2027届高中生物一轮复习讲义 高考共鸣点14 基因敲除及同源重组、融合基因与融合蛋白
2026-05-29
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普通
资源信息
| 学段 | 高中 |
| 学科 | 生物学 |
| 教材版本 | 高中生物学人教版选择性必修3 生物技术与工程 |
| 年级 | 高三 |
| 章节 | 第2节 基因工程的基本操作程序 |
| 类型 | 教案-讲义 |
| 知识点 | 基因工程的基本操作程序 |
| 使用场景 | 高考复习-一轮复习 |
| 学年 | 2027-2028 |
| 地区(省份) | 全国 |
| 地区(市) | - |
| 地区(区县) | - |
| 文件格式 | DOCX |
| 文件大小 | 1.19 MB |
| 发布时间 | 2026-05-29 |
| 更新时间 | 2026-05-29 |
| 作者 | 匿名 |
| 品牌系列 | - |
| 审核时间 | 2026-05-29 |
| 下载链接 | https://m.zxxk.com/soft/58110492.html |
| 价格 | 1.00储值(1储值=1元) |
| 来源 | 学科网 |
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摘要:
该高中生物学高考复习讲义聚焦基因敲除及同源重组、融合基因与融合蛋白两大高考核心热点,按原理阐释、技术应用、真题解析的逻辑架构整合考点,通过考点梳理构建知识网络,方法指导(如PCR扩增、同源重组双交换原理)突破技术难点,真题训练(安徽卷、福建卷等)强化应用能力,体现复习的系统性与针对性。
资料以高考真题为载体设计探究实践活动,如通过基因敲除实验设计题培养科学思维,利用融合蛋白构建案例提升探究实践能力,分层设置精准强化练习实现难点突破。有限时间内聚焦高频考点,助力学生形成基因工程问题解决思路,为教师把控复习节奏、提升学生应考能力提供有效支撑。
内容正文:
高考共鸣点14 基因敲除及同源重组、融合基因与融合蛋白
热点1 基因敲除及同源重组构建基因表达载体
1.同源重组构建表达载体
(1)减数分裂Ⅰ非姐妹染色单体的交换
(2)利用同源重组双交换实现基因敲除
2.基因敲除技术——应用Cre-LoxP系统进行基因敲除
(1)Cre-loxP系统的组成
(2)Cre-loxP系统的作用方式
[例] (2025·安徽卷,20)稻瘟病是一种真菌病害,水稻叶片某些内生放线菌对该致病菌有抑制作用。科研小组分离筛选出内生放线菌,并开展了相关研究。回答下列问题。
(1)采集有病斑的水稻叶片,经表面消毒、研磨处理,制备研磨液。此后,采用 (填方法)将研磨液接种于不同的选择培养基,分别置于不同温度下培养,目的是
__________________________________________________________________。
(2)经筛选获得一株内生放线菌,该菌株高效合成铁载体小分子,能辅助内生放线菌吸收铁离子。R基因是合成铁载体的关键基因之一。科研小组构建R基因敲除株,探究铁载体的功能。主要步骤如下:首先克隆R基因的上游片段R-U和下游片段R-D;然后构建重组质粒;最后利用重组质粒和内生放线菌DNA片段中同源区段可发生交换的原理,对目标基因进行敲除。如图1所示。
说明:用图1中的引物1和2进行PCR扩增。
采用PCR技术鉴定R基因的敲除结果。PCR通过变性、复性和延伸三步,反复循环,可实现基因片段的 。R基因敲除过程中,可发生多种形式的同源区段交换,PCR检测结果如图2所示,其中R基因敲除株为菌落 (填序号),出现菌落④的可能原因是____________________________________。
(3)内生放线菌和稻瘟病致病菌的生长均需要铁元素。科研小组推测该内生放线菌通过对铁离子的竞争性利用,从而抑制稻瘟病致病菌生长。设计实验验证该推测,简要写出实验思路。
__________________________________________________________________。
答案 (1)稀释涂布平板法 筛选出不同条件下生长的内生放线菌 (2)快速扩增 ② 只有R-U或R-D一处发生了同源重组,导致整个重组质粒整合到了内生放线菌的基因组中 (3)将野生型内生放线菌、R基因敲除内生放线菌分别与稻瘟病致病菌混合培养在含铁培养液中,统计培养液中铁离子含量及两种菌的数量变化
解析 (1)可采用稀释涂布平板法将研磨液接种于不同的选择培养基,并分别置于不同温度下培养的目的是筛选出不同条件下生长的内生放线菌。(2)PCR的实质是体外的DNA复制,所以PCR 可以实现基因片段的快速扩增。由图1可知,未发生同源重组前,在引物1、2的作用下可扩增出的片段为3 000 bp,故菌落①③未发生同源重组。若R基因被敲除,引物1和引物2只能扩增出R-U和R-D片段,长度为1 000 bp,故菌落②为发生同源重组后的R基因敲除株。根据题干信息,R基因敲除过程中可发生多种形式的同源区段交换,菌落④的大小约为7 000 bp,则可以推测在同源重组过程中,只发生了R-U或R-D一处同源重组,导致整个重组质粒片段接入。(3)若要验证内生放线菌通过与稻瘟病致病菌竞争性利用铁离子抑制稻瘟病致病菌的生长,则实验的自变量应为内生放线菌是否能利用培养液中的铁离子,即R基因的有无,因变量应该为稻瘟病致病菌的生长情况,最后可观测两种菌的数量和培养液中的铁离子含量变化情况来验证实验结论。所以实验可分为两组,甲组:将适量的含R基因的内生放线菌和稻瘟病致病菌混合培养在含铁的培养液中;乙组:将等量的R基因敲除内生放线菌与稻瘟病致病菌混合培养在相同的含铁培养液中;将两组培养液放在适宜的条件下,间隔合适时间记录每组培养液中铁离子含量变化和两种菌的数量变化。
热点2 融合基因与融合蛋白
1.融合基因与融合蛋白
2.报告基因技术
[例1] (2025·福建卷,20)为建立一种效率高、毒性小的基因敲除系统,将图1所示的质粒1和质粒2导入大肠杆菌,质粒2中的sgRNA基因依据目的基因设计,其转录的短链RNA通过与目的基因碱基互补配对,与Cas9蛋白共同作用,敲除大肠杆菌基因组中的目的基因。
回答下列问题:
(1)大肠杆菌LacZ基因的表达产物可催化X-gal生成蓝色物质从而使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色。将质粒1与含LacZ基因相应sgRNA基因的质粒2同时转化到大肠杆菌中,涂布到含抗生素 的平板(含有X-gal)上进行培养。若长出的是 色菌落则为LacZ基因被敲除的大肠杆菌。
(2)Cas9基因的表达量会影响敲除效率,但其过量表达会对大肠杆菌有毒。为评估毒性和敲除效率,用5种启动子(A、B、C、D和E)启动Cas9的转录,相应检测结果如图2所示。结果表明,启动子 对细胞毒性最小;综合考量毒性和敲除效率,应选用启动子 用于该系统。
(3)含有质粒的大肠杆菌在无抗生素选择压力下培养,少数子代细胞会丢失质粒。结合质粒1和质粒2的特点,在成功敲除LacZ基因的大肠杆菌中消除质粒1和质粒2,实验流程如图3所示。
①培养12小时后,图3试管1中大部分的大肠杆菌 (填选项)。
A.含质粒1和质粒2 B.只含质粒1
C.只含质粒2 D.无质粒1和质粒2
②若要从图3平板上筛出质粒1和质粒2均被消除的大肠杆菌,简要写出实验思路和预期结果:________________________________________________
__________________________________________________________________。
答案 (1)卡那霉素和四环素 白 (2)C A
(3)①B ②将同一菌落的大肠杆菌分别用含卡那霉素和四环素培养基进行培养,两者均不生长则为筛出的大肠杆菌
解析 (1)质粒2中含有与LacZ基因对应的sgRNA基因,其转录出来的短链RNA与目的基因(LacZ基因)发生碱基互补配对,与Cas9蛋白共同作用,敲除大肠杆菌LacZ基因,因而不能使X-gal分解产生蓝色物质,将质粒1和质粒2导入大肠杆菌,因此在含四环素和卡那霉素且含X-gal的培养基中,筛选白色的菌落即为LacZ基因成功敲除的菌落。(2)Cas9的表达量过高对大肠杆菌产生毒性,使其数量减少,结合图2可知,启动子C对应的菌落数最高,因此启动子C对细胞毒性最小。结合菌落数和敲除率可知,启动子A的菌落数和敲除率均较高,因此综合考虑,应选择启动子A作用于该系统。(3)①质粒2为温度敏感型质粒,在37 ℃下不能进行复制,培养12小时后,试管1中大部分大肠杆菌为只有质粒1,B正确,A、C、D错误。 ②试管2加入蔗糖,质粒1中的SacB基因表达的SacB蛋白能将蔗糖转化为有毒化合物,抑制大肠杆菌的生长繁殖,因此试管2中含质粒的大肠杆菌较少,为进一步筛选质粒1和质粒2均消除成功的大肠杆菌,实验设计思路和预测实验结果为:将同一菌落的大肠杆菌分别用含卡那霉素和四环素培养基进行培养,在无抗生素平板上可以生长,在含抗生素平板上均不生长的则为筛出的大肠杆菌。
[例2] (2026·广东汕头调研)人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点,该位点结合BCL11A蛋白后,γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列,解除对γ基因表达的抑制,可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段,将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测,以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。
(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达,需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知,在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是 ,在R末端添加的序列所对应的限制酶是 。本实验中,从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要 种酶。
(2)将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞,成功转化后,含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白,受体细胞有荧光;含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是
__________________________________________________________________。
(3)向培养液中添加适量的雌激素,含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光,而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列,据此结果可推测,BCL11A蛋白结合位点位于_________________________________________
__________________________________________________________________,
理由是___________________________________________________________
__________________________________________________________________。
答案 (1)Sal Ⅰ EcoR Ⅰ 6 (2)F7与R扩增产物不含完整的启动子,荧光蛋白基因不表达 (3)引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上 根据有无荧光情况判断,F1~F4与R扩增产物上均有BCL11A蛋白结合位点,因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游;F5~F6与R扩增产物上均无BCL11A蛋白结合位点,可知结合位点位于F5所对应调控序列的上游。所以,结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上
解析 (1)据图可知,荧光蛋白基因的启动子在右侧,右侧有三种限制酶识别位点,用EcoR Ⅰ会破坏荧光蛋白基因,所以为了定向连接,需用两种限制酶,即Xho Ⅰ和Mun Ⅰ。据图可知,扩增后的产物F1~F7末端添加的序列应与Xho Ⅰ切割的末端相连,R末端添加的序列应与Mun Ⅰ切割的末端相连,由于调控序列及启动子中含有Xho Ⅰ识别序列和切割位点,因此用Sal Ⅰ可切割出相同的黏性末端,所以在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是Sal Ⅰ;同理,调控序列及启动子中含有Mun Ⅰ识别序列和切割位点,因此用EcoR Ⅰ可切割出相同的黏性末端,所以在R末端添加的序列所对应的限制酶是EcoR Ⅰ。本实验中,需用Xho Ⅰ和Mun Ⅰ切割载体,用Sal Ⅰ和EcoR Ⅰ切割扩增产物,本实验还需要耐高温的DNA聚合酶和DNA连接酶,共需6种酶。(2)含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白,受体细胞有荧光,说明含F1~F6与R扩增产物中含有启动子;而F7与R扩增产物中不含完整的启动子,所以荧光蛋白基因未表达,受体细胞无荧光。(3)向培养液中添加适量的雌激素,雌激素能诱导P发挥作用,使BCL11A基因表达,构建的载体含有BCL11A基因,导入构建载体的受体细胞能合成BCL11A蛋白。含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光,说明F1~F4与R扩增产物上均有BCL11A蛋白的结合位点,因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游;而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光,说明F5~F6与R扩增产物上均无BCL11A蛋白结合位点,因此结合位点位于F5所对应调控序列的上游。由此可知,BCL11A蛋白结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上。
强化练5 基因敲除及同源重组、融合基因与融合蛋白
(时间:30分钟 分值:45分)
【精准强化】
1.(2025·黑吉辽蒙卷,25)香树脂醇具有抗炎等功效,从植物中提取难度大、产率低。通过在酵母菌中表达外源香树脂醇合酶基因N,可高效生产香树脂醇。回答下列问题。
(1)可从 中查询基因N的编码序列,设计特定引物。如图1所示,a链为转录模板链,为保证基因N与质粒pYL正确连接,需在引物1和引物2的5′端分别引入 和 限制酶识别序列。PCR扩增基因N,特异性酶切后,利用 连接DNA片段,构建重组质粒,大小约9.5 kb(kb为千碱基对),假设构建重组质粒前后,质粒pYL对应部分大小基本不变。
(2)进一步筛选构建的质粒,以1~4号菌株中提取的质粒为模板,使用引物1和引物2进行PCR扩增,电泳PCR产物,结果如图2。在第5组的PCR反应中,使用无菌水代替实验组的模板DNA,目的是检验PCR反应中是否有 的污染。初步判断实验组 (从“1~4”中选填)的质粒中成功插入了基因N,理由是___________________________________________________________
__________________________________________________________________。
(3)为提高香树脂醇合酶催化效率,将编码第240位脯氨酸或第243位苯丙氨酸的碱基序列替换为编码丙氨酸的碱基序列,丙氨酸的密码子有GCA等。a是诱变第240位脯氨酸编码序列的引物(GCA为诱变序列),b、c、d其中一条是诱变第243位苯丙氨酸的引物,其配对模板与a的配对模板相同。据此分析,丙氨酸的密码子除GCA外,还有 。
a:5′-…GCA/CCC/GAG/TTC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC…-3′
b:5′-…GAA/CTG/TGG/GAC/ACC/CTG/AAC/TAC/TTC/TCT/GAG…-3′
c:5′-…GCC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC/CCC/TAC/CAC…-3′
d:5′-…GAT/AAT/AAG/ATC/CGA/GAG/AAG/GCC/ATG/CGA/AAG…-3′
(4)进一步检测转基因酵母菌发酵得到的 含量并进行比较,可以选出最优的香树脂醇合酶基因的改造方案。
答案 (1)基因序列数据库(或GenBank或DNA序列数据库) Xho Ⅰ Xba Ⅰ DNA连接酶 (2)外源DNA(或外源基因) 1 基因N大小为重组质粒大小和质粒pYL大小的差值,约为2.3 kb,对应实验组1的电泳条带(或实验组1电泳条带大小加质粒pYL大小约等于重组质粒大小) (3)GCC (4)香树脂醇
解析 (1)可从基因序列数据库中查询基因N的编码序列,设计特定引物。分析题图1可知,为保证基因N与质粒pYL正确连接,需在引物1和引物2的5′端分别引入Xho Ⅰ和Xba Ⅰ限制酶识别序列。PCR扩增基因N,特异性酶切后,利用DNA连接酶连接DNA片段。(2)在第5组的PCR反应中,使用无菌水代替实验组的模板DNA,目的是检验PCR反应中是否有外源DNA的污染。 质粒pYL大小为7.2 kb,重组质粒大小约9.5 kb,假设构建重组质粒前后,质粒pYL对应部分大小基本不变,基因N大小为二者的差值,约为2.3 kb,结合图2电泳结果可知,实验组1的电泳条带大小约为2 300 bp,说明实验组1的质粒中成功插入了基因N。(3)a是诱变第240位脯氨酸编码序列替换为丙氨酸编码序列的引物(GCA为诱变序列,与丙氨酸的密码子序列相同),b、c、d其中一条是诱变第243位苯丙氨酸编码序列替换为丙氨酸编码序列的引物,其配对模板与a的配对模板相同,据此分析,除编码第243位苯丙氨酸的碱基序列TTC替换为诱变序列,与丙氨酸的密码子序列相同,其后的编码序列应该与a相同,为TGG/CTG/TTT……,所以该引物是c,其中GCC为第243位诱变序列,故丙氨酸的密码子还可以是GCC。(4)本题旨在通过在酵母菌中表达外源香树脂醇合酶基因N并进行改造,提高香树脂醇合酶的催化效率,高效生产香树脂醇,所以检测转基因酵母菌发酵产物香树脂醇的含量并进行比较,可以选出香树脂醇合酶催化效率较高的香树脂醇合酶基因改造方案。
2.(2025·河北卷,22)为治理水体中对生物有毒害的镉污染,研究者构建了分泌信号肽SP7、镉离子结合蛋白CADR、定位于细胞壁的蛋白GP1和黄色荧光蛋白YFP编码序列融合表达的载体,转入单细胞衣藻,实现CADR大量合成、分泌并定位于细胞壁,以吸附水体中的镉离子。
回答下列问题:
(1)在DNA聚合酶、引物、模板DNA和脱氧核苷酸中,随着PCR反应进行,分子数量逐渐减少的是 和 。模板与引物在PCR反应的 阶段开始结合。PCR中使用的DNA聚合酶需耐高温,其原因为__________________________________________________________________。
(2)载体中可用的酶切位点信息和拟构建载体的部分结构如图1所示。在将CADR、GP1和YFP基因逐个构建到载体时,为避免错误连接,需向以上三个基因的两端分别添加限制酶识别序列,其中GP1两端应添加 (填两种限制酶)的识别序列。用DNA连接酶连接时,可催化载体和目的基因之间形成 键。
(3)若在荧光显微镜下观察到转基因衣藻表现为 ,初步表明融合蛋白表达成功。将转基因衣藻和野生型衣藻置于含镉离子的培养液中培养一段时间后,若转基因衣藻细胞壁比野生型衣藻细胞壁的镉离子含量 ,则表明融合蛋白能结合镉离子。
(4)将转基因衣藻和野生型衣藻在不同镉离子浓度的培养液中培养6天后,检测细胞密度,结果见图2。转基因衣藻在含有不同浓度镉离子的培养液中生长均优于野生型衣藻的原因可能是______________________________________________
__________________________________________________________________。
240 μmol·L-1镉离子浓度下,转基因衣藻和野生型衣藻生长均被明显抑制的原因可能是____________________________________________________________。
注:镉离子对渗透压的影响忽略不计。
(5)转基因衣藻可用于水体镉污染治理,与施加化学药物法相比,能体现出其环境治理优势的两个特性是 和 。(填标号)
①衣藻作为生物材料在水体中可自我繁殖
②衣藻生长速率受镉离子浓度影响
③衣藻可吸收水体中能引起富营养化的物质
④衣藻吸附的镉可沿食物链传递
答案 (1)引物 脱氧核苷酸 复性 PCR过程变性、延伸需要的温度较高,不耐高温的DNA聚合酶在高温下会变性失活 (2)Sma Ⅰ和EcoR Ⅰ 磷酸二酯 (3)发出黄色荧光 高 (4)转基因衣藻细胞壁上的融合蛋白可吸附培养液中的镉离子,减小了镉离子对细胞的毒害 培养液中的镉离子浓度过高,融合蛋白的吸附能力有限,镉离子对转基因衣藻和野生型衣藻均造成了较强的毒害 (5)① ③
解析 (1)PCR过程中,每进行一轮的扩增,都需要消耗引物和作为原料的脱氧核苷酸,所以随着PCR反应进行,引物和脱氧核苷酸的数量逐渐减少,可作为模板的DNA 会越来越多,DNA聚合酶的数量基本保持不变。PCR反应中,变性、延伸过程温度较高,DNA聚合酶的化学本质为蛋白质,为防止高温导致蛋白质变性失活,所以PCR过程中需要用耐高温的DNA聚合酶。(2)分析图示中几种限制酶可知,Nhe Ⅰ与Xba Ⅰ酶切后产生的黏性末端相同,为了防止载体和目的基因出现自身环化和二者之间反向连接,不能同时在目的基因两端添加这两种酶的识别序列。根据题图中几种基因和限制酶的顺序可得出目的基因与对应酶切位点的位置关系,如图所示,即GP1基因两端应分别添加Sma Ⅰ和EcoR Ⅰ的识别序列。
DNA连接酶催化载体和目的基因之间形成磷酸二酯键,完成DNA片段的连接。(3)由题干信息可知,该转基因体系构建了SP7、CADR、GP1、YFP融合蛋白表达载体,其中黄色荧光蛋白基因(YFP)可看作标记基因。若在荧光显微镜下观察到转基因衣藻发出黄色荧光,说明YFP表达成功,即融合蛋白表达成功。 将两种衣藻置于含镉离子的培养液中培养一段时间后,若转基因衣藻细胞壁的镉离子含量高于野生型衣藻,则说明融合蛋白可结合镉离子。 (4)分析题图2可知,镉离子浓度为0时,两组的细胞密度相对值差异不大,镉离子浓度增大后,两组的衣藻数量均出现不同程度的减少,但转基因衣藻的细胞密度相对值均大于野生型衣藻,可能是转基因衣藻细胞壁上的融合蛋白可吸附培养液中的镉离子,减小了镉离子对细胞的毒害。当外界镉离子浓度为240 μmol·L-1时,转基因衣藻的生长也被明显抑制,原因可能是培养液中的镉离子浓度过高,融合蛋白的吸附能力有限,镉离子对转基因衣藻也造成了较强的毒害。 (5)与施加化学药物相比,转基因衣藻在环境治理上的优势有衣藻作为生物材料在水体中可进行自我繁殖,免去了反复施加药物的危害和麻烦;同时衣藻可吸收水体中的N、P等元素,在一定程度上减轻了水体富营养化。衣藻生长速率受镉离子浓度影响和衣藻吸附的镉可沿食物链传递不是其在环境治理上的优势。
3.(2026·湖北黄石二中质检)透明质酸是一种应用广泛的粘性多糖。研究者选择了含木糖诱导型启动子的p质粒改造枯草芽孢杆菌,通过添加诱导型启动子来控制基因的表达,从而协调菌体生长与产物生产之间的关系。回答下列问题:
(1)已知透明质酸合成酶基因H以a链为转录模板链,为了使图1中酶切后的H基因与p质粒正确连接,p质粒位点1所对应的限制酶是 ,酶切后加入 酶使它们形成重组质粒。
(2)在培养枯草芽孢杆菌的LB培养基中加入蛋白胨、酵母提取物、NaCl、琼脂、去离子水等,根据物理状态,该培养基为 培养基,常用 法对该培养基灭菌。
(3)为筛选出含重组质粒p的枯草芽孢杆菌,在含 的培养基上筛选;将筛选出的菌株进行工业生产时,若要获得大量的透明质酸,培养基中需要添加 。
(4)如图2为研究者将重组质粒进行改造,并利用同源区段进行 的方法将H基因插入到枯草芽孢杆菌的基因组mpr位点,从而获得整合型枯草芽孢杆菌的过程图。已知导入受体细胞的外源基因拷贝数过大会导致基因不稳定、转化效率低,与导入重组质粒的枯草芽孢杆菌相比,整合型枯草芽孢杆菌的优势为 。
答案 (1)B酶 DNA连接 (2)固体 高压蒸汽灭菌 (3)四环素 木糖 (4)互换 导入的基因较稳定,转化效率较高
解析 (1)透明质酸合成酶基因H以a链为转录模板链,转录时mRNA自身的延伸方向为5′→3′,即转录是从DNA链的3′端开始,再结合质粒中启动子的方向可知,图1中p质粒位点1和2所对应的限制酶分别是B酶和A酶。DNA连接酶可将两个DNA片段连接起来。(2)根据物理状态不同,培养基可分为固体培养基和液体培养基,该培养基含有琼脂,琼脂是常见的凝固剂,因此是固体培养基;培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌。(3)由图可知,p质粒含有四环素抗性基因,因此可在含四环素的培养基上筛选含重组质粒p的枯草芽孢杆菌。筛选出的枯草芽孢杆菌存在木糖诱导型启动子,若要生产大量的透明质酸,培养基中需要添加木糖。(4)由图示可知,改造后的重组质粒中的mpr上下游中间的基因与枯草芽孢杆菌的基因组中的mpr上下游中间的基因发生互换,得到了整合型枯草芽孢杆菌的基因组。与导入重组质粒的枯草芽孢杆菌相比,整合型枯草芽孢杆菌中含有的外源基因拷贝数小,相对比较稳定,转化效率高。
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