精品解析：四川成都七中万达学校等校2025-2026学年下学期高2024级半期考试生物试卷

成都七中万达学校2025-2026学年下期高2024级半期考试 生物试卷 满分：100分时间：75分钟 一、单选题：本题共30小题，每小题1.5分，共45分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 在制作发酵食品的学生实践中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是（ ） A. 泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气 B. 果酒与果醋发酵时温度宜控制在18-25℃，泡菜发酵时温度宜控制在30-35℃ C. 制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料 D. 葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后可直接通入无菌空气制作葡萄醋 【答案】C 【解析】 【详解】A、泡菜发酵需维持严格无氧环境，开盖放气会引入氧气和杂菌，抑制乳酸菌代谢甚至导致泡菜变质，发酵产生的气体可通过坛沿水封结构溢出，无需开盖放气，A错误； B、果酒发酵适宜温度为18-25℃，果醋发酵（醋酸菌）适宜温度为30-35℃，泡菜发酵适宜温度为18-20℃，B错误； C、制作果酒时葡萄汁不超过发酵瓶体积的2/3，既能为酵母菌前期有氧繁殖提供氧气，也可避免发酵产生的CO₂导致发酵液溢出；制作泡菜时盐水淹没全部菜料，可创造无氧环境保证乳酸菌正常代谢，C正确； D、醋酸菌发酵除需要有氧环境外，还需要30-35℃的适宜温度，制作好葡萄酒后仅通入无菌空气，温度不符合醋酸菌代谢需求，无法直接制作葡萄醋，D错误。 2. 某科研小组分别用3种不同浓度的食盐制作泡菜，如图是活动小组记录的亚硝酸盐含量与发酵天数的关系图。下列叙述正确的是（ ） A. 泡菜制作过程中亚硝酸盐的含量只与食盐溶液浓度有关 B. 前4天亚硝酸盐含量增多可能是其他细菌大量繁殖导致的 C. 根据曲线图可知三种食盐溶液浓度下取食泡菜的最佳时间相同 D. 亚硝酸盐是乳酸菌的代谢产物，后期含量降低是乳酸菌数量降低所致 【答案】B 【解析】 【详解】A、泡菜制作中亚硝酸盐的含量不仅与食盐浓度有关，还与发酵温度、腌制时间、杂菌污染等多种因素有关，A错误； B、发酵初期，乳酸菌尚未成为优势菌，蔬菜表面的杂菌（如硝酸盐还原菌）大量繁殖，会将硝酸盐还原为亚硝酸盐，导致亚硝酸盐含量上升，B正确； C、3%食盐组亚硝酸盐峰值在第5天左右，之后缓慢下降，5%食盐组亚硝酸盐峰值在第3天左右，之后快速下降，7%食盐组亚硝酸盐峰值低且下降快，三者亚硝酸盐含量下降到安全水平的时间不同，因此取食泡菜的最佳时间不同，C错误； D、亚硝酸盐不是乳酸菌的代谢产物，乳酸菌的代谢产物是乳酸。后期亚硝酸盐含量降低，是因为乳酸菌产生的乳酸抑制了硝酸盐还原菌的活动，同时亚硝酸盐被分解，D错误。 3. 为测定某种大肠杆菌对糖类的需求情况，某兴趣小组配制了如下培养基： 成分 NaCl KH2PO4 K2HPO4 （NH4）2SO4 MgSO4⋅7H2O 琼脂 质量（g） 1 0.5 0.5 2 0.2 20 同时配制质量分数为10%的葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖溶液。实验操作流程如下：将大肠杆菌悬液与熔化并冷却至50℃的固体培养基混匀，倒平板；通过无菌操作分别向平板中加入蘸有不同糖类的无菌滤纸片，待平板吸收干燥后倒置培养，观察大肠杆菌菌落的生长情况。下列叙述正确的是（　　） A. 上表中的培养基属于固体培养基且不含碳源，说明大肠杆菌是自养型微生物 B. 倒平板时应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C. 培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定 D. 该实验已经形成了相互对照，不需要保留若干个不加入糖类，但加入等量无菌水的平板，待平板吸收干燥后倒置培养作为对照 【答案】C 【解析】 【详解】A、上表中的培养基添加了琼脂属于固体培养基，在培养大肠杆菌时向培养基中添加了葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖溶液其中的一种，因此大肠杆菌是异养型微生物，A错误； B、倒平板时，应将培养皿盖打开一条缝隙，不能完全放到一边，否则容易导致杂菌污染，B错误； C、培养基中的KH2PO4、K2HPO4除了能提供无机盐外，还可以作为缓冲剂，保持培养基的pH稳定，C正确； D、该实验需要保留若干个不加入糖类，但加入等量无菌水的平板，作为空白对照，说明平板上出现菌落圈是大肠杆菌利用糖类的结果，D错误。 4. 为了调查某河流的水质情况，某研究小组利用两种不同方法对该河流水样中的细菌进行分离，结果分别如图甲、乙所示。下列叙述正确的是（　　） A. 图甲对应平板划线法，连续划线操作未将聚集的菌种稀释 B. 图乙对应涂布平板法，若想要获得图乙所示结果，则一般要对水样进行稀释 C. 若采用图甲对应方法对细菌进行计数，则应选择菌落数为30～300的平板进行统计 D. 图乙中的一个菌落由一个活菌生长发育而来，统计结果用活菌数表示 【答案】B 【解析】 【详解】A、平板划线法的原理就是通过连续划线，逐步将聚集的菌种稀释，最终得到单菌落，该操作已经实现了菌种的稀释，A错误； B、涂布平板法（图乙）接种前，需要对高浓度的水样进行梯度稀释，才能得到分散均匀的单菌落，B正确； C、平板划线法（图甲）只能分离纯化菌种，不能用于细菌计数，只有稀释涂布平板法可用于计数，计数时才需要选择菌落数为30～300的平板统计，C错误； D、稀释涂布平板法中，可能多个活菌聚集在一起，最终只形成一个菌落，因此图乙的一个菌落不一定由一个活菌生长发育而来，统计结果往往比实际活菌数偏低，D错误。 5. 微生物培养常常需要测定微生物的数量，常用的方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。下列有关微生物计数的叙述，错误的是（　　） A. 活菌计数法就是通过统计平板上的菌落数，推测样品中大约含有多少活菌 B. 血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数 C. 活菌计数法因为观察的是菌落，所以统计值往往比活菌的实际数目偏高 D. 在同一稀释度下，应至少对3个菌落数目在30～300的平板进行计数 【答案】C 【解析】 【详解】A、活菌计数法的原理是稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，因此可通过统计平板菌落数推测样品中的活菌数，A正确； B、血细胞计数板是显微镜直接计数的常用工具，个体相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等适合用该方法计数，B正确； C、活菌计数法统计时，若两个或多个活菌粘连在一起，平板上只能形成一个菌落，因此统计值往往比活菌的实际数目偏低，C错误； D、为保证计数结果准确，同一稀释度下需要至少涂布3个平板，选择菌落数在30~300之间的平板计数后取平均值，D正确。 6. 为提高葡萄酒品质，科研人员利用如图所示技术流程，筛选出发酵速度快、具有较强酒精耐受力优良酿酒酵母，其能在WL培养基（含有指示剂溴甲酚绿）上形成奶油状略带绿色、球形的菌落。而酒精耐受力弱的酵母，因代谢改变pH值导致培养基颜色变化。下列相关说法正确的是（　　） 注：YPD培养基和WL培养基是酵母菌培养常用培养基 A. Ⅲ属于选择培养基，依据其上生长的菌落特征，可挑选出优良酵母菌种 B. 进行酒精耐受力检测时，需重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基 C. 颜色变化大的培养基中的酵母菌，即为有较强酒精耐受力优良酿酒酵母 D. Ⅰ、Ⅱ均为液体培养基，图中重复操作可提升酿酒酵母的酒精发酵能力 【答案】B 【解析】 【详解】A、WL培养基Ⅲ含有指示剂溴甲酚绿，且优良酿酒酵母能在其上形成奶油状略带绿色、球形的菌落，它属于鉴别培养基，而非选择培养基，A错误； B、进行酒精耐受力检测时，需要重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基，以此来筛选出酒精耐受力强的酵母菌，B正确； C、题干明确说明，酒精耐受力弱的酵母，因代谢改变pH导致培养基颜色变化，而优良酵母不会引起明显颜色变化，形成特征菌落，颜色变化大的培养基中的酵母菌，是酒精耐受力弱的酵母，不是优良菌株，C错误； D、YPD培养基Ⅰ一般为固体培养基，YPD培养基Ⅱ为液体培养基，重复操作是为了筛选出更符合要求的酵母菌，而不是直接提升其酒精发酵能力，D错误。 7. 吃腐烂水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，实验基本步骤如图所示。请据此判断下列说法正确的是（ ） A. 根据本实验探究目的，步骤二接种采用的工具是接种环 B. 步骤三在适宜环境下培养8小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量值 C. 若菌落的种类和数量均为①>②>③>④>⑤，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低 D. 若编号为⑤的部位微生物的数量极少，则切掉①～④后的苹果就可以放心食用 【答案】C 【解析】 【分析】微生物常见的接种的方法： ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落； ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、本实验目的是探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，要对微生物进行计数，应采用稀释涂布平板法，而平板划线法不能用于计数，接种环是平板划线法所用工具，A错误； B、不同微生物生长繁殖速度不同，培养8小时不一定能让所有微生物都形成肉眼可见的菌落，也就不能统计出全部微生物的种类和数量，B错误； C、若菌落的种类和数量均为①>②>③>④>⑤，说明离腐烂部位越远，微生物的种类和数量越少。因为微生物代谢产生毒素，所以离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低，C正确； D、即使编号为⑤的部位微生物数量极少，但不能排除该部位以及① - ④部位可能存在少量微生物产生的毒素，所以不能放心食用，D错误。 故选C。 8. 啤酒生产的工艺流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 焙烤的目的是加热杀死种子胚但不使淀粉酶失活 B. 糖化阶段淀粉酶可催化淀粉分解 C. 主发酵结束后应将发酵液置于低温密闭环境中储存 D. 后发酵阶段完成大部分糖的分解和代谢物的生成 【答案】D 【解析】 【详解】A、大麦发芽后焙烤，目的是杀死种子胚，防止其继续生长消耗淀粉，同时控制温度不使淀粉酶失活，保证后续糖化过程能顺利进行，A正确； B、糖化阶段，发芽过程中产生的淀粉酶可催化淀粉分解为麦芽糖等，为酵母菌发酵提供底物，B正确； C、主发酵结束后，将发酵液置于低温密闭环境中储存，可抑制杂菌生长，同时让啤酒风味物质进一步成熟、澄清，C正确； D、啤酒生产中，主发酵阶段才是完成大部分糖的分解和主要代谢物（酒精、CO2等）生成的阶段；后发酵阶段主要是让剩余的糖分继续缓慢发酵、风味物质成熟、澄清和排杂，D错误。 9. 发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域得到了广泛的应用，形成了规模庞大的发酵工业。下列相关叙述错误的是（ ） A. 从酵母菌的纯培养物中获取的单细胞蛋白可制成微生物饲料 B. 乳酸发酵前期产生的乳酸会抑制杂菌生长，积累过多也会抑制乳酸菌 C. 青霉菌是生产青霉素的常用菌种，常采用过滤、沉淀等方法获取青霉素 D. 谷氨酸棒状杆菌是生产谷氨酸的常用菌种，在弱碱性条件下发酵会积累谷氨酸 【答案】C 【解析】 【详解】A、单细胞蛋白即微生物菌体本身，从酵母菌纯培养物中获得的酵母菌菌体就是单细胞蛋白，可加工为微生物饲料，A正确； B、乳酸发酵前期产生的乳酸使发酵液呈酸性，可抑制杂菌繁殖；当乳酸积累过多时，发酵液pH过低会抑制乳酸菌自身酶的活性，进而抑制乳酸菌代谢，B正确； C、青霉素是青霉菌分泌到发酵液中的胞外代谢产物，过滤、沉淀是分离收集菌体（如单细胞蛋白）的方法，提取青霉素需采用适当的提取、分离和纯化措施来获得，C错误； D、谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸时，弱碱性发酵条件下会积累谷氨酸，若为酸性条件则会生成谷氨酰胺等其他产物，D正确。 10. 发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物某些特定功能，为人类生产有用的产品。常用好氧菌谷氨酸棒状杆菌利用图1的发酵罐来大量生产味精，发酵流程如图2所示。下列叙述正确的是（　　） A. 通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 B. 为了保证发酵产品的产量和品质，图中发酵配料及发酵罐需经过严格的灭菌 C. 图中发酵过程需通入无菌空气，并通过搅拌使培养液与菌种充分接触后关闭通气口 D. 发酵中所使用的谷氨酸棒状杆菌菌种可从自然界筛选也可通过诱变育种、杂交育种获得 【答案】B 【解析】 【详解】A、单细胞蛋白本身就是指微生物菌体（如酵母菌、细菌等），不需要从细胞中提取，直接收集菌体即可，A错误； B、发酵工程中，培养基（发酵配料）和发酵罐都必须经过严格灭菌，防止杂菌污染，避免杂菌与生产菌竞争营养、产生有害物质，从而保证产品的产量和品质，B正确； C、谷氨酸棒状杆菌是好氧菌，整个发酵过程都需要持续通入无菌空气，搅拌的目的是增加培养液中的溶氧量，同时使菌种与营养物质充分接触，不能关闭通气口，C错误； D、谷氨酸棒状杆菌是细菌，属于原核生物，不能进行有性生殖，因此无法通过杂交育种获得菌种，只能通过诱变育种、基因工程育种或自然界筛选，D错误。 11. 某农业科技公司为抢救濒危药用植物“红豆杉”，启动了组织培养快速繁殖项目。在实验中，技术人员发现：当外植体取自树皮部位时，脱毒效果差；而取自茎尖分生组织时，可获得高纯度脱毒苗。同时，为研究生殖细胞全能性，团队还进行了花粉离体培养实验。下列关于该过程的叙述，错误的是（　　） A. 外植体脱分化过程中，细胞逐渐失去原有形态和功能特异性，形成不定形的薄壁组织团块 B. 再分化阶段，若培养基中细胞分裂素与生长素比例较高，则有利于芽的形成，但会抑制根的发育 C. 单倍体植株幼苗经秋水仙素处理后恢复可育性，体现了植物生殖细胞的全能性 D. 选择茎尖分生组织作为外植体获得脱毒苗，是因为该区域的病毒极少，甚至无病毒 【答案】C 【解析】 【详解】A、脱分化过程中，已分化的细胞会逐渐失去原有形态和功能特异性，形成愈伤组织，愈伤组织就是不定形的薄壁组织团块，A正确； B、再分化阶段，细胞分裂素与生长素的比例会调控分化方向，比例较高时有利于芽的分化，同时抑制根的发育，比例较低时有利于根的分化，B正确； C、细胞全能性的判断标准是已分化的细胞发育为完整个体，花粉（生殖细胞）发育为单倍体幼苗的过程已经体现了生殖细胞的全能性，秋水仙素处理使染色体加倍恢复可育性的过程不体现全能性，C错误； D、茎尖分生组织细胞分裂速度快，病毒极少甚至没有病毒，因此选择该部位作为外植体可以获得高纯度脱毒苗，D正确。 12. 毛花猕猴桃为二倍体，果实大，维生素C含量高。软枣猕猴桃为四倍体，极耐寒，在-40℃下可安全越冬。农科所想利用下图技术流程培育兼具这两种猕猴桃优点的新品种。下列叙述正确的是（　　） A. 人工诱导原生质体融合的方法有电融合法、离心法等 B. 新品种的体细胞含有3个染色体组，不可育 C. 植物体细胞杂交技术成功的标志是杂种细胞再生出细胞壁 D. 该技术属于有性杂交育种，能克服远缘杂交不亲和障碍 【答案】A 【解析】 【详解】A、人工诱导原生质体融合的物理方法主要有电融合法、离心法等，化学方法主要为PEG诱导法，A正确； B、毛花猕猴桃为二倍体（2个染色体组），软枣猕猴桃为四倍体（4个染色体组），二者原生质体融合后，杂种细胞含6个染色体组（2+4），为异源六倍体，减数分裂时染色体可正常联会，是可育的，B错误； C、植物体细胞杂交技术成功的标志是获得完整的杂种植株，而杂种细胞再生出细胞壁仅代表原生质体融合成功，C错误； D、该技术属于植物体细胞杂交育种，是无性繁殖技术，不属于有性杂交育种；它能克服远缘杂交不亲和障碍，D错误。 13. 胡萝卜（2n=18）具有清热解毒的功效，羊角芹（2n=12）有祛风止痛的功效。科研人员利用胡萝卜、羊角芹进行育种，如图为部分育种流程。下列分析正确的是（　　） A. 用秋水仙素处理植株①的种子或萌发的幼苗可使其染色体数目加倍 B. 获得植株③的过程中利用了愈伤组织的细胞具有分裂旺盛的特点 C. 获得植株④时需用生长素与细胞分裂素比值低的培养基诱导生芽、根 D. 植株⑤的生殖细胞中含有15条染色体，共1个染色体组 【答案】B 【解析】 【详解】A、植株①是由胡萝卜花粉粒发育成的单倍体，单倍体高度不育，没有种子，只能用秋水仙素处理其幼苗使其染色体数目加倍，A错误； B、γ射线诱导基因突变的主要时期是细胞分裂间期（DNA复制时），愈伤组织细胞分裂旺盛，在获得植株③（诱变育种）时，可在分裂间期用γ射线处理愈伤组织，正是利用了愈伤组织细胞分裂旺盛的特点，B正确； C、获得植株④时，生长素与细胞分裂素比值低时，有利于芽的分化；比值高时，有利于根的分化，C错误； D、胡萝卜（2n=18）和羊角芹（2n=12）的原生质体融合后，植株⑤的体细胞含4个染色体组（18+12=30条染色体），其生殖细胞中含有15条染色体，共2个染色体组，D错误。 故选B。 14. 诱导多能干细胞（iPSCs）在生物医药领域有广阔的应用前景。研究人员利用多种小分子化合物协同诱导小鼠胎儿成纤维细胞，成功获得iPSCs。相关叙述错误的是（ ） A. 利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿某些组织可获得分散的成纤维细胞 B. 小分子化合物改变了小鼠胎儿成纤维细胞的基因表达 C. 小鼠胎儿成纤维细胞形成iPSCs的过程属于细胞分化 D. 培养小鼠胎儿成纤维细胞和iPSCs时需提供一定浓度的CO2 【答案】C 【解析】 【详解】A、动物细胞培养时，胰蛋白酶可分解细胞间的粘连蛋白，使组织块分散为单个细胞，因此利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿相关组织可获得分散的成纤维细胞，A正确； B、小分子化合物诱导高度分化的成纤维细胞转化为多能干细胞iPSCs的本质是细胞发生重编程，改变了细胞的基因表达情况，B正确； C、细胞分化是细胞在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程，通常是分化程度升高、全能性降低的过程。成纤维细胞是分化程度高的体细胞，iPSCs是分化程度低、全能性较高的干细胞，该过程属于细胞脱分化（重编程），不属于细胞分化，C错误； D、动物细胞培养时，需要提供一定浓度的CO₂以维持培养液的pH，因此培养成纤维细胞和iPSCs都需要提供一定浓度的CO₂，D正确。 故选C。 15. 多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6～5倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，研究人员按如下流程制备了抗CD47的单克隆抗体。相关叙述正确的是（　　） A. 过程①可一次性注射较大剂量的CD47，以提高小鼠的免疫效果 B. 灭活病毒表面的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，诱导细胞融合 C. 过程②和过程③筛选出的杂交瘤细胞，染色体数目和产生的抗体一定相同 D. 将单克隆抗体加入巨噬细胞的培养液中，能解除CD47对巨噬细胞的抑制作用 【答案】B 【解析】 【详解】A、过程①为给小鼠注射抗原CD47，不能一次性注射较大剂量，通常需多次、小剂量注射以增强免疫效果，诱导产生更多能分泌抗CD47抗体的B淋巴细胞，A错误； B、灭活病毒表面的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，B正确； C、过程②是筛选杂交瘤细胞，过程③是筛选能产生特异性抗体（抗CD47抗体）的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞是脾细胞与骨髓瘤细胞融合形成的，可能处于细胞分裂的不同时期，染色体数目可能不同；由于取自脾脏的B细胞不止一种，③筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体可能不同，C错误； D、抗CD47的单克隆抗体可与肿瘤细胞表面的CD47特异性结合，阻断CD47对巨噬细胞的抑制信号，从而解除其抑制作用，将单克隆抗体加入巨噬细胞的培养液中，不能解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，D错误。    16. 下图表示一种治疗乳腺癌的抗体—药物偶联物（ADC）的作用机制。下列叙述错误的是（　　） A. ADC中的药物可与癌细胞表面的特定抗原特异性结合 B. ADC可被溶酶体降解并释放出药物达到选择性杀伤 C. ADC可能引起癌细胞中某些基因的表达增强，导致细胞凋亡 D. ADC在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点 【答案】A 【解析】 【详解】A、ADC中的抗体（而非药物）可与癌细胞表面的特定抗原特异性结合，A错误； B、分析题图可知，ADC被细胞吞噬后，可被溶酶体裂解，从而释放出药物，进而达到选择性杀伤癌细胞的目的，B正确； C、药物释放后可能会影响癌细胞内的信号传导等过程，引起癌细胞中某些基因的表达增强，最终导致细胞凋亡，C正确； D、由于ADC中的抗体能特异性结合癌细胞表面的特定抗原，靶点清楚，能更精准地作用于癌细胞，所以在临床上具有毒副作用小等优点，D正确。 17. 我国科学家经过多年的反复试验，攻克了导致体细胞克隆猴失败的障碍，开发出如图所示的培育流程。该技术中研究人员可以在10s之内对卵母细胞进行去核，在15s之内将体细胞注入去核的卵母细胞。下列说法错误的是（　　） A. 灭活的仙台病毒所起的作用是诱导体细胞和去核卵母细胞融合 B. Kdm4d的mRNA和TSA可改变组蛋白的表观遗传修饰，调控基因表达 C. 对卵母细胞进行快速的去核和注入体细胞操作可以大大减少对卵母细胞的伤害 D. 该过程涉及动物细胞核移植等生物工程技术，同时说明了动物体细胞具有全能性 【答案】D 【解析】 【详解】A、灭活的仙台病毒所起的作用是诱导体细胞和去核卵母细胞融合，A正确； B、组蛋白的去甲基化和脱乙酰化与表观遗传密切相关，故添加Kdm4d的mRNA和TSA的目的是调控相关基因表达，使细胞核的全能性得以体现，B正确； C、对卵母细胞进行快速的去核和注入体细胞操作可大大减少对卵母细胞的伤害，提高成功率，C正确； D、图示过程涉及动物细胞核移植、动物细胞培养等生物工程技术，但该实验说明动物体细胞核具有全能性，D错误。 18. “三亲试管婴儿”的培育过程可选用如下技术路线。下列叙述正确的是（ ） A. 卵母细胞捐献者携带的红绿色盲基因能够遗传给“三亲婴儿” B. “三亲婴儿”的遗传物质来自提供细胞核的母亲和提供精子的父亲 C. 该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代 D. 通常用灭活的病毒诱导精子和卵母细胞融合实现体外受精 【答案】C 【解析】 【详解】A、红绿色盲是核基因控制的遗传病，卵母细胞捐献者只提供细胞质，不提供细胞核，因此红绿色盲基因无法遗传给三亲婴儿，A错误； B、三亲婴儿的遗传物质除了父母提供的核遗传物质，还包含捐献者细胞质中的线粒体遗传物质，B错误； C、该技术中母亲仅提供细胞核，胎儿的细胞质线粒体来自捐献者，因此可以避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代，C正确； D、灭活病毒是诱导动物细胞融合的方法，体外受精不需要该处理，可在体外适宜条件下完成精子和卵母细胞的受精过程，D错误。 19. 多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体才能获得后代。下图列举了几项技术成果，下列叙述正确的是（　　） A. 受体须是健康的、同品种的、生理状况相同的雌性动物 B. ①②技术中均可用Ca2+载体处理，但作用对象不同 C. ①③技术中需取内细胞团进行性别鉴定，方可获得相应的奶牛或山羊 D. ③可通过①②技术实现大量生产具有相同遗传背景的动物，①②可通过③技术实现性状改良 【答案】B 【解析】 【详解】A、胚胎移植的受体应该是健康的、有正常繁殖能力的同品种、生理状况相同的雌性动物，不一定是同品种的，A错误； B、①试管动物技术：Ca2+载体处理的是精子，使其获能。②克隆动物技术：使用Ca2+载体激活重构胚，两者作用对象不同，B正确； C、进行性别鉴定时应取滋养层细胞，取内细胞团会损伤胚胎，C错误； D、②克隆技术可得到大量同种个体，所以③转基因动物可通过②克隆动物技术实现扩大化生产， ①试管动物技术主要用于培育有性生殖的后代，而非实现③的扩大化生产，D错误。 20. 利用基因工程赋予生物以新的遗传特性，或创造出更符合人类需要的生物产品时，需要使用多种工具酶，有4种限制性核酸内切酶的切割位点如图所示。下列相关叙述错误的是（　　） A. 限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，能识别特定核苷酸序列 B. 用限制酶SmaI和EcoRV切割后产生的均为平末端 C. DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是磷酸二酯键 D. 含有1个EcoRI识别位点的环状DNA，被EcoRI切割后可形成2个DNA片段 【答案】D 【解析】 【详解】A、限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，能识别特定核苷酸序列，并在特定位点切割 DNA，A正确； B、Sma I：识别序列是CCCGGG，切割位点在CCC和GGG之间，切割后两条链的末端是齐平的，产生平末端。 EcoR V：识别序列是GATATC，切割位点在中间的AT之间，切割后两条链的末端也是齐平的，同样产生平末端，B正确； C、DNA连接酶催化磷酸二酯键的形成，使得目的基因和质粒相连，C正确； D、对于环状 DNA 分子（如质粒）， 若含有1 个某限制酶的识别位点，被该酶切割后，环状 DNA 会被打开，形成1 个线性 DNA 片段，D错误。 21. CRISPR-Cas9系统中，Cas9蛋白与sgRNA形成的复合物能特异性切割DNA．为探究该复合物中各组分的作用，研究人员进行了如表所示的实验。下列分析错误的是（ ） 组别 处理方式 是否能切割DNA ① 完整Cas9-sgRNA复合物+DNA底物 是 ② Cas9-sgRNA复合物经蛋白酶处理+DNA底物 否 ③ Cas9-sgRNA复合物经RNA酶处理+DNA底物 否 ④ 从复合物中分离的Cas9蛋白+DNA底物 否 ⑤ 从复合物中分离的sgRNA+DNA底物 否 A. sgRNA的碱基序列可能会与靶DNA某条链的部分碱基序列互补 B. 实验①和实验②对照，可说明Cas9蛋白是切割DNA所必需的 C. 与实验①相比，实验②③均采用了自变量控制中的“减法原理” D. 对比分析实验①～⑤可得出CRISPR-Cas9系统中各组分的具体作用 【答案】D 【解析】 【详解】A、sgRNA需要特异性识别靶DNA序列才能实现精准切割，因此其碱基序列可与靶DNA某条链的部分碱基序列互补配对，A正确； B、实验①为完整复合物，能切割DNA，实验②用蛋白酶处理后Cas9蛋白被水解，无法切割DNA，二者对照可说明Cas9蛋白是切割DNA必需的组分，B正确； C、自变量控制的减法原理是指人为去除某种影响因素，实验②去除了复合物中的蛋白质，实验③去除了复合物中的RNA，均运用了减法原理，C正确； D、实验①~⑤仅能证明Cas9蛋白和sgRNA同时存在时才能完成DNA切割，无法确定二者各自的具体作用（如sgRNA的识别作用、Cas9的催化切割作用），D错误。 22. 下图为“DNA的粗提取和鉴定”实验中几个重要步骤的示意图，下列叙述错误的是（　　） A. 实验的操作顺序是③②①④，图②中的纱布不能用滤纸代替 B. 图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精 C. 图③中的鸡血细胞不可以用哺乳动物成熟的红细胞代替 D. 图④操作后加入二苯胺试剂充分振荡，可观察到颜色变蓝 【答案】D 【解析】 【详解】A、图中“DNA的粗提取和鉴定”的正确的实验操作顺序是③破碎细胞→②获取含DNA的滤液→①DNA析出→④DNA的再溶解，②中的纱布不能用滤纸代替，否则DNA会被吸附，A正确； B、图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精，这样可以进一步纯化DNA，B正确； C、图③中的鸡血细胞含有细胞核，富含DNA，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，几乎不含DNA，因此图③中的鸡血细胞不可以用哺乳动物成熟的红细胞代替，C正确； D、图④操作后加入二苯胺试剂充分振荡，通过水浴加热而后冷却后可观察到颜色变蓝，D错误。 23. 研究表明，DNA连接酶能够封闭DNA双螺旋骨架上的切口(图a)，却无法封闭缺口(图b)，下列叙述正确的是（　　） A. DNA连接酶封闭切口时，需要识别DNA片段特定的核苷酸序列 B. DNA连接酶的封闭是指催化核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成 C. 用限制酶产生磷酸二酯键切口时，还必须与解旋酶配合使用 D. 修复缺失的核苷酸缺口，可用DNA聚合酶沿缺口5＇→3＇方向进行 【答案】D 【解析】 【详解】A、DNA连接酶封闭切口时，不需要识别DNA片段特定的核苷酸序列，A错误； B、DNA连接酶的封闭是指催化脱氧核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成，B错误； C、限制酶切割DNA断裂磷酸二酯键即可产生切口，不需要解旋酶配合，C错误； D、修复缺失的核苷酸缺口，在DNA聚合酶作用下沿缺口5'→3'方向修复，D正确。 24. 目的基因的检测与鉴定是基因工程成功的关键，某科研团队将抗虫基因导入棉花细胞后，进行了一系列检测。下列检测方法与检测目的对应错误的是（　　） A. 分子杂交技术——检测目的基因是否导入棉花细胞 B. 琼脂糖凝胶电泳——检测PCR扩增的目的基因片段大小是否正确 C. 抗原—抗体杂交技术——检测目的基因是否转录出mRNA D. 抗虫接种实验——检测目的基因是否表达出抗虫蛋白质并发挥功能 【答案】C 【解析】 【详解】A、分子杂交技术利用标记的核酸探针与基因组DNA杂交，可检测目的基因是否成功导入受体细胞（棉花细胞），A正确； B、琼脂糖凝胶电泳通过DNA片段在电场中的迁移速率差异，可分离并检测PCR扩增产物的大小，验证目的基因片段是否正确，B正确； C、抗原—抗体杂交技术利用抗体特异性结合目标蛋白质的原理，用于检测目的基因是否翻译出相应蛋白质（如抗虫蛋白）。若检测转录产物mRNA，需使用分子杂交技术，而非抗原—抗体杂交，C错误； D、抗虫接种实验通过让转基因棉花接触害虫，观察抗虫表型，可检测目的基因表达的蛋白质是否具备预期生物学功能，D正确。 故选C。 25. 基因工程中使用的载体按照来源和性质可以分为质粒载体、噬菌体载体、病毒载体等。下列有关叙述错误的是（ ） A. 三种载体的来源不同，在大小、结构和复制方式上也有差别 B. 质粒载体均来源于原核细胞，天然质粒常需进行人工改造 C. 噬菌体载体具有严格的宿主选择性，常用细菌作为受体细胞 D. 将目的基因导入动物细胞时不宜选择质粒载体，可选择病毒载体 【答案】B 【解析】 【分析】基因工程的工具包含限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体。载体是运载着外源DNA进入宿主细胞的“车子”，即运载工具；除质粒外，基因工程的载体还有λ噬菌体的衍生物、植物病毒和动物病毒。限制性核酸内切酶是能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。DNA连接酶的作用是将具有末端碱基互补的外源基因和载体DNA连接在一起，形成的DNA分子称为重组DNA分子。 【详解】A、质粒载体通常为环状DNA，噬菌体载体为病毒DNA、病毒载体可以是动物病毒或植物病毒，不同载体的大小、结构和复制方式上也有差别，A正确； B、质粒主要存在于原核生物中，但某些真核生物（如酵母菌）也含有质粒，B错误； C、噬菌体专一感染细菌，其载体需以细菌为宿主细胞进行复制和表达，C正确； D、质粒载体通常用于原核或植物细胞转化，动物细胞导入目的基因常用病毒载体，D正确。 故选B。 26. 关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列说法错误的是（　　） A. 根据DNA片段大小配制一定质量分数的琼脂糖溶液以便分离DNA分子 B. 待指示剂前沿迁移到达凝胶加样孔边缘时需停止电泳以防DNA跑出凝胶 C. PCR反应需在反应体系中添加一定量的无菌水，以补齐反应体系体积 D. 扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液混匀后需缓慢注入加样孔中 【答案】B 【解析】 【详解】A、琼脂糖凝胶的浓度会影响DNA分子的分离效果，DNA片段越大，需要的琼脂糖浓度越低，所以需要根据DNA片段大小配制合适质量分数的琼脂糖溶液，A正确； B、电泳时，当指示剂前沿迁移到凝胶边缘（不是加样孔边缘）时需要停止电泳，否则DNA会跑出凝胶，B错误； C、PCR反应体系需要按照配方配制，添加无菌水是为了补齐反应体系的体积，保证各试剂的浓度符合要求，C正确； D、PCR产物与载样缓冲液混匀后，需要缓慢注入加样孔，防止样品溢出或加样孔被破坏，D正确。 27. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用PvuI酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 B. 若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 C. 若用SphI酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定目的基因与质粒是否正确连接 D. 受体菌本身应不具有对这两种抗生素的抗性 【答案】C 【解析】 【详解】A、若用PvuI酶切，则破坏了氨苄青霉素抗性基因，导入普通质粒和重组质粒的受体菌形成的菌落都具有抗四环素的能力，都能在含Tet（四环素）培养基中生存，A正确； B、若用HindⅢ酶切，目的基因可能会以不同的方向插入质粒，因此目的基因转录的产物可能不同，B正确； C、若用SphI酶切，目的基因可以和质粒进行正向拼接或反向拼接，但两种拼接方式形成的重组DNA分子碱基对数量相等，电泳形成的条带是一样的，因此不可通过DNA凝胶电泳技术鉴定目的基因与质粒是否正确连接，C错误； D、我们利用氨苄青霉素或四环素来对受体菌进行筛选，首要条件就是受体菌本身应不具有对这两种抗生素的抗性，若受体菌本身有抗性，则无论是否成功导入质粒，受体菌都能在相应抗生素的培养基中活下来，D正确。 28. 某科研团队通过转基因获得了一种大肠杆菌（工程菌），可作为监测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，其监测原理如下图所示，天然大肠杆菌不含有图中所示基因。（GFP基因是绿色荧光蛋白基因）。下列有关说法正确的是（ ） A. 启动子1、2是DNA聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程 B. 该转基因工程菌中的GFP基因表达产物不需要内质网等细胞器的加工 C. 培育“报警器”需要构建的基因表达载体只有GFP基因表达载体 D. 当环境中存在四环素时，生物报警器的绿色荧光会熄灭 【答案】B 【解析】 【详解】A、启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程，A错误； B、转基因工程菌是大肠杆菌，为原核生物，无内质网，因此该转基因工程菌中的GFP基因表达产物不需要内质网等细胞器的加工，B正确； C、天然大肠杆菌不具备题图中所示基因，要检测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，根据题图分析可知，必须导入天然大肠杆菌的目的基因有TetR基因和GFP基因，C错误； D、从图中可以看出，当环境中存在四环素时，四环素与TetR蛋白结合，使得TetR蛋白对GFP基因的抑制作用被解除，从而GFP基因能够表达，大肠杆菌可在一定条件下发出绿色荧光，D错误。 29. 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术。研究人员设计了F1、F2、R1、R2四种引物用于扩增DNA上的某基因，引物的位置如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. PCR所用的酶是一种耐高温的DNA聚合酶，其激活需要Mg2+ B. 引物是一段与DNA母链互补的RNA，其序列决定扩增特异性 C. 当温度下降到72℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 D. 图示PCR第2次循环的产物中出现双链等长的DNA片段 【答案】A 【解析】 【详解】A、PCR所用的Taq DNA聚合酶是从嗜热菌中分离出的耐高温的DNA聚合酶，Mg2+能够激活DNA聚合酶，A正确； B、细胞内DNA复制的引物为RNA，但PCR技术中所用引物是人工合成的单链DNA片段，并非RNA，引物与模板的互补特异性决定扩增的特异性，B错误； C、PCR过程中，温度降至50℃左右（复性阶段）时，引物通过碱基互补配对与单链DNA结合，72℃左右是延伸阶段，此时耐高温DNA聚合酶催化合成子链，C错误； D、图示PCR扩增的是DNA中的基因，PCR循环中，第一次循环产物都是一端固定、另一端超出目的片段，第二次循环产物中所有双链仍然至少有一条链长于目的片段，直到第三次循环才会出现双链等长的目的DNA片段，D错误。 30. 为获得高产脂质的硅藻用于生产生物柴油，研究人员将苹果酸酶（ME）基因（长度约800 bp）构建到含新霉素抗性基因的超表达载体上，导入硅藻细胞。为验证转化是否成功，以野生型基因组、转化后硅藻基因组以及重组质粒为模板，使用可特异性扩增完整ME基因的引物进行PCR，对产物进行琼脂糖凝胶电泳，并测定条带亮度（相对值），结果如图所示，下列分析正确的是（ ） A. PCR过程中，引物作用是使Taq DNA聚合酶从其3'端开始连接核糖核苷酸 B. 为确保ME基因正确插入载体，需在引物3'端加入不同的限制酶识别序列 C. 转化后硅藻基因组检测到明显条带，说明ME基因已整合到其染色体DNA上 D. 为评价所获硅藻品系的生产潜力，还需检测其生长速率与胞内脂质含量 【答案】D 【解析】 【详解】A、PCR使用DNA聚合酶连接脱氧核糖核苷酸（dNTP），不是核糖核苷酸。而且引物是提供 3'-OH 末端让聚合酶延伸 DNA 链，A错误； B、设计引物时，在5' 端加酶切位点（用于克隆时引入酶切位点），不是在 3' 端，3' 端必须与模板匹配以保证扩增特异性。而且“不同限制酶识别序列”不是必须的（有时只需同种两端不同酶），B错误； C、转化后硅藻基因组检测到明显条带，可能ME基因整合到质粒上，质粒进入转化后的硅藻，不能说明ME基因已整合到其染色体DNA上，C错误； D、因为实验目的是获得高产脂质的硅藻用于生物柴油，仅验证基因转入还不够，必须评估实际表现：生长速率（影响培养产量）和脂质含量（影响产油率）是关键生产指标，D正确。 故选D。 二、非选择题：本题共4小题，共55分。 31. 地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%～60%能被土壤中某些微生物分解利用。科研人员从森林土壤中筛选纤维素分解菌并计数，进行了如图所示操作。请回答下列有关问题： （1）防止杂菌污染，________是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在提取分离过程中，对吸管、培养皿通常采用________法进行灭菌，对操作的空间、操作者的衣着和手进行________。筛选时所用的培养基需添加________作为唯一碳源。 （2）图中的接种方法是________。用该计数方法得到的菌落数量比活菌的实际值小，原因是________；若用显微镜计数法统计，结果比实际活菌数________（偏大/偏小），原因是________。 （3）可通过________（填“甲”或“乙”）菌落周围的透明圈判断其分解纤维素能力更强，判断依据是________。 若将稀释倍数是105的菌液涂布平板，3个平板平均菌落数分别为111，120，129，则每1mL菌液中活菌数为________个。 【答案】（1） ①. 获得纯净的微生物培养物 ②. 干热灭菌 ③. 消毒 ④. 纤维素 （2） ①. 稀释涂布平板法 ②. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 ③. 偏大 ④. 显微镜计数法将死菌也计数在内 （3） ①. 甲 ②. 甲菌落产生的透明圈大，乙菌落产生透明圈较小 ③. 1.2×108 【解析】 【小问1详解】 防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提、也是发酵工程的重要基础。在提取分离过程中，对吸管、培养皿通常采用干热灭菌法进行灭菌，对操作的空间、操作者的衣着和手进行消毒。因为要筛选纤维素分解菌，所以筛选时所用的培养基需添加纤维素作为唯一碳源。 【小问2详解】 图中的接种方法是稀释涂布平板法。用该计数方法得到的菌落数量比活菌的实际值小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；若用显微镜计数法统计，由于显微镜计数法将死菌也计数在内，所以结果比实际活菌数偏大。 【小问3详解】 甲菌落产生的透明圈大，乙菌落产生透明圈较小，说明甲菌落分解纤维素的能力更强。若将稀释倍数是105的菌液涂布平板，3个平板平均菌落数分别为111、120、129，则每1mL菌液中活菌数为（111+120+129）÷3÷0.1×105=1.2×108个。 32. 紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的苜蓿新品种，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如图（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用）。 （1）该研究应用的生物技术所依据的原理是_______（写出两点）。 （2）获得原生质体最常用的方法是酶解法，先利用_______去除植物的细胞壁。然后进行人工诱导使原生质体融合，人工诱导原生质体融合的化学方法为_______（答一种即可）。经过过程①，只有异源融合的原生质体能够存活的原因是：IOA抑制百脉根原生质体及同源融合体的细胞呼吸第一阶段，R-6G阻止苜蓿原生质体及同源融合体的线粒体呼吸作用，而_______。 （3）过程③所用的培养基与②过程的主要区别是_______。百脉根富含单宁，单宁不是百脉根生长和生存所必需的产物，属于________代谢物。 【答案】（1）细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 （2） ①. 纤维素酶和果胶酶 ②. PEG诱导融合（高Ca2＋-高pH诱导融合） ③. 异源融合的原生质体可互补缺陷从而存活 （3） ①. 培养基中植物激素的种类和比例不同 ②. 次生 【解析】 【小问1详解】 该研究是植物体细胞杂交育种：原生质体融合依赖细胞膜的流动性，最终杂种细胞培育为完整植株依赖植物细胞的全能性。 【小问2详解】 植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，因此用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁；人工诱导原生质体融合的化学方法常用聚乙二醇（PEG）诱导，此外也可用高Ca2＋-高pH诱导融合；分析题意可知，IOA抑制百脉根呼吸第一阶段，R-6G破坏紫花苜蓿线粒体功能，只有异源融合的原生质体能缺陷互补：紫花苜蓿完成呼吸第一阶段，百脉根提供正常线粒体完成有氧呼吸后续阶段，细胞呼吸可正常进行，因此只有异源融合体能存活。 【小问3详解】 图中②为脱分化形成愈伤组织，③为再分化形成再生植株，两个过程培养基的主要区别是培养基中植物激素的种类（生长素和细胞分裂素）和比例不同，激素比例调控细胞分化方向；植物生长发育非必需的代谢产物属于次生代谢物，因此单宁是次生代谢物。 33. 甲状旁腺激素（PTH）是一种含有84个氨基酸的多肽，是调节钙磷代谢的主要激素之一。临床上PTH被作为低钙血症等疾病的重要诊断指标。拟制备抗PTH单克隆抗体（单抗），并建立定量检测PTH的方法。 （1）PTH在甲状旁腺细胞的_____上合成，通过_____作用分泌到细胞外。 （2）人工合成PTH肽链1~25氨基酸组成的多肽（A）和39~84氨基酸组成的多肽（B），分别用A、B多次免疫小鼠。 ①取免疫后小鼠的血清，以_____的血清为阴性对照，检测血清中抗PTH抗体的效价（效价越高表明免疫效果越好），以确保小鼠体内产生了能分泌抗PTH抗体的浆细胞。 ②取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞混合，加入聚乙二醇促进_____，并用特定的选择培养基进行筛选。对获得的杂交瘤细胞进行_____，经多次筛选获得5株能稳定分泌抗PTH单抗的细胞。 ③将5个杂交瘤细胞株分别注射到_____，一段时间后分离获得抗PTH单抗（用A免疫后筛选出的A1，用B免疫后筛选出的B1、B2、B3、B4）。 （3）经抗体配对检测后，筛选出A1、B1用于定量检测PTH。将B1固定在固相载体上作为捕获抗体，用辣根过氧化物酶标记A1，建立定量检测PTH的方法（如图）。 ①据图分析，捕获抗体和酶标抗体与待测样本中PTH的关系是捕获抗体和酶标抗体特异性结合于PTH的_____（“相同”或“不同”）位点。 ②因为在一定范围内_____，所以可通过检测显色反应后棕色的深浅来测定PTH的含量。 （4）研究表明，人体内除全长PTH外，还存在PTH的7~84氨基酸肽段，它与全长PTH的生物学功能完全相反。为更准确地检测血清中全长PTH的含量，还应制备针对_____的单抗作为酶标抗体，避免PTH的7~84氨基酸肽段。 【答案】（1） ①. 核糖体 ②. 胞吐 （2） ①. 免疫前小鼠 ②. 细胞融合 ③. 克隆化培养和抗体检测 ④. 小鼠腹腔 （3） ①. 不同 ②. 棕色的深浅与样品中 PTH含量呈正相关 （4）PTH的 1~6氨基酸组成的多肽 【解析】 【小问1详解】 分析题意可知，甲状旁腺激素(PTH)是一种多肽，多肽的合成场所是核糖体；多肽属于大分子物质，分泌到细胞外的方式是胞吐。 【小问2详解】 ①为确保小鼠体内产生了能分泌抗PTH抗体的浆细胞，需要用免疫后小鼠的血清与免疫前小鼠作对照，以检测血清中抗PTH抗体的效价。②聚乙二醇可促进动物细胞的融合；单克隆抗体制备过程中，有两次筛选，其中第二次筛选是对获得的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选获得5株能稳定分泌抗PTH单抗的细胞。③单克隆抗体制备时既可进行体内培养也可在体外培养，其中体内培养是将杂交瘤细胞株分别注射到小鼠腹腔，一段时间后分离获得抗PTH单抗。 【小问3详解】 ① 据图分析，捕获抗体和酶标抗体与待测样本中PTH的关系是捕获抗体和酶标抗体特异性结合于PTH的不同位点。②据图可知，PTH与捕获抗体结合后，再加入酶标抗体。经洗涤并加入底物后可产生棕色底物，且在一定范围内棕色的深浅与样品中 PTH含量呈正相关，故可通过检测显色反应后棕色的深浅来测定PTH的含量。 【小问4详解】 分析题意，人体内除全长PTH外，还存在PTH的7~84 氨基酸肽段，它与全长PTH的生物学功能完全相反，即7~84 氨基酸肽段的存在会干扰上述检测结果的准确性，故应制备针对 PTH 1~6氨基酸组成的多肽的单抗作为酶标抗体，避免7~84肽段的干扰。 34. 低温是限制农作物产量的重要胁迫因子。科学家将寒带植物中的抗寒基因CBFs转移到拟南芥中构建拟南芥耐寒模型，用于植物低温胁迫机制的相关研究。回答下列问题： 抗寒基因CBFs结构图 （注：Ampr代表氨苄青霉素抗性基因） 限制酶 识别序列 EcoRⅠ 5′G↓AATTC3′ BamHⅠ 5′G↓GATCC3′ SphⅠ 5′CGTAC↓G3′ Sau3A 5′↓GATC3′ XmaⅠ 5′C↓CCGGG3′ AscⅠ 5′G↓GCGCGCC3′ MunⅠ 5′C↓AATTG3′ （1）设计引物克隆目的基因。如图所示应选择引物________（填序号）对CBFs基因进行克隆，为了后续能将目的基因正确连接到载体上，应在CBFs基因上游引物的________端添加________（“EcoRⅠ”或“BamHⅠ”或“MunⅠ”）识别序列。 （2）根据图示Ti质粒的结构，应选用限制酶________切割Ti质粒，并通过________酶进行连接。 （3）用________处理农杆菌方能将重组质粒导入。在培养基中添加________来筛选成功导入质粒的农杆菌。将拟南芥叶片浸泡在转基因农杆菌菌液中一段时间对其进行转化，然后提取叶片中的DNA，通过PCR对CBFs基因是否整合到拟南芥基因组中进行检测，结果如下图所示。该转基因叶片的基因组中可能已整合CBFs基因，PCR结果中显示出小分子非目标条带，产生的原因可能是________（填字母）。 A．变性温度太低B．复性温度太低 C．复性温度太高D．引物特异性弱 （4）已获取成功转入CBFs基因的拟南芥植株，将其放置在________环境中检测拟南芥耐寒模型是否建立成功。 【答案】（1） ①. ①④ ②. 5′ ③. MunⅠ （2） ①. EcoRⅠ和SphⅠ ②. DNA连接（酶） （3） ①. Ca2+ ②. 氨苄青霉素 ③. BD （4）寒冷 【解析】 【小问1详解】 PCR 扩增时，引物①（3'→5'）和④（5'→3'）与模板链互补，可扩增目标基因，故选①④。 为保证目的基因正确连接到载体，需在引物 5' 端添加限制酶识别序列。据表可知，EcoRⅠ和MunⅠ所产生的黏性末端相同，是同尾酶，EcoRⅠ能切割目的基因不能用，结合后续 Ti 质粒切割使用的酶（见第 2 问）及图示酶切位点分布，上游片段中EcoRⅠ靠近目的基因起始端，EcoRⅠ能切割目的基因不能用，则使用其同尾酶MunⅠ，且不切割基因内部，因此上游引物的 5' 端 添加 MunⅠ 识别序列。 【小问2详解】 BamHⅠ切割标记基因不能用，Sau3A的识别序列包含BamHⅠ的识别序列也不能用；Ti 质粒的 T-DNA 区域需保留完整以确保目的基因转移，图示中 EcoRⅠ和 SphⅠ位于 T-DNA 内且无重叠，切割后可产生互补末端便于连接，故选用 EcoRⅠ 和 SphⅠ。 切割后通过DNA连接酶将目的基因和切割后的Ti质粒进行连接。 【小问3详解】 用Ca2+处理农杆菌可使其成为感受态细胞，能更好地吸收重组质粒。 在培养基中添加氨苄青霉素来筛选成功导入质粒的农杆菌，因为Ti质粒上有氨苄青霉素抗性基因（Ampr）。PCR结果中显示出小分子目标条带，原因可能是复性温度太低，导致引物与模板的结合特异性降低；引物特异性弱也会出现非特异性扩增，产生小分子条带，BD正确。 【小问4详解】 将成功转入CBFs基因的拟南芥植株放在寒冷环境中检测拟南芥耐寒模型是否建立成功。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 成都七中万达学校2025-2026学年下期高2024级半期考试 生物试卷 满分：100分时间：75分钟 一、单选题：本题共30小题，每小题1.5分，共45分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 在制作发酵食品的学生实践中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是（ ） A. 泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气 B. 果酒与果醋发酵时温度宜控制在18-25℃，泡菜发酵时温度宜控制在30-35℃ C. 制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料 D. 葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后可直接通入无菌空气制作葡萄醋 2. 某科研小组分别用3种不同浓度的食盐制作泡菜，如图是活动小组记录的亚硝酸盐含量与发酵天数的关系图。下列叙述正确的是（ ） A. 泡菜制作过程中亚硝酸盐的含量只与食盐溶液浓度有关 B. 前4天亚硝酸盐含量增多可能是其他细菌大量繁殖导致的 C. 根据曲线图可知三种食盐溶液浓度下取食泡菜的最佳时间相同 D. 亚硝酸盐是乳酸菌的代谢产物，后期含量降低是乳酸菌数量降低所致 3. 为测定某种大肠杆菌对糖类的需求情况，某兴趣小组配制了如下培养基： 成分 NaCl KH2PO4 K2HPO4 （NH4）2SO4 MgSO4⋅7H2O 琼脂 质量（g） 1 0.5 0.5 2 0.2 20 同时配制质量分数为10%的葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖溶液。实验操作流程如下：将大肠杆菌悬液与熔化并冷却至50℃的固体培养基混匀，倒平板；通过无菌操作分别向平板中加入蘸有不同糖类的无菌滤纸片，待平板吸收干燥后倒置培养，观察大肠杆菌菌落的生长情况。下列叙述正确的是（　　） A. 上表中的培养基属于固体培养基且不含碳源，说明大肠杆菌是自养型微生物 B. 倒平板时应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C. 培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定 D. 该实验已经形成了相互对照，不需要保留若干个不加入糖类，但加入等量无菌水的平板，待平板吸收干燥后倒置培养作为对照 4. 为了调查某河流的水质情况，某研究小组利用两种不同方法对该河流水样中的细菌进行分离，结果分别如图甲、乙所示。下列叙述正确的是（　　） A. 图甲对应平板划线法，连续划线操作未将聚集的菌种稀释 B. 图乙对应涂布平板法，若想要获得图乙所示结果，则一般要对水样进行稀释 C. 若采用图甲对应方法对细菌进行计数，则应选择菌落数为30～300的平板进行统计 D. 图乙中的一个菌落由一个活菌生长发育而来，统计结果用活菌数表示 5. 微生物培养常常需要测定微生物的数量，常用的方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。下列有关微生物计数的叙述，错误的是（　　） A. 活菌计数法就是通过统计平板上的菌落数，推测样品中大约含有多少活菌 B. 血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数 C. 活菌计数法因为观察的是菌落，所以统计值往往比活菌的实际数目偏高 D. 在同一稀释度下，应至少对3个菌落数目在30～300的平板进行计数 6. 为提高葡萄酒品质，科研人员利用如图所示技术流程，筛选出发酵速度快、具有较强酒精耐受力优良酿酒酵母，其能在WL培养基（含有指示剂溴甲酚绿）上形成奶油状略带绿色、球形的菌落。而酒精耐受力弱的酵母，因代谢改变pH值导致培养基颜色变化。下列相关说法正确的是（　　） 注：YPD培养基和WL培养基是酵母菌培养常用培养基 A. Ⅲ属于选择培养基，依据其上生长的菌落特征，可挑选出优良酵母菌种 B. 进行酒精耐受力检测时，需重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基 C. 颜色变化大的培养基中的酵母菌，即为有较强酒精耐受力优良酿酒酵母 D. Ⅰ、Ⅱ均为液体培养基，图中重复操作可提升酿酒酵母的酒精发酵能力 7. 吃腐烂水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，实验基本步骤如图所示。请据此判断下列说法正确的是（ ） A. 根据本实验探究目的，步骤二接种采用的工具是接种环 B. 步骤三在适宜环境下培养8小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量值 C. 若菌落的种类和数量均为①>②>③>④>⑤，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低 D. 若编号为⑤的部位微生物的数量极少，则切掉①～④后的苹果就可以放心食用 8. 啤酒生产的工艺流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 焙烤的目的是加热杀死种子胚但不使淀粉酶失活 B. 糖化阶段淀粉酶可催化淀粉分解 C. 主发酵结束后应将发酵液置于低温密闭环境中储存 D. 后发酵阶段完成大部分糖的分解和代谢物的生成 9. 发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域得到了广泛的应用，形成了规模庞大的发酵工业。下列相关叙述错误的是（ ） A. 从酵母菌的纯培养物中获取的单细胞蛋白可制成微生物饲料 B. 乳酸发酵前期产生的乳酸会抑制杂菌生长，积累过多也会抑制乳酸菌 C. 青霉菌是生产青霉素的常用菌种，常采用过滤、沉淀等方法获取青霉素 D. 谷氨酸棒状杆菌是生产谷氨酸的常用菌种，在弱碱性条件下发酵会积累谷氨酸 10. 发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物某些特定功能，为人类生产有用的产品。常用好氧菌谷氨酸棒状杆菌利用图1的发酵罐来大量生产味精，发酵流程如图2所示。下列叙述正确的是（　　） A. 通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 B. 为了保证发酵产品的产量和品质，图中发酵配料及发酵罐需经过严格的灭菌 C. 图中发酵过程需通入无菌空气，并通过搅拌使培养液与菌种充分接触后关闭通气口 D. 发酵中所使用的谷氨酸棒状杆菌菌种可从自然界筛选也可通过诱变育种、杂交育种获得 11. 某农业科技公司为抢救濒危药用植物“红豆杉”，启动了组织培养快速繁殖项目。在实验中，技术人员发现：当外植体取自树皮部位时，脱毒效果差；而取自茎尖分生组织时，可获得高纯度脱毒苗。同时，为研究生殖细胞全能性，团队还进行了花粉离体培养实验。下列关于该过程的叙述，错误的是（　　） A. 外植体脱分化过程中，细胞逐渐失去原有形态和功能特异性，形成不定形的薄壁组织团块 B. 再分化阶段，若培养基中细胞分裂素与生长素比例较高，则有利于芽的形成，但会抑制根的发育 C. 单倍体植株幼苗经秋水仙素处理后恢复可育性，体现了植物生殖细胞的全能性 D. 选择茎尖分生组织作为外植体获得脱毒苗，是因为该区域的病毒极少，甚至无病毒 12. 毛花猕猴桃为二倍体，果实大，维生素C含量高。软枣猕猴桃为四倍体，极耐寒，在-40℃下可安全越冬。农科所想利用下图技术流程培育兼具这两种猕猴桃优点的新品种。下列叙述正确的是（　　） A. 人工诱导原生质体融合的方法有电融合法、离心法等 B. 新品种的体细胞含有3个染色体组，不可育 C. 植物体细胞杂交技术成功的标志是杂种细胞再生出细胞壁 D. 该技术属于有性杂交育种，能克服远缘杂交不亲和障碍 13. 胡萝卜（2n=18）具有清热解毒的功效，羊角芹（2n=12）有祛风止痛的功效。科研人员利用胡萝卜、羊角芹进行育种，如图为部分育种流程。下列分析正确的是（　　） A. 用秋水仙素处理植株①的种子或萌发的幼苗可使其染色体数目加倍 B. 获得植株③的过程中利用了愈伤组织的细胞具有分裂旺盛的特点 C. 获得植株④时需用生长素与细胞分裂素比值低的培养基诱导生芽、根 D. 植株⑤的生殖细胞中含有15条染色体，共1个染色体组 14. 诱导多能干细胞（iPSCs）在生物医药领域有广阔的应用前景。研究人员利用多种小分子化合物协同诱导小鼠胎儿成纤维细胞，成功获得iPSCs。相关叙述错误的是（ ） A. 利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿某些组织可获得分散的成纤维细胞 B. 小分子化合物改变了小鼠胎儿成纤维细胞的基因表达 C. 小鼠胎儿成纤维细胞形成iPSCs的过程属于细胞分化 D. 培养小鼠胎儿成纤维细胞和iPSCs时需提供一定浓度的CO2 15. 多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6～5倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，研究人员按如下流程制备了抗CD47的单克隆抗体。相关叙述正确的是（　　） A. 过程①可一次性注射较大剂量的CD47，以提高小鼠的免疫效果 B. 灭活病毒表面的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，诱导细胞融合 C. 过程②和过程③筛选出的杂交瘤细胞，染色体数目和产生的抗体一定相同 D. 将单克隆抗体加入巨噬细胞的培养液中，能解除CD47对巨噬细胞的抑制作用 16. 下图表示一种治疗乳腺癌的抗体—药物偶联物（ADC）的作用机制。下列叙述错误的是（　　） A. ADC中的药物可与癌细胞表面的特定抗原特异性结合 B. ADC可被溶酶体降解并释放出药物达到选择性杀伤 C. ADC可能引起癌细胞中某些基因的表达增强，导致细胞凋亡 D. ADC在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点 17. 我国科学家经过多年的反复试验，攻克了导致体细胞克隆猴失败的障碍，开发出如图所示的培育流程。该技术中研究人员可以在10s之内对卵母细胞进行去核，在15s之内将体细胞注入去核的卵母细胞。下列说法错误的是（　　） A. 灭活的仙台病毒所起的作用是诱导体细胞和去核卵母细胞融合 B. Kdm4d的mRNA和TSA可改变组蛋白的表观遗传修饰，调控基因表达 C. 对卵母细胞进行快速的去核和注入体细胞操作可以大大减少对卵母细胞的伤害 D. 该过程涉及动物细胞核移植等生物工程技术，同时说明了动物体细胞具有全能性 18. “三亲试管婴儿”的培育过程可选用如下技术路线。下列叙述正确的是（ ） A. 卵母细胞捐献者携带的红绿色盲基因能够遗传给“三亲婴儿” B. “三亲婴儿”的遗传物质来自提供细胞核的母亲和提供精子的父亲 C. 该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代 D. 通常用灭活的病毒诱导精子和卵母细胞融合实现体外受精 19. 多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体才能获得后代。下图列举了几项技术成果，下列叙述正确的是（　　） A. 受体须是健康的、同品种的、生理状况相同的雌性动物 B. ①②技术中均可用Ca2+载体处理，但作用对象不同 C. ①③技术中需取内细胞团进行性别鉴定，方可获得相应的奶牛或山羊 D. ③可通过①②技术实现大量生产具有相同遗传背景的动物，①②可通过③技术实现性状改良 20. 利用基因工程赋予生物以新的遗传特性，或创造出更符合人类需要的生物产品时，需要使用多种工具酶，有4种限制性核酸内切酶的切割位点如图所示。下列相关叙述错误的是（　　） A. 限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，能识别特定核苷酸序列 B. 用限制酶SmaI和EcoRV切割后产生的均为平末端 C. DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是磷酸二酯键 D. 含有1个EcoRI识别位点的环状DNA，被EcoRI切割后可形成2个DNA片段 21. CRISPR-Cas9系统中，Cas9蛋白与sgRNA形成的复合物能特异性切割DNA．为探究该复合物中各组分的作用，研究人员进行了如表所示的实验。下列分析错误的是（ ） 组别 处理方式 是否能切割DNA ① 完整Cas9-sgRNA复合物+DNA底物 是 ② Cas9-sgRNA复合物经蛋白酶处理+DNA底物 否 ③ Cas9-sgRNA复合物经RNA酶处理+DNA底物 否 ④ 从复合物中分离的Cas9蛋白+DNA底物 否 ⑤ 从复合物中分离的sgRNA+DNA底物 否 A. sgRNA的碱基序列可能会与靶DNA某条链的部分碱基序列互补 B. 实验①和实验②对照，可说明Cas9蛋白是切割DNA所必需的 C. 与实验①相比，实验②③均采用了自变量控制中的“减法原理” D. 对比分析实验①～⑤可得出CRISPR-Cas9系统中各组分的具体作用 22. 下图为“DNA的粗提取和鉴定”实验中几个重要步骤的示意图，下列叙述错误的是（　　） A. 实验的操作顺序是③②①④，图②中的纱布不能用滤纸代替 B. 图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精 C. 图③中的鸡血细胞不可以用哺乳动物成熟的红细胞代替 D. 图④操作后加入二苯胺试剂充分振荡，可观察到颜色变蓝 23. 研究表明，DNA连接酶能够封闭DNA双螺旋骨架上的切口(图a)，却无法封闭缺口(图b)，下列叙述正确的是（　　） A. DNA连接酶封闭切口时，需要识别DNA片段特定的核苷酸序列 B. DNA连接酶的封闭是指催化核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成 C. 用限制酶产生磷酸二酯键切口时，还必须与解旋酶配合使用 D. 修复缺失的核苷酸缺口，可用DNA聚合酶沿缺口5＇→3＇方向进行 24. 目的基因的检测与鉴定是基因工程成功的关键，某科研团队将抗虫基因导入棉花细胞后，进行了一系列检测。下列检测方法与检测目的对应错误的是（　　） A. 分子杂交技术——检测目的基因是否导入棉花细胞 B. 琼脂糖凝胶电泳——检测PCR扩增的目的基因片段大小是否正确 C. 抗原—抗体杂交技术——检测目的基因是否转录出mRNA D. 抗虫接种实验——检测目的基因是否表达出抗虫蛋白质并发挥功能 25. 基因工程中使用的载体按照来源和性质可以分为质粒载体、噬菌体载体、病毒载体等。下列有关叙述错误的是（ ） A. 三种载体的来源不同，在大小、结构和复制方式上也有差别 B. 质粒载体均来源于原核细胞，天然质粒常需进行人工改造 C. 噬菌体载体具有严格的宿主选择性，常用细菌作为受体细胞 D. 将目的基因导入动物细胞时不宜选择质粒载体，可选择病毒载体 26. 关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列说法错误的是（　　） A. 根据DNA片段大小配制一定质量分数的琼脂糖溶液以便分离DNA分子 B. 待指示剂前沿迁移到达凝胶加样孔边缘时需停止电泳以防DNA跑出凝胶 C. PCR反应需在反应体系中添加一定量的无菌水，以补齐反应体系体积 D. 扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液混匀后需缓慢注入加样孔中 27. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用PvuI酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 B. 若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 C. 若用SphI酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定目的基因与质粒是否正确连接 D. 受体菌本身应不具有对这两种抗生素的抗性 28. 某科研团队通过转基因获得了一种大肠杆菌（工程菌），可作为监测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，其监测原理如下图所示，天然大肠杆菌不含有图中所示基因。（GFP基因是绿色荧光蛋白基因）。下列有关说法正确的是（ ） A. 启动子1、2是DNA聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程 B. 该转基因工程菌中的GFP基因表达产物不需要内质网等细胞器的加工 C. 培育“报警器”需要构建的基因表达载体只有GFP基因表达载体 D. 当环境中存在四环素时，生物报警器的绿色荧光会熄灭 29. 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术。研究人员设计了F1、F2、R1、R2四种引物用于扩增DNA上的某基因，引物的位置如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. PCR所用的酶是一种耐高温的DNA聚合酶，其激活需要Mg2+ B. 引物是一段与DNA母链互补的RNA，其序列决定扩增特异性 C. 当温度下降到72℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 D. 图示PCR第2次循环的产物中出现双链等长的DNA片段 30. 为获得高产脂质的硅藻用于生产生物柴油，研究人员将苹果酸酶（ME）基因（长度约800 bp）构建到含新霉素抗性基因的超表达载体上，导入硅藻细胞。为验证转化是否成功，以野生型基因组、转化后硅藻基因组以及重组质粒为模板，使用可特异性扩增完整ME基因的引物进行PCR，对产物进行琼脂糖凝胶电泳，并测定条带亮度（相对值），结果如图所示，下列分析正确的是（ ） A. PCR过程中，引物作用是使Taq DNA聚合酶从其3'端开始连接核糖核苷酸 B. 为确保ME基因正确插入载体，需在引物3'端加入不同的限制酶识别序列 C. 转化后硅藻基因组检测到明显条带，说明ME基因已整合到其染色体DNA上 D. 为评价所获硅藻品系的生产潜力，还需检测其生长速率与胞内脂质含量 二、非选择题：本题共4小题，共55分。 31. 地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%～60%能被土壤中某些微生物分解利用。科研人员从森林土壤中筛选纤维素分解菌并计数，进行了如图所示操作。请回答下列有关问题： （1）防止杂菌污染，________是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在提取分离过程中，对吸管、培养皿通常采用________法进行灭菌，对操作的空间、操作者的衣着和手进行________。筛选时所用的培养基需添加________作为唯一碳源。 （2）图中的接种方法是________。用该计数方法得到的菌落数量比活菌的实际值小，原因是________；若用显微镜计数法统计，结果比实际活菌数________（偏大/偏小），原因是________。 （3）可通过________（填“甲”或“乙”）菌落周围的透明圈判断其分解纤维素能力更强，判断依据是________。 若将稀释倍数是105的菌液涂布平板，3个平板平均菌落数分别为111，120，129，则每1mL菌液中活菌数为________个。 32. 紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的苜蓿新品种，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如图（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用）。 （1）该研究应用的生物技术所依据的原理是_______（写出两点）。 （2）获得原生质体最常用的方法是酶解法，先利用_______去除植物的细胞壁。然后进行人工诱导使原生质体融合，人工诱导原生质体融合的化学方法为_______（答一种即可）。经过过程①，只有异源融合的原生质体能够存活的原因是：IOA抑制百脉根原生质体及同源融合体的细胞呼吸第一阶段，R-6G阻止苜蓿原生质体及同源融合体的线粒体呼吸作用，而_______。 （3）过程③所用的培养基与②过程的主要区别是_______。百脉根富含单宁，单宁不是百脉根生长和生存所必需的产物，属于________代谢物。 33. 甲状旁腺激素（PTH）是一种含有84个氨基酸的多肽，是调节钙磷代谢的主要激素之一。临床上PTH被作为低钙血症等疾病的重要诊断指标。拟制备抗PTH单克隆抗体（单抗），并建立定量检测PTH的方法。 （1）PTH在甲状旁腺细胞的_____上合成，通过_____作用分泌到细胞外。 （2）人工合成PTH肽链1~25氨基酸组成的多肽（A）和39~84氨基酸组成的多肽（B），分别用A、B多次免疫小鼠。 ①取免疫后小鼠的血清，以_____的血清为阴性对照，检测血清中抗PTH抗体的效价（效价越高表明免疫效果越好），以确保小鼠体内产生了能分泌抗PTH抗体的浆细胞。 ②取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞混合，加入聚乙二醇促进_____，并用特定的选择培养基进行筛选。对获得的杂交瘤细胞进行_____，经多次筛选获得5株能稳定分泌抗PTH单抗的细胞。 ③将5个杂交瘤细胞株分别注射到_____，一段时间后分离获得抗PTH单抗（用A免疫后筛选出的A1，用B免疫后筛选出的B1、B2、B3、B4）。 （3）经抗体配对检测后，筛选出A1、B1用于定量检测PTH。将B1固定在固相载体上作为捕获抗体，用辣根过氧化物酶标记A1，建立定量检测PTH的方法（如图）。 ①据图分析，捕获抗体和酶标抗体与待测样本中PTH的关系是捕获抗体和酶标抗体特异性结合于PTH的_____（“相同”或“不同”）位点。 ②因为在一定范围内_____，所以可通过检测显色反应后棕色的深浅来测定PTH的含量。 （4）研究表明，人体内除全长PTH外，还存在PTH的7~84氨基酸肽段，它与全长PTH的生物学功能完全相反。为更准确地检测血清中全长PTH的含量，还应制备针对_____的单抗作为酶标抗体，避免PTH的7~84氨基酸肽段。 34. 低温是限制农作物产量的重要胁迫因子。科学家将寒带植物中的抗寒基因CBFs转移到拟南芥中构建拟南芥耐寒模型，用于植物低温胁迫机制的相关研究。回答下列问题： 抗寒基因CBFs结构图 （注：Ampr代表氨苄青霉素抗性基因） 限制酶 识别序列 EcoRⅠ 5′G↓AATTC3′ BamHⅠ 5′G↓GATCC3′ SphⅠ 5′CGTAC↓G3′ Sau3A 5′↓GATC3′ XmaⅠ 5′C↓CCGGG3′ AscⅠ 5′G↓GCGCGCC3′ MunⅠ 5′C↓AATTG3′ （1）设计引物克隆目的基因。如图所示应选择引物________（填序号）对CBFs基因进行克隆，为了后续能将目的基因正确连接到载体上，应在CBFs基因上游引物的________端添加________（“EcoRⅠ”或“BamHⅠ”或“MunⅠ”）识别序列。 （2）根据图示Ti质粒的结构，应选用限制酶________切割Ti质粒，并通过________酶进行连接。 （3）用________处理农杆菌方能将重组质粒导入。在培养基中添加________来筛选成功导入质粒的农杆菌。将拟南芥叶片浸泡在转基因农杆菌菌液中一段时间对其进行转化，然后提取叶片中的DNA，通过PCR对CBFs基因是否整合到拟南芥基因组中进行检测，结果如下图所示。该转基因叶片的基因组中可能已整合CBFs基因，PCR结果中显示出小分子非目标条带，产生的原因可能是________（填字母）。 A．变性温度太低B．复性温度太低 C．复性温度太高D．引物特异性弱 （4）已获取成功转入CBFs基因的拟南芥植株，将其放置在________环境中检测拟南芥耐寒模型是否建立成功。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $