精品解析：2025-2026学年吉林长春市东北师范大学附中高二年级下学期期中生物试卷

2025-2026学年下学期 东北师大附中（生物）科试卷 高（二）年级期中考试 注意事项： 1.答题前，考生须将自己的姓名、班级、考场/座位号填写在答题卡指定位置上，并粘贴条形码。 2.回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。 3.回答非选择题时，请使用0.5毫米黑色字迹签字笔将答案写在答题卡各题目的答题区域内，超出答题区域或在草稿纸、本试题卷上书写的答案无效。 4.保持卡面清洁，不要折叠、不要弄皱、弄破，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。 一、选择题：本题共30小题，每小题1分，共30分。在每小题给出的四个选项中，只有一项符合题目要求。 1. 下列关于果酒和果醋制作的叙述，正确的是（　　） A. 制作葡萄酒前，需反复冲洗葡萄以避免杂菌污染 B. 将葡萄汁装入发酵瓶要留有大约1/3的空间 C. 为保证无氧环境，果酒制作过程中不能拧松瓶盖 D. 在O2和糖源充足时，醋酸菌将乙醇先转化为乙醛，再将乙醛转化为醋酸 【答案】B 【解析】 【详解】A、制作葡萄酒所需的菌种主要是附着在葡萄皮上的野生酵母菌，反复冲洗葡萄会导致酵母菌大量流失，影响发酵，A错误； B、将葡萄汁装入发酵瓶留大约1/3的空间，既能为初期酵母菌有氧呼吸提供氧气，使其大量增殖，又能防止发酵过程中产生的CO2导致发酵液溢出，B正确； C、果酒制作过程中酵母菌无氧呼吸会产生CO2，若不及时拧松瓶盖释放气体，会导致瓶内压强过大引发危险，需要定时拧松瓶盖排气，C错误； D、在O2和糖源充足时，醋酸菌直接将葡萄糖分解为醋酸；只有糖源不足时，醋酸菌才会将乙醇先转化为乙醛，再将乙醛转化为醋酸，D错误。 故选B。 2. 腐乳是我国古代劳动人民通过微生物发酵制作而成的一种大豆食品。苏州的腐乳呈黄白色，口味细腻；北京的腐乳呈红色，略带甜味；四川的腐乳则香辣油润。下列有关叙述错误的是（　　） A. 各地腐乳的色泽风味各不相同可能与腌制过程中添加的香辛料不同有关 B. 多种微生物参与了豆腐的发酵，起主要作用的毛霉属于原核生物 C. 现代腐乳生产中，人工接种的毛霉菌种可从自然界中筛选，也可通过诱变育种获得 D. 腐乳中的蛋白质可被微生物产生的蛋白酶分解成小分子的肽和氨基酸 【答案】B 【解析】 【详解】A、腐乳腌制过程中添加的香辛料、其他调味辅料（如红曲等）会直接影响腐乳的色泽和风味，不同地区添加的辅料存在差异，因此各地腐乳的色泽风味各不相同，A正确； B、腐乳发酵过程中起主要作用的微生物是毛霉，毛霉属于真菌，有以核膜为界限的细胞核，属于真核生物，B错误； C、人工接种使用的优良毛霉菌种，既可以从自然界的腐生环境中筛选获得，也可以通过诱变育种的方式获得发酵性能更优的品种，C正确； D、腐乳制作过程中，毛霉等微生物会产生蛋白酶，蛋白酶可将豆腐中的蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，提升腐乳的营养价值和风味，D正确。 3. 下列关于泡菜制作的叙述，错误的是（　　） A. 泡菜的制作过程主要是由乳酸菌参与发酵，该菌属于厌氧菌 B. 用水密封发酵坛的主要目的是保持无氧条件 C. 泡菜制作的过程中，乳酸菌在产生乳酸的同时还会产生亚硝酸盐 D. 泡菜腌制方法、腌制时间长短等都会影响亚硝酸盐的含量 【答案】C 【解析】 【详解】A、泡菜制作的核心发酵菌种是乳酸菌，乳酸菌属于异养厌氧型微生物，仅能在无氧条件下进行乳酸发酵，A正确； B、用水密封发酵坛的作用是隔绝外界空气，为乳酸菌发酵创造无氧环境，同时抑制好氧杂菌的生长繁殖，B正确； C、乳酸菌无氧呼吸的代谢产物只有乳酸，亚硝酸盐不是乳酸菌的代谢产物，是发酵过程中硝酸盐还原菌等其他微生物将蔬菜中的硝酸盐还原形成的，C错误； D、泡菜的腌制方法、腌制时间、腌制温度、食盐添加量等条件都会影响微生物的代谢活动，进而影响亚硝酸盐的含量，D正确。 4. 获得纯净微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下列关于无菌操作的叙述，正确的是（　　） A. 牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味 B. 在接种箱或超净工作台的使用过程中，可用紫外线照射30min来进行消毒 C. 灼烧灭菌的对象可以是金属用具和试管口瓶口，在酒精灯火焰充分燃烧层进行 D. 若培养皿盖和培养皿底之间溅有培养基，必须将该处培养基去除后再用来培养微生物 【答案】C 【解析】 【详解】A、巴氏消毒法采用较低温度处理，仅能杀死牛奶中的绝大多数有害微生物，无法杀死芽孢、孢子等抗性结构，不能杀灭全部微生物，A错误； B、紫外线照射消毒需在接种箱或超净工作台使用前进行，使用过程中开启紫外线会杀灭目标接种物，还会损伤操作人员，B错误； C、酒精灯充分燃烧层（外焰）温度最高，灼烧灭菌适用于金属接种工具、试管口、瓶口等耐高温物品，可彻底杀灭杂菌，C正确； D、培养基溅到培养皿盖和底的缝隙后，该区域极易被杂菌污染，即使去除该处培养基也无法保证无菌环境，该培养皿不能再用于微生物培养，D错误。 5. 高压蒸汽条件下持续20分钟会杀死芽孢，因此无菌操作中常利用非致病性的嗜热脂肪杆菌的芽孢作为高压蒸汽灭菌的指示菌。使用时将其芽孢菌片放入待灭菌物品中，灭菌后将菌片浸没在含酸碱指示剂的培养液中；芽孢萌发繁殖会降低 pH，使含指示剂的培养液由紫变黄，同时需设置未灭菌的阳性对照组(PC)和不含菌片的阴性对照组(NC)。下列叙述错误的是（ ） A. 配制好的培养基需先调pH后置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌 B. 设置 NC组的作用是可以排除培养液自身 pH 变化对实验结果的干扰 C. 若实验组培养液为紫色，NC组和PC组为黄色，则灭菌达到预期效果 D. 若PC组培养液不变黄，说明芽孢可能已失活，需重新准备菌片实验 【答案】C 【解析】 【详解】A、配制培养基的标准流程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板，先调pH再进行高压蒸汽灭菌，可避免灭菌后调pH时引入杂菌污染，操作正确，A正确； B、NC组为不含菌片的阴性对照组，除无芽孢菌片外其余培养条件与实验组完全一致，可排除培养液自身pH发生变化对实验结果的干扰，保证实验结果是芽孢繁殖导致的，B正确； C、NC组不含芽孢菌片，正常情况下不会有微生物繁殖降低pH，培养液应保持紫色，若NC组为黄色说明培养液本身被污染或可自发变酸，实验结果无效；仅当实验组为紫色、PC组为黄色、NC组为紫色时，才能说明灭菌达到预期效果，C错误； D、PC组为未灭菌的阳性对照组，正常情况下保留活性的芽孢会萌发繁殖使培养液变黄，若PC组不变黄说明实验所用芽孢本身已失活，实验材料失效，需重新准备菌片进行实验，D正确。 6. 下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（　　） A. 操作②到④的过程中，接种环至少需要进行6次灼烧灭菌处理 B. 配制①中的培养基培养霉菌时，一般将培养基调至弱碱性后再进行湿热灭菌 C. 接种结束后，将④倒置培养，皿底上标注菌种及接种日期等信息 D. 通过平板划线法可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 【答案】B 【解析】 【详解】A、平板划线法操作中，每次划线前需灼烧接种环杀灭上次残留的菌种，划线结束后还需灼烧接种环避免污染环境。图中④共划5个区域，接种前灼烧1次，4次划线前各灼烧1次，划线结束后灼烧1次，共6次灼烧灭菌，A正确； B、霉菌适宜在酸性环境中生长，培养霉菌时应将培养基调至酸性，而非弱碱性，B错误； C、接种结束后将平板倒置培养，可避免皿盖的冷凝水滴落污染培养基，标注菌种、接种日期等信息时应标注在皿底（倒置时皿底朝上，便于识别），C正确； D、平板划线法通过多次连续划线，可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，最终获得单个菌落，D正确。 7. 测定样品中所含单细胞微生物的数量可用显微镜计数法。将某大肠杆菌培养液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色后，用细菌计数板（规格为1mm×1mm×0.02mm）进行计数，观察到一个中格的菌体数如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A. 若图示中格内大肠杆菌数量代表所有中格大肠杆菌数量的平均数，则培养液中大肠杆菌的活菌密度为1.125×1010个·mL-1 B. 细菌计数板广泛适用于细菌、酵母菌和霉菌等微生物的数量测定 C. 台盼蓝染色鉴别细胞死活的原理是细胞膜具有选择透过性 D. 细菌计数板使用时，应先在计数室上方加盖玻片，再沿凹槽边缘滴加样液 【答案】C 【解析】 【详解】A、血细胞计数板的体积为1mm×1mm×0.02mm=0.02mm3=2×10-5mL。图中一个中格的16小格中的大肠杆菌数总共有12个，其中3个被台盼蓝染色，说明为死细胞，不计数，则可计数大肠杆菌为9个，原1mL培养液中的大肠杆菌数=每个小格中的平均大肠杆菌数×400个小格×2（等体积染色相当于稀释两倍）×大肠杆菌培养液稀释倍数÷2×10-5，则该1mL样品中大肠杆菌数约=9÷16×400×2×1000÷ 2×10-5=2.25×1010个·mL-1，A错误； B、酵母菌菌体较大，应选用血细胞计数板测定酵母菌的数量，霉菌是多细胞丝状真菌，也无法用该方法测定数量，B错误； C、活细胞的细胞膜具有选择透过性，活细胞不能被台盼蓝着色，死细胞被台盼蓝染成蓝色，即台盼蓝染色鉴别细胞死活的原理是细胞膜具有选择透过性，C正确； D、使用细菌计数板时，应先放置盖玻片，再在盖玻片边缘滴加样液，使样液自行渗入计数室，D错误。 8. 黄葛树的叶子、果实（榕果）和枝干含有独特的次生代谢产物酚类化合物。为探究校内黄葛树下土壤中分解酚类化合物的细菌数量，进行了相关实验。下列分析正确的是（　　） A. 甲组中a培养基上的菌落连成一片，可能是稀释度过低造成的 B. 以乙组计数，5g土壤中酚类分解菌的估算数目是1.4×109个 C. 土壤样液先在锥形瓶内进行富集培养，再等比稀释后涂布计数 D. 以酚类为唯一碳源的培养基上生长的细菌都能合成酚类降解酶 【答案】B 【解析】 【详解】A、在微生物计数的稀释涂布平板法中，若稀释度过低，培养基上的菌落会因数量过多而连成一片。甲组中a培养基上的菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的，菌液未分散开，A错误； B、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，乙组中三个平板的菌落数分别为275、285、280，均在30-300之间，应以乙组计数。计算5g土壤中含分解酚类化合物细菌的估算数目时，应根据公式：每克样品中的菌株数 = （C÷V）×M（其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数）。5g该土壤含分解酚类化合物的细菌数是（275+285+280）÷3÷0.1×105×5=1.4×109，B正确； C、本实验目的是探究校内黄葛树下土壤中分解酚类化合物的细菌数量，若先在锥形瓶内进行富集培养，会使细菌数量增多，导致计数结果偏大，不能准确反映土壤中原有细菌数量，C错误； D、以酚类为唯一碳源的培养基上生长的细菌，可能通过分泌酚类降解酶分解酚类获取碳源，也可能通过共生、利用其他细菌代谢产物等方式生长，并非都能合成酚类降解酶，D错误。 9. 养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ） A. ①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B. ②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C. ③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D. 粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 【答案】C 【解析】 【分析】由图可知，所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂。图中②筛选的是不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验。 【详解】A、平板划线法无需稀释，A错误； B、由图可知，②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误； C、所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙，C正确； D、由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产生NH3，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。 故选C。 10. 与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高，下列关于发酵工程的说法错误的是（　　） A. 发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、产生的酶及菌体本身等 B. 由黑曲霉发酵得到的柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂 C. 利用酵母菌等发酵生产的单细胞蛋白属于分泌蛋白，可制成微生物饲料 D. 微生物肥料可以改良土壤结构，有的还可以抑制土壤中病原微生物的生长 【答案】C 【解析】 【详解】A、发酵工程的产品主要包含三类，分别是微生物的代谢物、微生物合成的酶以及菌体本身，A正确； B、黑曲霉是工业发酵生产柠檬酸的常用菌种，柠檬酸是应用广泛的食品酸度调节剂，B正确； C、单细胞蛋白指发酵获得的微生物菌体本身，并非微生物分泌到胞外的分泌蛋白，可直接制成微生物饲料，C错误； D、微生物肥料中的有益微生物可改善土壤理化性质、改良土壤结构，部分有益微生物可通过种间竞争等作用抑制土壤中病原微生物的生长，D正确。 11. 下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（　　） A. 用自然生长的茎进行组培消毒时，要兼顾消毒效果和植物的耐受性 B. 培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并避免瓶内外的气体交换 C. 组织培养的培养基中含有营养物质，因此整个过程不需要光照 D. 诱导形成试管苗后，打开封口膜或瓶盖后，直接将试管苗移栽入土 【答案】A 【解析】 【详解】A、自然生长的茎作为外植体消毒时，若消毒力度过强会损伤植物细胞导致外植体死亡，消毒力度不足则无法达到除菌效果，因此需兼顾消毒效果和植物的耐受性，A正确； B、培养瓶的专用封口膜具有透气特性，可在阻挡外界杂菌侵入的同时允许瓶内外进行气体交换，满足组培细胞的有氧呼吸需求，并非避免气体交换，B错误； C、组织培养的脱分化阶段可避光处理，但再分化形成芽、叶的过程需要光照，以促进叶绿素合成和光合作用，因此整个过程并非都不需要光照，C错误； D、诱导形成试管苗后，需先打开封口膜在适宜环境下进行炼苗，让试管苗适应外界环境后再移栽入土，直接移栽会导致试管苗存活率大幅降低，D错误。 12. 早在上个世纪，我国科学家就结合单倍体育种技术成功培育出玉米新品种，部分育种过程如下图。相关叙述错误的是（ ） A. 过程①包含脱分化和再分化，不同阶段激素含量及光照条件不同 B. 过程②需用秋水仙素或低温诱导处理单倍体的种子以获得二倍体 C. 过程③可从个体水平上进行筛选，从而获得稳定遗传的优良品种 D. 该培育过程涉及的生物学原理有植物细胞的全能性和染色体变异 【答案】B 【解析】 【分析】植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织（高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织），愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。 【详解】A、过程①包含脱分化和再分化，不同阶段的细胞分裂素和生长素的比例不同，脱分化不需要光，再分化需要光，A正确； B、过程②需用秋水仙素或低温诱导处理单倍体的幼苗，不是种子，B错误； C、过程③可从个体水平上进行筛选，观察玉米的性状，从而获得稳定遗传的优良品种，C正确； D、该过程植物组织培养技术，涉及植物细胞的全能性，由单倍体到纯和二倍体运用了染色体数目变异，D正确。 故选B。 13. 紫杉醇是一种从红豆杉树皮、根部等组织中分离出的具有抗肿瘤活性的化合物。然而红豆杉生长缓慢、野生资源匮乏，且紫杉醇含量低，从天然植物中提取已无法满足人类的生产需要。植物细胞培养是目前紫杉醇的主要生产途径之一，过程如下图。下列叙述正确的是（　　） A. 紫杉醇是红豆杉植株生长和生存所必需的次生代谢物 B. 诱导愈伤组织时，可向培养基中加入2，4-D、KT（细胞分裂素类似物）等物质 C. 悬浮细胞培养时应将红豆杉愈伤组织置于固体培养基中 D. 植物细胞培养技术能够实现红豆杉的快速繁殖 【答案】B 【解析】 【分析】初生代谢物是维持细胞生命活动所必需基本代谢物。如糖类、脂质、蛋白质及核酸等。次生代谢物是由次生代谢产生的一类细胞生命活动或植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物。 【详解】A、紫杉醇属于次生代谢物，次生代谢物不是生物生长所必需的，A错误； B、植物组织培养时，培养基中生长素和细胞分裂素比例适中，有利于诱导形成愈伤组织，因此诱导愈伤组织时，可向培养基中加入2，4-D、KT等物质，B正确； C、悬浮细胞培养时应将红豆杉愈伤组织置于液体培养基中，C错误； D、植物细胞培养技术不能够实现红豆杉的快速繁殖，能够实现细胞代谢产物的工厂化生产，D错误。 故选B。 14. 花椰菜（2n=18）易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥（2n=16）对黑腐病等多种常见病害具有抗性。科研人员用射线照射处理黑芥叶肉原生质体后与花椰菜根原生质体融合，获得了抗黑腐病的杂合新植株甲、乙、丙，它们均含有花椰菜的全部染色体。下列叙述错误的是（ ） 植株 花椰菜 黑芥 杂合新植株甲 杂合新植株乙 杂合新植株丙 染色体数目 18 16 34 24 58 A. 可以利用是否含有叶绿体作为初步筛选融合原生质体的依据 B. 杂合新植株甲的单倍体的细胞中有2个染色体组，因而可育 C. 杂合新植株丙可能是由多个原生质体经PEG诱导融合而成 D. 获得的杂种细胞需要经过脱分化和再分化才能培育成新植株 【答案】B 【解析】 【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞在一定条件下融合成为杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的方法。其原理是细胞膜的流动性和细胞的全能性，去除细胞壁后诱导原生质体融合的方法有离心、电刺激、聚乙二醇等试剂诱导，其典型优势是克服远缘杂交不亲和的障碍。 【详解】A、融合成功的杂种细胞，可形成叶绿体，所以可以利用是否含有叶绿体作为初步筛选融合原生质体的依据，A正确； B、杂合新植株甲的单倍体的细胞中有2个染色体组，但来源不同，因而不可育，B错误； C、由于细胞融合具有随机性，所以杂合新植株丙可能是由多个原生质体经PEG诱导融合而成，C正确； D、获得的杂种细胞需要经过脱分化形成愈伤组织，然后再分化生芽、生根，才能培育成新植株，D正确。 故选B。 15. 体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，培养方式可分为悬浮培养和贴壁培养。下列叙述正确的是（　　） A. 悬浮培养一般使用液体培养基 B. 贴壁培养一般使用固体培养基 C. 悬浮培养会发生接触抑制现象 D. 血液中淋巴细胞适合贴壁培养 【答案】A 【解析】 【分析】1、动物细胞培养的过程：取动物组织块剪碎组织用胰蛋白酶处理分散成单个细胞一制成细胞悬液一转入培养液中(原代培养)一放入二氧化碳培养箱培养一贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液一转入培养液(传代培养)一放入氧化碳培养箱培养。 2、动物细胞培养的条件：(1)无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素，定期更换培养液，以清除代谢废物；(2)营养物质：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和pH；(4)气体环境：95%空气(细胞代谢必需的)5%的CO2(维持培养液的pH)。 【详解】A、动物细胞培养均采用液体培养基，A正确； B、动物细胞培养均采用液体培养基，B错误； C、贴壁培养会发生接触抑制现象，悬浮培养不会发生接触抑制现象，C错误； D、体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，因此血液中淋巴细胞适合悬浮培养，D错误。 故选A。 16. 动物细胞培养时操作不当会造成“黑胶虫”细菌的污染，该菌对氯霉素敏感。下列叙述正确的是（ ） A. 配制细胞培养基时，加血清（含细胞生长必需的蛋白）和氯霉素后湿热灭菌 B. 在加入氯霉素防治“黑胶虫”污染过程中，需要考虑细胞和细菌生长双重因素 C. 考察“黑胶虫”污染程度时，应取细胞培养液，直接涂布在平板上培养后计数 D. 采用更换培养基、胰蛋白酶处理和分瓶培养等操作可清除“黑胶虫”污染 【答案】B 【解析】 【分析】微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵，其中消毒和灭菌是常用的防止杂菌入侵的方法。 微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、配制细胞培养基时，湿热灭菌后通过过滤灭菌加入血清（含细胞生长必需的蛋白）和氯霉素，A错误； B、在加入氯霉素防治“黑胶虫”污染过程中，需要考虑细胞和细菌生长双重因素，保证动物细胞的正常生长，同时抑制细菌的生长，B正确； C、考察“黑胶虫”污染程度时，应取细胞培养液，稀释后涂布在平板上培养，待菌落数目稳定后计数，C错误； D、采用更换培养基、胰蛋白酶处理和分瓶培养等操作都不能清除“黑胶虫”污染，D错误。 故选B。 17. 科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞（简称iPS细胞），iPS细胞增殖分化后可形成多种组织细胞，用于多种疾病的治疗。如图为该技术的实验示意图，下列有关说法错误的是（　　） A. 体外培养iPS细胞时，定期更换培养液可以清除细胞的代谢物 B. iPS细胞能够分化成神经细胞体现了细胞具有全能性 C. 图中的诱导因子可能是特定基因、特定蛋白或小分子化合物 D. 若iPS细胞来源于病人的体细胞，经诱导并移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应 【答案】B 【解析】 【详解】A、体外培养iPS细胞属于动物细胞培养，细胞代谢会产生有害代谢产物积累，定期更换培养液可及时清除代谢物，避免其对细胞产生毒害，A正确，不符合题意； B、细胞全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。iPS细胞仅分化为多种特定组织细胞，未发育为完整个体，不能体现细胞全能性，B错误，符合题意； C、将体细胞诱导为iPS细胞时，所用的诱导因子可以是特定调控基因、特定功能蛋白或小分子化合物，C正确，不符合题意； D、若iPS细胞来源于病人自身体细胞，细胞表面的抗原与病人自身匹配，移植回病人体内理论上不会引发免疫排斥反应，D正确，不符合题意。 故选B。 18. 2025年7月，世界首例克隆牦牛“纳木错1号”在我国西藏成功诞生，其原理是采集优质野牦牛的耳廓组织细胞进行培养，并将其注入到普通牦牛去核的卵母细胞，从而获得牦牛克隆胚胎，然后将牦牛克隆胚胎移植到本土母牦牛（受体）的子宫内获得克隆牦牛，下列叙述错误的是（　　） A. 用机械方法结合酶法处理耳廓组织获得分散的体细胞 B. 克隆牦牛的细胞核DNA与优质野牦牛相同，克隆属于无性生殖 C. 胚胎移植时需对受体牦牛注射免疫抑制剂，用于降低其对外来胚胎的排斥反应 D. 用电刺激、乙醇等激活重构胚，可使其完成细胞分裂和发育进程 【答案】C 【解析】 【详解】A、动物细胞培养处理组织时，可先通过剪碎的机械方法处理耳廓组织，再用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，获得分散的单个体细胞，A正确； B、克隆牦牛的细胞核来自优质野牦牛，因此其细胞核DNA与优质野牦牛完全相同，克隆过程未经过两性生殖细胞的结合，属于无性生殖，B正确； C、胚胎移植的生理学基础表明，受体母牦牛对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，C错误； D、核移植获得的重构胚需要通过物理方法（如电刺激）或化学方法（如乙醇）激活，才能使其完成细胞分裂和后续发育进程，D正确。 19. 治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。流程图如下，相关叙述错误的是（ ） A. 核移植前需将卵母细胞培养到MⅡ期 B. 上述过程体现出动物细胞具有全能性 C. 获得的组织器官移植给个体B一般不发生免疫排斥反应 D. 胚胎干细胞需经过基因的选择性表达才能产生出所需的组织器官 【答案】B 【解析】 【分析】1、“治疗性克隆”将使人胚胎干细胞(简称ES细胞)造福于人类的一种非常重要的途径，治疗性克隆是指把患者体细胞移植到去核卵母细胞中构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞(如神经细胞、肌肉细胞和血细胞)，用于治疗。 2、生殖性克隆就是以产生新个体为目的克隆，即用生殖技术制造完整的克隆人，目的是产生一个独立生存的个体，于此相对的是研究性克隆或医学性克隆，指的是产生研究所用的克隆细胞，不产生可独立生存的个体。 【详解】A、核移植前需将卵母细胞培养到MⅡ期，因为该时期的卵母细胞的细胞质中有促进细胞核全能性发挥的物质，A正确； B、上述过程表示的是治疗性克隆的过程，该过程能体现出动物体细胞核具有全能性，因为以及培育到囊胚阶段，但不能体现动物细胞的全能性，B错误； C、因为个体B是供核的一方，和克隆的组织器官的细胞核遗传物质相同，因此获得的组织器官移植给个体B一般不发生免疫排斥反应，C正确； D、细胞分化的结果是能产生各种组织细胞，而细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此，胚胎干细胞需经过基因的选择性表达才能产生出所需的组织器官，D正确。 故选B。 20. 为解决杂交瘤细胞在传代培养过程中出现来自B淋巴细胞的染色体丢失问题，研究者将抗原刺激后的B淋巴细胞用EBV（一种病毒颗粒）感染，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞。EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能存活，但对Oua不敏感。下图表示操作过程，下列有关分析错误的是（　　） A. B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的脾脏 B. HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞 C. 杂交瘤细胞染色体丢失可能会导致抗体的产生能力下降 D. 杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力 【答案】D 【解析】 【分析】题图分析：图示为单克隆抗体制备过程，除了抗原刺激之外，还用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B淋巴细胞，该细胞株能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。 【详解】A、抗原刺激可引起机体产生相应的B淋巴细胞，且B淋巴细胞可分布于淋巴结和脾脏等处，故B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的淋巴结和脾脏等，A正确； B、据题意“EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对Oua敏感；骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能存活，但对Oua不敏感”可知，HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞，B正确； C、抗体是由浆细胞分泌的，杂交瘤细胞若丢失来自B淋巴细胞的染色体，可能会导致抗体产生能力下降，C正确； D、杂交瘤细胞具有持续产生针对特定抗原而不是EBV的抗体的能力，D错误。 故选D。 21. 下列关于哺乳动物受精的叙述，错误的是（　　） A. 一般情况下，卵子在输卵管内发育到MⅡ期时，才具备受精的能力 B. 精子必须在雌性动物的生殖道获得能量才能参与受精 C. 受精时，透明带和卵细胞膜都会发生相应的生理反应以防止多精入卵 D. 精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体 【答案】B 【解析】 【详解】A、哺乳动物排出的卵子尚未成熟，需要在输卵管内发育到减数第二次分裂（MⅡ）中期时，才具备受精能力，A正确； B、精子在雌性动物生殖道内发生的是获能过程，获能的本质是精子获得受精的能力，而非获得能量，B错误； C、受精过程中存在两道防止多精入卵的屏障，分别是透明带反应和卵细胞膜反应，二者都是受精时发生的生理应答，C正确； D、精子入卵后会激活卵子，使其完成减数第二次分裂，排出第二极体，之后进一步形成雌原核，D正确。 22. 下列关于高等哺乳动物从配子形成到早期胚胎发育的过程的叙述，正确的是（　　） A. 排卵就是从卵巢中排出初级卵母细胞的过程 B. 常以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志 C. 透明带破裂标志着胚胎开始进入细胞分化的时期 D. 出现囊胚腔的胚胎不能用来进行胚胎分割 【答案】B 【解析】 【详解】A、排卵指卵子从卵泡中排出，不同哺乳动物排出的卵子可能是初级卵母细胞或次级卵母细胞，并非一定是初级卵母细胞，A错误； B、受精过程中，当在透明带和卵黄膜的间隙观察到两个极体，或观察到雌、雄原核时，可作为卵子已经受精的标志，B正确； C、高等哺乳动物胚胎的细胞分化开始于囊胚期，此时胚胎仍被透明带包裹，透明带破裂是囊胚后期孵化的标志，晚于细胞分化开始的时间，C错误； D、胚胎分割可选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚，囊胚期已出现囊胚腔，只要对内细胞团均等分割即可用于胚胎分割，D错误。 23. 华西牛是我国育种专家培育的具有完全自主知识产权的专门化肉牛新品种，打破了我国肉牛种源严重依赖进口的局面。科研人员在生产中采取胚胎工程的手段实现了华西牛的快速繁育。下列叙述错误的是（　　） A. 采集的精子需要进行获能处理后在适当的培养液中完成受精 B. 胚胎移植过程中涉及到两次检查，且两次检查的对象是相同的 C. 受体母牛需健康且具有正常的繁殖能力，胚胎移植前需要对其进行同期发情处理 D. 胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 【答案】B 【解析】 【详解】A、体外受精时，采集的精子必须先进行获能处理，才能与培养至减数第二次分裂中期的卵母细胞在适当的培养液中完成受精作用，A正确； B、胚胎移植的两次检查中，第一次是对早期胚胎进行质量检查，第二次是移植后对受体母牛是否妊娠进行检查，两次检查的对象不同，B错误； C、胚胎移植时受体母牛需要健康且具备正常繁殖能力，移植前需对供体、受体母牛进行同期发情处理，以保证二者生殖器官的生理状态一致，为胚胎移入提供相同的生理环境，C正确； D、转基因、核移植、或体外受精等技术获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代，胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，D正确。 24. 多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体 才能获得后代。下图列举了几项技术成果。 下列叙述正确的是 （ ） A. 经胚胎移植产生的后代与受体均保持一致 B. ①需获得MII期的去核卵母细胞 C. ②能大幅改良动物性状 D. ③可通过②技术实现扩大化生产，①②可通过③技术实现性状改良 【答案】D 【解析】 【分析】动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物。 【详解】A、子代动物的遗传性状与供体基本一致，但与受体无关，A错误； B、核移植过程中需要处于MII中期的去核卵母细胞，而过程1是培育试管动物，需要培育到适宜时期（桑葚胚或囊胚等时期）进行胚胎移植，B错误； C、过程2得到的是克隆动物，是无性生殖的一种，不能大幅改良动物性状，C错误； D、过程2克隆技术可得到大量同种个体，为过程3提供了量产方式；过程3是转基因技术，转基因可导入外源优良基因，为过程1、2提供了改良性状的方式，D正确。 故选D。 25. 质粒是基因工程中最常用的载体，质粒有标记基因（如图所示），通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。质粒上箭头表示三种限制酶的酶切位点。下表是外源基因插入（插入点有a、b、c）后细菌的生长情况。下列有关叙述正确的是（　　） 项目 细菌在含氨苄青霉素的培养基上生长情况 细菌在含四环素的培养基上生长情况 ① 能生长 不能生长 ② 能生长 能生长 ③ 不能生长 能生长 A. 质粒的复制原点上有RNA聚合酶的结合位点 B. ①②③三种重组后细菌的外源基因插入点①是a，②是c，③是b C. 该质粒被一种限制酶切开时，被水解的磷酸二酯键有2个 D. 将外源基因与质粒连接时需用DNA聚合酶 【答案】C 【解析】 【详解】A、RNA聚合酶的结合位点是启动子，作用是启动转录过程；复制原点是DNA复制的起始位点，是与DNA复制相关的酶的结合位点，不存在RNA聚合酶结合位点，A错误； B、插入点a位于氨苄青霉素抗性基因内部，插入外源基因会破坏该抗性基因，对应细菌③（在含氨苄青霉素的培养基上不能生长，在含四环素的培养基上能生长）；插入点b位于四环素抗性基因内部，插入外源基因会破坏该抗性基因，对应细菌①（在含氨苄青霉素的培养基上能生长，在含四环素的培养基上不能生长）；插入点c不破坏两个抗性基因，对应细菌②（两种培养基都能生长），因此①是b、②是c、③是a，B错误； C、质粒是环状双链DNA分子，限制酶识别一个酶切位点切割时，需要分别水解DNA两条链上的1个磷酸二酯键，共水解2个磷酸二酯键，C正确； D、连接外源基因与质粒需要使用DNA连接酶，DNA聚合酶的功能是将单个脱氧核苷酸连接到已有的DNA链上，不能连接两个独立的DNA片段，D错误。 26. 下图表示 PCR 过程中某个阶段反应体系的情况，①②③④表示相关物质，L、R 表示方向。下列叙述正确的是（ ） A. ②链从 L 到 R 的方向为 3′→5′，①②链均可作为子链合成的模板 B. PCR 过程需要通过解旋酶断开氢键，且为边解旋边复制 C. 以 1 个 DNA 为模板经 3 次循环需消耗 8 个引物③ D. 物质③的 5′端添加了某序列，至少需经 2 次循环才可获得该序列的双链产物 【答案】D 【解析】 【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）：过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶高温条件下氢键可自动解开）：低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。 【详解】A、根据DNA分子中两条链的反向平行关系可判断，②链从 L 到 R 的方向为 5′→3′，图中①②链均可作为子链合成的模板，A错误； B、PCR 过程需要通过高温处理使双链中氢键断裂成为单链，而后通过降温使子链和引物之间形成双链结构，而后调节温度是子链沿着引物的3’端延伸，B错误； C、以 1 个 DNA 为模板经 3 次循环产生的DNA分子数目为23=8，则需消耗 引物③的数目为（8×2-2）÷2=7，C错误； D、物质③的 5′端添加了某序列，至少需经 2 次循环才可获得以该序列为模板合成的双链DNA产物，D正确。 故选D。 27. 下列关于基因表达载体及其构建过程的说法，错误的是（　　） A. 构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中能稳定存在且遗传给下一代 B. 一个基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、起始密码子和终止密码子等结构 C. 诱导物与诱导型启动子结合可激活或抑制目的基因表达 D. 基因表达载体中启动子是RNA聚合酶的结合部位，启动转录过程 【答案】B 【解析】 【详解】A、构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在且能遗传给下一代，同时可使目的基因表达和发挥作用，A正确； B、基因表达载体一般包括目的基因、启动子、终止子、标记基因，起始密码子和终止密码子是mRNA上的序列，不属于基因表达载体（DNA分子）的结构，B错误； C、诱导型启动子的转录活性受诱导物调控，诱导物与该类启动子结合后可激活或抑制目的基因的表达，C正确； D、启动子是位于基因上游的一段有特殊序列结构的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的位点，可启动基因的转录过程，D正确。 28. 图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制酶EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ、Hind Ⅲ的酶切位点。下列有关叙述错误的是（ ） A. 在基因工程中若只用一种限制酶完成对质粒和外源DNA的切割，则可选EcoR Ⅰ B. 如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoR Ⅰ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoR Ⅰ切割位点有1个 C. 为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时可使用BamH Ⅰ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒和目的基因 D. 一个如图1所示的质粒分子经EcoRⅠ切割后，含有1个游离的磷酸基团 【答案】BD 【解析】 【分析】限制酶：（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来。（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（3）结果：形成黏性末端或平末端。 【详解】A、目的基因两侧都有，且质粒也有的限制酶是EcoRⅠ，所以在基因工程中若只用一种限制酶完成对质粒和外源DNA的切割，可选EcoRⅠ，A正确； B、如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRⅠ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoRⅠ酶切点有2个，B错误； C、为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时可使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理，C正确； D、一个图1所示的质粒分子经EcoRⅠ切割后，产生两个黏性末端，含有2个游离的磷酸基团，D错误。 故选BD。 29. 如图所示，研究人员将雪花莲凝集素基因（GNA）和尾穗苋凝集素基因（ACA）与载体（pB1121）结合，然后导入棉花细胞。下列操作不符合实验目的是（ ） A. 用PCR技术可检测GNA和ACA基因是否导入棉花细胞中 B. 将棉花细胞接种在含氨苄青霉素的培养基上可筛选出转基因细胞 C. 用限制酶BsaB1和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA—ACA融合基因 D. 与只用KpnI相比，KpnI和XhoI处理融合基因和载体可保证基因转录方向正确 【答案】B 【解析】 【分析】1、基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。 2、基因工程的基本操作程序：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达。 【详解】A、根据GNA-ACA融合基因的两端序列设计合适的引物，可以利用PCR技术检测GNA和ACA基因是否导入棉花细胞中，A正确； B、由于重组质粒含有卡那霉素的抗性基因，故将棉花细胞接种在含卡那霉素的培养基上可筛选出转基因细胞，B错误； C、雪花莲凝集素基因（GNA）和尾穗苋凝集素基因（ACA)均有 BsaBⅠ酶切位点，所以用限制酶 BsaBI 和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA-ACA融合基因，C正确； D、图中质粒与ACA-GNA上都含有KpnⅠ和XhoⅠ的酶切位点，与只用KpnⅠ相比，KpnI 和XhoI处理融合基 因和载体可保证基因转录方向正确，D正确。 故选B。 30. 利用AI（人工智能）破解蛋白质结构和功能之谜，建立蛋白质数据库，并在此基础上进行蛋白质结构设计和优化，会给未来蛋白质工程的发展带来翻天覆地的变化。关于该技术的实施，下列说法错误的是（　　） A. AI预测新型蛋白质的结构与功能的原理是中心法则 B. 可以通过改造或合成基因来获得AI设计的蛋白质 C. 根据某种蛋白质的氨基酸序列推理的基因序列中不包含启动子和终止子 D. 用蛋白质氨基酸序列推测的RNA编码序列有多种可能，原因是密码子具有简并性 【答案】A 【解析】 【详解】A、中心法则的内容是遗传信息的流动规律，包括DNA复制、转录、翻译、逆转录、RNA复制过程。AI预测蛋白质的结构与功能是基于已有的蛋白质序列、结构、功能的相关大数据进行机器学习分析，原理并非中心法则，A错误； B、蛋白质工程的核心操作是改造或合成目的基因，再通过基因表达获得所需蛋白质，因此AI设计的蛋白质可以通过该方式获取，B正确； C、启动子和终止子属于基因的非编码区序列，不对应氨基酸序列，因此仅根据蛋白质的氨基酸序列推理得到的基因序列仅包含编码区序列，不含启动子和终止子，C正确； D、密码子具有简并性，即绝大多数氨基酸可以对应多种密码子，因此根据氨基酸序列反推RNA编码序列时会有多种可能，D正确。 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有一项或多项是符合题目要求的，全选对但不全得1分，有选错得0分。 31. 营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，导致代谢过程中某些合成反应不能进行的菌株。如图是科研人员利用影印法（用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上）初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。下列相关说法错误的是（　　） A. ①过程接种方法为稀释涂布平板法，接种后的培养皿立即进行倒置培养 B. 进行②过程的顺序是先将丝绒布“复印”至完全培养基，再“复印”至基本培养基 C. 氨基酸缺陷型菌株应从基本培养基上没有、完全培养基上对应位置有的菌落中挑选 D. 统计菌落种类和数量时要每隔一定时间观察统计一次，直到各类菌落数目稳定为止 【答案】AB 【解析】 【详解】A、①过程接种后菌落均匀分布，接种方法为稀释涂布平板法，但接种后需待菌液被培养基充分吸收后再倒置培养，立即倒置会导致菌液流动，造成菌落分布不均，A错误； B、进行②过程培养时，为了防止将完全培养基中特定营养成分带入基本培养基，应先将丝绒布先转印至基本培养基上再“复印”至完全培养基上，B错误； C、氨基酸缺陷型菌株无法合成相应氨基酸，在缺乏该氨基酸的基本培养基中不能生长，在营养全面的完全培养基中可正常生长，因此需要在基本培养基上没有、完全培养基对应位置有的菌落中挑选，C正确； D、不同菌株的生长速率存在差异，统计菌落种类和数量时要每隔一定时间观察统计，直到各类菌落数目稳定，避免因培养时间不足导致统计结果偏小，D正确。 32. 香蕉是海南的热带水果，但是束顶病毒能够引起香蕉的严重病害，科研人员用感病植株的茎尖作为外植体进行培养获得脱毒苗，实验结果如图所示。下列有关叙述正确的是（ ） A. 感病植株的茎尖需经灭菌处理后才能用于脱毒苗的培育 B. 培养过程中培养基常添加生长激素、细胞分裂素等激素 C. 超低温保存感病植株茎尖可提高其脱毒率，降低成活率 D. 茎尖脱分化形成的愈伤组织是一团呈正方形的薄壁组织团块 【答案】C 【解析】 【详解】A、灭菌会将植株的茎尖杀死，所以需要对感病植株的茎尖消毒处理，A错误； B、培养过程中培养基中加入了生长素和细胞分裂素，而不是生长激素，B错误； C、从图中可以看出，经过超低温处理后，感病植株的脱毒率增加，但成活率由93.75%下降至55%，C正确； D、愈伤组织是无定形状态，D错误。 故选C。 33. 乳腺癌化疗的药物在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，为降低药物对患者的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体-药物偶联物（ADC），过程如图所示。下列相关说法正确的是（　　） A. 过程①是进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可以获得能分泌所需抗体的细胞 B. ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，ADC起作用时会被细胞吞噬，并在溶酶体内被分解后释放药物 C. 经步骤③筛选得到的杂交瘤细胞具有的特点是能准确识别抗原的细微差异并能大量制备 D. ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是抗体能特异性地作用于乳腺癌细胞，避免其他细胞受损 【答案】BD 【解析】 【详解】A、过程①是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的诱导融合过程，克隆化培养和抗体检测以筛选获得能分泌所需抗体的细胞是步骤③的操作，A错误； B、由图可知ADC由抗体、接头、药物三部分组成；ADC属于大分子物质，与靶细胞结合后通过胞吞进入细胞，在溶酶体的水解作用下分解释放药物，B正确； C、经步骤③筛选得到的杂交瘤细胞的特点是既能无限增殖，又能分泌特异性抗体；能准确识别抗原细微差异、可大量制备是单克隆抗体的特点，C错误； D、抗体具有特异性，可特异性识别乳腺癌细胞表面的抗原，使ADC定向作用于乳腺癌细胞，避免药物损伤正常细胞，因此能降低药物副作用，D正确。 34. 单峰骆驼在野外几乎灭绝，科学家欲通过胚胎工程的方法拯救野化单峰骆驼，进行了如图所示研究。请据图分析，下列说法错误的是（　　） A. 为提高胚胎利用率，可采用体外受精等无性繁殖技术 B. 为使野化单峰骆驼a超数排卵，可注射适量的外源促性腺激素 C. 胚胎移植后，胚胎进一步扩大导致囊胚腔破裂的过程称为孵化 D. 若①表示体外受精，可利用野化单峰骆驼b刚排出的精子与卵母细胞完成受精作用 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、体外受精经过了两性生殖细胞的结合，属于有性繁殖技术，不属于无性繁殖，且提高胚胎利用率通常采用胚胎分割技术，A错误； B、给雌性个体注射适量外源促性腺激素，可促进其超数排卵，B正确； C、孵化是指囊胚不断扩张导致透明带破裂，胚胎从透明带中伸展出来的过程，不是囊胚腔破裂，C错误； D、体外受精时，精子需要先进行获能处理才具备受精能力，刚排出的精子未获能，无法直接和卵母细胞完成受精作用，D错误。 35. 荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA的含量。其原理是在PCR反应体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当子链延伸至探针处时，探针水解，使荧光监测系统接收到荧光信号，如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 引物中（G+C）含量越高，其与模板DNA结合的稳定性则越低 B. 若引物1、2之间易发生碱基互补配对，则不能进行有效检测 C. 实验后期荧光强度不再变化可能是因为荧光探针或原料等耗尽 D. 若某次PCR反应共产生52个等长DNA，则需加入52个荧光探针 【答案】AD 【解析】 【详解】A、碱基C和G之间可形成三个氢键，故引物中（G+C）含量越高，其与模板DNA结合的稳定性就越高，A错误； B、如果引物1和引物2互补或引物自身发生碱基互补配对，那这两个引物或引物自身就会结合到一起，无法再和模板结合，不能做到有效检测，所以必须避免两个引物之间互补以及引物自身发生碱基互补配对，B正确； C、当子链延伸至探针处时，探针水解，使荧光监测系统接收到荧光信号，实验后期荧光强度不再变化可能是因为荧光探针或原料等耗尽，C正确； D、若某次PCR反应共产生52个等长的DNA，说明至少扩增了6次，其余为不等长的DNA，根据扩增过程可知，DNA每扩增一次，就水解一个探针，则至少需加入26-1=63个荧光探针，D错误。 故选AD。 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 36. 我国是世界上啤酒的生产和消费大国。啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，其工业化生产流程如图所示。回答下列问题： （1）发酵工程一般包括菌种的选育、________、培养基的配制、灭菌、________、发酵罐内发酵、分离提纯产物等方面；酿酒酵母的新陈代谢类型是________。 （2）图中焙烤阶段应注意控制温度，不能使________失活；发酵时要严格控制________（答出两点即可）等发酵条件，环境条件不仅会影响微生物的生长增殖，还会影响________。 （3）啤酒发酵过程可分为________、后发酵两个阶段，其中酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在前一阶段完成。后一阶段要在低温、________的环境下储存一段时间才能形成澄清、成熟的啤酒。 （4）发酵阶段，从发酵罐中取样装入甲瓶，初步估测甲瓶中酵母菌数量为3×106个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL用________稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过300个，则至少应将甲瓶的菌液稀释________倍。 【答案】（1） ①. 扩大培养 ②. 接种 ③. 异养兼性厌氧型 （2） ①. 淀粉酶 ②. 温度、pH、溶氧量等 ③. 微生物代谢物的形成（或代谢产物） （3） ①. 主发酵 ②. 密闭 （4） ①. 无菌水 ②. 1000 【解析】 【小问1详解】 发酵工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵罐内发酵、分离提纯产物等方面。啤酒酵母的新陈代谢类型是异养兼性厌氧型。 【小问2详解】 大麦发芽后会产生淀粉酶，后续糖化过程需要淀粉酶分解淀粉为酵母菌可利用的糖，因此焙烤不能使淀粉酶失活。发酵过程需要严格控制温度、pH、溶解氧等条件，环境条件除影响微生物生长外，还会影响微生物代谢产物的形成。 【小问3详解】 啤酒发酵过程可分为主发酵、后发酵两个阶段，其中酵母菌繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在前一阶段完成。后一阶段要在低温密闭的环境下储存一段时间才能形成澄清、成熟的啤酒。 【小问4详解】 从发酵罐中取样装入甲瓶，初步估测甲瓶中酵母菌数量为3×106个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL用无菌水稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过300个，则至少应将甲瓶的菌液稀释倍数为3×106×0.1÷300=1000倍。 37. 尼帕病毒（NV）是一种新型人畜共患病毒，科学家利用该病毒的结构蛋白（蛋白A）作为抗原制备单克隆抗体的流程如图所示。回答下列问题： （1）制备单克隆抗体涉及多种技术手段，其中________是动物细胞工程的基础，实验时一般需要多次注射蛋白A免疫小鼠，目的是________。 （2）与骨髓瘤细胞融合前，B淋巴细胞________（填“需要”或者“不需要”）通过原代培养扩大细胞数量。诱导细胞融合时，灭活病毒表面的糖蛋白和酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上________重新排布，使细胞融合。 （3）杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基，在该培养基上________细胞会死亡。经筛选②得到的细胞最简便的培养方法是________（填“体内培养”或“体外培养”），原因是________。（答出1点即可） （4）为鉴定单克隆抗体识别抗原的具体区域，可将抗原（A蛋白）逐步截短，分别与纯化的单克隆抗体反应，实验结果如图所示（“+”表示有反应，“-”表示无反应，“aa”表示氨基酸）。 结果证明该单克隆抗体识别抗原（A蛋白）的区域大概为________（填“40～50”、“40～55”或“40～60”）位氨基酸。 【答案】（1） ①. 动物细胞培养技术 ②. 增强小鼠机体的免疫反应，从而从该小鼠的脾中获得更多能产生抗A蛋白抗体的B淋巴细胞 （2） ①. 不需要 ②. 蛋白质分子和脂质分子 （3） ①. 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞（合理即可） ②. 体内培养 ③. 体内培养条件容易控制、不需要更换培养基、不需要考虑温度、pH是否合适等 （4）40～55 【解析】 【小问1详解】 制备单克隆抗体涉及动物细胞培养技术和动物细胞融合技术，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础；实验时一般需要多次注射蛋白A免疫小鼠，目的是增强小鼠机体的免疫反应，从而从该小鼠的脾中获得更多能产生特定抗体（抗蛋白A的抗体）的B淋巴细胞。 【小问2详解】 已免疫的B淋巴细胞本身数量相对较多，且在后续与骨髓瘤细胞融合等操作中会有进一步的处理和筛选，所以不需要通过原代培养扩大细胞数量；灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用， 使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞膜打开，细胞发生融合。 【小问3详解】 用特定的选择培养基进行筛选杂交瘤细胞过程中：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。经筛选②得到的细胞最简便的培养方法是体内培养，因为体内培养条件容易控制、不需要更换培养基、不需要考虑温度、pH是否合适等。 【小问4详解】 根据图可知，1~50氨基酸序列片段与抗体无反应，而1~55氨基酸序列片段与抗体有反应，说明该单克隆抗体识别的区域大概为50~55位氨基酸。56~153氨基酸序列片段与抗体无反应，而40~153氨基酸序列片段与抗体有反应，说明该单克隆抗体识别的区域大概为40~56位氨基酸。综上分析可知，该单克隆抗体识别抗原（A蛋白）的区域大概为40~55位氨基酸。 38. 为治疗mtDNA（线粒体DNA）突变导致的线粒体遗传病，某科研团队通过第一极体移植得到了“三亲小猴”，过程如图1所示。回答下列问题： （1）“三亲小猴”的诞生需依次用到动物细胞培养、第一极体移植、________（答出2点即可）等技术，属于________（填“有性”或“无性”）生殖。该过程不能直接用患者猴的体细胞作为核供体的原因是________。 （2）次级卵母细胞的获取过程中，需要对雌性猴注射________进行超数排卵处理。图中过程②移除“原核”移除的是________。研究人员对“三亲小猴”、供体猴、代孕母体猴和患者猴的mtDNA中某一特异性序列进行了检测、比对，结果如图2所示。分析可知，“三亲小猴”的mtDNA特异性序列与________的一致，不同于另两种猴，原因是________。 （3）过程⑥之前想要进行性别鉴定，应取________时期的________细胞进行DNA检测，可优先选择是________性（填“雌”或“雄”）胚胎移入子宫发育以进一步避免线粒体遗传病遗传给后代。 【答案】（1） ①. 体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植 ②. 有性 ③. 患者猴的体细胞细胞核中含有2个染色体组，受精后形成的受精卵有3个染色体组，不能正常发育 （2） ①. （外源）促性腺激素 ②. 纺锤体-染色体复合物 ③. 供体猴 ④. 患者猴的第一极体中含有极少量线粒体，“三亲小猴”的mtDNA来源于供体猴卵母细胞细胞质，与代孕母体猴和患者猴无关 （3） ①. 囊胚 ②. 滋养层 ③. 雄 【解析】 【小问1详解】 据图可知，“三亲小猴”的诞生依次用到了动物细胞培养（培养患者猴次级卵母细胞和供体猴次级卵母细胞）、第一极体移植、体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术，该过程经过了受精作用过程，所以属于有性生殖。由于患者猴的体细胞中含有2个染色体组，经过受精作用后，受精卵中就会含有三个染色体组，不能完成正常发育，所以该过程不能直接用患者猴的体细胞作为核供体。 【小问2详解】 次级卵母细胞的获取过程中，要使雌性猴超数排卵，应给该雌性猴注射外源的促性腺激素。该过程需要保留供体猴的细胞质（含健康mtDNA），移除自身细胞核，因此过程②移除的是供体猴次级卵母细胞的细胞核，即原核指的是纺锤体-染色体复合物。据图2可知，“三亲小猴”的mtDNA特异性序列与供体猴一致，其原因主要是：患者猴的第一极体中含有很少的线粒体，也就是说含有极少量的患者猴的mtDNA，而“三亲小猴”的mtDNA来源于供体猴卵母细胞细胞质，而与代孕母体猴和患者猴无关。 【小问3详解】 过程⑥表示胚胎移植，胚胎移植前进行性别鉴定，选取囊胚期的滋养层细胞进行DNA检测，不会损伤内细胞团影响胚胎发育；线粒体遗传病是母系遗传（只有雌性会将mtDNA传递给后代，雄性不会将mtDNA传给子代），因此优先选择雄性胚胎，可避免该遗传病继续遗传给后代。 39. 定点诱变技术可以在体外改造目的DNA分子，进而研究基因的表达以及蛋白质的结构与功能之间的关系。经典的大引物PCR定点诱变技术成为基于PCR的定点诱变技术中应用最普遍的方法，操作过程如图甲。研究者欲改造某基因并将其导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒含有氨苄青霉素抗性基因、LacZ基因及一些酶切位点，结构如图乙。回答下列问题： （1）PCR体系中，除了加入目的基因与引物外，还应加入________等（答出两点即可）。利用大引物PCR进行定点诱变需要进行两轮PCR（PCR1和PCR2），在PCR1中，至少需要________个循环才能获得相应的大引物模板。在PCR2中，要获得带有诱变点的改良基因，引物应选用大引物两条链中的________（填“①”或“②”）。 （2）为实现质粒和改良基因的高效连接，选用限制酶XmaⅠ切割质粒而不选用限制酶SmaⅠ的原因是________。 （3）在构建改良基因表达载体时，有的质粒含有改良基因，有的质粒为空白质粒，将含上述组件的溶液加入到大肠杆菌菌液中，适宜温度下培养一段时间后，再将菌液涂布在含氨苄青霉素和________的平板上。一段时间后，在培养基上出现白色和蓝色两种菌落，其中________色菌落含有重组质粒，判断的依据是________。 （4）与X射线诱变相比，该诱变技术的优点是________。 【答案】（1） ①. 耐高温的DNA聚合酶（或Taq酶）、四种脱氧核苷酸（或dNTP） ②. 2##二##两 ③. ② （2）SmaⅠ的酶切末端为平末端，无法与改良基因上的黏性末端连接 （3） ①. β-半乳糖苷 ②. 白 ③. 构建改良基因组质粒时破坏了LacZ基因 （4）目的性强（精准、针对性强）、突变频率高 【解析】 【小问1详解】 PCR反应体系需要模板（目的基因）、引物、原料（四种脱氧核苷酸）、酶（热稳定Taq酶）、缓冲液等。由图可知，大引物的两条链均带有突变位点，进行第一轮循环，得到的DNA有一个不含突变位点，另一个有一条链含有突变位点，进行第二轮循环，即可得到DNA有三个不含突变位点和一个两条链均含突变位点的DNA，即大引物，所以需要经过2个循环才能获得相应的大引物模板。从大引物和目的基因的结合位点分析，要获得带有诱变点的改良基因，引物应选用大引物两条链中的②链。 【小问2详解】 根据SmaⅠ的酶切位点，如果选择SmaⅠ，则获得的是平末端，无法与改良基因上的黏性末端连接，因此，为实现质粒和改良基因的高效连接，选用限制酶XmaⅠ。 【小问3详解】 因LacZ基因编码的酶能分解β-半乳糖苷，产生蓝色物质，如果没有分解，则菌落为白色，因此可以将菌液涂布在含氨苄青霉素和β-半乳糖苷的平板上。由于重组质粒的LacZ基因在重组过程中被切断，即构建改良基因组质粒时破坏了LacZ基因，不能编码相应的酶分解β-半乳糖苷，呈现白色，所以白色菌落含有重组质粒。 【小问4详解】 X射线诱变具有不定向性、低频性，故与X射线诱变相比，该诱变技术的优点是目的性强、突变频率高。 40. 科研人员为了培育出耐盐水稻，从野生大豆中提取出了耐盐基因，先用PCR技术大量扩增耐盐基因，然后将该基因插入农杆菌的T-DNA中，获得重组质粒，再利用农杆菌转化法，将目的基因导入水稻细胞内，最终培育出了耐盐水稻。该培育实验所用农杆菌的Ti质粒的部分结构和耐盐基因的结构如图1所示。回答下列问题： （1）基因工程中的转化是指________。该农杆菌的Ti质粒中，潮霉素抗性基因的模板链与OCS基因的模板链________（填“位于”或“不位于”）该质粒的同一条脱氧核苷酸链上。 （2）用PCR技术大量扩增耐盐基因时，为了提高耐盐基因与Ti质粒的正确拼接率，应在引物________的5′端添加碱基序列5′-________-3′，并用限制酶________切割Ti质粒。 （3）先用农杆菌感染水稻细胞，再用含潮霉素的培养基培养水稻细胞，能在该培养基上生长的水稻细胞不一定含目的基因，原因是________。 （4）根据耐盐基因和OCS基因序列合成相关引物，并利用PCR和电泳检测转基因植株中是否导入耐盐基因，得到的电泳图谱如图2所示。为了能在波长为300nm紫外灯下检测出DNA分子，电泳时需要在琼脂糖溶液中加入适量的________。据图2可知，转化成功的有植株________，理由是________。 【答案】（1） ①. 目的基因进入受体细胞内，在受体细胞内维持稳定 ②. 和表达的过程不位于 （2） ①. R2 ②. GAATTC ③. XhoⅠ、MunⅠ （3）空质粒和重组质粒都含潮霉素抗性基因，导入水稻细胞后均可使水稻细胞在该培养基上生长 （4） ①. 核酸染料（或EB，溴化乙锭） ②. 1、4、5、7、9 ③. 植株1、4、5、7、9对应电泳条带与重组质粒组相同，而重组质粒中含OCS基因和耐盐基因（或条带相同，位置相同，分子量相同） 【解析】 【小问1详解】 基因工程中的转化是指目的基因进入受体细胞内，在受体细胞内维持稳定。据题图1可知，潮霉素抗性基因的转录方向：由启动子 P1 驱动，箭头向左，说明它的模板链是DNA 的上链（3'→5' 方向），转录时 RNA 聚合酶沿模板链 3'→5' 移动，合成的 mRNA 方向为 5'→3'。 OCS 基因的转录方向：由启动子P2驱动，箭头向右，说明它的模板链是DNA的下链（3'→5' 方向），转录方向与潮霉素抗性基因相反。   因此，两个基因的模板链不位于同一条脱氧核苷酸链上。 【小问2详解】 要提高拼接效率，需要让目的基因两端的酶切位点和质粒的酶切位点匹配，同时避免目的基因自身环化和反向连接。 质粒上的酶切位点顺序：XhoI → MunI，位于 OCS 基因的上游，方向从左到右。 耐盐基因的引物：R1（下游，3' 端）和R2（上游，5' 端）。为了让目的基因插入质粒时方向正确，需要在上游引物 R2的 5' 端添加酶切位点的保护序列，使扩增后的目的基因两端带有与质粒匹配的黏性末端。Mun I的识别序列是 5'-CAATTG-3'，切割后产生的黏性末端和EcoR I（5'-GAATTC-3'）的黏性末端是互补的（都是-AATT-）。 质粒上Mun I的左侧是Xho I（5'-CTCGAG-3'），右侧是Mun I。 要让目的基因插入时，一端匹配Xho I，一端匹配Mun I，需要在R2的 5' 端添加与Mun I互补的序列，也就是GAATTC（EcoR I的序列，和Mun I切割后的黏性末端互补）。为了实现定向连接，需要用两种不同的限制酶切割质粒，产生不同的黏性末端，防止质粒自身环化和目的基因反向连接。   质粒上与目的基因两端匹配的酶是XhoI和MunI，用这两种酶切割后，质粒两端的黏性末端分别和目的基因两端的黏性末端互补，保证正确拼接。 【小问3详解】 潮霉素抗性基因是标记基因，用于筛选导入了质粒的受体细胞。但导入的质粒有两种情况：   空质粒（未插入目的基因的 Ti 质粒）：它也含有潮霉素抗性基因，导入水稻细胞后，细胞也能在含潮霉素的培养基上生长。 重组质粒（插入了目的基因的 Ti 质粒）：也含有潮霉素抗性基因，同样能让细胞在培养基上生长。   因此，仅靠潮霉素抗性只能筛选出导入了质粒的细胞，无法区分是空质粒还是重组质粒，所以生长的细胞不一定含目的基因。 【小问4详解】 为了便于对分离后的DNA片段进行检测，在凝胶制备中加入核酸染料，能够与DNA分子结合，凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。以耐盐基因和 OCS 基因为模板合成相关引物，进行 PCR 和电泳检测。   重组质粒（+）：同时含有耐盐基因和 OCS 基因，所以 PCR 扩增后会出现对应的条带。 空质粒（-）：只有 OCS 基因，没有耐盐基因，不会出现和重组质粒相同的条带。 空白对照（水）：无模板，无条带。   从图 2 可以看到：   植株 1、4、5、7、9 的电泳条带位置与重组质粒组（+）的条带位置相同，说明这些植株的 PCR 产物和重组质粒的扩增产物一致，同时含有耐盐基因和 OCS 基因，因此转化成功的有植株1、4、5、7、9。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年下学期 东北师大附中（生物）科试卷 高（二）年级期中考试 注意事项： 1.答题前，考生须将自己的姓名、班级、考场/座位号填写在答题卡指定位置上，并粘贴条形码。 2.回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。 3.回答非选择题时，请使用0.5毫米黑色字迹签字笔将答案写在答题卡各题目的答题区域内，超出答题区域或在草稿纸、本试题卷上书写的答案无效。 4.保持卡面清洁，不要折叠、不要弄皱、弄破，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。 一、选择题：本题共30小题，每小题1分，共30分。在每小题给出的四个选项中，只有一项符合题目要求。 1. 下列关于果酒和果醋制作的叙述，正确的是（　　） A. 制作葡萄酒前，需反复冲洗葡萄以避免杂菌污染 B. 将葡萄汁装入发酵瓶要留有大约1/3的空间 C. 为保证无氧环境，果酒制作过程中不能拧松瓶盖 D. 在O2和糖源充足时，醋酸菌将乙醇先转化为乙醛，再将乙醛转化为醋酸 2. 腐乳是我国古代劳动人民通过微生物发酵制作而成的一种大豆食品。苏州的腐乳呈黄白色，口味细腻；北京的腐乳呈红色，略带甜味；四川的腐乳则香辣油润。下列有关叙述错误的是（　　） A. 各地腐乳的色泽风味各不相同可能与腌制过程中添加的香辛料不同有关 B. 多种微生物参与了豆腐的发酵，起主要作用的毛霉属于原核生物 C. 现代腐乳生产中，人工接种的毛霉菌种可从自然界中筛选，也可通过诱变育种获得 D. 腐乳中的蛋白质可被微生物产生的蛋白酶分解成小分子的肽和氨基酸 3. 下列关于泡菜制作的叙述，错误的是（　　） A. 泡菜的制作过程主要是由乳酸菌参与发酵，该菌属于厌氧菌 B. 用水密封发酵坛的主要目的是保持无氧条件 C. 泡菜制作的过程中，乳酸菌在产生乳酸的同时还会产生亚硝酸盐 D. 泡菜腌制方法、腌制时间长短等都会影响亚硝酸盐的含量 4. 获得纯净微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下列关于无菌操作的叙述，正确的是（　　） A. 牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味 B. 在接种箱或超净工作台的使用过程中，可用紫外线照射30min来进行消毒 C. 灼烧灭菌的对象可以是金属用具和试管口瓶口，在酒精灯火焰充分燃烧层进行 D. 若培养皿盖和培养皿底之间溅有培养基，必须将该处培养基去除后再用来培养微生物 5. 高压蒸汽条件下持续20分钟会杀死芽孢，因此无菌操作中常利用非致病性的嗜热脂肪杆菌的芽孢作为高压蒸汽灭菌的指示菌。使用时将其芽孢菌片放入待灭菌物品中，灭菌后将菌片浸没在含酸碱指示剂的培养液中；芽孢萌发繁殖会降低 pH，使含指示剂的培养液由紫变黄，同时需设置未灭菌的阳性对照组(PC)和不含菌片的阴性对照组(NC)。下列叙述错误的是（ ） A. 配制好的培养基需先调pH后置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌 B. 设置 NC组的作用是可以排除培养液自身 pH 变化对实验结果的干扰 C. 若实验组培养液为紫色，NC组和PC组为黄色，则灭菌达到预期效果 D. 若PC组培养液不变黄，说明芽孢可能已失活，需重新准备菌片实验 6. 下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（　　） A. 操作②到④的过程中，接种环至少需要进行6次灼烧灭菌处理 B. 配制①中的培养基培养霉菌时，一般将培养基调至弱碱性后再进行湿热灭菌 C. 接种结束后，将④倒置培养，皿底上标注菌种及接种日期等信息 D. 通过平板划线法可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 7. 测定样品中所含单细胞微生物的数量可用显微镜计数法。将某大肠杆菌培养液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色后，用细菌计数板（规格为1mm×1mm×0.02mm）进行计数，观察到一个中格的菌体数如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A. 若图示中格内大肠杆菌数量代表所有中格大肠杆菌数量的平均数，则培养液中大肠杆菌的活菌密度为1.125×1010个·mL-1 B. 细菌计数板广泛适用于细菌、酵母菌和霉菌等微生物的数量测定 C. 台盼蓝染色鉴别细胞死活的原理是细胞膜具有选择透过性 D. 细菌计数板使用时，应先在计数室上方加盖玻片，再沿凹槽边缘滴加样液 8. 黄葛树的叶子、果实（榕果）和枝干含有独特的次生代谢产物酚类化合物。为探究校内黄葛树下土壤中分解酚类化合物的细菌数量，进行了相关实验。下列分析正确的是（　　） A. 甲组中a培养基上的菌落连成一片，可能是稀释度过低造成的 B. 以乙组计数，5g土壤中酚类分解菌的估算数目是1.4×109个 C. 土壤样液先在锥形瓶内进行富集培养，再等比稀释后涂布计数 D. 以酚类为唯一碳源的培养基上生长的细菌都能合成酚类降解酶 9. 养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ） A. ①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B. ②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C. ③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D. 粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 10. 与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高，下列关于发酵工程的说法错误的是（　　） A. 发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、产生的酶及菌体本身等 B. 由黑曲霉发酵得到的柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂 C. 利用酵母菌等发酵生产的单细胞蛋白属于分泌蛋白，可制成微生物饲料 D. 微生物肥料可以改良土壤结构，有的还可以抑制土壤中病原微生物的生长 11. 下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（　　） A. 用自然生长的茎进行组培消毒时，要兼顾消毒效果和植物的耐受性 B. 培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并避免瓶内外的气体交换 C. 组织培养的培养基中含有营养物质，因此整个过程不需要光照 D. 诱导形成试管苗后，打开封口膜或瓶盖后，直接将试管苗移栽入土 12. 早在上个世纪，我国科学家就结合单倍体育种技术成功培育出玉米新品种，部分育种过程如下图。相关叙述错误的是（ ） A. 过程①包含脱分化和再分化，不同阶段激素含量及光照条件不同 B. 过程②需用秋水仙素或低温诱导处理单倍体的种子以获得二倍体 C. 过程③可从个体水平上进行筛选，从而获得稳定遗传的优良品种 D. 该培育过程涉及的生物学原理有植物细胞的全能性和染色体变异 13. 紫杉醇是一种从红豆杉树皮、根部等组织中分离出的具有抗肿瘤活性的化合物。然而红豆杉生长缓慢、野生资源匮乏，且紫杉醇含量低，从天然植物中提取已无法满足人类的生产需要。植物细胞培养是目前紫杉醇的主要生产途径之一，过程如下图。下列叙述正确的是（　　） A. 紫杉醇是红豆杉植株生长和生存所必需的次生代谢物 B. 诱导愈伤组织时，可向培养基中加入2，4-D、KT（细胞分裂素类似物）等物质 C. 悬浮细胞培养时应将红豆杉愈伤组织置于固体培养基中 D. 植物细胞培养技术能够实现红豆杉的快速繁殖 14. 花椰菜（2n=18）易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥（2n=16）对黑腐病等多种常见病害具有抗性。科研人员用射线照射处理黑芥叶肉原生质体后与花椰菜根原生质体融合，获得了抗黑腐病的杂合新植株甲、乙、丙，它们均含有花椰菜的全部染色体。下列叙述错误的是（ ） 植株 花椰菜 黑芥 杂合新植株甲 杂合新植株乙 杂合新植株丙 染色体数目 18 16 34 24 58 A. 可以利用是否含有叶绿体作为初步筛选融合原生质体的依据 B. 杂合新植株甲的单倍体的细胞中有2个染色体组，因而可育 C. 杂合新植株丙可能是由多个原生质体经PEG诱导融合而成 D. 获得的杂种细胞需要经过脱分化和再分化才能培育成新植株 15. 体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，培养方式可分为悬浮培养和贴壁培养。下列叙述正确的是（　　） A. 悬浮培养一般使用液体培养基 B. 贴壁培养一般使用固体培养基 C. 悬浮培养会发生接触抑制现象 D. 血液中淋巴细胞适合贴壁培养 16. 动物细胞培养时操作不当会造成“黑胶虫”细菌的污染，该菌对氯霉素敏感。下列叙述正确的是（ ） A. 配制细胞培养基时，加血清（含细胞生长必需的蛋白）和氯霉素后湿热灭菌 B. 在加入氯霉素防治“黑胶虫”污染过程中，需要考虑细胞和细菌生长双重因素 C. 考察“黑胶虫”污染程度时，应取细胞培养液，直接涂布在平板上培养后计数 D. 采用更换培养基、胰蛋白酶处理和分瓶培养等操作可清除“黑胶虫”污染 17. 科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞（简称iPS细胞），iPS细胞增殖分化后可形成多种组织细胞，用于多种疾病的治疗。如图为该技术的实验示意图，下列有关说法错误的是（　　） A. 体外培养iPS细胞时，定期更换培养液可以清除细胞的代谢物 B. iPS细胞能够分化成神经细胞体现了细胞具有全能性 C. 图中的诱导因子可能是特定基因、特定蛋白或小分子化合物 D. 若iPS细胞来源于病人的体细胞，经诱导并移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应 18. 2025年7月，世界首例克隆牦牛“纳木错1号”在我国西藏成功诞生，其原理是采集优质野牦牛的耳廓组织细胞进行培养，并将其注入到普通牦牛去核的卵母细胞，从而获得牦牛克隆胚胎，然后将牦牛克隆胚胎移植到本土母牦牛（受体）的子宫内获得克隆牦牛，下列叙述错误的是（　　） A. 用机械方法结合酶法处理耳廓组织获得分散的体细胞 B. 克隆牦牛的细胞核DNA与优质野牦牛相同，克隆属于无性生殖 C. 胚胎移植时需对受体牦牛注射免疫抑制剂，用于降低其对外来胚胎的排斥反应 D. 用电刺激、乙醇等激活重构胚，可使其完成细胞分裂和发育进程 19. 治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。流程图如下，相关叙述错误的是（ ） A. 核移植前需将卵母细胞培养到MⅡ期 B. 上述过程体现出动物细胞具有全能性 C. 获得的组织器官移植给个体B一般不发生免疫排斥反应 D. 胚胎干细胞需经过基因的选择性表达才能产生出所需的组织器官 20. 为解决杂交瘤细胞在传代培养过程中出现来自B淋巴细胞的染色体丢失问题，研究者将抗原刺激后的B淋巴细胞用EBV（一种病毒颗粒）感染，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞。EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能存活，但对Oua不敏感。下图表示操作过程，下列有关分析错误的是（　　） A. B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的脾脏 B. HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞 C. 杂交瘤细胞染色体丢失可能会导致抗体的产生能力下降 D. 杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力 21. 下列关于哺乳动物受精的叙述，错误的是（　　） A. 一般情况下，卵子在输卵管内发育到MⅡ期时，才具备受精的能力 B. 精子必须在雌性动物的生殖道获得能量才能参与受精 C. 受精时，透明带和卵细胞膜都会发生相应的生理反应以防止多精入卵 D. 精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体 22. 下列关于高等哺乳动物从配子形成到早期胚胎发育的过程的叙述，正确的是（　　） A. 排卵就是从卵巢中排出初级卵母细胞的过程 B. 常以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志 C. 透明带破裂标志着胚胎开始进入细胞分化的时期 D. 出现囊胚腔的胚胎不能用来进行胚胎分割 23. 华西牛是我国育种专家培育的具有完全自主知识产权的专门化肉牛新品种，打破了我国肉牛种源严重依赖进口的局面。科研人员在生产中采取胚胎工程的手段实现了华西牛的快速繁育。下列叙述错误的是（　　） A. 采集的精子需要进行获能处理后在适当的培养液中完成受精 B. 胚胎移植过程中涉及到两次检查，且两次检查的对象是相同的 C. 受体母牛需健康且具有正常的繁殖能力，胚胎移植前需要对其进行同期发情处理 D. 胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 24. 多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体 才能获得后代。下图列举了几项技术成果。 下列叙述正确的是 （ ） A. 经胚胎移植产生的后代与受体均保持一致 B. ①需获得MII期的去核卵母细胞 C. ②能大幅改良动物性状 D. ③可通过②技术实现扩大化生产，①②可通过③技术实现性状改良 25. 质粒是基因工程中最常用的载体，质粒有标记基因（如图所示），通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。质粒上箭头表示三种限制酶的酶切位点。下表是外源基因插入（插入点有a、b、c）后细菌的生长情况。下列有关叙述正确的是（　　） 项目 细菌在含氨苄青霉素的培养基上生长情况 细菌在含四环素的培养基上生长情况 ① 能生长 不能生长 ② 能生长 能生长 ③ 不能生长 能生长 A. 质粒的复制原点上有RNA聚合酶的结合位点 B. ①②③三种重组后细菌的外源基因插入点①是a，②是c，③是b C. 该质粒被一种限制酶切开时，被水解的磷酸二酯键有2个 D. 将外源基因与质粒连接时需用DNA聚合酶 26. 下图表示 PCR 过程中某个阶段反应体系的情况，①②③④表示相关物质，L、R 表示方向。下列叙述正确的是（ ） A. ②链从 L 到 R 的方向为 3′→5′，①②链均可作为子链合成的模板 B. PCR 过程需要通过解旋酶断开氢键，且为边解旋边复制 C. 以 1 个 DNA 为模板经 3 次循环需消耗 8 个引物③ D. 物质③的 5′端添加了某序列，至少需经 2 次循环才可获得该序列的双链产物 27. 下列关于基因表达载体及其构建过程的说法，错误的是（　　） A. 构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中能稳定存在且遗传给下一代 B. 一个基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、起始密码子和终止密码子等结构 C. 诱导物与诱导型启动子结合可激活或抑制目的基因表达 D. 基因表达载体中启动子是RNA聚合酶的结合部位，启动转录过程 28. 图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制酶EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ、Hind Ⅲ的酶切位点。下列有关叙述错误的是（ ） A. 在基因工程中若只用一种限制酶完成对质粒和外源DNA的切割，则可选EcoR Ⅰ B. 如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoR Ⅰ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoR Ⅰ切割位点有1个 C. 为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时可使用BamH Ⅰ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒和目的基因 D. 一个如图1所示的质粒分子经EcoRⅠ切割后，含有1个游离的磷酸基团 29. 如图所示，研究人员将雪花莲凝集素基因（GNA）和尾穗苋凝集素基因（ACA）与载体（pB1121）结合，然后导入棉花细胞。下列操作不符合实验目的是（ ） A. 用PCR技术可检测GNA和ACA基因是否导入棉花细胞中 B. 将棉花细胞接种在含氨苄青霉素的培养基上可筛选出转基因细胞 C. 用限制酶BsaB1和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA—ACA融合基因 D. 与只用KpnI相比，KpnI和XhoI处理融合基因和载体可保证基因转录方向正确 30. 利用AI（人工智能）破解蛋白质结构和功能之谜，建立蛋白质数据库，并在此基础上进行蛋白质结构设计和优化，会给未来蛋白质工程的发展带来翻天覆地的变化。关于该技术的实施，下列说法错误的是（　　） A. AI预测新型蛋白质的结构与功能的原理是中心法则 B. 可以通过改造或合成基因来获得AI设计的蛋白质 C. 根据某种蛋白质的氨基酸序列推理的基因序列中不包含启动子和终止子 D. 用蛋白质氨基酸序列推测的RNA编码序列有多种可能，原因是密码子具有简并性 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有一项或多项是符合题目要求的，全选对但不全得1分，有选错得0分。 31. 营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，导致代谢过程中某些合成反应不能进行的菌株。如图是科研人员利用影印法（用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上）初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。下列相关说法错误的是（　　） A. ①过程接种方法为稀释涂布平板法，接种后的培养皿立即进行倒置培养 B. 进行②过程的顺序是先将丝绒布“复印”至完全培养基，再“复印”至基本培养基 C. 氨基酸缺陷型菌株应从基本培养基上没有、完全培养基上对应位置有的菌落中挑选 D. 统计菌落种类和数量时要每隔一定时间观察统计一次，直到各类菌落数目稳定为止 32. 香蕉是海南的热带水果，但是束顶病毒能够引起香蕉的严重病害，科研人员用感病植株的茎尖作为外植体进行培养获得脱毒苗，实验结果如图所示。下列有关叙述正确的是（ ） A. 感病植株的茎尖需经灭菌处理后才能用于脱毒苗的培育 B. 培养过程中培养基常添加生长激素、细胞分裂素等激素 C. 超低温保存感病植株茎尖可提高其脱毒率，降低成活率 D. 茎尖脱分化形成的愈伤组织是一团呈正方形的薄壁组织团块 33. 乳腺癌化疗的药物在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，为降低药物对患者的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体-药物偶联物（ADC），过程如图所示。下列相关说法正确的是（　　） A. 过程①是进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可以获得能分泌所需抗体的细胞 B. ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，ADC起作用时会被细胞吞噬，并在溶酶体内被分解后释放药物 C. 经步骤③筛选得到的杂交瘤细胞具有的特点是能准确识别抗原的细微差异并能大量制备 D. ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是抗体能特异性地作用于乳腺癌细胞，避免其他细胞受损 34. 单峰骆驼在野外几乎灭绝，科学家欲通过胚胎工程的方法拯救野化单峰骆驼，进行了如图所示研究。请据图分析，下列说法错误的是（　　） A. 为提高胚胎利用率，可采用体外受精等无性繁殖技术 B. 为使野化单峰骆驼a超数排卵，可注射适量的外源促性腺激素 C. 胚胎移植后，胚胎进一步扩大导致囊胚腔破裂的过程称为孵化 D. 若①表示体外受精，可利用野化单峰骆驼b刚排出的精子与卵母细胞完成受精作用 35. 荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA的含量。其原理是在PCR反应体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当子链延伸至探针处时，探针水解，使荧光监测系统接收到荧光信号，如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 引物中（G+C）含量越高，其与模板DNA结合的稳定性则越低 B. 若引物1、2之间易发生碱基互补配对，则不能进行有效检测 C. 实验后期荧光强度不再变化可能是因为荧光探针或原料等耗尽 D. 若某次PCR反应共产生52个等长DNA，则需加入52个荧光探针 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 36. 我国是世界上啤酒的生产和消费大国。啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，其工业化生产流程如图所示。回答下列问题： （1）发酵工程一般包括菌种的选育、________、培养基的配制、灭菌、________、发酵罐内发酵、分离提纯产物等方面；酿酒酵母的新陈代谢类型是________。 （2）图中焙烤阶段应注意控制温度，不能使________失活；发酵时要严格控制________（答出两点即可）等发酵条件，环境条件不仅会影响微生物的生长增殖，还会影响________。 （3）啤酒发酵过程可分为________、后发酵两个阶段，其中酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在前一阶段完成。后一阶段要在低温、________的环境下储存一段时间才能形成澄清、成熟的啤酒。 （4）发酵阶段，从发酵罐中取样装入甲瓶，初步估测甲瓶中酵母菌数量为3×106个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL用________稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过300个，则至少应将甲瓶的菌液稀释________倍。 37. 尼帕病毒（NV）是一种新型人畜共患病毒，科学家利用该病毒的结构蛋白（蛋白A）作为抗原制备单克隆抗体的流程如图所示。回答下列问题： （1）制备单克隆抗体涉及多种技术手段，其中________是动物细胞工程的基础，实验时一般需要多次注射蛋白A免疫小鼠，目的是________。 （2）与骨髓瘤细胞融合前，B淋巴细胞________（填“需要”或者“不需要”）通过原代培养扩大细胞数量。诱导细胞融合时，灭活病毒表面的糖蛋白和酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上________重新排布，使细胞融合。 （3）杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基，在该培养基上________细胞会死亡。经筛选②得到的细胞最简便的培养方法是________（填“体内培养”或“体外培养”），原因是________。（答出1点即可） （4）为鉴定单克隆抗体识别抗原的具体区域，可将抗原（A蛋白）逐步截短，分别与纯化的单克隆抗体反应，实验结果如图所示（“+”表示有反应，“-”表示无反应，“aa”表示氨基酸）。 结果证明该单克隆抗体识别抗原（A蛋白）的区域大概为________（填“40～50”、“40～55”或“40～60”）位氨基酸。 38. 为治疗mtDNA（线粒体DNA）突变导致的线粒体遗传病，某科研团队通过第一极体移植得到了“三亲小猴”，过程如图1所示。回答下列问题： （1）“三亲小猴”的诞生需依次用到动物细胞培养、第一极体移植、________（答出2点即可）等技术，属于________（填“有性”或“无性”）生殖。该过程不能直接用患者猴的体细胞作为核供体的原因是________。 （2）次级卵母细胞的获取过程中，需要对雌性猴注射________进行超数排卵处理。图中过程②移除“原核”移除的是________。研究人员对“三亲小猴”、供体猴、代孕母体猴和患者猴的mtDNA中某一特异性序列进行了检测、比对，结果如图2所示。分析可知，“三亲小猴”的mtDNA特异性序列与________的一致，不同于另两种猴，原因是________。 （3）过程⑥之前想要进行性别鉴定，应取________时期的________细胞进行DNA检测，可优先选择是________性（填“雌”或“雄”）胚胎移入子宫发育以进一步避免线粒体遗传病遗传给后代。 39. 定点诱变技术可以在体外改造目的DNA分子，进而研究基因的表达以及蛋白质的结构与功能之间的关系。经典的大引物PCR定点诱变技术成为基于PCR的定点诱变技术中应用最普遍的方法，操作过程如图甲。研究者欲改造某基因并将其导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒含有氨苄青霉素抗性基因、LacZ基因及一些酶切位点，结构如图乙。回答下列问题： （1）PCR体系中，除了加入目的基因与引物外，还应加入________等（答出两点即可）。利用大引物PCR进行定点诱变需要进行两轮PCR（PCR1和PCR2），在PCR1中，至少需要________个循环才能获得相应的大引物模板。在PCR2中，要获得带有诱变点的改良基因，引物应选用大引物两条链中的________（填“①”或“②”）。 （2）为实现质粒和改良基因的高效连接，选用限制酶XmaⅠ切割质粒而不选用限制酶SmaⅠ的原因是________。 （3）在构建改良基因表达载体时，有的质粒含有改良基因，有的质粒为空白质粒，将含上述组件的溶液加入到大肠杆菌菌液中，适宜温度下培养一段时间后，再将菌液涂布在含氨苄青霉素和________的平板上。一段时间后，在培养基上出现白色和蓝色两种菌落，其中________色菌落含有重组质粒，判断的依据是________。 （4）与X射线诱变相比，该诱变技术的优点是________。 40. 科研人员为了培育出耐盐水稻，从野生大豆中提取出了耐盐基因，先用PCR技术大量扩增耐盐基因，然后将该基因插入农杆菌的T-DNA中，获得重组质粒，再利用农杆菌转化法，将目的基因导入水稻细胞内，最终培育出了耐盐水稻。该培育实验所用农杆菌的Ti质粒的部分结构和耐盐基因的结构如图1所示。回答下列问题： （1）基因工程中的转化是指________。该农杆菌的Ti质粒中，潮霉素抗性基因的模板链与OCS基因的模板链________（填“位于”或“不位于”）该质粒的同一条脱氧核苷酸链上。 （2）用PCR技术大量扩增耐盐基因时，为了提高耐盐基因与Ti质粒的正确拼接率，应在引物________的5′端添加碱基序列5′-________-3′，并用限制酶________切割Ti质粒。 （3）先用农杆菌感染水稻细胞，再用含潮霉素的培养基培养水稻细胞，能在该培养基上生长的水稻细胞不一定含目的基因，原因是________。 （4）根据耐盐基因和OCS基因序列合成相关引物，并利用PCR和电泳检测转基因植株中是否导入耐盐基因，得到的电泳图谱如图2所示。为了能在波长为300nm紫外灯下检测出DNA分子，电泳时需要在琼脂糖溶液中加入适量的________。据图2可知，转化成功的有植株________，理由是________。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $