2026届高三生物一轮复习3.2基因工程的基本操作程序默写题

第3章 基因工程

第2节 基因工程的基本操作程序

1.基因工程的四大步骤是什么？ 核心步骤是？

目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建（核心步骤）、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

2.目的基因的筛选与获取：

（1）什么是目的基因？主要是指什么基因？ 还可以是？

目的基因：用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物的基因。

主要指编码蛋白质的基因，还可以是具有调控作用的因子。

（2）获取目的基因的方法有哪些？ 

利用PCR获取、从基因文库中获取、人工合成

（3）PCR：①全称？ 原理？ 操作环境？  可以扩增mRNA吗？

全称：聚合酶链式反应    原理：半保留复制    操作环境：体外（PCR扩增仪） 

不能直接扩增 mRNA，但可以通过逆转录PCR(RT-PCR)先转为cDNA再扩增。

②PCR的条件区别？

模板（DNA的2条母链）、2种引物、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、控制温度。

PCR反应缓冲溶液中一般要添加哪种离子？作用是什么？

Mg2+，激活DNA聚合酶

③什么是引物？   两种引物序列一样吗？   没有引物，DNA聚合酶还能起作用吗？

    引物：一段能与DNA母链碱基序列互补配对的短单链核酸。

不一样（分别与DNA的两条模板链互补）。

无引物，DNA聚合酶不能起作用，不能连接两个游离的脱氧核苷酸。

游离的脱氧核苷酸结合在引物哪端？

结合在引物的3'端

④PCR扩增目的基因，目的基因序列需要完全已知吗？

不需要，只需要知道两端的序列，设计引物即可。

⑤PCR一轮循环经过哪三步？ 所需温度各是多少？ 

变性：超过90℃（解旋为单链）

复性：50℃左右（引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合）

延伸：72℃（合成子链）

⑥PCR的扩增产物如何鉴定？ 

琼脂糖凝胶电泳   

电泳的原理？

DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动。

在凝胶中DNA分子的迁移速率与什么有关？

凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等。DNA分子越大迁移越慢。

⑦PCR相关计算（见笔记）  几轮循环后能得到位于DNA中间位置的目的基因?

3轮循环后（2n-2n）

⑧PCR的主要应用？