2026届高三生物一轮复习3.2基因工程的基本操作程序默写题

该高中生物学高考复习知识清单聚焦基因工程基本操作程序，系统涵盖四大核心步骤，包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞及检测与鉴定，整合PCR技术、载体组成、转化方法等关键知识模块。 清单采用问题驱动与分层解析结合的方式，如细化PCR原理、步骤及计算，对比启动子与起始密码子等易混概念，以表格梳理分子与个体水平检测方法，培养科学思维与探究实践素养。特设易错点提示（如原核细胞表达真核蛋白无活性的原因），助力学生自主构建知识体系，教师可据此精准指导复习，提升备考效率。

第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 1.基因工程的四大步骤是什么？ 核心步骤是？ 目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建（核心步骤）、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 2.目的基因的筛选与获取： （1）什么是目的基因？主要是指什么基因？ 还可以是？ 目的基因：用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物的基因。 主要指编码蛋白质的基因，还可以是具有调控作用的因子。 （2）获取目的基因的方法有哪些？ 利用PCR获取、从基因文库中获取、人工合成 （3）PCR：①全称？ 原理？ 操作环境？ 可以扩增mRNA吗？ 全称：聚合酶链式反应 原理：半保留复制 操作环境：体外（PCR扩增仪） 不能直接扩增 mRNA，但可以通过逆转录PCR(RT-PCR)先转为cDNA再扩增。 ②PCR的条件区别？ 模板（DNA的2条母链）、2种引物、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、控制温度。 PCR反应缓冲溶液中一般要添加哪种离子？作用是什么？ Mg2+，激活DNA聚合酶 ③什么是引物？ 两种引物序列一样吗？ 没有引物，DNA聚合酶还能起作用吗？ 引物：一段能与DNA母链碱基序列互补配对的短单链核酸。 不一样（分别与DNA的两条模板链互补）。 无引物，DNA聚合酶不能起作用，不能连接两个游离的脱氧核苷酸。 游离的脱氧核苷酸结合在引物哪端？ 结合在引物的3'端 ④PCR扩增目的基因，目的基因序列需要完全已知吗？ 不需要，只需要知道两端的序列，设计引物即可。 ⑤PCR一轮循环经过哪三步？ 所需温度各是多少？ 变性：超过90℃（解旋为单链） 复性：50℃左右（引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合） 延伸：72℃（合成子链） ⑥PCR的扩增产物如何鉴定？ 琼脂糖凝胶电泳 电泳的原理？ DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动。 在凝胶中DNA分子的迁移速率与什么有关？ 凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等。DNA分子越大迁移越慢。 ⑦PCR相关计算（见笔记） 几轮循环后能得到位于DNA中间位置的目的基因? 3轮循环后（2n-2n） ⑧PCR的主要应用？ 获取目的基因、扩增目的基因、检测目的基因 3.基因表达载体的构建： ①基因表达载体的作用？ 组成？ 作用：让目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，并且能表达和发挥功能。 组成：目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点 启动子：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动转录（位于基因上游，紧挨转录起始位点）。 终止子：终止转录（位于基因下游）。 ②目的基因一般插入到基因表达载体的哪个部位？ 什么是诱导型启动子？ 插入载体的启动子和终止子之间 诱导型启动子：在诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因表达的启动子。 ③区分启动子与起始密码子、终止子与终止密码子。 启动子、终止子在DNA上 起始密码子、终止密码子在mRNA上 4.将目的基因导入受体细胞： ①什么是转化？ 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 ②导入植物细胞的方法有？ 可以导入植物的什么细胞？ 农杆菌转化法、花粉管通道法 受精卵（正常生长发育）或体细胞（植物组织培养） ③农杆菌转化法：原理？ 主要侵染什么植物？ 两次拼接？ 两次导入？ 原理：农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 主要侵染双子叶植物和裸子植物。 两次拼接：质粒与目的基因拼接；T-DNA与植物染色体DNA拼接 两次导入：导入农杆菌（Ti质粒）；导入植物细胞（T-DNA） ④显微注射法的常用的受体细胞是？ 如果导入体细胞还应进行什么操作？ 动物的受精卵 核移植 ⑤Ca2+处理大肠杆菌后，处于什么状态？ 能吸收周围环境种DNA分子的生理状态。 基因工程操作中常用微生物作为受体细胞，原因是什么？ 微生物结构和遗传物质简单、生长繁殖快、对环境因素敏感、容易进行遗传物质操作。 ⑥真核生物的基因导入原核细胞能表达但蛋白质无活性，原因可能是？ 原核细胞缺乏内质网和高尔基体，无法对蛋白质进行加工。 5.目的基因的检测和鉴定： 目的基因的检测与鉴定包括哪两个水平？其中在分子水平的检测包括哪三项? 类型 检测内容 方法 分子水平的检测 受体DNA上是否插入了目的基因 PCR等技术 是否转录出了mRNA 是否翻译成蛋白质 抗原-抗体杂交 个体生物学水平的鉴定 个体是否具有相应性状 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 1 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $