云南高二生物下学期阶段测试2025-2026学年人教版选择性必修三全册

### **基本信息** 高二生物选择性必修三阶段测试，立足《生物技术与工程》模块，以云南特色发酵食品、珍稀植物保护、烟草育种等真实情境设计原创与新情境题，覆盖发酵工程、细胞工程、基因工程等核心知识，渗透生命观念与科学思维。 ### **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|16题/48分|发酵工程操作（如云南泡青菜腌制）、细胞培养（动物细胞培养过程）、限制酶应用（BamHⅠ与Sau3AⅠ切割）|结合地域文化（如普洱果酒酿制），考查基础原理辨析| |非选择题|5题/52分|发酵流程分析（酱油生产）、体细胞杂交育种（马铃薯-番茄）、双价抗虫基因载体构建|综合实践情境，突出技术应用与探究能力（如转基因烟草抗虫性验证）|

Sheet1 题号 题型 分值 知识点 难度系数（预估） 1 单选题 3 果酒和果醋的制作原理；泡菜的腌制 0.94 2 单选题 3 培养基的成分及其功能；生物多样性丧失原因及其保护措施 0.65 3 单选题 3 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 0.65 4 单选题 3 发酵工程的应用；培养基的成分及其功能；无菌技术 0.65 5 单选题 3 植物组织培养技术综合 0.85 6 单选题 3 植物组织培养、体细胞杂交、人工种子、细胞工程应用 0.65 7 单选题 3 动物细胞培养技术 0.85 8 单选题 3 动物细胞融合与单克隆抗体的制备 0.4 9 单选题 3 动物细胞培养技术；动物体细胞核移植技术和克隆；精子和卵子的发生 0.65 10 单选题 3 胚胎发育；克隆；动物的体外受精 0.85 11 单选题 3 动物的体外受精；胚胎工程综合 0.65 12 单选题 3 DNA的粗提取及鉴定 0.65 13 单选题 3 DNA重组技术的基本工具 0.65 14 单选题 3 DNA重组技术的基本工具；基因表达载体的构建 0.4 15 单选题 3 蛋白质工程的应用及实例分析；基因表达载体的构建；基因工程综合；目的基因的检测与鉴定 0.65 16 单选题 3 转基因生物安全性；基因工程在农牧业、制药及环境等方面的应用 0.65 17 非选择题 9 果酒和果醋的制作原理；果酒和果醋的制作流程及实验分析；腐乳制作的原理；腐乳制作的步骤及注意事项 0.85 18 非选择题 11 植物组织培养技术综合；植物体细胞杂交技术；染色体组、单倍体、二倍体、多倍体概念 0.5 19 非选择题 12 动物细胞融合与单克隆抗体的制备 0.65 20 非选择题 9 动物细胞培养技术；动物体细胞核移植技术和克隆；胚胎移植技术 0.65 21 非选择题 11 基因工程的工具；基因工程的操作流程及应用 0.5 $ 应用场景：周测/单元测/月考/期中/期末 高二生物下学期阶段测试 选择性必修三 《生物技术与工程》 注意事项： 1．答卷前，考生务必用黑色字迹钢笔或签字笔将自己的姓名、考生号、考场号和座位号填写在答题卡上。 2．作答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案，答在试卷上无效。 3．非选择题必须用黑色字迹钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新的答案。 4．本试卷共10页，共21小题，满分100分。考试用时75分钟。 一、选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1．（原创）云南各族人民凭借其丰富的地理环境与多元的文化传统，在长期的劳动实践中，积累了制作各类特色发酵食品的独特技艺。这些发酵食品不仅体现了当地人民的智慧与创造力，也成为他们饮食文化中不可或缺的重要组成部分，代代相传，不断丰富着云南的美食宝库。下列叙述正确的是（） A. 普洱果酒与雕梅酒酿制过程中的主要微生物为醋酸菌。 B. 傣味酸醋的制作需严格密封，以维持无氧环境。 C. 云南泡青菜与酸笋的腌制依赖于乳酸菌的无氧呼吸来产生乳酸。 D. 乳腐的制作主要借助乳酸菌进行发酵。 2．垃圾分类有利于变废为宝，减少环境污染。如图为分类后餐厨垃圾资源化处理的流程设计。下列叙述错误的是（    ）    A．压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品 B．添加的木屑有利于堆肥体通气，还可作为某些微生物的碳源 C．X中需要添加合适的菌种，才能产生沼气 D．为保证堆肥体中微生物的活性，不宜对堆肥体进行翻动 3．土壤中有丰富的微生物，若要利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如图。下列相关叙述错误的是（    ） A．若要筛选分解尿素[CO（NH2）2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源 B．理论上每毫升菌液中2号试管的活菌数是4号试管的100倍 C．4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.1×109个 D．该种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 4．我国是世界上最大的柠檬酸生产国。利用黑曲霉通过深层通气液体发酵技术生产柠檬酸，流程如下图。下列叙述错误的是（    ） A． 淀粉水解糖为发酵提供碳源和能源 B． B．扩大培养可提供足量的黑曲霉菌种 C． 培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同 D． 通气、搅拌有利于溶解氧增加和柠檬酸积累 5．图示一种植物组织培养周期，①~③表示相应过程。下列相关叙述错误的是（    ） A．过程①发生了细胞的脱分化和有丝分裂 B．过程②经细胞的再分化形成不同种类的细胞 C．过程②③所用培养基的成分、浓度相同 D．培养基中糖类既能作为碳源，又与维持渗透压有关 6．（原创）科研人员通过植物细胞工程育种技术，对云南特有的野生杜鹃、滇山茶、高山兰花等珍稀濒危植物进行资源保护与新品种培育。下列说法正确的是（） A. 利用茎尖组织培养可获得抗病毒植株，有效抵御多种花卉病毒侵染 B. 野生杜鹃与滇山茶体细胞杂交培育新品种，可克服远缘杂交不亲和障碍 C. 植物体细胞杂交过程中，需用盐酸和酒精去除细胞壁获得原生质体 D. 人工种子以愈伤组织为核心，包裹人工种皮，可快速繁殖珍稀兰花 7．某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。 下列叙述错误的是（    ） A．①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离 B．②加培养液的目的是促进细胞增殖 C．③分装时需调整到合适的细胞密度 D．整个过程需要在无菌、无毒条件下进行 8．下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的是（　　）    A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间 B．W细胞是先提取B淋巴细胞再用PML蛋白免疫而获得 C．步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞 D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 9．野生动物郊狼的物种数量近年不断减少、濒临灭绝，科研人员利用种间体细胞核移植技术（iSCNT）培育小郊狼的流程如下图。下列叙述正确的是（    ） A．图中①是第二极体，②是透明带 B．iSCNT技术比胚胎细胞核移植技术难度要大 C．郊狼的耳廓组织培养时一般需提供营养和酸性环境 D．结构③通常需要激活，使其完成减数分裂和发育进程 10．为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙（种群数量多）进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是（    ） A．克隆动物的核基因组来源于甲、乙 B．体外受精需用获能的精子与MI期的卵母细胞受精 C．囊胚①的内细胞团可发育为胎盘、个体 D．滋养层可影响内细胞团的发育 11．（新情境题）梅花鹿与马鹿的杂交后代具有生命力旺盛、鹿茸品质优良的特点，但在云南山区鹿场的自然条件下，二者自然杂交成功率极低。通过人工授精技术可有效突破这一繁殖障碍，再结合胚胎工程技术优化繁育流程，能够显著提升优良种鹿的繁殖效率，助力云南特色茸鹿养殖产业提质增效，切实提高鹿场经济效益与山区特色养殖产业发展水平。下列相关叙述合理的是（    ） A．采集的精液无需固定、稀释，即可用血细胞计数板检测精子密度 B．人工授精时，采集的精液经获能处理后才能输入雌性生殖道 C．超数排卵处理时，常用含促性腺激素的促排卵剂 D．母体子宫对胚胎的免疫耐受性低下是胚胎移植的生理学基础 12．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是（　　） A．整个提取过程中可以不使用离心机 B．研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中 C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变 D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰 13．下表是几种限制酶的识别序列及切割位点（Y=C或T，R=A或G）。下列相关叙述正确的是（　　） 限制酶 HindⅡ AluⅠ BamHⅠ Sau3AⅠ 识别序列及切割位点 5'-GTY↓RAC-3' 5'-AG↓CT-3' 5'-G↓GATCC-3' 5'-↓GATC-3' A．限制酶切割一次需切断2个磷酸二酯键，增加2个游离的磷酸基团 B．一种限制酶只能识别一种核苷酸序列，并在特定位点切割 C．AluⅠ切割后的DNA片段只可用E.coliDNA连接酶连接 D．BamHⅠ和Sau3AⅠ切割形成的片段进行重组后，BamHⅠ和Sau3AⅠ均不能识别并切割 14．基因工程中，使用单个限制酶酶切构建的表达载体易出现连接方向错误和重复插入目的基因片段等现象，可通过酶切及筛选标记鉴定出符合预期的重组载体。研究小组选用的载体P和目的基因CDS片段特征如图，将CDS片段插入载体P的SacⅡ位点后对重组载体进行扩增、筛选和检测。下列叙述错误的是（　　） 注：LacZ基因表达产物为β-半乳糖苷酶，X-gal会被β-半乳糖苷酶分解，产生蓝色产物。 A．含重组载体的宿主细胞在含X-gal的培养基上，菌落颜色为白色 B．重组载体被PstⅠ充分酶切后电泳可能会获得长度为9.4kbDNA片段 C．用EcoRⅠ与PstⅠ充分酶切重组载体，可判断CDS片段的连接方向 D．用EcoRⅠ与SacⅡ充分酶切重组载体，可得到2个长度的DNA片段 15．研究发现，为心梗患者注射适量t-PA蛋白会诱发颅内出血，但若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血等副作用，改良后的t-PA蛋白成为心梗和脑血栓的急救药。下图所示，通过基因工程大量制备改良药物t-PA蛋白，下列说法错误的是（    ）    A．制备改良t-PA蛋白的过程属于蛋白质工程 B．利用重组pCLY11质粒可获得牛乳腺生物反应器 C．选用限制酶XmaI和BglⅡ切割质粒pCLY11，构建重组质粒 D．成功导入重组质粒的受体细胞在含有新霉素的培养基上能存活，且呈现蓝色 16．（新情境题）云南作为我国重要的高原特色农业与烟草核心省份，种业发展在气候、种质资源、育种科技等方面均有突出优势。在云南，从优质烤烟、杂交玉米、高山花卉，到双价抗虫烟草、抗病马铃薯、转基因药材，诸多优质新品种在这里选育审定、示范推广。下列有关叙述错误的是（　　） A．云南双价抗虫烟草等转基因产品需经严格安全性评价，符合标准才可推广种植 B．我国对转基因技术的方针是研究上要大胆、推广上要慎重、管理上要严格 C．我国相关法律法规最大程度保障了云南转基因烟草、转基因作物的研发与应用安全 D．对云南烤烟、花卉、药材等植物的基因改造，是基因工程中研究最广泛、应用成果最多的领域 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 17．（新情境题）（每空1分，共9分）工业上所指的发酵，是微生物在有氧或无氧条件下，经分解与合成代谢将原料转化为特定产品的过程。利用微生物发酵酿造酱油在我国有着悠久历史。云南依托丰富的豆类、谷物等农产品资源，将传统发酵工艺与现代生物技术相结合，发展特色调味品酿造产业。某云南本地企业结合高原气候与菌种资源，通过发酵工艺生产酱油，其简要流程如下图所示。 回答下列问题： （1）米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的___________可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供___________。 （2）米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的_____、______能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和__________。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，由此可以判断米曲霉属于___________（填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”）微生物。 （3）在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于___________（填“真核生物”或“原核生物”）；添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是___________。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是___________（答出1点即可）。 18． （除特殊标注外，每空1分，共11分）云南素有 “植物王国” 之称，特色经济作物资源丰富。科研人员为培育兼具抗病、高产、优质的新品种，利用体细胞杂交技术，将云南本地高产马铃薯与滇南特色小番茄进行体细胞杂交，实验过程如图所示。尽管成功获得了杂种植株，但该植株并未表现出人们预期的地上结番茄、地下长马铃薯的理想性状。 (1) 该研究过程所利用的植物体细胞杂交技术，融合了植物原生质体融合技术和植物组织培养技术。人工诱导原生质体融合常用的化学方法，除 PEG 融合法外，还有_______________；植物组织培养技术的理论基础是___________________________。 (2) 图中细胞两两融合时，会出现______种融合细胞类型；在培养杂种细胞的培养基中，通常需要添加____________和____________两类关键植物激素，以调控细胞的分裂与分化。 (3) 由杂种细胞培育形成完整试管苗，需要依次经过④________________和⑤____________两个核心过程。 (4) 育种工作中也可采用另一种技术路线：先利用马铃薯和番茄的________________进行离体培养，获得单倍体植株；再取单倍体植株的体细胞进行体细胞杂交，随后用________________________处理，诱导染色体数目加倍，最终可获得可育的杂种植株。 (5) 从生物进化与基因表达的角度分析，为何培育出的番茄 — 马铃薯杂种植株，未能呈现地上结番茄、地下结马铃薯的理想性状？请简要说明原因。 19．（除特殊标记外，每空2分，共12分）双特异性单克隆抗体是指可同时与癌细胞和药物结合的特异性抗体。下图是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱（一种抗癌药物）的双特异性单克隆抗体的部分过程。分析回答： (1)过程①注射癌胚抗原，抗原是指____，制备双特异性单克隆抗体的过程中用到的技术有____。 (2)过程②诱导融合的方法是____，假设仅考虑某两个细胞的融合，则经过②过程试管内含有____种类型的细胞。 (3)过程③能在HAT培养基上生长的细胞是____，未融合的B淋巴细胞经过多次传代培养后都不能存活，原因是____。 (4)经过程③筛选得到的细胞还需转移至多孔培养板中进行过程④，原因是____。 (5)获得的单克隆杂交—杂交瘤细胞在体外条件下培养或____，均可提取出大量的双特异性单克隆抗体。 20．（除特殊标记外，每空1分，共9分）为研究多种血糖调节因子的作用，我国科学家开发出胰岛素抵抗模型鼠。为扩增模型鼠数量，科学家通过诱导优良模型鼠体细胞转化获得iPS细胞，继而利用iPS细胞培育出与模型鼠遗传特性相同的克隆鼠，具体步骤如图所示。请回答下列问题：    (1)图中黑鼠的体细胞在诱导因子的作用下转化为iPS细胞的过程与植物组织培养中的________过程类似。该过程结束后，细胞的全能性________（填“提高”或“降低”）。 (2)图中灰鼠形成的受精卵，经过一次有丝分裂后可得到双细胞胚。为获得更多的双细胞胚，可对灰鼠注射________激素，使其超数排卵。 (3)囊胚中的内细胞团将来可以发育成胎儿的________。上图中的重构胚通过①________技术进入代孕白鼠子宫内继续发育，X鼠的体色为________。上图中可以是雄鼠的有________（填图中相关鼠的名称）。 (4)为确定克隆鼠的培育是否成功，须对X鼠进行________的相关检测。 21．（原创）（除标注外每空2分,共11分）烟草是我国重要的经济作物，为解决“昆虫对烟草单一抗虫基因快速产生抗性”的问题，科研人员通过基因工程技术，设计了含GFM Cry1A（Bt杀虫基因）与CpTI（蛋白酶抑制剂基因）的双价植物表达载体，并成功培育出抗虫烟草新品系，其载体构建流程如下图所示。请结合教材知识回答下列问题： 注：35S promoter为启动子；NPTⅡ为新霉素磷酸转移酶基因，常作为标记基因；Nos为终止子。 （1） 由图可知，在构建双价植物表达载体过程中多次使用T4 DNA连接酶，该酶催化形成的化学键是 。 （2） 基因表达载体是载体中的一种，除目的基因、标记基因外，它还必须有启动子、终止子等。图中“35S promoter”的功能是 ，最终表达出人类需要的蛋白质。该载体的标记基因是NPTⅡ，因此需在培养基中添加 以筛选含重组质粒的细胞。 （3） 将重组质粒导入烟草愈伤组织细胞的常用方法是农杆菌转化法，该方法的原理是农杆菌中的 可转移至烟草细胞，并整合到烟草细胞染色体的DNA上。 （4） 检测GFM Cry1A基因是否整合到烟草细胞染色体的DNA上，可采用PCR等技术检测；若从个体生物学水平验证转基因烟草的抗虫性，实验思路为 （5） 与传统化学杀虫剂相比，双价抗虫烟草的显著优点有 （答出1点即可，需结合教材“生物技术生态效益”表述。） 为避免转基因烟草的抗虫基因向其他植物扩散，从技术层面可采取的措施是 （答出1点即可）。 试卷第1页，共3页 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二生物下学期阶段测试 选择性必修三 《生物技术与工程》 答案及解析 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 A D C C C B B D B D 题号 11 12 13 14 15 16 答案 C A A D D D 一、选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1． 【答案】A 【解析】A 错误：果酒（普洱果酒、雕梅酒）酿制的主要微生物是酵母菌，利用其无氧呼吸产生酒精；醋酸菌是果醋发酵的菌种，不是果酒的。 B 错误：傣味酸醋的制作依赖醋酸菌，该菌为好氧菌，发酵过程需要持续通气，而非严格密封、无氧。 C 正确：云南泡青菜、酸笋的腌制，依赖乳酸菌的无氧呼吸产生乳酸，降低pH，抑制杂菌生长，实现保鲜与风味形成。 D 错误：乳腐（腐乳）的制作主要借助毛霉（真菌），毛霉分泌蛋白酶、脂肪酶分解豆腐中的蛋白质和脂肪，不是乳酸菌。 2．【答案】D 【解析】A、压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品，有利于实现物质的循环再生和能量的多级利用，A正确； B、添加的木屑有利于堆肥体通气，木屑也可作为某些微生物的碳源，B正确； C、X中需要添加合适的菌种，通过分解有机物才能产生沼气，C正确； D、为保证堆肥体中微生物的活性，可以对堆肥体进行翻动，D错误。 3． 【答案】C 【解析】A、若目的是筛选分解尿素[CO（NH2）2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源，A正确； B、由样品稀释示意图分析可知，2号试管的稀释倍数为103倍，应是4号试管的100倍，B正确； C、4号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为（113+106+111）÷3×10×105=1.1×108个，C错误； D、稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，D正确。 故选C。 4．【答案】C 【解析】A、淀粉水解形成的糖类可以作为黑曲霉生存所需的碳源，氧化分解可以为黑曲霉提供能源，A正确； B、通过液体培养基的扩大培养，可以为后续的发酵罐内发酵提供足量的黑曲霉菌种，B正确； C、空气一般用过滤除菌的方式，培养基一般用高压蒸汽灭菌的方式，发酵罐可以用高温灭菌的方式等，因此它们的灭菌方法不相同，C错误； D、已知利用黑曲霉通过深层通气液体发酵技术生产柠檬酸，说明通气、搅拌有利于溶解氧增加，有利于发酵产物柠檬酸的积累，D正确。 故选C。 5．【答案】C 【解析】A、过程①形成了愈伤组织，发生了细胞的脱分化，此时细胞还进行有丝分裂，A正确； B、过程②是愈伤组织经再分化形成胚状体的过程，故经过再分化形成不同种类的细胞，B正确； C、过程②③所有培养基的成分、浓度不完全相同，如细胞分裂素和生长素的浓度不同，C错误； D、培养基中常加入蔗糖，既能作为碳源，又与维持渗透压有关，D正确。 故选C。 6． 【答案】B 【解析】A 错误：茎尖组织培养可获得脱毒苗，只能去除植物体内已有病毒，不能使植物获得抗病毒的遗传特性。 B 正确：植物体细胞杂交能打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和障碍，可用于云南珍稀花卉远缘杂交育种。 C 错误：去除植物细胞壁应使用纤维素酶和果胶酶；盐酸和酒精是解离液，用于使细胞相互分离开。 D 错误：人工种子以胚状体为核心结构，并非愈伤组织。 7． 【答案】B 【解析】A、①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离，A正确； B、②加培养液，多次加培养液先洗去残留的消化酶，然后终止消化液的消化作用，并对细胞加以稀释，B错误； C、③分装时需调整到合适的细胞密度，因为若密度过大细胞直接仍存在接触抑制，C正确； D、动物细胞培养需要无菌无毒环境，因此整个过程需要在无菌、无毒条件下进行，D正确。 故选B。 8． 【答案】D 【解析】A、PML蛋白单克隆抗体的制备过程，应用PML蛋白作为抗原间隔多次免疫小鼠，目的是获得更多的能产生PML蛋白抗体的B淋巴细胞，A错误； B、W细胞是先用PML蛋白免疫而获得相应的B淋巴细胞，后通过筛选提取能产生单一抗体的B淋巴细胞，B错误； C、根据题意可知步骤1是诱导W细胞与骨髓瘤细胞融合，步骤2是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，C错误； D、根据电泳结果可知应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体，因为孔2中的细胞能特异性产生PML蛋白的抗体,，D正确。 故选D。 9． 【答案】B 【解析】A、图中①是第一极体，②是透明带，A错误； B、与胚胎细胞核移植技术相比，种间体细胞核移植技术（iSCNT）的成功率更低，这是由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难，故与胚胎细胞核移植技术相比，iSCNT技术难度更大，B正确； C、郊狼的耳廓组织在培养时除营养外，还需提供的条件是适宜的温度、pH和渗透压、无菌、无毒的环境以及适宜的气体环境（95%空气和5%的CO2），其中最适的pH为7.2~7.4，C错误； D、③是重组细胞，通常需要激活，使其完成细胞分裂和发育进程，但此过程中不含减数分裂，D错误。 故选B。 10． 【答案】D 【解析】A、克隆动物的核基因组来源于甲，细胞质中的基因来源于乙，A错误； B、体外受精需用获能的精子与MⅡ期的卵母细胞受精，而不是MI期，B错误； C、囊胚①的内细胞团可发育为个体，滋养层细胞发育为胎膜和胎盘，C错误； D、滋养层可影响内细胞团的发育，如滋养层细胞分泌的某些物质可能会影响内细胞团细胞的分化等，D正确。 故选D。 11．【答案】C 【解析】、采集的精子需要经过稀释和固定处理，否则活动精子会影响计数准确性，且血细胞计数板通常用于已固定的细胞，A错误； B、人工授精时，精子在雌性生殖道内自然获能，无需提前体外处理，B错误； C、超数排卵通过注射促性腺激素（如FSH和LH）促进卵泡发育和排卵，C正确； D、胚胎移植的生理学基础是母体子宫对胚胎的免疫耐受性高，不会发生免疫排斥，而非耐受低下，D错误。 12．【答案】A 【解析】A、在DNA的粗提取与鉴定实验中，可将获得的研磨液用纱布过滤后，在4℃的冰箱中放置几分钟，再取上清液，也可以直接将研磨液用离心机进行离心后取上清液，A正确； B、研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，DNA在上清液中，应取上清液倒入烧杯中，B错误； C、鉴定过程中用沸水浴加热，DNA双螺旋结构会发生改变，C错误； D、加入二苯胺试剂后沸水浴处理的时间要在5分钟以上，且要等到冷却后再观察结果，这样才可以观察到较为明显的显色反应，仅设置一个对照组可以排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰，D错误。 故选A。 13．【答案】A 【解析】A、限制酶切割一次需切断2个磷酸二酯键，形成2个新的游离的磷酸基团，A正确； B、一种限制酶不一定只识别一种核苷酸序列，如HindⅡ，B错误； C、用AluⅠ切割得到的是平末端，可用T4DNA连接酶连接起来，C错误； D、BamHⅠ和Sau3AⅠ切割形成的片段进行重组后，BamHⅠ不能识别并切割重组片段，而Sau3AⅠ可识别并切割重组片段，D错误。 故选A。 14．【答案】D 【解析】A、目的基因插入LacZ基因的SacⅡ位点后，LacZ被插入而导致LacZ失活，进而无法表达出有活性的β−半乳糖苷酶，不能分解X−gal产生蓝色物质，因此含重组载体的菌落为白色，A正确； B、单个限制酶酶切可能出现重复插入目的基因的情况，若插入2个CDS，重组载体总长度为4.2+2.6×2=9.4kb；载体仅含1个PstⅠ位点，CDS无 𝑃𝑠𝑡 Ⅰ位点，因此酶切后得到1条长度为9.4kb的线性片段，存在这种可能性，B正确； C、PstⅠ位于载体上紧邻 SacⅡ，若CDS插入方向不同，EcoRⅠ距离PstⅠ的长度分别为 0.5 kb和 2.1 kb，双酶切后得到的片段长度不同，因此可以判断连接方向，C正确； D、插入1个CDS的重组载体，共含有2个SacⅡ位点（CDS两端）和1个EcoRⅠ位点（CDS内部），共3个酶切位点，环状DNA经3个切点酶切后，会得到3个不同长度的DNA片段（0.5 kb、2.1 kb、4.2 kb），插入多个CDS会得到更多长度的片段，不可能只得到2个长度的片段，D错误。 15．【答案】D 【解析】A、蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。依题意，改良后的药物t-PA蛋白将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸改良而来，因此，制备改良t-PA蛋白的过程属于蛋白质工程，A正确； B、科学家将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，通过显微注射的方法导入哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物在进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物，这称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。因此，利用重组pCLY11质粒也可获得牛乳腺生物反应器，B正确； C、t-PA改良基因的黏性末端如图所示，则所选的限制酶所获得的切口应与t-PA改良基因的黏性末端相同，因此需选用限制酶XmaI和BglⅡ切开质粒pCLY11，C正确； D、结合图示可知，限制酶XmaI和BglⅡ会破坏质粒pCLY11上的mlacZ，但不会破坏新霉素抗性基因，导入重组质粒的大肠杆菌具有新霉素抗性，但由于mlacZ基因被破坏，没有相应产物，因而菌落呈现白色，D错误。 故选D。 16．【答案】D 【解析】A 正确：云南双价抗虫烟草等转基因产品，必须通过安全性评价才能推广。 B 正确：我国对转基因技术的方针表述正确。 C 正确：法律法规保障云南转基因作物研发与应用安全。 D 错误：基因工程研究最广泛、成果最多的是微生物，不是植物。 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 17．（每空1分，共9分） 【答案】蛋白质 碳源 蛋白酶 脂肪酶 氨基酸 异养好氧 原核生物 酒精和二氧化碳 酒精、乳酸、食盐（答一个即可） 【解析】（1）大豆中含有丰富的蛋白质，可为微生物的生长繁殖提供氮源。小麦中的淀粉可以为微生物的生长繁殖提供碳源。 （2）米曲霉在发酵过程中产生的蛋白酶能将蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，产生的脂肪酶能将脂肪分解为甘油和脂肪酸，使发酵的产物具有独特的风味。米曲霉发酵时需要利用现有的有机物和需要氧气，说明其代谢类型是异养好氧型。 （3）乳酸菌没有核膜包被的细胞核，属于原核生物。酵母菌属于兼性厌氧型微生物，既可以进行有氧呼吸，也可以进行无氧呼吸，无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳。在发酵池中酵母菌产生的酒精能抑制杂菌的生长，乳酸菌产生的乳酸使发酵液呈酸性也能抑制杂菌的生长，同时往发酵池中添加的食盐也能抑制杂菌的生长。 18． （除特殊标注外，每空1分，共11分） 【答案】(1)物理方法（离心、振动、电激等）；植物细胞的全能性 (2) 3；生长素；细胞分裂素 (3) 脱分化；再分化 (4) 花药（或雄配子、花粉）；秋水仙素 (5) 番茄和马铃薯的基因种类复杂，二者基因在杂种植株中不能按照人们预期的方式有序表达，导致相关性状无法同时表现。（2分） 【解析】 （1）人工诱导原生质体融合的方法包括物理法和化学法。化学法常用 PEG 融合法，物理法包括离心、振动、电激等；植物组织培养的理论基础是植物细胞具有全能性，即已分化的植物细胞仍具有发育成完整植株的潜能。 （2）细胞两两融合时可形成三种融合细胞：马铃薯 — 马铃薯融合细胞、番茄 — 番茄融合细胞、马铃薯 — 番茄杂种细胞；在植物组织培养过程中，生长素和细胞分裂素是调控细胞分裂、脱分化与再分化的两类关键植物激素。 （3）杂种细胞需先经过④脱分化形成愈伤组织，再经过⑤再分化形成根、芽等器官，最终发育为完整试管苗。 （4）花药（花粉）中含有雄配子，经花药离体培养可获得单倍体植株；单倍体体细胞杂交后染色体组数不足，需用秋水仙素处理抑制纺锤体形成，使染色体数目加倍，从而获得可育杂种植株。 （5）生物性状是基因选择性表达的结果。番茄和马铃薯属于不同物种，基因表达调控机制存在差异，在杂种植株内，控制番茄结果和马铃薯结薯的相关基因无法按特定时空顺序选择性表达，因此不能表现出理想性状。 19．（除特殊标记外，每空2分，共12分） 【答案】(1) 能够引起机体产生特异性免疫反应的物质 动物细胞融合、动物细胞培养 (2) 聚乙二醇（PEG）诱导、电激等 5（1分） (3) 杂交瘤细胞（1分） 不能无限增殖（1分） (4)从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型（或：筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体并不是单克隆抗体） (5)注射到小鼠腹腔内增殖（1分） 【解析】（1）能够引起机体产生特异性免疫反应的物质叫做抗原。根据单克隆抗体制备流程可知，该过程涉及到的技术有动物细胞融合技术、动物细胞培养技术。 （2）过程②诱导融合的方法是聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电激等。仅考虑某两个细胞的融合，则可能形成骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞、B细胞—B细胞、骨髓瘤细胞—B淋巴细胞3种融合细胞；另外，还有部分B细胞、骨髓瘤细胞不发生融合，总共形成5种类型的细胞。 （3）HAT培养基是特定的选择性培养基，只有杂交瘤细胞能在其上生长，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡。未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后，仍然不是能恶性增殖的细胞，即不能无限增殖。 （4）从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型（筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体并不是单克隆抗体），因此经过程③筛选得到的细胞还需转移至多孔培养板中继续进行过程④。 （5）获得的单克隆杂交—杂交瘤细胞在体外条件下培养或注射到小鼠腹腔内增殖，均可提取出大量的双特异性单克隆抗体。 20．（除特殊标记外，每空1分，共9分） 【答案】(1) 脱分化 提高 (2)促性腺 (3) 各种组织 胚胎移植 黑色 黑鼠和X鼠 (4)胰岛素抵抗（2分） 【解析】（1）黑鼠体细胞在诱导因子的作用下转化为iPS细胞的过程与植物组织培养中的脱分化过程类似，是组织细胞恢复分裂分化能力的过程。iPS细胞与小鼠内细胞团一样，具有全能性，该过程结束后，细胞的全能性提高。 （2）超数排卵是指应用外源促性腺激素，诱导卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子。 （3）囊胚中的内细胞团将来可以发育成胎儿的各种组织。将重构胚移入代孕白鼠子宫内的技术为胚胎移植。克隆属于无性繁殖，iPS细胞来自黑鼠，所以X鼠的体色为黑色。图中提供胚胎的灰鼠和代孕白鼠都是雌鼠，可以是雄鼠的有黑鼠和X鼠。 （4）据图所示，最终得到了X鼠，而实验最终目的为“开发出胰岛素抵抗模型鼠”，故为确定克隆鼠的培育是否成功，须对X鼠进行胰岛素抵抗的相关检测。 21．（除标注外每空2分,共11分） 【答案】（1）磷酸二酯键（1分） （2）RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动目的基因转录；新霉素（1分） （3）Ti质粒上的T-DNA（1分） （4）将非转基因烟草和转基因烟草分别接种等量的目标昆虫，观察并比较昆虫的存活情况（或烟草的受害程度）（2分，答出1点给1分） （5）减少化学杀虫剂的使用，降低对环境的污染；延缓昆虫抗药性的产生，提高抗虫持久性 （6）将抗虫基因导入叶绿体基因组中（或设置生殖隔离的种植区域） 【解析】 （1） T4 DNA连接酶的功能是催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而将目的基因与载体连接起来。 （2） “35S promoter”是启动子，其功能是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动目的基因转录出mRNA。标记基因NPTⅡ可使细胞在含新霉素的培养基中存活，因此需添加新霉素筛选含重组质粒的细胞。 （3） 农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至植物细胞，并整合到植物细胞染色体的DNA上，从而将目的基因导入植物细胞。 （4） 要从个体水平验证转基因烟草的抗虫性，需设置对照实验，将非转基因烟草和转基因烟草分别接种等量的目标昆虫，观察并比较昆虫的存活情况或烟草的受害程度。 （5） 与传统化学杀虫剂相比，双价抗虫烟草可减少化学杀虫剂的使用，降低对环境的污染；同时能延缓昆虫抗药性的产生，提高抗虫持久性。 （6） 将抗虫基因导入叶绿体基因组中，由于叶绿体基因组不会随花粉传播，可避免抗虫基因向其他植物扩散；也可设置生殖隔离的种植区域，防止基因交流。 学科网（北京）股份有限公司 $