【串讲课件】专题01 发酵工程（期末复习课件）高二生物下学期人教版

这是一份高中生物学选择性必修三发酵工程的期末复习课件，包含期末考情分析、考点扫描和提升演练三大模块。考情分析明确知识模块、核心考点及考查方式，考点扫描涵盖果酒果醋制作、发酵工程应用等五大考点并附易混易错解析，提升演练精选高考真题和地方期末试题，为学生提供系统复习支架。 资料特色突出核心素养培养，通过对比表格（如三种发酵技术参数对比）构建知识联系，结合实验操作要点（如无菌技术灭菌方法）提升科学思维和探究实践能力，融入发酵工程应用实例（如食品工业生产）强化态度责任。能帮助学生精准把握考点，助力教师高效开展期末复习教学。

人教版 生物学 选择性必修三 期末复习课件 期末考情 考点扫描 提升演练 专题01 发酵工程 1 Part 01 期末考情 知识 板块 核心考点 考查方式及题型 复习提示及易错点 期末考情分析 知识板块 核心考点 常见考查方式与题型 复习提示与易错点 传统发酵技术、发酵工程 1.果酒、果醋和泡菜制作； 2. 发酵工程及其应用； 1. 选择题： (1)辨析果酒、果醋、泡菜制作的菌种和代谢类型、发酵条件差异; (2)判断发酵装置、操作步骤正误；(3)发酵产物检测方法； (1)混淆菌种代谢类型：酵母菌兼性厌氧，醋酸菌全程需氧，乳酸菌全程厌氧； (2)发酵条件细节易错：果酒18-25℃、果醋30-35℃； (3)对“白膜”的误解：泡菜坛白膜是产膜酵母，果酒表面白膜是醋酸菌，均不是乳酸菌. 微生物的培养技术及应用 1.培养基和无菌技术； 2.微生物的基本培养技术； 3.微生物的选择培养和计数 1. 选择题： (1)辨析培养基类型； (2)无菌技术方法与适用对象辨析; (3) 微生物计数方法辨析。 2. 填空题： (1)填写培养基的主要成分及作用； (2)写出高压蒸汽灭菌 (1)选择培养基与鉴别培养基混淆：前者抑制杂菌生长、筛选目的菌，后者通过颜色反应区分菌种； (2)无菌技术适用对象错误：接种环用灼烧灭菌，培养基用高压蒸汽灭菌，不能混用； (3)平板划线法与稀释涂布平板法易错：划线法仅用于分离纯化，不能计数； Part 02 考点扫描 知识回顾 考点剖析 易混易错； 技巧点拨； 试题分析 考点01 果酒、果醋和泡菜制作 考点02 发酵工程及其应用 考点03 培养基和无菌技术 考点04 微生物的基本培养技术 考点05 微生物的选择培养和计数 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 知识回顾 果酒、果醋和泡菜的制作 果酒果醋制作 发酵技术共性 菌种： 代谢类型 菌种： 操作要点 适宜温度 发酵原理 泡菜制作 酵母菌、醋酸菌 酵母菌：兼性厌氧 醋酸菌：严格需养 果酒：18~25℃ 醋酸菌：30~35℃ 酵母菌无氧呼吸产生酒精 醋酸菌有氧把酒转化为醋酸 操作要点 发酵瓶留空隙 弯管排气、防止杂菌污染 乳酸菌、严格厌氧 盐水煮沸后冷却使用；全程密闭，无氧发酵 均为天然微生物自然发酵、混合菌种 核心把控：控温、控氧、防杂菌 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 知识点1：比较果酒、果醋和泡菜的制作 考点剖析 项目 果酒的制作 果醋的制作 泡菜的制作 菌种 原理 在有氧时，酵母菌大量繁殖；在无氧时，酵母菌进行酒精发酵 当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将糖分解成乙酸；在缺少糖源和有氧条件下，醋酸菌可将乙醇转化乙醛，再将乙醛变为乙酸 在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸 酵母菌 (真核生物，异养兼性厌氧型) 醋酸菌 (原核生物，异养需氧型) 乳酸菌 (原核生物，异养厌氧型) 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 知识点1：比较果酒、果醋和泡菜的制作 考点剖析 项目 果酒的制作 果醋的制作 泡菜的制作 原料选择 新鲜葡萄(或苹果)等 萝卜、豇豆等新鲜蔬菜 发酵温度 对氧需求 检测指标 嗅味、品尝、通过酸 性重铬酸钾检测酒精 是否形成菌膜、嗅味、品尝、pH检测 色泽、口味、亚硝酸盐含量等 18～30 ℃ 30～35 ℃ 室温 前期需氧，后期不需氧 需充足氧 不需氧 (1)配制的盐水要煮沸后冷却。煮沸的作用：①__________________， ②杀灭盐水中的其他微生物；冷却目的是防止________________。 (2)泡菜制作中营造“无氧环境”的三项措施：①选择的泡菜坛要__________。 ②加入蔬菜后要注入____________的盐水(质量分数为 5%～20%为宜)。 装坛时________，并使盐水没过全部菜料。 ③盖上坛盖后发酵期间不宜开盖，并注意在坛盖边沿的水槽中__________， 且注意经常补水。 除去水中的氧气 高温杀死菌种 密封性好 煮沸冷却 压实 注满水 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 泡菜的制作注意事项 考点剖析 果酒、果醋发酵的操作要点分析 (1)材料的选择与处理： 选择新鲜的葡萄，榨汁前________________，一般冲洗1～2次即可，即使反复 进行冲洗，也几乎不影响果酒的发酵，因为果酒发酵的酵母菌可以来自空气。 (2)发酵条件的控制 ①葡萄汁装入发酵瓶时，要留有约____的空间，目的是让酵母菌先进行有氧呼吸 大量繁殖，再进行酒精发酵；还能 。 ②果酒发酵过程中先________促进有氧呼吸，以利于酵母菌大量繁殖；后____________，以利于酵母菌进行酒精发酵。发酵过程中，适时地________瓶盖，放出产生的CO2。 先冲洗后去枝梗 1/3 通O2 关闭充气口 拧松 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 考点剖析 防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液溢出 ③严格控制温度。果酒、果醋发酵温度不同，因为各自所需的主要菌种繁殖、 发酵适宜温度不同。 (3)防止发酵液被污染 ①榨汁机要清洗干净，并晾干。 ②发酵瓶要洗净并用体积分数为70%的酒精________，杀灭部分微生物， 减少杂菌污染。 ③装入葡萄汁后发酵瓶要密封或后期封闭充气口。无氧、偏酸性、 18～30 ℃条件下，适合__________的生存，不适合绝大多数微生物的生存。 消毒 酵母菌 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 考点剖析 A．过程①可加入纤维素酶，有利于提高柿子的出汁率 B．过程②接种酵母菌后需灭菌处理，以防止杂菌污染 C．与过程②相比，过程③需通入空气并适当升高温度 D．过程④采用过滤除菌可防止柿子醋中营养成分的损耗 1.(2026·南通期初)柿子醋具有促进消化、调节血脂等功效。 如图为柿子醋酿造工艺流程，下列相关叙述错误的是(　　) B 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 考点剖析 过程②接种酵母菌后进行灭菌处理，会将目的菌株(酵母菌)杀死 2.(2025·苏锡常镇二调)某研究小组以软枣猕猴桃和苹果为原料制备 复合果醋饮料，工艺流程如下图。下列叙述错误的是(　　) A．发酵的原理主要是利用酵母菌的无氧呼吸和醋酸菌的有氧呼吸 B．步骤①中加入适量的纤维素酶和果胶酶以提高出汁率 C．步骤②中加入绵白糖能促进酵母菌的生长、繁殖和发酵 D．流程中两次杀菌处理的目的、方式及强度均相同 D 考点01：果酒、果醋和泡菜的制作 考点剖析 第一次杀菌：杀灭原料中的杂菌，避免其与酵母菌竞争营养或干扰发酵；第二次杀菌：彻底杀灭果醋中的微生物，防止产品腐败变质，延长保质期。 考点02：发酵工程及其应用 知识回顾 发酵工程及其应用 发酵工程 的基本环节 发酵工程应用 菌种选育、扩大培养 配制培养基、灭菌、接种 在食品工业上的应用 在医药工业上的应用 发酵罐内发酵（中心环节） 分离、提纯产物、获得产品 生产传统的发酵食品 生产抗生素、氨基酸、激素、免疫抑制剂等 生产食品添加剂 生产酶制剂 在农牧业上的应用 在其他方面的应用 与基因工程结合生产药物 生产微生物饲料 对极端微生物的利用 生产微生物农药 解决资源短缺和环境污染问题 生产微生物肥料 考点02：发酵工程及其应用 知识点1：发酵工程的基本环节 考点剖析 选育菌种 扩大培养 接种 途径 从 中筛选 通过 或 获得 增加菌种数量 工业发酵罐的体积很大，接入的菌种总体积也较大 配制培养基 培养基的配方要经过反复试验才能确定 灭菌 和 。都必须经过严格的灭菌 扩大培养的菌种和灭菌后的培养基加入发酵罐中 自然界 诱变育种 基因工程育种 培养基 发酵设备 ①产品是微生物细胞本身： 采用 等方法将菌体分离和干燥； ②产品是代谢物： 根据产物的 采取适当的提取、分离和纯化措施。 分离、 提纯产物 获得产品 发酵罐内发酵 (中心环节) 随时检测培养液中的微生物数量、 等， 以了解发酵进程； 及时添加必需的营养组分，要严格控制 、 和 溶解氧等发酵条件 产物浓度 温度 pH 过滤、沉淀 性质 考点02：发酵工程及其应用 考点剖析 考点02：发酵工程及其应用 考点剖析 知识点2：发酵工程的应用 食品工业 医药工业 农牧业 他方面 ①生产传统的发酵产品。②生产食品添加剂，如通过黑曲霉发酵制得的柠檬酸; 发酵生产谷氨酸制成味精。 ③生产酶制剂。 主要包括生产多种______、氨基酸、激素和________调节剂等 ①生产微生物肥料。 ②生产微生物农药。 ③生产微生物饲料， 如发酵饲料、______蛋白和青贮饲料。 ①解决资源短缺和环境污染问题，如利用___________发酵生产酒精、乙烯等能源物质 ②对________微生物的利用，如利用嗜热菌、嗜盐菌生产洗涤剂。 单细胞 纤维废料 极端 抗生素 免疫 谷氨酸棒状杆菌 注意：单细胞蛋白是微生物菌体本身。 1.我国是世界上最大的柠檬酸生产国。利用黑曲霉通过深层通气液体发酵技术生产柠檬酸，流程见下图。下列叙述错误的是(　　) C B．扩大培养可提供足量的黑曲 霉菌种 C．培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同 D．通气、搅拌有利于增加溶解氧和积累柠檬酸 A．淀粉水解糖为发酵提供碳源和能源 考点02：发酵工程及其应用 考点剖析 空气一般用过滤除菌，培养基一般用高压蒸汽灭菌，发酵罐可以用高温灭菌的方式等，因此它们的灭菌方法不相同。 2.青霉素可采取液体发酵方式以青霉菌(一种需氧、多细胞丝状真菌)为 生产菌株进行生产，过程中操作不当的是(　　) A．用诱变或基因工程等途径得到的菌种进行接种 B．监控pH、温度、溶解氧等参数 C．用血细胞计数板实时监测活菌数量 D．用大肠杆菌为指示菌监测青霉素产量 C 血细胞计数板无法区分死菌与活菌，且青霉菌为多细胞丝状结构，难以分散计数，不适合用该法。 考点02：发酵工程及其应用 考点剖析 考点03：培养基和无菌技术 知识回顾 培养基和无菌技术 培养基 营养成分 分类 按状态分 水 无机盐 氮源 异养型细菌需要有机碳源 自养型细菌可以利用无机碳源(如C02） 细菌碱性或弱碱性、霉菌酸性； 乳酸杆菌培养需要在培养基中添加维生素 按功能分 碳源 其它条件 获取单菌落，鉴定，分离、鉴定 发酵工程、摇床，震荡扩大培养 用于研究微生物运动方式 无菌技术 允许特定种类的微生物生长， 同时抑制其他种类微生物生长 如伊红一亚甲蓝琼脂培养基可鉴定大肠杆菌菌落，呈深紫色并有金属光泽 刚果红培养基可以鉴别纤维素分解菌 酚红培养基可以鉴别尿素分解菌 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 选择培养基 鉴别培养基 如牛肉膏蛋白胨，只有固氮微生物能够利用无机氮源(如氮气) 细胞结构重要组分，维持正常生命活动，调节pH和渗透压等 提供液体环境、良好溶剂、参与反应 考点03：培养基和无菌技术 知识回顾 培养基和无菌技术 无菌技术 概念 分类 灭菌 消毒 概念 分类 可杀死大多数微生物，并且基本不会破坏营养成分 适量石炭酸或煤酚皂溶液可以加强消毒效果。 酒精擦拭双手、用氯气消毒水源 煮沸消毒法，生物消毒法 如使用高压蒸汽灭菌进行培养基的无菌处理 玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等 布涂器、接种环、接种针或其他金属用具 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物 巴氏消毒法: 紫外线消毒法: 化学药剂消毒法: 其他方法: 使用强烈的理化因素杀死物体内所有微生物（包括芽孢和孢子） 知识点1：培养基类型 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 划分标准 培养基类型 配制特点 主要应用 物理性质 ________培养基 加入凝固剂较多 菌种___________________ __________培养基 加入凝固剂________ 菌种________ ________培养基 ______加入凝固剂 工业生产，连续培养 化学组成 ________培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 菌种______________ ________培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生产，降低成本 目的用途 ________培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的________ ________培养基 添加(或缺少)某种化学成分 菌种的________ 固体 分离、鉴定、计数 半固体 较少 保存 液体 不 合成 分类、鉴定 天然 鉴别 鉴别 选择 分离 知识点2：培养基的营养构成 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 (1)各种培养基一般都含有__________________和无机盐等营养物质。 水、碳源、氮源 营养物质 作用 主要来源 水 良好的溶剂、细胞结构的重要组成成分 培养基、空气、代谢产物 碳源 提供碳元素，有机碳源是异养生物的________物质 葡萄糖、蔗糖、淀粉、纤维素、牛肉膏、蛋白胨等 氮源 提供氮元素，合成_______________、磷脂以及含氮代谢产物 无机氮源，如铵盐、硝酸盐等；有机氮源，如酵母粉、________、__________等 无机盐 组成细胞结构和许多化合物，调节生命活动；某些化能自养菌的能源 如磷酸盐等无机化合物 能源 蛋白质、核酸 牛肉膏 蛋白胨 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 (2)培养基的其他条件：满足微生物对pH、特殊营养物质以及O2等的需求。 培养微生物种类 特殊要求 乳酸杆菌 培养基中添加__________ 霉菌 培养基的pH调至________ 细菌 培养基的pH调至________________ 厌氧微生物 需要提供________的条件 知识点2：培养基的营养构成 维生素 酸性 中性或弱碱性 无氧 知识点3：无菌技术 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 获得纯净的微生物培养物的关键是________________。无菌技术主要包括：________和________。 防止杂菌污染 项目 消毒 灭菌 概念 使用较为________的物理、化学或生物等方法杀死物体________或内部一部分微生物 使用________的理化方法杀死物体内外_______的微生物，包括_____________ 常用 方法 ________消毒法、巴氏消毒法、________消毒法、紫外线消毒法 ________灭菌(如高压蒸汽灭菌法)、干热灭菌、________灭菌 区别 最大区别在于是否杀死芽孢和孢子 消毒 灭菌 温和 表面 强烈 所有 芽孢和孢子 煮沸 酒精 湿热 灼烧 1．消毒和灭菌 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 知识点3：无菌技术 2．三种灭菌方法的比较 方法 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 媒介 沸水、流通蒸汽或高压蒸汽 热空气 火焰的充分燃烧层 方法 高压蒸汽灭菌：100 kPa、121 ℃，维持15～30 min 160～170 ℃、1～2 h 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 对象 __________等 耐高温的和需要保持干燥的物品，如__________、____________等 ___________、试管口、瓶口等 原理 高温或高温、高压使蛋白质____________，导致微生物活体以及芽孢和孢子全部死亡 培养基 玻璃器皿 金属用具 接种工具 变性失活 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 知识点3：无菌技术 (1)对实验操作的________、操作者的衣着和手进行清洁和________。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行________。 (但是不耐高温的培养基或成分可采用其他方法除菌，如血清可通过过滤除菌。) (3)为了避免周围环境中微生物的污染，许多实验操作都应在超净工作台并在 ______________附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与______________接触。 3．操作对象或注意点 空间 消毒 灭菌 酒精灯火焰 周围的物品 1.“细菌喜荤，霉菌喜素”，一般来说，在培养细菌时，需添加动物性营养物质，如蛋白胨等；而在培养霉菌时，一般需要添加植物性营养成分，如豆芽汁等。下列相关叙述错误的是(　　) A．蛋白胨为细菌提供碳源、氮源和特殊营养物质 B．分别培养细菌和霉菌时，需将培养基调节至适宜的pH，并保持良好的通气 C．细菌和霉菌体内的酶存在差异，导致二者偏好的营养成分不同 D．若需要比较细菌和霉菌形成的菌落差异，培养基中还需添加琼脂等物质 B 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 细菌有的是需氧型，有的是厌氧性，要根据微生物的代谢类型，来确定是否保持良好的通气。 A．配制培养基、倒平板、接种均需在酒精灯火焰旁进行 B．玻璃器皿、金属用具可采用干热灭菌法进行灭菌 C．倒平板后敞开皿盖用吹风机冷风加速培养基凝固 D．配制好的培养基先分装到培养皿中再进行灭菌 2.无菌操作是微生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（ ） B 考点03：培养基和无菌技术 考点剖析 不需要。 会增大杂菌污染的风险，正确操作应为倒平板后立即盖上皿盖。 培养基配制后应先高压蒸汽灭菌，再趁热倒入培养皿中，若先分装再灭菌，可能导致灭菌不彻底或培养基受热不均。 考点04：微生物的基本培养技术 知识回顾 微生物的基本培养技术 纯培养 分离纯化方法 概念 步骤 由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程即纯培养 配制培养基 灭菌 倒平板 平板倒置 接种 平板划线法 稀释涂布平板法 原理 注意事项 原理 注意事项 此步骤还无需无菌条件 培养基高压蒸汽灭菌、培养皿干热灭菌(或高压蒸汽灭菌) 50°C左右(不烫手为指标)、酒精灯火焰附近倒平板 防止培养基表面的水分挥发，防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。若标记应该标记在皿底。 平板划线法或稀释涂布平板法 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养可以分离得到单菌落 每次划线前都需要灼烧接种环（杀灭残留杂菌）并冷却（避免杀灭细菌）。 第一次灼烧冷却后需要燕取菌液，第二次以后都不用煎取。 划线时最后一区不要与第一区相连 确保准确：选择菌落数在30~300个的平板计数 减少误差：同一稀释度加到三个或以上的平皿中，经涂布培养计算出菌落平均数 数据偏小：当两个或多个细胞连在一起时，最终平板上观察到的只是一个菌落 将菌液进行一系列的梯度稀释（使用无菌水稀释），然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养由于使用的稀释液浓度可知，所以不仅可以用于纯培养，还可以用于计数 知识点1：酵母菌的纯培养 考点剖析 考点04：微生物的基本培养技术 1.获得单菌落的两种常用方法：______________和__________________。 平板划线法 稀释涂布平板法 2.酵母菌的纯培养步骤: 制备培养基 接种与分离 培养 ①制备培养基 ：配制培养基 ② 灭菌 培养基——高压蒸汽灭菌 注意：先调pH再灭菌 培养皿——干热灭菌 高压蒸汽灭菌锅 培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。 1 拔出锥形瓶的棉塞。 2 将瓶口迅 速通过火焰。 3 用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿（10～20mL），立即盖上皿盖。 4 等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。 1.防止培养基水分蒸发。 2.防止皿盖上冷凝水滴落，造成污染。 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 不能完全打开，以免杂菌污染培养基。 ③ 倒平板： 考点剖析 考点04：微生物的基本培养技术 知识点1：酵母菌的纯培养 平板划线法 稀释涂布平板法 主要步骤 接种工具 单菌落的获得 用途 培养结果 相同点 接种环在固体培养基 表面连续划线 等比稀释操作和涂布平板操作 接种环 涂布器 从最后划线的区域挑取 稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落 分离纯化菌种，获得单菌落 ①分离纯化菌种，获得单菌落 ②用于计数 ①都能分离纯化菌种；②都是在固体培养基上进行的。 知识点2：分离纯化，获得单菌落的两种方法 考点剖析 考点04：微生物的基本培养技术 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. ②划线首尾不能相接 ③每次划线前接种环进行灭菌。在5个区域划线，接种环灼烧灭菌共6次。 ④划线后,培养皿倒置培养 分区划线法（最常用） 平板划线法注意事项 : 知识点2：分离纯化，获得单菌落的两种方法 考点剖析 考点04：微生物的基本培养技术 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞 杀死接种环上原有微生物 接种环共需灼烧几次？ 6次 知识点2：分离纯化，获得单菌落的两种方法 考点剖析 考点04：微生物的基本培养技术 灼烧接种环的目的 1.从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是(　　) A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 B 考点剖析 考点04：微生物的基本培养技术 高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线用于消毒。 应从上次划线的末端开始。 斜面培养基保存菌种应置于4 ℃短期保存，长期保存菌种应使用甘油管藏法(－20 ℃)。 2.实验小组对酿酒酵母菌进行平板划线的纯培养操作，下列有关叙述正确的是(　　) A．将配制好的马铃薯琼脂培养基放入干热灭菌箱内灭菌 B．在酒精灯火焰附近，将培养皿盖完全打开后倒入培养基 C．从第一次划线的末端开始到第二次划线结束，即完成接种 D．将接种后的平板和未接种的平板倒置，放入恒温培养箱中培养 D 考点剖析 考点04：微生物的基本培养技术 高压蒸汽灭菌。 开一条稍大于瓶口的缝隙。 一般再做第三、四、五次划线，以便于得到单菌落。 考点05：微生物的选择培养和计数 知识回顾 微生物的选择培养和计数 微生物的选择培养 微生物的计数 培养基 以尿素为唯一氮源的选择培养基，尿素分解菌能够合成脲酶，将尿素分解为氮。 对照组 ①判断培养基中“是否有杂菌污染”: 需将未接种的培养基同时进行培养。 ②判断选择培养基“是否有筛选作用“: 需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养。 直接计数 间接计数 利用细菌计数板或血细胞计数板，不能区分死细胞和活细胞，比实际值偏大。 原理： 通过统计平板上的菌落数，推测出样品中大约含有多少活菌。 缺点： 当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到只是一个菌落。比实际值偏小。 知识点1：微生物的选择培养 考点剖析 考点05：微生物的选择培养和计数 1.选择培养基和鉴别培养基的比较 项目 选择培养基 鉴别培养基 原理 人为提供目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品，产生特定的颜色或其他变化 用途 从众多微生物中分离所需微生物(目的菌) 鉴别不同种类的微生物 举例 ①加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌； ②以 为唯一氮源，分离出分解尿素的微生物 ①以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂； ②利用 筛选分解纤维素的微生物 (出现以纤维素分解菌为中心的透明圈)； ③用 琼脂培养基鉴别大肠杆菌 (菌落呈深紫色，并有金属光泽) 尿素 刚果红染色法 伊红—亚甲蓝 02 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9mL 无菌水 90mL无菌水 10g ①铲取土样，将样品装入纸袋中 注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌。 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 2.稀释涂布平板法操作 微量移液器 知识点1：微生物的选择培养 考点剖析 考点05：微生物的选择培养和计数 40 02 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 注意：多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 浸 涂 灼 滴 注：各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照。 考点剖析 考点05：微生物的选择培养和计数 知识点1：微生物的选择培养 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 恒温培养箱 思考：设置空白对照组的目的是什么？ 检测培养基灭菌是否彻底，保证实验结果的准确性。 根据实验结果，能否计算出细菌数目的是多少？原理是什么？ 可以。 培养与观察： 考点剖析 考点05：微生物的选择培养和计数 知识点1：微生物的选择培养 项目 显微镜直接计数法 稀释涂布平板法 主要用具 显微镜、_____________ 　　　　　　 等 培养基等 计数依据 菌株本身 培养基上的　 　数 优点 计数方便、操作简单 计数的都是活菌 缺点 死菌、活菌都计数在内 操作复杂、有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌株数＝ 每小格平均菌株数×400×104×稀释倍数 血细胞计数板 或细菌计数板 菌落 每毫升原液含菌株数＝ 平均菌落数/所用涂布液体积×稀释倍数 考点剖析 考点05：微生物的选择培养和计数 知识点2：测定微生物数量常用的方法 1.环丙沙星是一类高效的广谱抗菌药物，某科研团队通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解环丙沙星能力强的菌株。相关叙述错误的是(　　) A．逐步提高培养基中环丙沙星的浓度有助于获得高耐受的菌株 B．用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面 C．稀释涂布平板需控制每个平板30～300个菌落 D．使用过的培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃 C 考点剖析 考点05：微生物的选择培养和计数 筛选特定微生物时，涂布后的平板上的菌落数不一定要在30～300。 2.采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是(　　) A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 B 考点剖析 考点05：微生物的选择培养和计数 平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数。 醋酸菌为严格好氧菌，进行有氧呼吸。 筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，蛋白胨中也含有氮元素，可作为氮源，则无法筛选目标菌。 Part 03 提升演练 优选试题 高考真题 1.下列关于果酒、果醋、酸奶和泡菜的说法，正确的是（    ） A．先制果酒后制果醋，后期需要升高发酵温度即可 B．果酒、果醋、酸奶和泡菜制作过程中pH值先升高后明显下降 C．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌 D．制作泡菜过程中泡菜盐水浓度过高可能会导致泡菜咸而不酸 D 提升演练 同时改变温度和氧气条件。 果酒（酵母菌产CO₂使pH下降）、果醋（醋酸菌产酸）、酸奶（乳酸菌产酸）、泡菜（乳酸菌产酸）的pH均持续下降。 牛奶采用巴氏消毒法灭菌 2.下列有关发酵及其应用的叙述正确的是（    ） A．谷氨酸棒状杆菌发酵谷氨酸需要在中性或弱碱性条件下 B．工业发酵啤酒时酒精的产生主要在后发酵阶段完成 C．工业发酵啤酒的过程中加入啤酒花的目的是接种酵母菌 D．若发酵工程的产品是菌体本身，可采用提取、分离和纯化方法将菌体分离和干燥 A 提升演练 后发酵阶段主要在低温下进行糖分的缓慢分解和风味物质的形成。 提供香味和苦味，并抑制杂菌，酵母菌需在发酵初期接种。 菌体作为产品时，通常通过过滤、沉淀等方法分离并干燥，而非提取、分离和纯化（用于代谢产物） 3.（24-25高二下·江苏南通·期末）下图是某同学自制酸奶的主要流程。相关叙述错误的是 （　　） A．过程①可将鲜奶置于80℃恒温水浴箱中15min B．过程②加入酸奶的目的是接种发酵菌种 C．过程③需适时拧松瓶盖，防止牛奶溢出 D．过程④使发酵停止，防止酸奶酸度过高 C 提升演练 过程③是密封发酵过程，乳酸菌是厌氧菌，在无氧条件下才能将葡萄糖分解为乳酸（产物没有气体），从而制作出酸奶，故过程③需无需拧松瓶盖。 4.（24-25高二下·江苏南京·期末）研究人员用刚果红培养基从蔗渣堆肥中筛选、分离出4株具有降解纤维素能力的真菌（图示①~④）。下列说法正确的是（     ) A．图中培养基应在调节pH 后灭菌 B．①号真菌降解纤维素的能力最强 C．实验中应将接种后的平板直接静置培养 D．可使用平板划线法对4种菌株进行培养和计数 A 提升演练 ④号真菌形成的透明圈与菌落直径的比值最大，这表明④号真菌降解纤维素的能力最强 将平板倒置于恒温培养箱中培养 平板划线法主要用于菌种的分离和纯化，不能用于微生物的计数。 5.（24-25高二下·江苏镇江·期末）结核分枝杆菌可以引起结核病，为探究不同抗生素对结核分枝杆菌的抑菌效果，将患者体内的病原菌进行分离培养，实验结果如图所示。培养基成分主要含有天门冬氨酸、甘油、鸡蛋黄、KH2PO4、MgSO4等。下列分析错误的是（    ）    A．结核分枝杆菌会引起人体发生体液免疫和细胞免疫 B．此培养基成分中提供氮源的是天门冬氨酸和鸡蛋 C．接种过程所用实验器材有酒精灯、接种环、微量移液器 D．图中D为含有无菌水的滤纸片作为对照 C 提升演练 涂布器。 6.（24-25高二下·江苏南通·期末）为获得分解活性黑5能力强的假单胞杆菌，科研人员开展了下图所示实验。相关叙述错误的是（　　）    A．配制培养基时，先分装后灭菌，可降低培养基被污染的概率 B．运用涂布法和划线法将菌种分别接种于培养基Ⅰ和Ⅱ C．接种环灼烧冷却后，应挑取完整菌落进行转接 D．浓度梯度驯化后，假单胞杆菌分解活性黑5能力增强 C 提升演练 接种环灼烧冷却后，应挑取完整单菌落进行转接。 7.(2024·江苏卷)关于“利用乳酸菌发酵制作酸奶或泡菜”的实验， 下列叙述正确的是(　　) A．制作泡菜的菜料不宜完全淹没在煮沸后冷却的盐水中 B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌 C．发酵装置需加满菜料或牛奶并封装，以抑制乳酸菌的无氧呼吸 D．控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质 D 提升演练 要完全淹没。 巴氏消毒。 泡菜需装至八成满，制作酸奶时倒入的奶液量不要超过奶瓶容积的2/3 8.(2025·江苏卷)某同学利用红叶李果实制作果醋，如图为其操作的简易流程。下列相关叙述正确的是(　　) A．果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同 B．过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率 C．过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌 D．过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气 B 提升演练 果酒发酵的菌种是酵母菌，是真核生物，果醋发酵的菌种是醋酸菌，是原核生物，两者的细胞结构不同 多次开盖会引入氧气，抑制酵母菌的无氧呼吸 不需要拧松瓶盖放气 9.（2025·河南·高考真题）食醋和黄酒是我国传统的日常调味品，均通过发酵技术生产。下列叙述错误的是（　　） A．醋酸的发酵是好氧发酵，而酒精的发酵是厌氧发酵 B．以谷物为原料酿造食醋和黄酒时，伴有pH下降和气体产生 C．食醋和黄酒发酵过程中，微生物繁殖越快发酵产物产率越高 D．使用天然混合菌种发酵往往会造成传统发酵食品的品质不一 C 提升演练 以谷物为原料酿造食醋和黄酒时，产物中的醋酸、二氧化碳等会使pH下降 10.（2025·浙江·高考真题）猕猴桃醋生产的基本工艺流程如下，其中①②③表示发酵的三个环节，糖化是将淀粉转化为葡萄糖的过程。 下列叙述错误的是（　　） A．通过蒸煮可以杀灭猕猴桃自带的绝大多数微生物 B．麸曲中曲霉的主要作用是对糖类进行氧化分解 C．环节③需要通入无菌空气 D．①②③都需要控制温度、pH 等条件 B 提升演练 麸曲中的曲霉主要作用是将淀粉等多糖分解为葡萄糖等单糖，而不是对糖类进行氧化分解 $