发酵利用多种微生物，是 混菌发酵，为避免杂菌的污染，发酵罐需要严格灭菌，D错误。故 选A。 4.B解析：向培养皿中转移已灭菌的M培养基时，注意不要黏附在皿 壁上，否则会引起杂菌污染，A正确；细菌通常是在中性偏碱的环境 中生长，B错误；将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马 铃薯浸汁，马铃薯浸汁可为微生物提供无机盐，C正确；斜面培养基 常用来进行短期的菌种保存，D正确。故选B。 压轴挑战 5.(1)液体选择(2)异养型真菌(3)(CH20)调pH灭菌 50℃酒精灯火焰 解析：(1)依物理性质，该培养基中未加凝固剂应属液体培养基；依用 途，该培养基中加入了青霉素，能抑制细菌生长，而对真菌没有影响， 故该培养基能筛选出真菌，应属选择培养基。(2)由于该培养基中加 人了有机碳源，故所培养的微生物属于异养型。青霉素能对细菌起 抑制作用，但对真菌不起作用，所以培养的微生物可能是真菌。 (3)培养基中只有(CH20)能提供碳元素，故该培养基的碳源是(CH2 0);培养基溶化后需调节pH并灭菌；搁置斜面时，应冷却至50℃左 右，操作应在无菌区即酒精灯火焰旁进行。 第二节纯净的目标微生物可通过分离和 纯化获得 白题 基础过关练 1.D解析：平板划线法中每次划线前都要灼烧接种环，保证菌种来自 上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止污染环境；操 作过程中，划线了四次，因此接种环蘸取菌液1次，至少需灼烧五次 A正确。连续划线可以将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单个菌落， B正确。为了防止空气中杂菌的污染，蘸取菌液和划线都要在酒精 黑白题01 灯火焰旁进行，C正确。分析题图乙，a对应的区域出现了单菌落，d 区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的 起始区域，D错误。故选D。 四名师点睛 分析题干可看出本实险接种微生物的方法为平板划线法，该方法 中会通过多次划线来逐步稀释以便获得单菌落，因此在最后的一 个区域中可能获得单菌落，该方法实施时为了严格无菌，需要全 程在酒精灯火焰附近操作。 2.D解析：获得纯培养物的关键是防止杂菌浸染，A正确；为防止冷凝 的水珠落入培养基，两种方法均需同时将接种的平板和未接种的平 板倒置，在培养箱中进行培养，B正确：接种环和涂布器均需要在酒 精灯火焰上灼烧，接种环可直接灼烧灭菌，涂布器要沾少量酒精在火 焰上引燃进行灼烧灭菌，C正确：当两个或多个细胞连在一起时，平 板上观察到的只是一个菌落，故用稀释涂布平板法进行微生物的计 数时，所获得的数据往往比实际值小，D错误。故选D。 3.C解析：显微镜直接计数法无法区分死菌和活菌，A正确：稀释涂布 平板法计数中，当多个细菌连在一起时，平板上观察到的往往是一个 菌落，故而统计值比实际值偏小，显微镜直接计数时不能区分死菌和 活菌，故测定的微生物数量往往大于实际的活菌数，因此两种计数方 法，其统计值与实际值相比，均有差异，但差异原因不同，B正确；稀 释涂布平板法观察到的是菌落的形态特征，而不是微生物的形态特 征，显微镜直接计数法观察到的是微生物的形态特征，C错误；当菌 落数目稳定时，一般选取菌落数为30~300且差异不大的平板进行计 数，D正确。故选C。 4.A解析：根据题意和题图分析可知：水样中蓝细菌数量=80个小方 格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数=n×5×10000×10=5n× 105个。故选A。 四名师点睛 本题考查微生物计数的相关知识，意在考查学生能运用所学知识 与观，点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解 释、推理，做出合理的判断或得出正确结论的能力。 5.C解析：为了筛选、获取能利用多环芳烃为碳源的菌种，首先应配制 来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用，A项正确：需配制以多环 芳烃为唯一碳源的选择培养基，B项正确：进行接种时，在无菌环境 下，将土壤稀释液接种到选择培养基上，在适宜的条件下进行培养， 若将土壤稀释液灭菌，则不能筛选出能高效降解原油的菌株，C项错 误：在选择培养基上形成的菌落，若该菌落周围有分解圈，即为所需 菌种，D项正确。 6.B解析：固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌，甲培养基中含有葡 萄糖和纯淀粉，可以作为碳源和能源，由此推出该培养基适于分离异 养型的自生固氨菌；乙培养基中不含有机碳源，所以可用来分离培养 自养型的自生固氨菌。故选B。 四解题指导 分析题表：甲培养基中含有葡萄糖和纯淀粉，可以作为碳源和能 源，适于异养微生物的生长；乙培养基中不含有机碳源，适用于自 养微生物的生长。 7.B解析：由题意可知，需对分解尿素的微生物进行分离和计数，其中 平板划线法只能分离，不能计数，而稀释涂布平板法既能分离又能计 数，选项A、B为稀释涂布平板法，但选项A浓度过大，选项C、D为平 板划线法，B正确。故选B。 8,B解析：培养基中加人尿素作为唯一氮源，该培养基是选择培养基 A错误；微生物培养常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板 选择性必修三·ZK 法，B正确：细菌合成的脲酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱 性增强，pH升高，C错误：由于培养基中加入尿素作为唯一氮源，其 他不分解尿素的微生物不能生长，故不会有多种杂菌生长，D错误。 故选B。 重难聚焦 9.(1)54稀释涂布平板法1051.32×108低(2)将聚集的菌体 逐步稀释以便获得（不连续的）单菌落2.25×108 解析：(1)根据题意分析，需要配制成稀释10倍的土壤溶液，因此应 该将6g土样加入54mL的无菌水进行配制；将103~10？倍的稀释 液分别吸取0.2mL滴加在固体培养基上，将菌液用涂布器均匀涂布 到固体培养基上：估算样品中的活菌数时，往往选取菌落数在30~ 300的平板进行计数，分析题表中数据可知，稀释倍数为10的平板 菌落数在这一范围；每克土壤中的菌落数为(277+261+254)÷3× 105÷0.2=1.32×103个。稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于菌 落之间会相互重叠，因此测定的菌落数往往比活菌的实际数目低。 (2)用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌时，为了将聚集的菌体逐 步稀释以便获得（不连续的）单菌落，在第二次及以后划线时，总是从 上一次的末端开始划线。若以一个大方格（体积为0.1mm3)有25个 中方格的计数板为例进行计算，设5个中方格中总菌数为45，菌液稀 释倍数为102，那么原菌液的菌群密度=45×5÷0.1÷10-3×102=2.25× 108个/mL。 黑题应用提优练 1.A解析：分离过程中选用以棉酚为唯一碳源的培养基，只有能分解 棉酚的微生物才能生长，该培养基属于选择培养基，培养基中除了碳 源以外，基本成分还有氨源、水和无机盐，因此不是以棉酚为唯一的 营养物质，A错误：获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的人侵， 因此实验过程中需严格遵循无菌操作原则，B正确：纯化微生物的方 法有稀释涂布平板法或平板划线法，且稀释涂布平板法还可以对微 生物进行计数，C正确：棉酚分解菌可分解棉酚的直接原因是具有相 应的酶存在，根本原因是细胞内存在含有能分解棉酚相应酶的基因， 能够指导该酶的合成，D正确。故选A。 2.B解析：据题图可知，2号试管中的菌液稀释倍数为103倍，3号试管 中的菌液稀释倍数为10倍，A错误：5号试管进行稀释涂布平板法 计数的结果表明，每克土壤中的菌株数为(168+175+167)÷3÷0.1× 10=1.7×10个，B正确：5号试管中的稀释液进行平板培养，稀释倍 数比4号试管的低10倍，若稀释倍数恰当，得到的菌落平均数可能 接近5号的10倍，C错误：稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个 或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往 会比实际活菌数目要少，D错误。故选B。 3.D解析：为获得长满测试菌的琼脂平板，需要采用稀释涂布平板法， 该方法需要使用题图1中①酒精灯（操作需要在酒精灯火焰旁进行， 酒精灯对涂布器进行灼烧灭菌)、④涂布器和③培养基，②为接种环 (接种工具)，是平板划线法接种时需要使用的接种工具，用平板划线 法不能获得长满测试菌的平板，A错误；题图2中Ⅱ处透明圈最小， 说明此处微生物对该药物敏感度最低，B错误：突变株的出现不是在 抗生素的作用下产生的，抗生素只是起选择作用，C错误：不同抗生 素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果中抑菌圈的大小，D正 确。故选D。 4.C解析：益生菌主要在肠道内发挥调节功能，所以其代谢类型是厌 氧型，因此培养箱中氧含量的变化会影响所培养的益生菌的繁殖和 代谢，A正确：经高压蒸汽灭菌的空白平板和接种后的平板均需要倒 置，防止冷凝水对培养基造成污染，B正确；由于两个或多个细菌可 黑白题02 能会形成一个菌落，所以稀释涂布平板法统计的数目会比实际值略 小， $$C _ { 4 }$$ 错误；若要检测培养基是否被污染，可将未接种的培养基在相 同条件下进行培养，如果出现了菌落，则说明培养基被污染，不合格， D正确。故选 $$C _ { 0 }$$ 5.C 解析：该富集培养基是以亚硝酸盐作为唯一氮源的选择培养基， 这样可以使能利用亚硝酸盐的细菌大量繁殖，而不能利用亚硝酸盐 的细菌不能生长，A正确；将菌液置于含亚硝酸盐的富集培养基中反 复培养 6 代的目的是使能利用亚硝酸盐的微生物增加，从而将不能 利用亚硝酸盐的微生物淘汰，B正确；若稀释涂布平板上生长出不同 形态的亚硝酸盐降解菌，则说明能利用亚硝酸盐的微生物有多种，因 此需要再进行平板划线检测、纯化，C错误；进行活菌计数应该用台 盼蓝染色，被染色的细胞为死细胞，不着色的为活细胞，故如果要研 究纯化后的降解菌的生长曲线，可取其菌落进行液体培养并用台盼 蓝染色后进行活菌计数，D正确。故选 $$C _ { 0 }$$ 压轴挑战 6.(1)在富含有机质的土壤表层，有更多的固氮菌生长(或固氨菌一般 为需氧型，生活在土壤表层)使土壤中的微生物充分释放到无菌水 中(2)使菌液与水混合均匀，以便计数更准确稀释涂布平板法 涂布器(3)甲甲培养基不含氮源，具有选择作用，自生固氮菌可 以利用空气中的氮气作为氮源，而乙培养基中的蛋白胨可以提供氮 源，不具有选择作用倒置(4)检测培养过程中培养基是否被杂菌 污染 $$1 . 3 \times { 1 0 ^ { 7 } }$$ 固氮菌产生的含氮化合物 (5)① 每盆土壤浇 50mL 无氮植物营养液 ②83.3 ③ 自生固氮菌能在土壤中独立固 氮，不受宿主的限制④有机肥 解析：(1)步骤 ① 土样应取自当地表层土壤的原因是土壤有“微生物 的天然培养基”之称，同其他环境相比，土壤中的微生物数量最大，种 类最多，在富含有机质的土壤表层，有更多的固氮菌生长；步骤 ② 需 充分振荡的主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中。 (2)用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次的作用是使菌液与水混 合均匀，以便计数更准确。由题图观察可知，步骤 ④ 平板中的菌落分 布均匀，故所采用的分离菌落的方法是稀释涂布平板法，接种工具是 涂布器。(3)由题表中培养基配方分析可知，步骤 ④ 应选其中的甲培 养基，这是因为该培养基不含氮源，具有选择作用，自生固氮菌可以 利用空气中的氮气作为氮源，而乙培养基中的蛋白胨可以提供氮源， 不具有选择作用。用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，倒置培 养既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水 珠落入培养基，造成污染。(4)进行纯化培养时，需同时进行未接种 培养基的培养，作为对照，目的是检测培养过程中培养基是否被杂菌 污染。若在 ④ 的平板上统计的菌落的平均值为130个，则每克土壤 中含有菌落数为 $$1 3 0 \div 0 . 1 \times { 1 0 ^ { 4 } } = 1 . 3 \times { 1 0 ^ { 7 } }$$ 个。杂菌不能利用空气中的 氮气，但可利用自生固氮菌产生的含氮化合物(或自生固氮菌向培养 基上分泌的含氮化合物)。 (5)① 设置对照组时需要排除无关变量 对实验的影响，故对照组 (CK) 的处理为每盆土壤浇 50mL 无氮植物 营养液。 ② 由柱形图分析可知，空白对照组中土壤微生物有机氮含 量为 $$1 0 m g \cdot { k g ^ { - 1 } } ，$$ ，尿素处理组的土壤微生物有机氮含量为 $$1 2 m g \cdot k g ^ { - 1 } ，$$ ，而 CM12 处理组土壤微生物有机氮含量为 $$2 2 m g \cdot { k g ^ { - 1 } } ，$$ ，故与尿素处理组相比， CM12 处理组土壤微生物有机氮 含量增加值大概为 (22-12)÷12×100%=83.3%③ 自生固氮菌较共 生固氮菌(如根瘤菌)的应用范围更广，这是因为自生固氮菌能在土 壤中独立固氮，不受宿主的限制。④ 土壤中的碳氮比低于 40：1 时， 固氮菌的固氮作用迅速停止，而有机肥中含有碳，经微生物分解可提 供碳源，故优良菌肥最好与有机肥配合施用。 正本参考答案 第三节发酵工程为人类提供多样的生物产品 白题基础过关练 1.C解析：大多数微生物需要以现成的有机物为食，不过由于它们的 结构简单，因此多以分泌胞外酶的方式消化、分解大分子有机物后， 再吸收所需的小分子物质。 2.D解析：菌种的种类和代谢类型会影响发酵食品的风味，A正确；不 同菌种之间的种间关系会影响发酵食品的营养成分，主要取决于优 势菌种，B正确；酱油发酵过程中，嗜盐片球菌产生的乳酸使发酵液 的pH下降，会抑制竞争关系的杂菌的生长，C正确：保加利亚乳杆菌 在无氧条件下分解牛奶中的乳糖产生乳酸，还产生多肽酶，将牛奶蛋 白分解成多肽和氨基酸，这些反应会刺激互利关系的嗜热链球菌的 生长，D错误。故选D。 3.D解析：果酒发酵的最适温度是18~30℃，果醋发酵的最适温度是 30~35℃，因此果酒发酵所需最适温度低于果醋发酵，A错误；先制 酒再制醋，故先隔绝空气进行果酒发酵，再供氧进行果醋发酵，B错 误；自然发酵中，可能带有的杂菌较多，产品品质更难控制，C错误； 加大接种量，所需菌种数量较多，发酵速率快，也可抑制杂菌生长， D正确。故选D。 4.D解析：果酒发酵的适宜度为18~30℃，如果保温温度从15℃提 高到25℃，有利于酵母菌发酵产生乙醇，因此乙醇浓度会升高，A错 误：由题意可知，葡萄汁是足量的，因此葡萄汁不是限制发酵的因素， 增加葡萄汁量，则相同时间内乙醇浓度不会升高，B错误：酵母菌厌 氧呼吸产生乙醇，如果连续通入无菌空气，则发酵液内没有乙醇产 生，C错误：由题意可知，发酵过程中加入的酵母菌菌液较少，酵母菌 数量少，因此酵母菌数量是限制发酵的因素之一，若增加酵母菌液用 量，则产生相同乙醇所需的时间缩短，D正确。故选D。 5.A解析：酱菜的制作是利用乳酸菌在无氧环境下大量繁殖并产生乳 酸，A正确：制作酱菜时利用的是环境中的乳酸菌菌种，不能将材料 灭菌，且需要无氧环境，B错误；乳酸自然发酵属于混合菌种发酵，故 而生产周期较长，C错误；抗生素能够抑制乳酸菌的生长，不利于发 酵，所以不能加入抗生素，D错误。故选A。 四名师点睛 酱莱制作所需的菌种是乳酸菌，乳酸菌属于厌氧生物，在有氧条 件下发酵会受抑制。 6.D解析：前2天坛子内02含量较高，而乳酸菌是厌氧型微生物，所 以繁殖速度慢，A正确：前4天由于其他细菌大量繁殖，导致亚硝酸 盐含量升高，B正确：第6天后0，浓度降低，乳酸菌大量繁殖，导致 其他杂菌无法生长，所以亚硝酸盐含量变化缓慢，C正确：第8天该 泡莱亚硝酸盐含量最高，不适宜食用，D错误。故选D。 7.D解析：传统发酵技术和发酵工程都是利用各种微生物的代谢来实 现相关产品的生产，D错误。 8.D解析：许多酶制剂在医药、临床诊断和食品毒素鉴定中也被广泛 应用。 重难聚焦 9.(1)扩大培养酵母菌有以核膜为界限的细胞核而醋酸菌没有 消毒、过滤(2)随机稀释涂布平板酸性重铬酸钾(3)透明圈 直径与菌落直径比值增加接种量、控制发酵条件(4)菌种的类 型、代谢特点、葡萄和糯米的品质、发酵条件的不同 解析：(1)A用于酒精发酵，所需菌种是酵母菌，B用于果醋发酵，菌 种是醋酸菌，两种菌种一般要先活化和扩大培养后，再接种于发酵液 中：酵母菌是真核生物，醋酸菌是原核生物，从细胞结构上看，两菌种 黑白题03第二节 纯净的目标微生 白题基础过关练 题型1微生物的分离、纯化和计数 1.在分离、纯化细菌的实验中，划线接种（甲）、 培养结果（乙）如下图，a、b、c、d是划线的四个 区域。下列有关叙述错误的是 A.操作过程中，接种环蘸取菌液1次，至少需 灼烧五次 B.连续划线的目的是获得单个细菌形成的 菌落 C.蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行 D.甲图中的a区域为划线的起始区域 2.(2023·广东番禺中学期中)分散的微生物在 适宜的固体培养基表面繁殖形成的肉眼可见 的、有一定形态结构的细胞群体，称为纯培养 物。获取纯培养物的常用方法是平板划线法 和稀释涂布平板法。下列有关这两种方法的 叙述，错误的是 () A.这两种方法的关键都是要防止杂菌污染以 保证获得培养物的纯度 B.这两种方法均需同时将接种的平板和未接 种的平板倒置进行培养 C.接种环和涂布器均需要在火焰上灼烧，且 涂布器灼烧前需用酒精引燃 D.用稀释涂布平板法统计菌落数目时，所获 得的数据往往比实际值大 3.下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接 计数法的叙述，不正确的是 () A.利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计 数法，其缺点是不能区分死菌与活菌 B.两种计数方法，其统计值与实际值相比，均 有差异，但差异原因不同 第一章 物可通过分离和纯化获得 限时：30min C.两种计数方法均能在计数的同时观察到所 研究微生物的形态特征 D.当菌落数目稳定时，一般选取菌落数为 30~300且差异不大的平板进行计数 4.检测员将1mL水样稀释10倍后，用抽样检测 的方法检测每毫升蓝细菌的数量：将盖玻片放 在计数区上，用吸管吸取少许培养液使其自行 渗入计数区，并用滤纸吸去多余液体。已知每 个计数区由25×16=400个小格组成，容纳液 体的总体积为0.1mm3。现观察到图中该计数 区所示a、b、c、d、e5个中格内（每个中格内含 16个小格)共有蓝细菌n个，则上述水样中每 毫升约有蓝细菌多少个？ 盖玻片 中央 平台 放大计数区 血细胞 凹槽 计数板 A.5nx105 B.5n×106 C.8n×105 D.8n×10 题型2特殊培养基 5.原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土 壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为 碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高 效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设 计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确 的是 () A.应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释 液备用 B.配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基 C.将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上 D.在选择培养基上能形成分解圈的即为所需 菌种 黑白题03 6.现有两种固体培养基，已知其配制时所加的 成分如下表：用这两种培养基分别去分离土壤 中的两种微生物，它们适于分离的是 ) 成 MgS0 CaSOa 葡 KHSO NaCl CaCO 分 淀 7H20 2H,0 礴 研 0.5 0.02% 0.02% 0.02%0.01% 0.5% 量 乙培养基 含 0.02% 0.02% 0.02%0.01% 0.5% A.甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适 于分离真菌 B.甲培养基适于分离异养型自生固氨菌；乙 培养基适于分离自养型自生固氮菌 C.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙 培养基适于分离异养型自生固氨菌 D.甲培养基适于分离异养型共生细菌；乙培 养基适于分离异养型共生固氮菌 题型3能分解尿素的微生物的分离与计数 7.某兴趣小组从土壤中分离和计数分解尿素的 微生物，下图结果最能达到实验目的的是 A B 8.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌 的分解，就不能更好地被植物利用。下列有关 土壤中尿素分解菌的分离和培养的叙述，正确 的是 ( A.培养基中加入尿素作为唯一碳源，该培养 基是鉴别培养基 B.微生物培养常用的接种方法是平板划线法 和稀释涂布平板法 C.细菌合成的脲酶能将尿素分解成氨，氨会 使培养基的酸性增强，pH降低 D.若上述培养基被杂菌污染，则培养基上会 有多种杂菌菌落出现 选择性必修三·ZK黑 重难聚焦 9.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们 在研究微生物时一般要将它们分离纯化，然 后进行数量的测定。下面是有关土壤中分解 尿素的细菌分离和计数的实验过程，请回答 下列问题。 (1)若取土样6g,应加入 mL的无菌 水配制成稀释10倍的土壤溶液。因土壤 中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配 制成10~10不同浓度的土壤溶液。将 103~10倍的稀释液分别吸取0.2mL滴加 在固体培养基上，用涂布器将菌液铺平， 每个稀释度下至少涂布3个平板，这种接 种方法称为 将接种的培养 皿放置在37℃恒温培养箱中培养24~ 48h,观察并统计菌落数，结果如下表，其 中 倍的稀释比较合适，由此计算 出每克土壤中的菌落数为 个。 这种方法测定的菌落数往往比活菌的实 际数目 (填“低”或“高”)。 稀释倍数 103104 105 106 10 菌落 1号平板478367 277 26 5 2号平板49635426120 8 数/个 3号平板50933225429 (2)若研究尿素分解菌的群体生长规律，可 采用平板划线法分离土壤中的尿素分解 菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第 二次及以后划线时，总是从上一次划线 的末端开始划线，这样做的目的是 。将分离纯化后的单 个菌落进行液体培养，可采用定期取样 的方法进行计数。若以一个大方格（体 积为0.1mm3)有25个中方格的计数板 为例进行计算，设5个中方格中总菌数 为45，菌液稀释倍数为102，那么原菌液 的菌群密度为 个/mLo 白题04 黑题应用提优练 1.棉酚是棉花植株中一种对动物有危害的毒性 物质，研究人员试图从棉花田的土壤中分离、 筛选出高效分解棉酚的菌株。下列叙述错误 的是 () A.筛选培养基需以棉酚为唯一的营养物质 B.实验过程中需严格遵循无菌操作原则 C.稀释涂布平板法或平板划线法均可用来分 离纯化棉酚分解菌 D.棉酚分解菌可分解棉酚的根本原因是含有 能分解棉酚相应酶的基因 2.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计 数”实验中样品稀释示意图。据图分析下列 叙述正确的是 () 1 mL 1 mLI mLI mL I mL 泥尚水R→18个商落 国 4 。一175个菌落 3 10g 90mL +®→167个菌落 0.1mL 土样无菌水 A.3号试管的稀释倍数为103倍 B.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数 为1.7×10个 C.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌 落平均数恰为5号试管的10倍 D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际 活菌数目要高 3.为了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度， 某研究小组进行了相关药敏实验，图1为部分 实验器材。将含有相同浓度的抗生素I~V 四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的 平板上，实验结果如图2。下列相关叙述正确 的是 () 含抗生素的纸片 抑菌圈中的菌落 ②③ ④ 图1 图2 A.为获得长满测试菌的平板，需要使用图1 中器材①②③ 第一 章 限时：35min B.图2中Ⅱ形成的抑菌圈较小，可能是病原微 生物对药物较敏感 C.图2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素V作 用下产生了突变株 D.不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影 响实验结果 4.(2023·淅江嘉兴期中)益生菌是一类食用后 能在肠道内发挥调节功能的活菌。市售的益 生菌产品质量参差不齐，某益生菌品牌宣传其 产品中活菌数不少于10'个/g。研究小组尝 试检测该品牌益生菌中的活菌含量是否与宣 传一致，实验步骤为制备培养基→调节pH→ 灭菌→倒平板→梯度稀释样品→接种→培 养→计数。下列叙述错误的是 () A.培养箱中氧含量的变化会影响所培养的益 生菌的繁殖和代谢 B.经高压蒸汽灭菌的空白平板和接种后的平 板培养时均需要倒置 C.对该品牌益生菌进行计数时，稀释涂布平 板法统计的数目会比实际值略大 D.若要检测培养基是否被污染，可将未接种 的培养基在相同条件下进行培养 5.污水中一般都会含有亚硝酸盐，科研人员从污 水中分离出了亚硝酸盐降解菌，该微生物能对 污水中的亚硝酸盐进行有效去除。从水体取 样后置于含亚硝酸盐的培养基中进行富集培 养，取富集培养6代后的菌液依次等比稀释。 稀释系列菌液浓度为104、105、10-6、107、 10-8,分别取0.1mL培养液涂平板，37℃倒置 培养24h,观察菌落形态并进行相关检测和纯 化等。下列说法错误的是 () A.该富集培养基是以亚硝酸盐作为唯一氨源 的选择培养基 B.将菌液置于含亚硝酸盐的富集培养基中反 复培养6代的目的是增加亚硝酸盐降解菌 的数量 黑白题05 C.若稀释涂布平板上生长出不同形态的亚硝 酸盐降解菌，即可获得所需的降解菌 D.如果要研究纯化后的降解菌的生长曲线， 可取其菌落进行液体培养并用台盼蓝染色 后进行显微直接计数 压轴挑战 6.(2023·浙江杭州期中)为提高作物产量，种 植业往往使用大量的氨素化肥，既增加了生 产成本，又易造成环境污染。自生固氮菌能 独立固定氮气，为改变这种现状带来了希 望。科研人员进行了土壤中自生固氮菌 的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流 程如下图。回答下列问题： 1 mL 1 mL 0.1 mL 扩大 培养 固氯 能力 90 ml 土壤 多次纯 鉴定 土样 无菌水 悬液 9mL无菌水化培养 ① ③ ④ ⑤ (1)步骤①土样应取自表层土壤的原因 是 步骤②需充分振荡的主要目的是 (2)步骤③中需用手指轻压移液管上的橡皮 头，吹吸3次的作用是 步骤④用于分离菌落的方法是 所用的接种工具是 (3)下表为两种培养基的配方，上述步骤④应 选培养基 (填“甲”或“乙”)， 原因是 用平板培养细菌时一般需要将平 板 (填“倒置”或“正置”)。 培养基类型 培养基组分 甘露醇、KH,PO4、MgS04· 甲 H,0、NaCl、K2S04、CaC03、蒸 馏水、琼脂 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、 蒸馏水、琼脂 选择性必修三·ZK黑 (4)纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培 养，目的是 。若在④的 平板上统计出菌落的平均数量为130个，则 每克土壤中含有的固氮菌为 个。 另一组实验中发现，当培养时间过长时，在 固氨菌大菌落四周出现了少量杂菌小菌落， 进一步研究表明这些杂菌不能利用空气中 的氮气，则其氮源来自 (5)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培 养48h,经离心后收集下层细胞并转移至 特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选 出固氮能力最强的菌种CM12,为进一步鉴 定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的 玉米种子进行3组盆栽实验，30d后测定 土壤微生物有机氨含量，结果如下图： N:尿素处理组（每盆土壤浇灌50mL有氦 全营养液：在1000mL无氨植物营养液中 加入0.12g尿素)；CM12:自生固氮菌CM12 处理组（每盆土壤浇灌50mL接种自固氦菌 的无氨植物营养液)。 ①对照组(CK)的处理为 ②实验结果表 301 明，用尿素 22 处理和接种 道20 道15 12 固氮菌CM12 10 5 处理，均能 0 CM12 显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿 素处理组相比，CM12处理组土壤微生物 有机氮含量增加了约 %。 ③自生固氮菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的 应用范围更广，原因是 ④研究表明，土壤中的碳氮比低于40：1 时，固氨菌的固氨作用迅速停止，因此优 良菌肥最好与 (填“有机肥” “氨肥”“磷肥”或“钾肥”)配合施用。 进阶突破拔高练P02 白题06